FoxH1基因SNP位點的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了FoxH1基因SNP位點的用途。本發(fā)明的用途是FoxH1基因SNP位點rs750472在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明的檢測試劑盒具有良好靈敏性、穩(wěn)定性和特異性。本發(fā)明的試劑盒對孕婦腹中胎兒進行先天性心臟病易感性的篩查，能有效起到風(fēng)險預(yù)警、早期診斷的作用。
【專利說明】FoxHI基因SNP位點的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及FoxHl基因SNP位點的用途及相關(guān)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]先天性心臟病(簡稱先心病,congenital heart defects, CHDs)是指胎兒發(fā)育時期(懷孕初期2-3個月內(nèi))，心臟及大血管在母體內(nèi)發(fā)育有缺陷或部分發(fā)育停頓所造成的畸形，或出生后本應(yīng)自動關(guān)閉的通道未能閉合(在胎兒屬正常)的一種出生缺陷性疾病。先天性心臟病(以下簡稱為CHDs)是人類所有出生缺陷中最為常見的疾病之一。國外資料顯示，CHDs的發(fā)病率為1%。，國內(nèi)統(tǒng)計為發(fā)病率占新生活產(chǎn)嬰兒6.87%。~14.39%0。
[0003]先天性心臟病有很多種類型，包括簡單和復(fù)雜的先心病。簡單的先心病有以下三種:室間隔缺損(ventricular septal defect, VSD)、房間隔缺損(attial septaldefect,ASD)、動脈導(dǎo)管未閉(patent ductus arteriosus, PDA)。復(fù)雜的先心病主要包括以下幾種:法洛四聯(lián)癥(tetralogy of Fallot, TOF)、肺動脈瓣狹窄(pulmonary stenosis,PS)、大動脈異位(transposition of the great arteries, TGA)、主動脈縮窄(aorticstenosis, AS)、右室雙出口(double-outlet right ventricle, D0RV),房室傳導(dǎo)阻滯(atrioventricular block, AVB)等。其中室間隔缺損(以下簡稱為VSD)在CHDs中的發(fā)病率在新生兒中約為20%，在兒童中 約為30%，是所有CHDs中發(fā)病率最高的一種。VSD是具體指室間隔在胚胎發(fā)育不全，在左、右心室之間存在一直接開口，產(chǎn)生左向右分流，可單獨發(fā)生，形成單純性室間隔缺損，也可是某種復(fù)雜心臟畸形的組成部分，形成非單純性室間隔缺損。這種心臟缺損會導(dǎo)致左心室的富氧血液流入右心室而不是正常流入主動脈。甘肅省六地市2-19歲人群中CHDs調(diào)查表明總患病率為0.571%，其中VSD占52.72%。盡管大多數(shù)VSD可通過手術(shù)方式來糾正，但手術(shù)治療會給患兒家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟負擔(dān)；況且VSD患者術(shù)后發(fā)生心臟功能異常的機率與正常人比會大大增加。因此，尋找VSD相關(guān)基因，用于產(chǎn)前診斷和基因治療，最大程度地避免VSD患兒出生和糾正遺傳缺陷，是當前心血管領(lǐng)域研究重點。先天性心臟病與自然環(huán)境、細菌、病毒、遺傳及精神狀態(tài)等因素密切相關(guān)。
[0004]單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism, SNP)是指存在于某一(些)群體、正常個體的基因組DNA中單堿基的序列差異，并且在人群中的分布頻率至少要在1%以上(Brookes AJ.Gene，1999，234 (2): 177-186)，人類遺傳基因的多態(tài)性在遺傳信息上的本質(zhì)表現(xiàn)，90%以上是由SNP所引起的。因為其多態(tài)信息量大，目前已成為繼限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)標志和微衛(wèi)星即短串聯(lián)重復(fù)(STR)標志后的第三代遺傳標志。
[0005]從基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)到臨床醫(yī)學(xué)的各個領(lǐng)域，SNP都存在巨大的應(yīng)用價值。SNP的研究為基因診斷，尤其是疾病的早期診斷提供更多依據(jù)有重要意義。SNP由于其分布廣、密度高而被期望在諸如癌癥、糖尿病、高血壓、憂郁癥和哮喘等復(fù)雜疾病的研究中起重要作用，這些復(fù)雜疾病是多個遺傳變異位點與環(huán)境因子共同作用的結(jié)果，由于發(fā)病原因復(fù)雜，涉及的基因數(shù)量多，已成為國際上疾病基因組學(xué)研究的重點。全基因組關(guān)聯(lián)研究已經(jīng)證實單核苷酸多態(tài)性增加了某些常見疾病的易感性，如癌癥，糖尿病和冠狀動脈性疾病，但對先心病的研究尚處于初期階段。目前，單核苷酸多態(tài)性與先心病的關(guān)聯(lián)研究都集中在檢測候選基因多態(tài)性上，如葉酸代謝通路基因與先心病易感性的研究，在多項研究中都發(fā)現(xiàn)葉酸代謝過程中重要的亞甲基四氫葉酸還原酶基因中的一個SNP(C677T)可導(dǎo)致酶的活性下降，但是這個結(jié)論在一項Meta分析中并未得到確定。另外，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)已被證明是正常心臟發(fā)育的關(guān)鍵基因，而VEGF的三個SNP(C2578A，G1154A，C634G)被認為與22qll缺失綜合征、TOF及VSD有關(guān)，但是和MTHFR —樣，Meta分析依然未能證實它們之間的關(guān)系，這可能和樣本量大小、基因頻率、統(tǒng)計效力及先心病表型的異質(zhì)性有關(guān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為先天性心臟病易感性的診斷或先天性心臟病藥物的個體化治療提供解決方法和相應(yīng)的試劑盒。
[0007]本發(fā)明的解決方案之一是=FoxHl基因SNP位點rs750472在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0008]方案之一中，在不區(qū)分性別的情況下，當FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型為GG時，先天性心臟病易感性(VSD)增加。
[0009]方案之二是=FoxHl基因SNP位點rs750472在制備男性先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
[0010]方案之二中，在男性中，當FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型為GG或TG時，先天性心臟病易感性(VSD)增加。
[0011]方案之一或方案之二中，所述先天性心臟病的`類型具體為室間隔缺損。
[0012]本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過能夠檢測SNP位點的任何方法或技術(shù)進行SNP基因型分析。例如，Taqman法、質(zhì)譜法、DNA微陣列法、測序法、微測序、雜交、限制性片段分析、寡核苷酸連接檢測、等位基因特異性PCR-HRM或聯(lián)合應(yīng)用上述方法檢測SNP基因型。
[0013]方案之三是:一種先天性心臟病易感性的診斷試劑盒，或一種男性先天性心臟病易感性的診斷試劑盒，包括檢測FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型的物質(zhì)。
[0014]方案之三中，所述檢測FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型的物質(zhì)包括引物對。
[0015]方案之三中，所述試劑盒還包括基因組DNA抽提試劑、PCR反應(yīng)體系試劑和DHPLC相關(guān)試劑。
[0016]方案之三中，所述引物對如SEQ ID N0.1和SEQID N0.2所示。
[0017]方案之三中，所述PCR反應(yīng)體系試劑包括dNTP、MgCl2, Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液；所述DHPLC相關(guān)試劑包括乙腈和三基乙基銨醋酸鹽。
[0018]方案之三中，所述Taq DNA聚合酶為高保真tag酶。
[0019]方案之三中，所述先天性心臟病的類型為室間隔缺損。
[0020]方案之四是:上述任一所述試劑盒在制備先天性心臟病易感性的診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用或在制備男性先天性心臟病易感性的診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0021]方案之四中，在不區(qū)分性別的情況下，當FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型為GG時，先天性心臟病易感性(VSD)增加。在男性中，當FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型為GG或TG時，先天性心臟病易感性(VSD)增加。
[0022]本發(fā)明的優(yōu)點為:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)位于FoxHl基因SNP位點rs750472與先天性心臟病相關(guān)。可通過SNP來檢測先天性心臟病易感風(fēng)險性。本發(fā)明的檢測試劑盒具有良好靈敏性、穩(wěn)定性和特異性。本發(fā)明的試劑盒對孕婦腹中胎兒進行先天性心臟病易感性的篩查，能有效起到風(fēng)險預(yù)警、早期診斷的作用。【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1為rs750472位點PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果(373bp)。
[0024]圖2為rs750472位點PCR產(chǎn)物的DHPLC洗脫圖譜。
[0025]圖3為rs750472位點三種基因型的測序結(jié)果。
[0026]圖4為rsl480000位點PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果(404bp)。
[0027]圖5為rsl480000位點PCR產(chǎn)物的DHPLC洗脫圖譜。
[0028]圖6為rsl480000位點三種基因型的測序結(jié)果。
【具體實施方式】
[0029]以下結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
[0030]本實施例中涉及的材料和試劑如下:
[0031]1、研究對象
[0032]收集2008年3月至2009年9月甘肅省人民醫(yī)院和蘭州大學(xué)第一醫(yī)院心臟外科197位先天性室間隔缺損的患者為病例組，其中單純性室缺患者146位，非單純性室缺患者51位，所有患者均經(jīng)通過其病史詢問，體格檢查，胸部X線檢查，12導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查，最后經(jīng)彩色多普勒超聲心電圖檢查確診。同時排除了臨床上診斷已知的染色體異常疾病。對照組收集209位與病例組性別和民族相匹配的在當?shù)蒯t(yī)院參加體檢的健康志愿者并且詢問病史均無先天性心臟病家族史。所有納入的樣本均得到了供者的知情同意書，如果參與者年齡太小，也得到了其父母的知情同意。此項研究通過了蘭州大學(xué)倫理委員會的倫理要求。
[0033]2、主要試劑
[0034]飽和酚(pH >7.8)、氯仿(天津市天新精細化工開發(fā)中心)、異戊醇、無水乙醇、十二烷基磺酸納(SDS)、Tris、硼酸、溴化乙啶(均為分析純)。
[0035]DHPLC所用緩沖液試劑乙三胺(TEAA),乙腈(均為色譜純)均購自TransgenomicInc, USA。
[0036]生物試劑:RNA酶、蛋白酶 K (Merck KgaA, Germany) > Taq DNA polymerase (MBI) >IOmM dNTP mixture、常熔點瓊脂糖(Spain)、DNA對照標準品Markerl (購自廣州東盛生物技術(shù)有限公司)等。
[0037]3、主要儀器
[0038]UV7501紫外分光光度計(上海天美科學(xué)儀器有限公司)[0039]低溫臺式離心機:
[0040](I).臺式高速冷凍離心機(北京長流科學(xué)儀器公司)
[0041](2).MIRK0-22R (Hettich Zentrifugen, Germany)
[0042]PCR 儀(Bio-Rad iCyclerl70-870s.Bio-Rad Laboratories, Inc., USA)
[0043]電泳儀:DYY_6B型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京市六一儀器廠)
[0044]凝膠成像儀(UVPBioimaging system, UVP，Inc., UK)
[0045]高壓蒸汽滅菌鍋(廣州醫(yī)用設(shè)備廠)
[0046]變性高效液相色譜儀DHPLC WAVE35OO (Transgenomic Inc, Omaha, USA)
[0047]硬件系統(tǒng):WAVE L-7100型四元梯度溶液注入系統(tǒng)(含四元梯度泵)
[0048]WAVE L-7250型Peltier可冷卻、加熱自動進樣器
`[0049]WAVE L-7300 型高精度 Peltier 柱箱
[0050]WAVE L-7400型紫外/可見光檢測器
[0051]WAVE L-7000在線去氣裝置:四通道，樣品池(可容納4個96孔PCR板，以便進行大規(guī)模分析篩查)
[0052]WAVE Maker數(shù)據(jù)工作站系統(tǒng)(硬件)等。
[0053]軟件部分Microsoft Windows (NT操作系統(tǒng)，HSMD-7000數(shù)據(jù)工作站控制接口軟件，WAVEMaker核苷酸片段分析系統(tǒng)專用軟件包。
[0054]測序儀器:ABIPRISM3730。
[0055]其他包括:微波爐、微量移液槍(1000ul、200ul、50ul、10ul、2.5ul)等
[0056]Nanodrop2000 微量核酸蛋白檢測儀；Thermal scientific (美國)
[0057]實施例1
[0058]1.1酚氯仿提取DNA ；
[0059]1、提取DNA之前，將DNA提取所需物品和試劑進行121 °C 15_20min高壓蒸汽滅菌。如:EP管、槍頭、白細胞裂解液、小燒杯、紅細胞裂解液、醋酸鈉溶液、TE緩沖液，烘箱65°C烘干。
[0060]2、提取DNA之前半小時將血樣(EDTA抗凝處理)從_20°C冰箱轉(zhuǎn)移至室溫中(相當于空氣浴)，讓其緩慢融化。
[0061]3、混勻全血，取500ml血樣于2ml FP管中，加入2_3倍體積的紅細胞裂解液，上下顛倒，搖晃5min后置于冰箱中約2min(相當于冰浴)，2min后離心(12000rpml0min)去上清。
[0062]4、再次加入上一步同等量的紅細胞裂解液重懸沉淀再次離心(12000rpml0min)
棄上清。
[0063]5、用移液槍將EP管內(nèi)殘余的紅細胞裂解液吸干凈，加入500ul白細胞裂解液，然后將細胞吹散，然后加入5ul 10mg/ml的蛋白酶K，再加入30ul 10 % SDS’輕輕混勻，37°C水浴過夜(最好不要超過16個小時)。
[0064]6、將EP管從水浴鍋中取出，加入Tris平衡酚500ul上下顛倒FP管約5分鐘使其充分混勻，然后離心(12000rpml0min)，將EP管內(nèi)的上層的液體，用切尖的黃槍頭小心的將上層轉(zhuǎn)移到一個新的EP管中，不要將中間層的蛋白轉(zhuǎn)移至EP管中，棄下層，重復(fù)這個步驟。
[0065]7、往轉(zhuǎn)移上層液體的EP管內(nèi)加入2-3倍體積的氯仿:異戊醇(24: I)，上下顛倒混勻，離心(12000rpml0min)。
[0066]8、將離心后的上層液體轉(zhuǎn)移到干凈的滅過菌的小燒杯中，加入1/10體積的醋酸鈉溶液(3M/L)，然后加入2-3倍體積之前冰浴的無水乙醇，邊加邊搖晃小燒杯，此時動作都輕柔，避免析出的DNA的物理性斷裂。
[0067]9、將沉淀的DNA用微量加樣槍小心轉(zhuǎn)移至新的EP管中，用75%的乙醇輕柔的洗滌DNA,以去除DNA上面附著的醋酸鈉，然后離心(10000rpm5min)。
[0068]10、緩慢倒出75 %乙醇，待乙醇完全揮發(fā)后，加入適量TE緩沖液溶解DNA，將母液置于_20°C保存，分裝出的工作液于4°C保存。
[0069]1.2DNA純度的測定
[0070]取DNA樣品Iul于比色皿中，用59ul雙蒸水稀釋(I: 60)后，用紫外分光光度計測定260nm、280nm處吸光度值(0D260和0D280)，計算所獲取的DNA樣品的純度。DNA應(yīng)在DNA應(yīng)在0D260處有顯著吸收峰，0D260值為I相當于大約50ug/ml雙鏈DNA，A260/A280比值應(yīng)為1.7-1.9，本實驗所有核酸樣本在分裝前均做了核酸定量，確保每個樣的純度在
1.7-1.9之間，且濃度為20ng/ul。
[0071]1.3引物設(shè)計與合成
[0072]針對FoxHl基因SNP位點rs750472和rs 1480000設(shè)計引物。雖然DHPLC分析的DNA分子的大小為150-800bp，但最合適的片段大小為300bp左右。
[0073]通過美國國家醫(yī)學(xué) 圖書館Pubmed 引擎(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/sites/snp)檢索到每個位點的側(cè)翼序列，輸入在線軟件Primer3(http://frod0.w1.mit.edu/primer3)進行引物設(shè)計。通過UCSC_PCR(http://genome.ucsc.edu)驗證其特異性后交上海生工生物技術(shù)公司合成，引物濃度調(diào)整到20 μ M-20°C保存。各位點引物序列及PCR產(chǎn)物如下:
[0074]rs750472
[0075]引物:P1GGAGAGTCAGAGATAGAAGG(SEQ ID N0.1) ；Tm:50.4°C GC%:50
[0076]P2 CTGGTATTGTGTATCCTGCC(SEQ ID N0.2) ；Tm:55.5.1°C GC%:50
[0077]PCR 產(chǎn)物:404bp,如 SEQID N0.3 所示。
[0078]rsl480000
[0079]引物:PlTCAGTTGAGTCAATGTGTCC(SEQ ID N0.4)
[0080]Tm:54.3°C GC%:45
[0081]P2 TTGGTTAATCTGGAAGGGAG(SEQ ID N0.5)
[0082]Tm:56.7°C GC%:45
[0083]PCR 產(chǎn)物:373bp,如 SEQ ID N0.6 所示。
[0084]1.4PCR 擴增
[0085]在25 μ IPCR混合反應(yīng)液中，分別含有1.0mM MgC12，4種dNTP各120 μ Μ，各種引物分別為 0.12 μ M，TaqDNA polymerasel.6u，模板 DNA20ng。PCR 退火溫度見表 I。PCR 條件為:預(yù)變性94°C，5min ;循環(huán):變性95°C，30s，退火54-55 °C，45s，延伸72 °C，45s，循環(huán)數(shù)為35 個；總延伸 72°C，5min。
[0086]擴增的PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳(FB溴化乙錠染色)檢測后用凝膠成像系統(tǒng)進行初步驗證。[0087]1.5DHPLC 分型
[0088]1、確定引物:利用WAVEMAKER4.1軟件分析候選的若干引物的解鏈溫度，根據(jù)曲線變化趨勢(解鏈溫度區(qū)間窄、平滑且拐點少)選定最佳的引物。
[0089]2、檢測PCR產(chǎn)物的純度:在50.(TC的柱溫下，選擇Universal Liner檢測類型，根據(jù)目的片段的DHPLC洗脫圖峰型確定PCR適合的擴增條件，然后進行待測樣本的大量PCR擴增。
[0090]3、設(shè)定dsDNA分離柱的溫度:在部分變性的溫度下，導(dǎo)入所要檢測的DNA序列和突變位點所在的位置，根據(jù)位點在擴增PCR片段中的位置利用WAVEMAKER4.1軟件預(yù)測DHPLC分型的合適柱溫，最終最適溫度取決于位點所在DNA片段區(qū)域的局部解鏈溫度，通常需要在預(yù)測溫度土(1-2) V內(nèi)進行預(yù)實驗調(diào)節(jié)柱溫，每次變化的溫度控制在0.5°C以內(nèi)，根據(jù)得到的PCR產(chǎn)物洗脫圖譜的最佳峰型所對相應(yīng)的PCR產(chǎn)物進行測序驗證，確定此樣本為標準品的基因型及相應(yīng)的DHPLC洗脫峰型(通常選定DHPLC洗脫峰型對稱性好、峰寬較窄且峰頂端尖銳的野生型樣本的PCR產(chǎn)物為標準品)。
[0091]4、進行待測樣本的高通量DHPLC分型，具體檢測步驟如下:
[0092]I)單個樣本檢測:將待分型位點的PCR產(chǎn)物于95°C下變性5分鐘，然后經(jīng)過1°C /分鐘的溫度梯度冷卻至56°C，在56°C保持10分鐘之后緩慢冷卻至室溫后上樣。
[0093]2) DNA片段在一系列的乙腈梯度下洗脫(緩沖液A、B、C、D)。梯度洗脫液的濃度是由WAVEMAKER4.1軟件(Transgenomic)和DHPLC系統(tǒng)自動調(diào)節(jié)的。
[0094]3)混合樣本檢測:單個樣本上樣檢測后，將標準樣品即已知基因型的野生型純合樣本與待測單峰樣本按1:1的體積比(共6微升)混合上樣，與標準品比較兩者之間洗脫峰圖譜的差別。
[0095]4)將分型結(jié)果通過直接測`序(通常測序樣本量需要大于10%總樣本量)和將突變樣本兩兩混合進行驗證。
[0096]5) DHPLC的數(shù)據(jù)收集和分析由WAVEMAKER4.1軟件自動完成。
[0097]高分辨熔解選擇HRM通道，按Rotor gene6000儀器默認條件進行。熔解溫度范圍按不同擴增子Tm±3°C確定。
[0098]1.6統(tǒng)計學(xué)處理與分析
[0099]各基因多態(tài)性位點的等位基因頻率用Hard-Weinberg平衡檢測。病例一對照分析中，各位點多態(tài)性與VSD易患風(fēng)險相關(guān)性有無顯著性差異經(jīng)由X 2檢測進行判定，并且根據(jù)受試者的性別進行分層統(tǒng)計。P <0.05認為有顯著性差異。關(guān)聯(lián)度由OR值及95%置信區(qū)間(95% Cl)表示。
[0100]1.7 結(jié)果:
[0101]1.7.1Hardy-Weinberg平衡遺傳吻合度檢驗
[0102]檢測到對照組中rs750472和rs 1480000位點基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P > 0.05)(表1)。可以認為本研究的研究人群基因頻率能代表群體的基因分布。
[0103]表1Hardy-Weinberg 檢測
[0104]
【權(quán)利要求】
1.FoxHl基因SNP位點rs750472在制備先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
2.FoxHl基因SNP位點rs750472在制備男性先天性心臟病易感性的診斷試劑盒中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述先天性心臟病的類型為室間隔缺損。
4.一種先天性心臟病易感性的診斷試劑盒，或一種男性先天性心臟病易感性的診斷試劑盒，包括檢測FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型的物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于:所述檢測FoxHl基因SNP位點rs750472的基因型的物質(zhì)包括引物對。
6.如權(quán)利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括基因組DNA抽提試劑、PCR反應(yīng)體系試劑和DHPLC相關(guān)試劑。
7.如權(quán)利要求4-6中任一所述的試劑盒，其特征在于:所述引物對如SEQID N0.1和SEQ ID N0.2 所示。
8.如權(quán)利要求4-7中任一所述的試劑盒，其特征在于:所述PCR反應(yīng)體系試劑包括dNTP、MgCl2, Taq DNA聚合酶、PCR反應(yīng)緩沖液； 所述DHPLC相關(guān)試劑包括乙腈和三基乙基銨醋酸鹽。
9.如權(quán)利要求4-8中任一所述的試劑盒，其特征在于:所述TaqDNA聚合酶為高保真tag 酶； 所述先天性心臟病的類型為室間隔缺損。
10.權(quán)利要求4-9中任一所述試劑盒在制備先天性心臟病易感性的診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用或在制備男性先天性心臟病易感性的診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12Q1/68GK103555822SQ201310398790
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】謝小冬, 蘇剛, 李培強, 吳驊, 李炯, 陳晶晶 申請人:謝小冬