作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸。本發(fā)明涉及用于治療不以預(yù)期速率愈合的傷口，包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的連接蛋白調(diào)節(jié)，以及有關(guān)的方法、組合物和制品。
【專利說明】作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸
[0001]本申請是申請日為2007年12月11日的題為“作為受損傷口愈合組合物的抗連接蛋白多核苷酸”的中國專利申請N0.200780051207.X的分案申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及間隙連接以及傷口和傷口愈合，具體地涉及不以預(yù)期速率愈合的傷口，如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、慢性傷口、以及裂開傷口。
【背景技術(shù)】
[0003]以下包括可能有益于理解本發(fā)明的信息。這并不是承認(rèn)，本文提供的任何信息是現(xiàn)有技術(shù)，或與目前描述的或要求保護(hù)的發(fā)明有關(guān)，或具體或含蓄提及的任何出版物或文獻(xiàn)是現(xiàn)有技術(shù)。
[0004]在人類和其他哺乳動物中，傷口損傷觸發(fā)細(xì)胞和生化事件的有組織的復(fù)雜級聯(lián)， 其在大多數(shù)情況下將導(dǎo)致愈合傷口。理想的愈合傷口是這樣的一種愈合傷口，其可以在細(xì)胞、組織、器官、和生物體水平恢復(fù)正常解剖結(jié)構(gòu)、功能、以及外觀。傷口愈合，不管是由創(chuàng)傷、微生物還是異物(或雜質(zhì)，foreign materials)所引起的,其借助于復(fù)雜過程來進(jìn)行,該復(fù)雜過程涵蓋許多重疊階段，包括發(fā)炎、上皮形成、血管生成以及基質(zhì)沉積。通常，這些過程導(dǎo)致成熟的傷口和一定程度的瘢痕形成。雖然炎癥和修復(fù)大多數(shù)沿著規(guī)定歷程發(fā)生，但過程的敏感性依賴于各種傷口愈合調(diào)節(jié)因子的平衡，包括例如，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和生長因子的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。
[0005]間隙連接是促進(jìn)直接的細(xì)胞間通信的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。間隙連接通道由兩個連接子 (半通道)形成，每個連接子由6個連接蛋白亞單位組成。每個六聚體連接子?？坑谠谙鄬δぶ械倪B接子以形成單間隙連接。間隙連接通道被報道為存在于整個體內(nèi)。組織如角膜上皮，例如，具有6至8個細(xì)胞層，而在不同層中表現(xiàn)不同的間隙連接通道，其中連接蛋白43 在基底層中而連接蛋白26在基底至中間翼細(xì)胞層(wing cell layer)中。通常,連接蛋白是通常按照它們的分子量命名或在系統(tǒng)發(fā)育的基礎(chǔ)上分為、以及Y亞類的蛋白質(zhì)家族。已鑒定了至少20種人和19種小鼠同種型。不同的組織和細(xì)胞類型被報道為具有連接蛋白表達(dá)的特征模式并且組織如角膜已表明在損傷或移植以后可以改變連接蛋白表達(dá)模式(Qui et al.(2003)Current Biology, 13:1967-1703;Brander et al.(2004), J.1nvest Dermatol.122:1310-20)。
[0006]已經(jīng)報道了，異常`的連接蛋白功能可能與某些疾病狀態(tài)(例如心臟病)有關(guān) (A.C.de Carvalho, et al.(1994) J Cardiovasc Electrophysiol5:686)。在某些連接蛋白中，通過加入外源劑(exogenous agent)可以誘導(dǎo)周轉(zhuǎn)和運(yùn)輸性能的改變,其中外源劑可以影響間隙連接細(xì)胞間通信的水平(Darrow et al.(1995)Circ Res76:381;Lin et al.(2001) J Cell Bioll54(4):815)。還報道了反義技術(shù)已用于調(diào)節(jié)與病毒、真菌和代謝性疾病有關(guān)的基因的表達(dá)。參見例如，美國專利第5，166，195號(HIV的寡核苷酸抑制劑(oligonucleotide inhibitors of HIV))、美國專利第 5，004，810 號(低聚物，用于雜交于單純抱疫病毒Vmw65mRNA和抑制復(fù)制(oligomers for hybridizing to herpessimplex virus Vmw65mRNA and inhibiting replication))。還參見授權(quán)給 Becker 和Green的美國專利第7，098, 190號(包含連接蛋白的反義核苷酸的制劑(formulationscomprising antisense nucleotides to connexins))。還已經(jīng)報道了間隙連接和半通道的妝抑制劑。參見例如，Berthoud et al.(2000)Am J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.279:L619-L622;Evans, ff.H.and Boitano, S.Biochem.Soc.Trans.29:606-612,以及 De Vriese A.S.,et al.(2001)Kidney Int.61:177-185。還參見 Green andBecker, W02006/134494 ( “抗連接蛋白化合物和應(yīng)用方法(Ant1-connexin compounds andmethods of use)，，)。
[0007]雖然在理解構(gòu)成傷口愈合過程基礎(chǔ)的原理方面有進(jìn)展，但在用于傷口護(hù)理，包括不以預(yù)期速率愈合的傷口，如延遲愈合的傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的適宜的治療選擇方面仍然存在顯著的未滿足的需要。本文描述了并要求保護(hù)這樣的治療組合物以及治療。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本文描述和要求保護(hù)的發(fā)明具有許多特性和實施方式，包括但不限于在本
【發(fā)明內(nèi)容】
部分列出的或描述的或提及的那些。本文描述的并要求保護(hù)的發(fā)明不限于本
【發(fā)明內(nèi)容】
中限定的特點(diǎn)或?qū)嵤┓绞交蛘弑槐?br/>【發(fā)明內(nèi)容】
中限定的特點(diǎn)或?qū)嵤┓绞较拗?，使用這些特點(diǎn)和實施方式僅僅是為了說明的目的而非限制的目的。
[0009]本發(fā)明通常涉及包括例如連接蛋白反義多核苷酸的抗連接蛋白多核苷酸、以及組合物和方法在用于治療不以預(yù)期速率愈合的傷口，如延遲愈合的傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口中的應(yīng)用。
[0010]通過使用一種或多種連接蛋白反義多核苷酸，本發(fā)明用來提高和改善不以預(yù)期速率愈合的傷口如延遲愈合的傷`口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口的愈合。
[0011]它們還涉及與敷料、繃帶、基質(zhì)以及覆蓋物組合來使用抗連接蛋白多核苷酸。在一個方面，本發(fā)明包括一種合成或天然存在的傷口愈合基質(zhì)，其包含抗連接蛋白多核苷酸。在某些實施方式中，抗連接蛋白多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸，例如，抗連接蛋白43多核苷酸。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸包括抗連接蛋白寡脫氧核苷酸，如抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
[0012]它們還涉及在重復(fù)應(yīng)用(例如，每周一次)中單獨(dú)或與敷料、繃帶、基質(zhì)以及覆蓋物組合來使用抗連接蛋白多核苷酸直到愈合完全或如達(dá)到所期望的。
[0013]描述和要求保護(hù)本發(fā)明的組合物和方法，其采用包括連接蛋白反義多核苷酸的抗連接蛋白多核苷酸。
[0014]在一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含一種或多種連接蛋白反義多核苷酸。優(yōu)選地，該藥物組合物進(jìn)一步包含藥用載體、稀釋劑或賦形劑。例如，本發(fā)明包括藥物組合物，其包含(a)治療有效量的藥用連接蛋白反義多核苷酸以及(b)藥用載體或稀釋劑。
[0015]在一個方面，本發(fā)明包括藥物組合物，該藥物組合物包括局部遞送形式和制劑(劑型，formulations),其包含藥用載體和治療有效量的抗連接蛋白多核苷酸,優(yōu)選連接蛋白反義多核苷酸，并且最優(yōu)選連接蛋白43反義多核苷酸。
[0016]連接蛋白反義多核苷酸的實例包括抗連接蛋白寡脫氧核苷酸(ODN)，其包括反義 (包括修飾和未修飾的主鏈反義(backbone antisense);例如，結(jié)合于連接蛋白mRNA的DNA 反義多核苷酸)、RNA1、以及siRNA多核苷酸。
[0017]適宜的連接蛋白反義多核苷酸包括例如，相對于連接蛋白43(Cx43)、連接蛋白 26(Cx26)、連接蛋白37(Cx37)、連接蛋白30 (Cx30)、連接蛋白31.l(Cx31.1)以及連接蛋白 32(Cx32)的反義0DN。在某些實施方式中，適合的組合物包括組合的多種連接蛋白反義多核苷酸，其包括例如，靶向Cx43、26、30、以及31.1的多核苷酸。優(yōu)選的連接蛋白反義多核苷酸靶向連接蛋白43。
[0018]因此，在另一個方面，本發(fā)明提供了一種制劑，其包含相對于連接蛋白的至少一種連接蛋白反義多核苷酸以及藥用載體或媒介物(vehicle)。在一種優(yōu)選的形式中，該制劑包含僅相對于一種連接蛋白(connexin protein)的多核苷酸。最優(yōu)選地,這種連接蛋白是連接蛋白43?？商鎿Q地，該制劑包含相對于多于一種的連接蛋白的寡脫氧核苷酸。
[0019]本發(fā)明包括一種制劑，該制劑包含可有效促進(jìn)受治療者傷口愈合的量的藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，其中受治療者具有慢性傷口或特征為延遲愈合的傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口。這樣的制劑包括，例如，局部遞送形式和制齊IK或劑型，formulations)。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0020]優(yōu)選地,寡脫氧核苷酸導(dǎo)向(direct to)的連接蛋白之一是連接蛋白43。寡脫氧核苷酸導(dǎo)向的其他連接蛋白包括連接蛋白26、 連接蛋白31.1以及連接蛋白32。
[0021]適宜地，對于連接蛋白43的寡脫氧核苷酸選自:GTA ATT GCG GCA AGA AGA ATT GTT TCT GTC(SEQ.1D.NO:1) ；GTA ATT GCG GCA GGA GGA ATT GTT TCT GTC(SEQ.1D.NO:2)； GGC AAG AGA CAC CAA AGA CAC TAC CAG CAT (SEQ.1D.N0:3)，與 SEQ.1D.NO: 1、2、或 3 具有至少約70%的同源性的多核苷酸或在中等至高度嚴(yán)格的條件下雜交于連接蛋白43mRNA的多核苷酸。
[0022]適宜地，對于連接蛋白26的寡脫氧核苷酸是:TCC TGA GCA ATA CCT AAC GAA CAA ATA(SEQ.1D.N0:4)，與SEQ.1D.N0:4具有至少約70%的同源性的多核苷酸；或在中等至高度嚴(yán)格條件下雜交于連接蛋白26mRNA的多核苷酸。適宜地，對于連接蛋白31.1的寡脫氧核苷酸是:CGT CCG AGC CCA GAA AGA TGA GGT C(SEQ.1D.NO:9)，與 SEQ.1D.NO:9 具有至少約70%的同源性的多核苷酸；或在中等至高度嚴(yán)格條件下雜交于連接蛋白31.1mRNA的多核苷酸。適宜地，對于連接蛋白32的寡脫氧核苷酸是:TTT CTT TTC TAT GTG CTG TTG GTG A (SEQ.1D.N0:12)，與SEQ.1D.NO: 12具有至少約70%的同源性的多核苷酸;或在中等至高度嚴(yán)格條件下雜交于連接蛋白32mRNA的多核苷酸。根據(jù)本發(fā)明的方法可用的其他連接蛋白反義多核苷酸序列包括:
(連接蛋白 37) (SEQ ID NO:5)
(連接蛋白 37) (SEQ ID NO:6)
(連接蛋白 30) (SEQ ID NO:7)
(連接蛋白 30) (SEQ ID NO:8)
(連接蛋白 31.1) (SEQ ID NO: 10)
[0023]5'CATCTCCTTGGTGCTCAACC3'[0024]5'CTGAAGTCGACTTGGCTTGG3'[0025]5'CTCAGATAGTGGCCAGAATGC3[0026]5'TTGTCCAGGTGACTCCAAGG3'[0027]5'AGAGGCGCACGTGAGACAC3,[0028]5' TGA AGA CAA TGA AGA TGT T3'(連接蛋白 31.1) (SEQ ID NO: 11)
[0029]優(yōu)選局部給予反義多核苷酸(在待治療部位和/或在待治療部位周圍)。適當(dāng)?shù)兀狗戳x多核苷酸與藥用載體、媒介物或稀釋劑組合以提供藥物組合物。
[0030]適合的藥用載體或媒介物包括常用于局部給予的那些中的任意一種。局部制劑可以為，例如，乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、乳劑、洗劑、噴霧劑、泡沫或涂劑的形式。本發(fā)明的制劑還可以浸潰敷料的形式存在。
[0031]優(yōu)選地，藥用載體或媒介物是凝膠，適當(dāng)?shù)貫榉请x子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物凝膠，例如，Pluronic凝膠,優(yōu)選Pluronic F-127 (BASF Corp.)。該凝膠在低溫下可以作為液體使用，但在生理溫度下快速凝結(jié)，其可以有助于將抗連接蛋白寡核苷酸成分的釋放限制于施加部位或緊靠該部位。其中抗連接蛋白寡核苷酸隨時間被釋放的緩釋凝膠劑優(yōu)選用于局部施加。因此，可以配制藥物組合物以提供抗連接蛋白多核苷酸例如反義多核苷酸的持續(xù)釋放。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0032]在另一個方面，本發(fā)明包括用于將治療有效量的一種或多種藥用連接蛋白反義多核苷酸給予受治療者的方法，其中一種或多種藥用連接蛋白反義多核苷酸配制在延遲釋放配制物、緩釋配制物、延長釋放配制物、控釋配制物、和/或重復(fù)作用配制物中，并且其中受治療者患有全部或部分特征在于延遲或不完全傷口愈合的傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口。這樣的制劑特別有利于不以預(yù)期速率愈合的傷口，如慢性傷口。
[0033]在某些其他方面，本發(fā)明還涉及應(yīng)用這樣的組合物來治療受治療者的方法，其中受治療者患有與不以預(yù)期速率愈合的傷口如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、或慢性傷口有關(guān)的各種疾病、障礙和病癥。在又一方面，本發(fā)明包括用于治療受治療者的方法，其中受治療者患有或懷疑患有全部或部分特征在于慢性傷口或延遲或不完全傷口愈合、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口的任何疾病、障礙和/或病癥。這樣的組合物包括，例如，局部遞送形式和制劑。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0034]在另一方面，本發(fā)明包括透皮貼劑、敷料、墊(或護(hù)墊，pads)、包裹物、基質(zhì)以及繃帶，其能夠附著于或以其他方式結(jié)合于受治療者的皮膚，并且所述制品能夠遞送治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸。
[0035]本發(fā)明包括包含治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸例如連接蛋白反義多核苷酸的裝置，例如，封裝藥物忙器(reservoir)的速率控制膜和整體基質(zhì)裝置(monolithic matrix device)。這些裝置可以用于治療需要其的受治療者,如本文所披露的。適當(dāng)?shù)兀峁﹤诜罅匣蚧|(zhì)，其包括固體基質(zhì)(或基層，substrate)的形式，其中抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，分散在固體基質(zhì)上或固體基質(zhì)中。在一種實施方式中，與傷口敷料或傷口愈合促進(jìn)基質(zhì)組合提供了本發(fā)明的藥物產(chǎn)品。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0036]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種在具有延遲愈合傷口或慢性傷口的患者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法包括以下步驟:將如本文所定義的制劑以在所述傷口部位和緊鄰所述傷口部位可有效地負(fù)調(diào)節(jié)(或下調(diào))連接蛋白表達(dá)的量給予所述傷口。重復(fù)施加(或應(yīng)用，applications)包括在本發(fā)明內(nèi)。連接蛋白43的負(fù)調(diào)節(jié)是優(yōu)選的。
[0037] 本發(fā)明的一個方面涉及一種治療具有延遲愈合或慢性傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口的受治療者的方法，該方法包括給予有效量的抗連接蛋白多核苷酸，例如，抗連接蛋白多核苷酸。適合的抗連接蛋白多核苷酸可以選自由連接蛋白反義多核苷酸(例如，結(jié)合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNAi多核苷酸、以及siRNA多核苷酸構(gòu)成的組。 優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸可以阻止或抑制連接蛋白43的表達(dá)。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。
[0038]在一個方面，本發(fā)明提供了一種對具有延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，該方法包括將有效量的連接蛋白 43反義多核苷酸持續(xù)給予傷口。適宜地，給予或遞送反義多核苷酸至少約0.5小時、約1-2 小時、約2-4小時、約4-6小時、或約6-8小時,但可以給予更長時間，例如，長達(dá)24小時， 或更長時間。1-2小時、2-3小時、以及4-8小時施加或遞送目前是優(yōu)選的。根據(jù)一種實施方式，受治療者是糖尿病患者。在其他實施方式中，患者(病人)患有糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈游滯性潰瘍(venous stasis ulcer)、動脈性潰瘍、壓力(或壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性胺皮病有關(guān)的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。優(yōu)選的是重復(fù)施加直到看到傷口閉合正進(jìn)行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復(fù)施加一次(或施加多次)。
[0039]根據(jù)一個可替換的方面，本發(fā)明提供了一種對具有延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，該方法包括將連接蛋白43反義多核苷酸持續(xù)給予傷口(或傷口區(qū)域內(nèi)或周圍的區(qū)域)，從而在一段持續(xù)時間內(nèi)負(fù)調(diào)節(jié)(下調(diào))連接蛋白43的表達(dá)。適宜地，連接蛋白43表達(dá)被負(fù)調(diào)節(jié)至少約0.5小時、約 1-2小時、約2-4小時、約4-6小時、或約6-8小時，但可以給予更長時間，例如，長達(dá)24小時，或更長時間。0.5小時、1-2小時、以及4-8小時持續(xù)給予目前是優(yōu)選的。適合的受治療者包括糖尿病受治療者。在其他實施方式中，患者患有糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、 血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力(或壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。優(yōu)選的是重復(fù)施加直至看到傷口閉合正進(jìn)行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復(fù)施加一次(或施加多次)。
[0040]根據(jù)另一方面，提供了將可在一段持續(xù)時間內(nèi)有效負(fù)調(diào)節(jié)連接蛋白43表達(dá)的量的連接蛋白43反義多核苷酸持續(xù)給予傷口。另外根據(jù)該方面，可以促進(jìn)不以預(yù)期速率愈合的傷口包括延遲愈合傷口、受損愈合傷口、以及慢性傷口的傷口愈合。在一種實施方式中， 傷口是糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力(壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性胺皮病有關(guān)的潰瘍、或混合性潰瘍或多種潰瘍。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。優(yōu)選的是重復(fù)施加直至看到傷口閉合正進(jìn)行，接著在傷口愈合再次變得停頓或延遲的情況下重復(fù)施加一次(或施加多次)。
[0041]根據(jù)本發(fā)明的其他方面，可以促進(jìn)傷口再上皮化(再上皮形成， re-epithelialization)和/或肉芽組織的形成。[0042]在另外的方面，本發(fā)明提供了一種在具有不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法包括持續(xù)給予連接蛋白43反義多核苷酸和連接蛋白31.1反義多核苷酸。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。
[0043]本發(fā)明的一個可替換方面涉及一種促進(jìn)皮膚傷口的再上皮化的方法，該方法包括將可有效促進(jìn)再上皮化的量的抗連接蛋白多核苷酸，例如，抗連接蛋白多核苷酸給予患有不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括，例如，延遲愈合或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者?？惯B接蛋白多核苷酸可以靶向選自連接蛋白26、連接蛋白30、連接蛋白31.1以及連接蛋白43的連接蛋白。適合的多核苷酸可以選自修飾或未修飾的主鏈連接蛋白反義多核苷酸(例如，結(jié)合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNAi多核苷酸以及siRNA多核苷酸。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。連接蛋白43目前是優(yōu)選的靶標(biāo)。
[0044]在另外的方面，本發(fā)明提供了一種在具有不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括，例如，延遲愈合傷口或不完全愈合傷口或慢性傷口)的受治療者中促進(jìn)傷口愈合的方法，該方法包括持續(xù)給予可有效調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞分裂和生長的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸；以及可有效調(diào)節(jié)外層角蛋白分泌的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸。在一種實施方式中，可有效調(diào)節(jié)上皮基底細(xì)胞分裂或生長的抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白26反義多核苷酸或連接蛋白43反義多核苷酸或它們的混合物。根據(jù)一種可替換的實施方式，被給予以調(diào)節(jié)外層角質(zhì)化的抗連接蛋白多核苷酸(例如，連接蛋白反義多核苷酸)是連接蛋白31.1反義多核苷酸。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。
[0045]在另一種實施方式中，慢性傷口是慢性皮膚傷口并且將抗連接蛋白多核苷酸給予所述受治療者的皮膚或與皮膚有關(guān)的組織有效的一段時間。適合于治療的慢性皮膚傷口可以，例如，選自壓力(壓迫)性潰瘍、褥瘡性潰瘍、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、血管炎性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍、以及混合性潰瘍構(gòu)成的組。慢性傷口可以是動脈性潰瘍，其包括由完全或部分動脈阻塞`引起的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍，其包括由靜脈瓣功能障礙以及關(guān)聯(lián)的血管疾病引起的潰瘍。慢性傷口可以是創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。
[0046]根據(jù)另一個方面，本發(fā)明提供了一種在具有不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口)的受治療者中提高傷口愈合或閉合速率的方法，該方法包括給予受治療者有效量的抗連接蛋白多核苷酸。適合的多核苷酸選自連接蛋白反義多核苷酸(例如，結(jié)合于連接蛋白mRNA的DNA反義多核苷酸)、RNA多核苷酸以及siRNA多核苷酸。適合的連接蛋白反義多核苷酸是連接蛋白43多核苷酸。特別適合的多核苷酸具有約18至約32個核苷酸。重復(fù)施加包括在本發(fā)明內(nèi)。一種目前優(yōu)選的寡核苷酸是SEQ.1D.NO:1。
[0047]本發(fā)明包括在藥物或劑型制備中使用治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸(包括連接蛋白反義多核苷酸)的方法。這樣的藥物、制劑和劑型包括，例如，局部遞送形式和制劑。這樣的藥物包括那些用于治療如本文所披露的受治療者的藥物。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。優(yōu)選地，藥物、制劑或劑型是泡沫、乳膏劑、噴霧劑或凝膠劑。
[0048]在另一個方面,本發(fā)明包括一種制品(article of manufacture),該制品包括容器，其包含治療有效量的一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，以及使用說明書。這樣的說明書可以包括關(guān)于用于治療患有慢性傷口或特征在于延遲愈合的傷口的受治療者的說明書。說明書可以包括針對不以預(yù)期速率愈合的傷口(如延遲愈合傷口、不完全愈合傷口以及慢性傷口)的使用說明書。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0049]本發(fā)明包括一種制品，該制品包括包裝材料，其包含一種或多種劑型，該劑型包含一種或多種藥用抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，其中包裝材料具有標(biāo)簽，其說明該劑型可以用于這樣的受治療者，其患有或懷疑患有或易患本文描述或提及的任何疾病、障礙和/或病癥，包括全部或部分特征在于受損或延遲傷口愈合或慢性傷口、或不以預(yù)期速率愈合的其他傷口的疾病、障礙和/或病癥。這樣的劑型包括，例如，局部遞送形式和劑型制劑。優(yōu)選的抗連接蛋白多核苷酸和連接蛋白反義多核苷酸是抗連接蛋白43 多核苷酸和連接蛋白43反義多核苷酸。
[0050]在某個其他方面，本發(fā)明提供了一種包裝，該包裝包括抗連接蛋白多核苷酸，例如，連接蛋白反義多核苷酸，以及用于促進(jìn)(例如，減少愈合時間、使傷口結(jié)果更好)延遲或不完全愈合傷口或慢性傷口的傷口愈合的使用說明書。
[0051]在本發(fā)明的所有方面，抗連接蛋白多核苷酸優(yōu)選是抗連接蛋白43多核苷酸，連接蛋白反義多核苷酸優(yōu)選是連接蛋白43反義多核苷酸，并且連接蛋白反義寡脫氧核苷酸優(yōu)選是連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
[0052]以下提供了本發(fā)明的這些和其他方面，其并不限于在本
【發(fā)明內(nèi)容】
中的信息或受本
【發(fā)明內(nèi)容】
中的信息所限制。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0053]圖1A至圖1D示出了在真皮成纖維細(xì)胞、毛囊、血管以及附屬物(appendage)中的連接蛋白免疫染色。圖1A示出了在誘導(dǎo)糖尿病后兩周，在正常(空心柱)和糖尿病性皮膚 (實心柱)表皮和真皮中連接蛋白43的染色以及表皮中連接蛋白26的染色。圖1B示出了在STZ誘導(dǎo)糖尿病以后8周對連接蛋白表達(dá)的影響。圖1C示出了在8周在對照(C)和糖尿病患者(D)中的連接蛋白免疫染色，其中箭頭表示表皮和真皮之間的邊界。圖1D示出了在非糖 尿病性(空心柱)和糖尿病性(實心柱)表皮和真皮中在5分鐘內(nèi)間隙連接持久染料通過組織的染料轉(zhuǎn)移的距離的定量。
[0054]圖2A至圖2D示出了通過在受傷后測量連接蛋白染色所獲得的再上皮化率以及連接蛋白43和連接蛋白26蛋白水平的反應(yīng)。圖2A示出了其中量化了在角質(zhì)細(xì)胞中的連接蛋白染色的區(qū)域:傷口邊緣(WE)、離開500 ii m的鄰近區(qū)(AD)以及前沿(leading edge, LE)。 在受傷后一天和兩天，對在WE和AD處的連接蛋白染色進(jìn)行量化。在5天后，對LE角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行成像。圖2B示出了在對照(C)和糖尿病性(D)皮膚中在受傷后的第1、2以及5天的再上皮化率。圖2C示出了在對照(空心柱)和糖尿病性(實心柱)動物中，在受傷后的第1、2以及5天，在WE、AD以及LE中的連接蛋白43染色。圖2D示出了在對照(空心柱) 和糖尿病性(實心柱)動物中，在受傷后的第1、2以及5天，在WE、AD以及LE區(qū)中的連接蛋白26染色。
[0055]圖3a至圖3f以及圖3a’至圖3f’示出了在對照和糖尿病動物中，在受傷后第1、 2以及5天的連接蛋白染色。圖3a、圖3c和圖3e (對照)以及圖3a’、圖3c’和3e’(糖尿病患者)示出了受傷后第I天(圖3a和圖3a’)、第2天(圖3c和圖3c’)以及第5天(圖3e 和圖3e’)的連接蛋白43染色。圖3b、圖3d和圖3f (對照)以及圖3b’、3d’和圖3f’(糖尿病患者)示出了在受傷后的第I天(圖3b和圖3b’)、第2天(圖3d和圖3d’)以及第5天 (圖3f和圖3f ’ )的連接蛋白26染色。
[0056]圖4A至圖4C示出了施加連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸組合物對連接蛋白43表達(dá)和傷口愈合的影響。圖4A(正義對照)和圖4B (連接蛋白43反義)示出了在糖尿病性WE 角質(zhì)細(xì)胞中連接蛋白43的表達(dá)。圖4C示出了在對照(C)和糖尿病性(D)傷口中，在受傷后的第1、2以及5天的再上皮化百分比，其中用正義(“s”)和連接蛋白43反義(“as”) 多核苷酸加以治療。
【具體實施方式】
[0057]不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開傷口、以及慢性傷口)經(jīng)常導(dǎo)致感染并可能導(dǎo)致截肢或死亡。通過間隙連接的細(xì)胞間通信在傷口愈合中起關(guān)鍵作用。已發(fā)現(xiàn)，使用某些化合物(其包括本文中所描述或提及的那些化合物)可以阻斷、抑制、或改變細(xì)胞通信，其促進(jìn)不以預(yù)期速率愈合的傷口(包括慢愈合傷口、延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、裂開傷口、以及慢性傷口)的閉合和愈合。對于所有應(yīng)用，連接蛋白43間隙連接調(diào)節(jié)劑是優(yōu)選的。
[0058]定義
[0059]如在本文中所使用的，“障礙”是任何將受益于促進(jìn)傷口愈合和/或減少瘢痕形成的藥劑(agent)的障礙、疾病、或病癥。例如,包括與神經(jīng)病、缺血病、以及微血管病病理學(xué)有關(guān)的傷口相關(guān)性異常；對骨區(qū)域[尾骨(骶骨)、髖關(guān)節(jié)(轉(zhuǎn)子的)、臀(坐骨的)、或足跟]的壓力(壓迫)；再灌注損傷；以及與瓣膜反流病因和相關(guān)病癥有關(guān)的病癥。
[0060]如在本文中所使用的，“受治療者”是指任何哺乳動物，包括人類、家養(yǎng)和農(nóng)場動物 (或家畜)、以及動物園動物、體育動物、或?qū)櫸铮绻?、馬、貓、羊、豬、牛等。本文中優(yōu)選的哺乳動物是人，包括成人、兒童、以及老人。
[0061]如在本文中所使用的，“預(yù)防”是指預(yù)防(全部或部分地)、或改善或控制。
[0062]如在本文中所使用的，關(guān)于本發(fā)明的化合物或組合物的“治療有效量”是指足以誘導(dǎo)所期望的生物、藥物、或治療結(jié)果的量。所述結(jié)果可以是疾病或障礙或病癥的征兆、癥狀、 或原因的減輕，或生物系統(tǒng)的任何其他期望的改變。在本發(fā)明中，結(jié)果將涉及傷口愈合，包括傷口愈合率和傷口的閉合(全部或部分)的促進(jìn)和/或改善。其他益處包括腫脹、炎癥和 /或瘢痕形成的全部或部分減小。
[0063]如在本文中所使用的,術(shù)語“治療”是指治療性治療和預(yù)防性(prophyIact i c or preventative)措施。
[0064]如在本文中所使用的，“同時”用來指同時給予一種或多種抗連接蛋白多核苷酸， 例如，反義多核苷酸，而術(shù)語“組合(in combination)”用來指在一段時間范圍內(nèi)“順序地” 給予它們(如果不是同時或以物理組合方式)，使得它們均可有效發(fā)揮治療作用。因此，“順序地”給予可以允許在給予其他制劑以后在數(shù)分鐘(例如，1、2、3、4、5、10、15、20、25、30分鐘)或大約數(shù)小時、數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月內(nèi)給予一種藥劑(agent)，只要一種或多種抗連接蛋白多核苷酸同時以有效量存在。給予成分之間的時間延遲將根據(jù)成分的確切性質(zhì)、成分之間的相互作用、以及它們相應(yīng)的半衰期而變化。
[0065]如在本文中所使用的，“抗連接蛋白多核苷酸”減少或抑制連接蛋白mRNA和/或蛋白質(zhì)的表達(dá)。抗連接蛋白多核苷酸包括但不限于反義化合物如反義多核苷酸、其他多核苷酸(如具有siRNA或核酶功能的多核苷酸)。抗連接蛋白多核苷酸的適合實例包括連接蛋白的反義多核苷酸。因此，適合的抗連接蛋白多核苷酸包括，例如，反義多核苷酸(例如，連接蛋白43反義多核苷酸)，其在所選組織、細(xì)胞、以及受治療者中調(diào)節(jié)連接蛋白和間隙連接的表達(dá)或活性。
[0066]術(shù)語“傷口敷料”是指用于局部施加到傷口的敷料并且排除適合于系統(tǒng)給予的組合物。例如，可以將一種或多種抗連接蛋白多核苷酸(如連接蛋白反義多核苷酸)分散在傷口接觸材料如編織或非編織紡織材料的固體片材之中或之上，或分散在泡沫如聚氨酯泡沫層中，或分散在水凝膠如聚氨酯水凝膠、聚丙烯酸酯水凝膠、明膠、羧甲基纖維素、果膠、藻酸鹽、和/或透明質(zhì)酸水凝膠中，例如分散在凝膠或軟膏中。在某些實施方式中，一種或多種抗連接蛋白多核苷酸被分散在生物可降解的片材(其提供活性組分持續(xù)釋放到傷口中) 之中或之上，例如凍干膠原、凍干膠原/藻酸鹽混合物(可獲自Johnson&Johnson Medical Limited,注冊商標(biāo)為FIBRA⑶L)或凍干膠原/氧化再生纖維素(可獲自Johnson&Johnson Medical Limited，注冊商標(biāo)為 PR0M0GRAN)片材。
[0067]如在本文中所使用的，“傷口促進(jìn)基質(zhì)”包括例如，合成或天然存在的基質(zhì)如膠原、 非細(xì)胞基質(zhì)、交聯(lián)生物支架分子、基于組織的生物工程結(jié)構(gòu)框架、生物制備的生物假體、以及其他植入結(jié)構(gòu)如例如，適合于細(xì)胞浸潤和增殖的血管移植物，其可用于促進(jìn)傷口愈合。另外適合的生物基質(zhì)材料可以包括化學(xué)修飾的膠原組織以降低抗原性和免疫原性。其他適合的實例包括用于傷口敷料的膠原片材、無抗原或抗原減少的非細(xì)胞基質(zhì)(Wilson G J et al.(1990)Trans Am Soc Artif Intern36:340_343)或其他生物基質(zhì),其已被設(shè)計成降低對異種移植材料的抗原反應(yīng)?？捎糜诖龠M(jìn)傷口愈合的其他基質(zhì)可以包括例如，經(jīng)加工的牛心包蛋白，其包括不溶性膠原和彈性蛋白(Courtman Dff et al.(1994) J Biomed Mater Res28:655-666)和其他非細(xì)胞組織，其可以用于為宿主細(xì)胞遷移提供自然微環(huán)境以加速組織再生(Malone J M et al.(1984) J Vasc Surgl: 181-91 )。本發(fā)明設(shè)想合成或天然基質(zhì)， 其包含本文所描述的一種或多種抗連接蛋白多肽，包括抗連接蛋白43多肽。連接蛋白43 反義寡脫氧核苷酸是優(yōu)選的。 [0068]如在本文中所使用的，術(shù)語“傷口 ”包括對任何組織的損傷，其包括例如，延遲或難以愈合傷口、以及慢性傷口。傷口的實例可以包括開放性和閉合性傷口。術(shù)語“傷口”還可以包括例如對皮膚和皮下組織的損傷，其是以不同方式引發(fā)的(例如，起因于長期臥床休息的褥瘡以及由創(chuàng)傷引起的傷口)并具有不同特性。取決于傷口的深度，傷口可歸類于四個等級之一:i)等級I (I級)傷口，限于上皮；ii)等級II傷口，延伸到真皮；iii)等級III傷口，延伸到皮下組織；以及iv)等級IV (或全厚度傷口，full-thickness wounds)傷口，其中骨頭外露(例如，骨壓點(diǎn)如更大轉(zhuǎn)子或骶骨)。
[0069]術(shù)語“部分厚度傷口”是指包括等級1-1II的傷口。部分厚度傷口的實例包括褥瘡、靜脈淤滯性潰瘍、以及糖尿病性潰瘍。本發(fā)明設(shè)想治療不以預(yù)期速率愈合類型的所有傷口，其包括延遲愈合傷口、不完全愈合傷口、以及慢性傷口。
[0070]“不以預(yù)期速率愈合的傷口 ”是指對任何組織的損傷，其包括延遲或難以愈合傷口 (包括延遲或不完全愈合傷口)、以及慢性傷口。不以預(yù)期速率愈合的傷口的實例包括潰瘍， 如糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍(脈管炎性潰瘍，vascultic ulcers)、動脈性潰瘍、靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、壓力性潰瘍、褥瘡性潰瘍、感染性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、燒傷性潰瘍、與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍、以及混合性潰瘍。不以預(yù)期速率愈合的其他傷口包括裂開傷口。
[0071]如在本文中所使用的，延遲或難以愈合傷口可以包括，例如，這樣的傷口，其至少部分特征在于:1)長期炎癥階段，2)緩慢形成細(xì)胞外基質(zhì)，和/或3)降低的上皮形成或閉合率。
[0072]術(shù)語“慢性傷口 ”通常是指沒有愈合的傷口。在三個月內(nèi)還未愈合的傷口例如被認(rèn)為是慢性的。慢性傷口包括靜脈性潰瘍、靜脈淤滯性潰瘍、動脈性潰瘍、壓力性潰瘍、糖尿病性潰瘍、糖尿病性足潰瘍、血管炎性潰瘍、褥瘡性潰瘍、燒傷性潰瘍、創(chuàng)傷引發(fā)性潰瘍、感染性潰瘍、混合性潰瘍、以及壞疽性膿皮病。慢性傷口可以是動脈性潰瘍，其包括起因于完全或部分動脈阻塞的潰瘍。慢性傷口可以是靜脈性或靜脈淤滯性潰瘍，其包括起因于靜脈瓣功能障礙和有關(guān)血管疾病的潰瘍。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法， 其中慢性傷口的特征在于以下壓力性潰瘍的AHCPR階段中的一個或多個:階段1、階段2、階段3、和/或階段4。
[0073]如在本文中所使用的，慢性傷口可以指，例如，這樣的傷口，其特征至少部分在于以下中的一種或多種:(I)傷口炎癥的慢性自保持(或自身延續(xù)，self-perpetuating)狀態(tài)，(2)不足和缺陷的傷口細(xì)胞外基質(zhì)，(3)不良反應(yīng)(衰老)的傷口細(xì)胞，尤其是成纖維細(xì)胞，其限制細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，和/或(4)再上皮化的失敗，部分起因于缺乏必要的細(xì)胞外基質(zhì)編排(matrixorchestration)和缺乏用于遷移的支架。慢性傷口的特征還在于:1)長期的炎癥和蛋白水解活性，其導(dǎo)致潰瘍性病變，包括例如，糖尿病性、壓力性(褥瘡性)、靜脈性、以及動脈性潰瘍；2)基質(zhì)在受影響區(qū)域中的逐步沉積，3)更長的修復(fù)時間，4)更小傷口收縮，5)更慢的再上皮化，以及6)增加的肉芽組織厚度。
[0074]示例性的慢性傷口可以包括“壓力性(壓迫性)潰瘍”。基于AHCPR (衛(wèi)生保健政策與研究署(Agency for Health Care Policy and Research),美國衛(wèi)生與公眾服務(wù)部 (U.S.Department of Health and Human Services))準(zhǔn)則，不例性的壓力性潰瘍可分為 4 個階段。階段I壓力性潰瘍是完好皮膚的明顯的壓力相關(guān)改變，與身體上的相鄰或相對區(qū)域相比，其指標(biāo)可以包括以下一種或多種的變化:皮膚溫度(溫暖或涼爽)、組織堅稠度(堅實`或軟而濕的感覺)和/或感覺(疼痛、瘙癢)。潰瘍在淺色素皮膚中顯示為持續(xù)發(fā)紅的限定區(qū)域，而在較深的膚色中潰瘍可以顯示為持久的紅色、藍(lán)色、或紫色色調(diào)。階段I潰瘍可以包括完好皮膚的不可褪色的紅斑和皮膚潰瘍的前驅(qū)病變。在具有較深膚色的個體中，皮膚變色、溫暖、水腫、硬化、或硬度也可以是階段I潰瘍的指標(biāo)。階段2潰瘍的特點(diǎn)可以是部分厚度皮膚損失，其涉及表皮、真皮、或兩者。該潰瘍是表面的并且臨床表現(xiàn)為擦傷、水皰、或淺口(或淺凹陷)。階段3潰瘍的特點(diǎn)可以是全厚度皮膚損失，其涉及皮下組織的損傷或壞死，其可以向下延伸到、但不穿過基本筋膜。該潰瘍臨床上表現(xiàn)為存在或不存在相鄰組織破壞的深口(或深凹陷)。階段4潰瘍的特點(diǎn)可以是全厚度皮膚損失，其具有廣泛的破壞、組織壞死、或?qū)∪?、骨骼、或支撐結(jié)構(gòu)(例如，腱、關(guān)節(jié)囊)的損傷。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于壓力性潰瘍的以下AHCPR階段中的一個或多個:階段1、階段2、階段3、和/或階段4。
[0075]示例性的慢性傷口還可以包括“褥瘡性潰瘍”。示例性的褥瘡性潰瘍可以由對骨隆起(bony prominence)的長期和未緩解壓力(其導(dǎo)致缺血)所引起。該傷口傾向于在不能改變本身的位置以卸下重量的患者中發(fā)生，如癱瘓、無意識或嚴(yán)重殘疾的人。如由美國衛(wèi)生與公眾服務(wù)部(U.S.Department of Health and Human Services)所定義的，主要預(yù)防措施包括高?；颊叩拇_定；經(jīng)常評估；以及預(yù)防措施如定期改變位置、適當(dāng)?shù)臏p壓寢具、防濕層、以及適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)狀況。治療選項可以包括例如，減壓、手術(shù)和酶促清創(chuàng)、潮濕傷口護(hù)理、 以及細(xì)菌負(fù)荷的控制。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于褥瘡性潰瘍或潰瘍形成，其來自對骨隆起的長期、未緩解的壓力(其導(dǎo)致缺血)。
[0076]慢性傷口還可以包括“動脈性潰瘍”。慢性動脈性潰瘍通常應(yīng)理解為伴隨動脈硬化和高血壓心血管疾病的潰瘍。它們是疼痛的、尖銳邊緣的(sharply marginated),并且經(jīng)常存在于側(cè)下肢和腳趾。動脈性潰瘍的特點(diǎn)可以是完全或部分動脈阻塞，其可以導(dǎo)致組織壞死和/或潰瘍。動脈性潰瘍的征兆可以包括，例如，四肢無脈；疼痛的潰瘍；小、點(diǎn)狀潰瘍，其通常被很好地限定范圍；涼或冷皮膚；延遲的毛細(xì)管返回時間(快速擠壓腳趾末端并釋放， 正常的顏色應(yīng)在約3秒或更短時間內(nèi)返回到腳趾);萎縮外觀皮膚(例如，發(fā)亮、薄、干);以及手指和足毛發(fā)的損失。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特點(diǎn)是由完全或部分動脈阻塞引起的動脈性潰瘍或潰瘍形成。
[0077]示例性的慢 性傷口可以包括“靜脈性潰瘍”。示例性的靜脈性潰瘍是最常見類型的影響下肢的潰瘍并且其特征可以在于靜脈瓣功能障礙。正常靜脈具有防止血液回流的瓣膜。當(dāng)這些瓣膜能力喪失時，靜脈血的回流引起靜脈充血。來自紅細(xì)胞的血紅蛋白逃逸并滲漏到血管外腔隙中，引起通常注意到的褐色變色。已表明，靜脈性潰瘍周圍的皮膚的經(jīng)皮氧壓力被降低，這提示存在阻礙該區(qū)域正常血管分布的力。淋巴引流和流動也在這些潰瘍中起作用。靜脈性潰瘍可以出現(xiàn)在內(nèi)踝附近并且通常與水腫和硬結(jié)性下肢結(jié)合出現(xiàn)；它可以較淺、不太疼并且可以呈現(xiàn)為從受影響部位的漏液排出。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由靜脈瓣功能障礙和有關(guān)血管疾病引起的靜脈性潰瘍或潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由完全或部分動脈阻塞引起的動脈性潰瘍或潰瘍形成。
[0078]示例性的慢性傷口可以包括“靜脈淤滯性潰瘍”。淤滯性潰瘍是與靜脈功能不全有關(guān)的病變，并且更通常存在于內(nèi)踝上，通常具有壓凹性水腫、靜脈曲張、斑點(diǎn)狀色素沉著、紅斑、以及不可觸及的瘀點(diǎn)和紫癜。淤滯性皮炎和潰瘍通常是搔癢而不是疼痛的。示例性的靜脈淤滯性潰瘍的特點(diǎn)可以是下肢的慢性被動性靜脈充血，其導(dǎo)致局部缺氧。這些傷口的一種可能的發(fā)病機(jī)制包括阻礙氧穿過厚血管周圍纖維蛋白套囊擴(kuò)散到組織中。另一種機(jī)制是，滲漏到血管周圍組織中的大分子捕獲為保持皮膚完整性所需要的生長因子。另外，由于靜脈充血，較大白細(xì)胞的流動會減慢，從而阻斷毛細(xì)血管，成為激活狀態(tài)，并損傷血管內(nèi)皮， 從而傾向于潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由靜脈瓣功能障礙和相關(guān)血管疾病引起的靜脈性潰瘍或潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由下肢的慢性被動性靜脈充血和/或形成的局部缺氧引起的靜脈淤滯性潰瘍或潰瘍形成。
[0079]示例性的慢性傷口可以包括“糖尿病性潰瘍”。糖尿病患者易患潰瘍，包括足部潰瘍，這起因于神經(jīng)和血管并發(fā)癥。周圍神經(jīng)病變可以引起腳和/或腿部改變的或完全喪失的感覺?；加型砥谏窠?jīng)病變的糖尿病患者減弱所有敏捷-遲鈍辨別的能力。在神經(jīng)病變患者中對足部的任何創(chuàng)口或創(chuàng)傷可能會完全被忽視數(shù)天或數(shù)周。并不少見的是，當(dāng)事實上潰瘍已存在相當(dāng)長的一段時間時，神經(jīng)病變患者才注意到潰瘍“剛剛出現(xiàn)”。對于神經(jīng)病變患者，已表明嚴(yán)格的血糖控制可以減慢該疾病的進(jìn)展。由于降低感覺，夏爾科(Charcot)足部畸形還可以發(fā)生。在其足部具有“正?！备杏X的人具有自動感覺何時太大的壓力正施加于足部區(qū)域的能力。一旦確定，我們的身體本能地移動位置以釋放該應(yīng)力?；加型砥谏窠?jīng)病變的患者會減弱這種感覺持續(xù)的壓力損害的能力，因而，可以發(fā)生組織缺血和壞死，導(dǎo)致例如足底潰瘍。另外，在足骨中的微小骨折，如果未注意且未治療，可以導(dǎo)致外形損傷、慢性腫脹以及另外的骨隆起。微血管疾病是糖尿病患者的重大并發(fā)癥之一，其還可以導(dǎo)致潰瘍形成。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于由糖尿病的神經(jīng)和血管并發(fā)癥引起的糖尿病性足潰瘍和/或潰瘍形成。
[0080]示例性的慢性傷口可以包括“創(chuàng)傷性潰瘍”。創(chuàng)傷性潰瘍的形成可以起因于對身體的創(chuàng)傷性損傷。這些損傷包括，例如，對動脈、靜脈或淋巴系統(tǒng)的損害；對骨骼的骨結(jié)構(gòu)的改變；組織層表皮、真皮、皮下軟組織、肌肉或骨的損失；對身體部位或器官的損害以及身體部位或器官的損失。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與對身體的創(chuàng)傷性損傷有關(guān)的潰瘍形成。
[0081]示例性的慢性傷口可以包括“燒傷性潰瘍”，其包括I度燒傷(即，皮膚的表面的、 變紅區(qū)域);11度燒傷(水皰損傷部位，在已除去水皰液以后，其可以自發(fā)治愈);111度燒傷 (貫穿整個皮膚的燒傷并且通常需要外科干預(yù)用于傷口愈合)；燙傷(可以起因于滾燙的熱水、油脂或散熱器液);熱燒傷(可以起因于火焰，通常是深度燒傷);化學(xué)燒傷(可以起因于酸和堿，通常是深度燒傷)；電燒傷(房屋周圍的低電壓或工作中的高壓)；爆炸焰(通常是表面損傷);以及接觸燒傷(通常是深度燒傷并且可以起因于消聲器尾管(muffler tail pipes)、 熱熨斗以及爐灶)。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與對身體的燒傷性損傷有關(guān)的潰瘍形成。
[0082]示例性的慢性傷口可以包括“血管炎性潰瘍”。血管炎性潰瘍還發(fā)生在下肢上并且是疼痛的、尖銳邊緣的病變，其可以具有有關(guān)的可觸知的紫癜以及出血性大皰。膠原疾病、 敗血癥、以及各種血液疾病(例如，血小板減少癥、異常蛋白血癥)可以是這種嚴(yán)重的、急性病癥的原因。
[0083]示例性的慢性傷口可以包括壞疽性膿皮病。壞疽性膿皮病以小腿的單個或多個非常未成熟潰瘍的形式存在。深紅色至紫色的破壞邊界圍繞化膿性中央缺損?；罱M織檢查通常不能揭示血管炎。在一半患者中，它伴隨全身性疾病如潰瘍性結(jié)腸炎、節(jié)段性回腸炎、或白血病。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與壞疽性膿皮病有關(guān)的潰瘍形成。
[0084]示例性的慢性傷口可以包括感染性潰瘍。感染性潰瘍在直接接種各種生物體后發(fā)生并且可以伴隨重要的區(qū)域腺病。實例是分枝桿菌感染、炭疽病、白喉癥、皮炎芽生菌病(blastomyosis)、孢子絲菌病、兔熱病、以及貓抓熱。一期梅毒的生殖器潰瘍通常為非觸痛性的并具有清潔的、堅實的基礎(chǔ)。軟下疳和腹股溝肉芽腫的那些生殖器潰瘍傾向于是粗糙的、骯臟的、以及更加過度(extravagant)的病變。在某些實施方式中，提供了一種治療慢性傷口的方法，其中慢性傷口的特征在于與感染有關(guān)的潰瘍形成。
[0085]如在本文中所使用的，術(shù)語“裂開傷口 ”是指具有破裂或裂開的開口的傷口，通常是手術(shù)傷口。在某些實施方式中，提供了一種治療不以預(yù)期速率愈合的傷口的方法，其中傷口的特征在于裂開。
[0086]抗連接蛋白多核苷酸
[0087]抗連接蛋白多核苷酸包括連接蛋白反義多核苷酸以及具有功能性可使它們能夠負(fù)調(diào)節(jié)連接蛋白表達(dá)(例如，通過負(fù)調(diào)節(jié)mRNA轉(zhuǎn)錄或翻譯)的多核苷酸。在負(fù)調(diào)節(jié)的情況下，通過在連接蛋白表達(dá)被負(fù)調(diào)節(jié)的部位的間隙連接，這將具有減少直接的細(xì)胞間通信的效果。
[0088]適合的抗連接蛋白多核苷酸包括RNAi多核苷酸和siRNA多核苷酸。
[0089]反義多核苷酸和其他抗連接蛋白多核苷酸如RNA1、siRNA、以及核酶多核苷酸以及具有修飾和混合主鏈的多核苷酸的合成，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見 例如，Stein C.A.and Krieg A.M.(eds)，Applied Antisense Oligonucleotide Technology, 1998(Wiley-Liss)。
[0090]根據(jù)一個方面，連接蛋白表達(dá)的負(fù)調(diào)節(jié)可以通?；诶梅戳x多核苷酸(如DNA 或RNA多核苷酸)的反義方法，并且更特別地基于使用反義寡脫氧核苷酸(ODN)。這些多核苷酸(例如，0DN)靶向待負(fù)調(diào)節(jié)的(一種或多種)連接蛋白。通常多核苷酸是單鏈的，但可以是雙鏈的。
[0091]反義多核苷酸可以抑制連接蛋白的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。優(yōu)選地，多核苷酸是來自連接蛋白基因或mRNA的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯的特異性抑制劑，但并不抑制來自其他基因或mRNA 的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。產(chǎn)物可以結(jié)合至連接蛋白基因或mRNA，(i)5'至編碼序列、和/或(ii) 至編碼序列，和/或至編碼序列。
[0092]反義多核苷酸相對于連接蛋白mRNA通常是反義的。這樣的多核苷酸可能能夠雜交于連接蛋白mRNA并且因此可能抑制連接蛋白的表達(dá)，其中通過干擾連接蛋白mRNA代謝的一個或多個方面，其包括轉(zhuǎn)錄、mRNA加工、從細(xì)胞核的mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯或mRNA降解。反義多核苷酸通常雜交于連接蛋白mRNA以形成雙鏈體，其可以引起mRNA的翻譯和/或去穩(wěn)定作用的直接抑制。這樣的雙鏈體可能易于被核酸酶降解。
`[0093]反義多核苷酸可以雜交于所有或部分的連接蛋白mRNA。通常反義多核苷酸雜交于連接蛋白mRNA的核糖體結(jié)合區(qū)或編碼區(qū)。多核苷酸可以互補(bǔ)于連接蛋白mRNA的全部或一個區(qū)域。例如，多核苷酸可以是所有或部分連接蛋白mRNA的精確互補(bǔ)體。然而，并不需要完全互補(bǔ)性，并且具有足夠互補(bǔ)性以形成在生理條件下解鏈溫度大于約20°C、3(TC或40°C 的雙鏈體的多核苷酸特別適用于本發(fā)明。
[0094]因此多核苷酸通常是互補(bǔ)于mRNA的序列的同源物(或同系物，homologue)。多核苷酸可以是在中等至高度嚴(yán)格的條件如0.03M氯化鈉和0.03M檸檬酸鈉下、在約50°C至約 60°C下雜交于連接蛋白mRNA的多核苷酸。
[0095]對于某些方面,適合的多核苷酸的長度通常為約6至40個核苷酸。優(yōu)選地多核苷酸的長度可以為約12至約35個核苷酸，或可替換地長度為約12至約20個核苷酸，或更優(yōu)選長度為約18至約32個核苷酸。根據(jù)一個可替換方面，多核苷酸的長度可以為至少約40 個，例如至少約60個或至少約80個核苷酸以及多達(dá)約100個、約200個、約300個、約400 個、約500個、約1000個、約2000個或約3000個或更多個核苷酸。[0096]由多核苷酸靶向的一種或多種連接蛋白將取決于要實施負(fù)調(diào)節(jié)的位點(diǎn)。就連接蛋白亞單位組成而論，這反映了整個身體中在不同位點(diǎn)的(一個或多個)間隙連接的非均勻構(gòu)造(構(gòu)成)。連接蛋白是在一個方面自然發(fā)生在人或動物中或自然發(fā)生在其中要降低連接蛋白表達(dá)或活性的組織中的連接蛋白。連接蛋白基因(包括編碼序列)通常與本文提及的特定連接蛋白中的一個或多個的編碼序列具有同源性，如與表2所示的連接蛋白43編碼序列的同源性。連接蛋白通常是a或0連接蛋白。優(yōu)選地，連接蛋白是a連接蛋白并且表達(dá)在要治療的組織中。
[0097]然而,就在組織中的分布而論,某些連接蛋白(connexin proteins)比其他連接蛋白更普遍存在。最廣泛存在的連接蛋白之一是連接蛋白43。靶向連接蛋白43的多核苷酸特別適用于本發(fā)明。在其他方面，靶向其他連接蛋白。
[0098]在一個優(yōu)選的方面，反義多核苷酸僅靶向一種連接蛋白的mRNA。最優(yōu)選地，這種連接蛋白是連接蛋白43。在另一個方面，連接蛋白是連接蛋白26、30、31.1、32、36、37、40、或 45。在其他方面，連接蛋白是連接蛋白30.3,31,40.1、或46.6。
[0099]還設(shè)想，組合使用靶向單獨(dú)的連接蛋白的多核苷酸(例如，可以靶向1、2、3、4或更多種不同的連接蛋白)。例如，可以組合使用靶向連接蛋白43、以及連接蛋白家族的一個或更多其他成員(如連接蛋白26,30,30.3,31.1、32、36、37、40、40.1、45、以及46.6)的多核苷酸。
[0100]可替換地，反義多核苷酸可以是組合物的一部分，其可以包含靶向多于一種的連接蛋白的多核苷酸。優(yōu)選地，多核苷酸所導(dǎo)向的連接蛋白之一是連接蛋白43。寡脫氧核苷酸導(dǎo)向的其他連接蛋白可以包括，例如，連接蛋白26,30,30.3,31.1、32、36、37、40、40.1、45、 以及46.6。導(dǎo)向各種連接蛋白的適合的示例性多核苷酸(以及0DN)列在表1中。
[0101]單獨(dú)的反義多核苷酸對于特定的連接蛋白可以是特異性的，或可以靶向1、2、3或更多種不同的連接蛋白。特異性多核苷酸將通常靶向連接蛋白基因或mRNA中的序列，其在連接蛋白之間不是保守的，而非特異性多核苷酸將靶向各種連接蛋白的保守序列。
[0102]用于本發(fā)明的多核苷酸可以適當(dāng)?shù)厥俏葱揎椀牧姿岫サ途畚?。這樣的寡脫氧核苷酸在長度上可以不同。已發(fā)現(xiàn)，一種30聚體多核苷酸是特別適合的。
[0103]描述本發(fā)明中關(guān)于寡脫氧核苷酸的許多方面。然而，應(yīng)當(dāng)理解，其他適合的多核苷酸(如RNA多核苷酸)可以用于這些方面。
[0104]可以化學(xué)修飾反義多核苷酸。這可以增強(qiáng)它們對核酸酶的抗性并且可以增強(qiáng)它們進(jìn)入細(xì)胞的能力。例如，可以使用硫代磷酸寡核苷酸。其他脫氧核苷酸類似物包括甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、N3' P5'-氨基磷酸酯和寡核糖核苷酸硫代磷酸酯以及它們的2' -0-烷基類似物和2' -0-甲基核糖核苷酸甲基膦酸酯?？商鎿Q地，可以使用混合的主鏈寡核苷酸(“MBO”)。MBO包含硫代磷酸酯寡脫氧核苷酸的節(jié)段以及適當(dāng)位置的修飾寡脫氧核苷酸或寡核糖核苷酸的節(jié)段。MBO具有硫代磷酸酯鍵的節(jié)段和其他修飾的寡核苷酸的其他節(jié)段，如甲基膦酸酯，其是非離子型的，并且非常耐核酸酶或2' -0-烷基寡核糖核苷酸。制備修飾主鏈和混合主鏈寡核苷酸的方法在本領(lǐng)域是已知的。
[0105]本發(fā)明中使用的反義多核苷酸的精確序列將取決于靶連接蛋白。在一種實施方式中，適合的連接蛋白反義多核苷酸可以包括多核苷酸如寡脫氧核苷酸，其選自以下表1中所列出的序列:
[0106]表1
[0107]
【權(quán)利要求】
1.一種對具有慢性皮膚傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括在藥用載體中給予所述傷口約0.0Olmg至約lmg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述組合物包含約0.001至約0.lmg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中,所述組合物包含約0.001至約0.01mg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
4.一種對具有慢性皮膚傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述傷口包含藥用載體和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸的治療有效量的組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸以0.5至約2.0mg/ml的濃度存在。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸以I至約5mg/ml的濃度存在。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸以1.5至約I Omg/ml的濃度存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸以5至約40mg/ml的濃度存在。
9.一種對具有慢性皮`膚傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括在藥用載體中給予所述傷口約0.01mg至約10mg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
10.一種對具有慢性皮膚傷口的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述傷口包含藥用載體和以約25-100 μ L、約100-200 μ L、約200-500 μ L或約500-1000 μ L的范圍的劑量容積存在的0.5至約1.0mg單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸的治療有效量的組合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸具有約18至約32個核苷酸。
12.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述寡脫氧核苷酸是修飾的寡脫氧核苷酸。
13.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述寡脫氧核苷酸是未修飾的寡脫氧核苷酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸是具有根據(jù)SEQ.1D.N0.:1或2的序列的寡脫氧核苷酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸與SEQ.1D.N0.:1或2具有至少約70%的同源性。
16.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸在中等至高度嚴(yán)格條件下雜交于連接蛋白43mRNA。
17.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述藥用載體包括非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥用載體包括PluronicF-127。
19.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述藥用載體包括藻酸鹽。
20.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述藥用載體包括水凝膠。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述藥用載體包括選自由包含纖維素衍生物的水凝膠和包含聚丙烯酸的水凝膠所組成的組的水凝膠。
22.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述藥用載體是基于纖維素的載體。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述藥用載體包括選自由以下各項所組成的組的基于纖維素的載體:羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素以及它們的混合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述組合物配制成用于局部給予。
25.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述組合物配制成用于持續(xù)釋放。
26.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述組合物配制成用于緩釋、延長釋放、或者控釋。
27.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述組合物是凝膠。
28.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述組合物是乳膏劑、軟膏劑、乳劑、洗劑、噴霧劑、軟膏、泡沫或涂劑。
29.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述傷口的特征至少部分在于連接蛋白43增加的表達(dá)。
30.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述傷口的特征至少部分在于炎癥。
31.合傷口。
32.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9`或10中任一項所述的方法，其中，所述傷口是延遲或不完全愈根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
33.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
34.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
35.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
36.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
37.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述傷口是混合性潰瘍。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是裂開傷口。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是靜脈性潰瘍。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是靜脈淤滯性潰中任一項所述的方法，其中，所述傷口是糖尿病性潰瘍。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是糖尿病性足潰中任一項所述的方法，其中，所述傷口是動脈性潰瘍。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是壓力性潰瘍。 中任一項所述的方法，其中，所述傷口是血管炎性潰瘍。
38.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
39.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
40.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10
41.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述傷口是由創(chuàng)傷或燒傷引起的皮膚潰瘍。
42.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者是糖尿病患者。
43.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者具有周圍神經(jīng)病變。
44.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者具有靜脈瓣功能障礙和/或靜脈功能不全。
45.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者具有動脈堵塞。
46.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述給予進(jìn)行超過一次。
47.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述給予重復(fù)約每周一次。
48.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者是人。
49.根據(jù)權(quán)利要求1、4、9或10中任一項所述的方法，其中，所述受治療者是非人動物。
50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中，所述非人動物是馬。
51.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含藥用載體和單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，以及通過給予傷口約0.0Olmg至約lmg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
52.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含藥用載體和單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，以及通過給予傷口約0.01mg至約10mg/kg體重的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
53.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含藥用載體和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的單鏈抗連接蛋`白43寡脫氧核苷酸，以及通過給予傷口所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
54.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含藥用載體和單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，用于給予具有慢性皮膚傷口的受治療者有效量的包含藥用載體和在約25-100 μ L、約100-200 μ L、約200-500 μ L或約500-1000 μ L范圍的劑量容積中0.5至約1.0mg單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸的組合物，以及通過給予傷口所述組合物用于治療受治療者的說明書。
55.一種制品，包括包含一個或多個劑量的組合物的容器，所述組合物包含(a)具有約1%-50%的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸的治療有效劑量濃度和(b)藥用載體，以及通過以單次或分開的劑量給予傷口所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
56.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含藥用載體和約30μΜ至約200μΜ濃度的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，以及通過給予傷口治療有效量的所述組合物用于治療患有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
57.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸和藥用載體，用于給予具有慢性皮膚傷口的受治療者，以及通過給予所述傷口約30至約500 μ g/平方厘米所述抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸用于治療受治療者的說明書。
58.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述受治療者具有靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍。
59.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述受治療者具有糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍。
60.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述連接蛋白43寡脫氧核苷酸具有約18至約32個核苷酸。
61.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述寡脫氧核苷酸是修飾的寡脫氧核苷酸。
62.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述寡脫氧核苷酸是未修飾的寡脫氧核苷酸。
63.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述反義寡脫氧核苷酸包含選自SEQ.1D.N0S.:1或2的序列。
64. 根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述反義寡脫氧核苷酸與SEQ.1D.N0S.:1或2 具有至少約70%的同源性。
65.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述連接蛋白43寡脫氧核苷酸在中等至高度嚴(yán)格條件下雜交于連接蛋白43mRNA。
66.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述藥用載體包括非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的制品，其中，所述非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物是Pluronic F-127。
68.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述藥用載體包括藻酸鹽、水凝膠、或基于纖維素的載體。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的制品，其中，所述水凝膠選自由包含纖維素衍生物的水凝膠和包含聚丙烯酸的水凝膠所組成的組。
70.根據(jù)權(quán)利要求68所述的制品，其中，所述基于纖維素的載體選自由羥乙基纖維素、 羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素以及它們的混合物組成的組。
71.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述組合物配制成用于局部給予。
72.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述組合物配制成用于持續(xù)釋放、緩釋、延長釋放、或者控釋。
73.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述組合物是凝膠。
74.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述傷口是慢性傷口。
75.根據(jù)權(quán)利要求53所述的制品，其中，所述受治療者是人。
76.—種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含藥用載體和單鏈抗連接蛋白 43寡脫氧核苷酸，標(biāo)記用于局部給予所述組合物以提供給具有慢性皮膚傷口的受治療者約 0.0Olmg至約lmg/kg體重的所述單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
77.—種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含藥用載體和單鏈抗連接蛋白 43寡脫氧核苷酸，標(biāo)記用于局部給予所述組合物以提供給具有慢性皮膚傷口的受治療者約 0.01mg至約10mg/kg體重的所述單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
78.一種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含藥用載體和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，以及用于局部給予慢性皮膚傷口所述一種或多種組合物的標(biāo)簽。
79.—種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含藥用載體和以約 25-100 ii L、約100-200 ii L、約200-500 ii L或約500-1000 ii L范圍的劑量容積存在的0.5至約1.0mg的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸，以及用于局部給予慢性皮膚傷口所述一種或多種組合物的標(biāo)簽。
80.一種試劑盒，包括一種組合物，所述組合物包含治療有效的劑量濃度，具有(a)約1%-50%的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸和(b)藥用載體，以及用于以單次或分開的劑量局部給予慢性皮膚傷口所述組合物的標(biāo)簽。
81.一種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含藥用載體和約30 μ M至約200 μ M濃度范圍的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸,標(biāo)記用于局部給予慢性皮膚傷口。
82.—種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸和藥用載體，標(biāo)記用于局部給予慢性皮膚傷口約30至約500 μ g/平方厘米的所述抗連接蛋白43多核苷酸。
83.根據(jù)78所述的試劑盒，其中，所述傷口是靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍。
84.根據(jù)78所述的試劑盒，其中，所述傷口是糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍。
85.—種配制成用于局部施加于人類慢性皮膚傷口的單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸組合物，其中，所述單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸在所述組合物中以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在。
86.根據(jù)權(quán)利要求85所述的組合物，其中，藥用載體包括非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物和根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
87.一種對具有靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍約0.001至約lmg/kg體重的在包含Pluronic F-127的藥用組合物中存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的多核苷酸。
88.一種對具有糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍約0.001至約lmg/kg體重的在包含Pluronic F-127的藥用組合物中存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的多核苷酸。
89.一種對具有靜脈性潰瘍或`靜脈淤滯性潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍約0.01至約10mg/kg體重的在包含Pluronic F-127的藥用載體中存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的多核苷酸。
90.一種對具有糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍約0.01至約10mg/kg體重的在包含Pluronic F-127的藥用載體中存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的多核苷酸。
91.一種對具有靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍治療有效量的組合物，所述組合物包含藥用非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
92.一種對具有糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍的受治療者進(jìn)行治療的方法，所述方法包括給予所述潰瘍治療有效量的組合物，所述組合物包含藥用非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
93.根據(jù)權(quán)利要求91或92所述的方法，其中，所述非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物是 Pluronic F-127。
94.一種適于局部施加于人類皮膚慢性傷口的組合物，包含藥用非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物和在所述組合物中以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
95.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中，所述非離子型聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物是 Pluronic F-127。
96.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中，所述多核苷酸是未修飾的寡脫氧核苷酸。
97.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中，所述慢性皮膚傷口是靜脈性潰瘍或靜脈淤滯性潰瘍。
98.根據(jù)權(quán)利要求94所述的組合物，其中，所述慢性皮膚傷口是糖尿病性潰瘍或糖尿病性足潰瘍。
99.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含Pluronic F-127和根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，以及通過給予傷口約0.0Olmg至約lmg/kg體重的所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
100.—種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含Pluronic F-127和根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，以及通過給予傷口約0.01mg至約10mg/kg體重的所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
101.一種制品，包括包含組合物的容器，所述組合物包含Pluronic F-127和以0.5至約40.0mg/ml的濃度存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，以及通過給予傷口所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
102.一種制品，包括包含一個或多個劑量的組合物的容器，所述組合物包含(a)約 1%-50%的治療有效劑量濃度的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸和(b)Pluronic F-127，以及通過以單次或分開的劑量給予傷口所述組合物用于治療具有慢性皮膚傷口的受治療者的說明書。
103.根據(jù)權(quán)利要求101所述的制品，其中，所述多核苷酸是未修飾的寡脫氧核苷酸。
104.根據(jù)權(quán)利要求99-102或103中任一項所述的制品，其中，所述慢性皮膚傷口是靜脈性潰瘍。
105.根據(jù)權(quán)利要求99-102或103中任一項所述的制品，其中，所述慢性皮膚傷口是靜脈淤滯性潰瘍。
106.根據(jù)權(quán)利要求99-102或103中任一項所述的制品，其中，所述慢性皮膚傷口是糖尿病性潰瘍。
107.根據(jù)權(quán)利要求99-102或103中任一項所述的制品，其中，所述慢性皮膚傷口是糖尿病性足潰瘍。
108.—種試劑盒,包含一種或多種組合物,所述組合物包含Pluronic F-127和根據(jù) SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，標(biāo)記用于局部給予具有慢性皮膚傷口的受治療者約0.0Olmg至約lmg/kg體重。
109.—種試劑盒,包含一種或多種組合物,所述組合物包含Pluronic F-127和根據(jù) SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，標(biāo)記用于局部給予具有慢性皮膚傷口的受治療者約0.01mg至約10mg/kg體重。
110.一種試劑盒，包含一種或多種組合物，所述組合物包含Pluronic F-127和以0.5 至約40.0mg/ml的濃度存在的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，以及用于局部給予慢性皮膚傷口所述一種或多種組合物的標(biāo)簽。
111.一種試劑盒，包括一種或多種組合物，所述組合物包含Pluronic F-127和以約25-100 μ L、約100-200 μ L、約200-500 μ L或約500-1000 μ L范圍的劑量容積存在的0.5至約1.0mg根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸，以及用于局部給予慢性皮膚傷口所述一種或多種組合物的標(biāo)簽。
112.—種試劑盒,包括一種組合物,所述組合物包含Pluronic F-127凝膠和(a)約1%-50%治療有效劑量濃度的根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸和(b) PluronicF-127，以及用于以單次或分開的劑量局部給予慢性皮膚傷口所述組合物的標(biāo)簽。
113.—種試劑盒，包含用于治療慢性皮膚傷口的治療有效劑量濃度的抗連接蛋白多核苷酸，包含Pluronic F-127和約1%_50%根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
114.一種試劑盒，包含凝膠，所述凝膠包含Pluronic F-127和用于治療慢性皮膚傷口的有效劑量濃度下的約1%_50%根據(jù)SEQ.1D.NO:1的抗連接蛋白43多核苷酸。
115.根據(jù)權(quán)利要求108-113或114中任一項所述的試劑盒，其中，所述多核苷酸是未修飾的寡脫氧核苷酸。
116.根據(jù)權(quán)利要求108-113或114中任一項所述的試劑盒，其中，所述慢性皮膚傷口是靜脈性潰瘍。
117.根據(jù)權(quán)利要求108-113或114中任一項所述的試劑盒，其中，所述慢性皮膚傷口是靜脈淤滯性潰瘍。
118.根據(jù)權(quán)利要求108-113或114中任一項所述的試劑盒，其中，所述慢性皮膚傷口是糖尿病性潰瘍。
119.根據(jù)權(quán)利要求108-113或114中任一項所述的試劑盒，其中，所述慢性皮膚傷口是糖尿病性足潰瘍。
120.包括抗連接蛋白43多核苷酸`和藥用載體的組合物在制備用于治療具有不以預(yù)期速率愈合的傷口的受治療者的藥物中的應(yīng)用，其中，給予所述傷口的所述抗連接蛋白43多核苷酸的量的范圍為約30微克至約500微克/平方厘米所述傷口。
121.包括連接蛋白43反義多核苷酸和藥用載體的組合物在制備用于治療具有延遲愈合、不完全愈合、或慢性傷口的受治療者的藥物中的應(yīng)用，其中，給予所述傷口的所述抗連接蛋白43多核苷酸的量的范圍為約30 μ M至約200 μ M/平方厘米所述傷口。
122.包括抗連接蛋白43多核苷酸和藥用載體的組合物在制備用于在具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者中促進(jìn)皮膚傷口的再上皮化的藥物中的應(yīng)用，其中，所述抗連接蛋白43多核苷酸以至少約30 μ M的濃度、有效促進(jìn)再上皮化的量存在。
123.包含連接蛋白43反義多核苷酸、藥用載體和連接蛋白31.1反義多核苷酸的藥物組合物在制備用于在具有延遲愈合、不完全愈合或慢性傷口的受治療者中促進(jìn)傷口愈合的藥物中的應(yīng)用，其中，所述連接蛋白43反義多核苷酸以至少約30 μ M的濃度存在。
124.包括抗連接蛋白43多核苷酸和藥用載體的組合物在制備用于在具有傷口的糖尿病受治療者中提高傷口愈合速率的藥物中的應(yīng)用，其中，在所述組合物中所述抗連接蛋白43多核苷酸以至少約30 μ M的濃度存在。
125.包括抗連接蛋白43多核苷酸和藥用載體的組合物在制備用于在具有傷口的糖尿病受治療者中提高傷口愈合速率的藥物中的應(yīng)用，其中所述抗連接蛋白43多核苷酸的量有效減少所述傷口或傷口區(qū)域中的異常連接蛋白43調(diào)節(jié)，其中，在所述組合物中所述抗連接蛋白43多核苷酸以至少約30 μ M的濃度存在。
126.包括藥用載體和抗連接蛋白43多核苷酸的組合物在制備用于在具有傷口的糖尿病受治療者中改善傷口閉合的藥物中的應(yīng)用，其中，在所述組合物中所述抗連接蛋白43多核苷酸以至少約30 ii M的濃度存在。
127.—種試劑盒，包括一種組合物，用于治療不以預(yù)期速率愈合的傷口，所述組合物包括藥用載體和濃度為約30 ii M至約200 u M的抗連接蛋白43反義多核苷酸。
128.根據(jù)權(quán)利要求127所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白多核苷酸是寡脫氧核苷酸。
129.根據(jù)權(quán)利要求128所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白寡脫氧核苷酸是連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸。
130.根據(jù)權(quán)利要求127、或128-129中任一項所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白43 反義多核苷酸以30-50 u M的濃度存在。
131.根據(jù)權(quán)利要求127、或128-129 反義多核苷酸以30-200 u M的濃度存在。
132.根據(jù)權(quán)利要求127、或128-129 反義多核苷酸以約100 u M的濃度存在。
133.根據(jù)權(quán)利要求127、或128-129 反義多核苷酸以約200 u M的濃度存在。 中任一項所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白43 中任一項所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白43 中任一項所述的試劑盒，其中，所述抗連接蛋白43
【文檔編號】C12N15/113GK103520197SQ201310392821
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2007年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2006年12月11日
【發(fā)明者】戴維·L·貝克爾, 科林·R·格林, 布拉德福德·J·杜夫特 申請人:科達(dá)治療公司