具有生物防治作用的勐海產(chǎn)氣霉的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了1株對多種植物病原微生物和人體病原微生物具有抑制作用的產(chǎn)氣霉屬真菌，它是勐海產(chǎn)氣霉(Musodormenghaiensis)；它能用于植物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的生物防治，具有開發(fā)利用的價值。CGMCC No637820120717
【專利說明】具有生物防治作用的勐海產(chǎn)氣霉

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是涉及1株產(chǎn)氣霉屬真菌：勐海產(chǎn)氣霉， 它能夠抑制植物病原微生物和人體病原微生物，對于植物病原微生物和人類生活環(huán)境病原 微生物具有生物防治作用。 發(fā)明背景
[0002] 內(nèi)生真菌（Endophytic fungi)是指那些在其生活史的部分或全部階段能在健康 植物組織內(nèi)部定植,且不會對宿主植物造成明顯傷害的一類真菌。宿主植物與內(nèi)生真菌在 長期的協(xié)同進化過程中形成了互惠互利的共生關(guān)系。植物可為內(nèi)生真菌提供生存空間、水 分和其他營養(yǎng)成分，保護其不受外界環(huán)境的影響而在植物體內(nèi)生存繁衍；另一方面，內(nèi)生 真菌也能夠產(chǎn)生一些促進植物生長發(fā)育、提高植物抗脅迫能力的次生代謝產(chǎn)物，包括激素、 酶、抗生素及其它殺蟲抑菌物質(zhì)。這些發(fā)現(xiàn)使得內(nèi)生真菌在生物活性物質(zhì)篩選的研究領(lǐng)域 中顯示出巨大的應(yīng)用潛力，逐漸成為國內(nèi)外研究的熱點之一。
[0003] 目前，對于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的植物病原菌、建筑材料的霉變和人類生存環(huán)境的病原菌 的防治，人們主要依靠人工合成的化學(xué)藥劑，但是，這些化學(xué)成分大多數(shù)具有致癌性，且不 易降解，對人類和動物及環(huán)境均具有很大的毒性。因此，這一類化學(xué)藥劑產(chǎn)品將會逐漸被限 制。在這種情況下，新型環(huán)保的生物殺菌劑的開發(fā)和利用顯得尤為迫切。
[0004] 產(chǎn)氣霉屬（Muscodor)真菌屬于子囊菌綱炭角菌目，該屬物種的顯著特征是能夠 產(chǎn)生一系列揮發(fā)性氣體化合物 [1]。經(jīng)實驗證明，這些揮發(fā)性物質(zhì)形成的混合氣體可以有效 地抑制植物病原菌及人類病原微生物。這一生物學(xué)特性使得產(chǎn)氣霉屬真菌在土傳病害等方 面具有很好的應(yīng)用前景。2002年，美國AgreQuest公司以白色產(chǎn)氣霉（M albus)為基礎(chǔ)，首 家推出世界上第一種可以替代傳統(tǒng)劇毒土壤熏蒸劑溴代甲烷（已被禁用）的真菌熏蒸劑。 這種真菌熏蒸劑也可以有效地防治引發(fā)"病房綜合征"的病原霉菌和細菌。目前全世界已 報道8個產(chǎn)氣霉屬物種Γ 8]。本專利采用組織塊分離法，從蘭科植物中分離得到一株產(chǎn)氣 霉屬真菌，綜合形態(tài)鑒定、分子鑒定和化學(xué)分析的結(jié)果，這株真菌為產(chǎn)氣霉屬的新物種，命 名為：動海產(chǎn)氣霉（Mmenghaiensis X.M. Tan et S.X. Guo)。培養(yǎng)皿對峙實驗證明，該真菌 產(chǎn)生的氣體混合物對終極腐霉、金黃色葡萄球菌、新型隱球酵母等多種植物病原微生物和 人體病原微生物具有強烈的抑制和殺滅作用，顯示它具有開發(fā)為殺菌劑的巨大潛力。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的為提供一株產(chǎn)氣霉屬（Muscodor)真菌：動海產(chǎn)氣霉；它可以應(yīng)用于 多種病原真菌和細菌的生物防治。
[0006] 本發(fā)明采取如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0007] 勐海產(chǎn)氣霉（M menghaiensis X. M. Tan et S. X. Guo)于 2012 年 7 月 17 日保藏于 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC No. 6378。保藏單位 地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。菌株的保藏和存活證 明見附件。
[0008] 勐海產(chǎn)氣霉的培養(yǎng)特性如下：
[0009] PDA培養(yǎng)基上菌落白色，背面無色，生長緩慢，25°C暗培養(yǎng)2周菌落直徑43-48mm， 邊緣不規(guī)則，呈花瓣狀，氣生菌絲毛狀，較發(fā)達，產(chǎn)生特殊的氣味；菌絲透明，壁薄，具有橫膈 膜，直徑1.4-3. 6 μ m，常呈90°分枝，纏結(jié)在一起形成"繩索鏈"(rope_like strands)及網(wǎng) 狀結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑20-40 μ m，部分菌絲中間膨大形成不規(guī)則塊 狀的菌絲細胞；菌絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。
[0010] 勐海產(chǎn)氣霉的核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)序列（6378-1)、核 糖核酸聚合酶Π 亞基（RPB2)序列（6378-2)、β -微管蛋白（β -tublin)序列（6378-3)和 核糖體脫氧核糖核酸大亞基（28S)序列￠378-4)如序列表所示。
[0011] ①勐海產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬菌株M25 (Genbank accession HM595539)和M yucatanensis(Genbank accession FJ917287)相似性分別為 99%和 98%。以 Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的ITS序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化 發(fā)育樹。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為5個分支，勐海產(chǎn)氣霉與菌株M25聚類在分 支C中，支持強度88% ;M yucatanensis聚類在分支D中。
[0012] ②勐海產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬菌株M25 (Genbank accession HM595623)的RPB2序列 相似性為86%，與白色產(chǎn)氣霉菌株S13-1-2 (Genbank accession GQ241929)的RPB2序列 相似性為99%。以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真 菌的RPB2序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分支， 勐海產(chǎn)氣霉、勐養(yǎng)產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 3672與白色產(chǎn)氣霉菌株S13-1-2和B-23 (Genbank accession FJ480345)聚類在分支C中，支持強度100% ;菌株M25聚類在分支B中。
[0013] ③勐海產(chǎn)氣霉與產(chǎn)氣霉屬菌株S18-3-1 (Genbank accession HM034846)和白色產(chǎn) 氣霉菌株9_6(Genbank accession HM034844)的β-tublin基因序列相似性分別為90% 和82%。以Sordariafimicola為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 β -tublin序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹形圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分支， 勐海產(chǎn)氣霉、麻栗坡產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 3671和菌株S18-3-1聚類在分支A中，支持強度 79% ;白色產(chǎn)氣霉菌株9-6聚類在分支B中。
[0014] ④勐海產(chǎn)氣霉與白色產(chǎn)氣霉菌株9-6 (Genbank accession HM034865)的28S序列 存在3個堿基的差異，相似性99%。以Taphrina deformans和Taphrina sp.為外類群，基 于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的28S序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹。在這個樹形 圖中，產(chǎn)氣霉屬真菌被分為3個分支，勐海產(chǎn)氣霉、麻栗坡產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 3671和白 色產(chǎn)氣霉菌株9-6聚類在分支A中，支持強度99 %。
[0015] 在形態(tài)學(xué)上，勐海產(chǎn)氣霉部分菌絲中間膨大形成不規(guī)則塊狀的菌絲細胞，己報道 的產(chǎn)氣霉屬其他物種都不具有這一特點[Η]。分析勐海產(chǎn)氣霉釋放的揮發(fā)性氣體的化學(xué) 成分，其中主要含有 3-Cyclohexene-l-carboxaldehyde，4_ (4-methyl_3-pentenyl)-和 Methoxyacetic acid，3-tridecyl ester，不能檢測到萘及其衍生物。
[0016] 綜合形態(tài)鑒定、分子鑒定和化學(xué)分析的結(jié)果，勐海產(chǎn)氣霉是產(chǎn)氣霉屬的一個新物 種，命名為 M menghaiensis X.M.Tan et S.X.Guo,模式菌株為 CGMCC No.6378。
[0017] 勐海產(chǎn)氣霉產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體是有效的混合殺菌劑，能抑制或殺滅多種病原 細菌和真菌，如：金黃色葡萄球菌Staphy loccocus aureus、枯草芽孢桿菌Bacillus subtil is、新型隱球酵母 Cryptococcus neoformans、煙曲霉 Aspergi I lusfumi gatu、終極腐 霉 Pythium ultimum、灰葡萄抱 Botrytis cinerea、腐皮鎌抱 Fusarium solani、鎊腐柱抱 Cylindrocarpon distructans。它能用于對植物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的 生物防治。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1 :基于ITS-rDNA序列構(gòu)建的NJ(Neighbor-Joining)系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示動 海產(chǎn)氣霉與同屬真菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0019] 圖2 :基于RPB2基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示勐海產(chǎn)氣霉與同屬真菌 及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0020] 圖3 :基于β-微管蛋白（β-tublin)基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示 勐海產(chǎn)氣霉與同屬真菌及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。
[0021] 圖4:基于28S基因序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)發(fā)育進化樹，顯示勐海產(chǎn)氣霉與同屬真菌 及炭角菌目其他類群的親緣關(guān)系。

【具體實施方式】
[0022] 實施例1.勐海產(chǎn)氣霉的形態(tài)學(xué)鑒定
[0023] 在PDA培養(yǎng)基上，CGMCC No. 6378菌落白色，背面無色，生長緩慢，25 °C暗培養(yǎng) 2周菌落直徑43-48mm，邊緣不規(guī)則，呈花瓣狀，氣生菌絲毛狀，較發(fā)達，產(chǎn)生特殊的氣味； 菌絲透明，壁薄，具有橫膈膜，直徑1. 4-3. 6 μ m，常呈90°分枝，纏結(jié)在一起形成"繩索 鏈"(rope_like strands)及網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑20-40 μ m，部 分菌絲中間膨大形成不規(guī)則塊狀的菌絲細胞；菌絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢結(jié) 構(gòu)。
[0024] 菌株CGMCC No. 6378部分菌絲中間膨大形成不規(guī)則塊狀的菌絲細胞，己報道的產(chǎn) 氣霉屬其他物種均不具有這一特點Γ81。
[0025] 實施例2.勐海產(chǎn)氣霉的分子生物學(xué)鑒定
[0026] 將真菌接種到PDA培養(yǎng)基上，在暗室內(nèi)25°C培養(yǎng)2周后提取DNA。DNA提取方法 參照真菌DNA提取試劑盒的使用指南進行（E.Z.N. ATM Fungal DNA Kit, Omega Bio-Tek, Doraville, Georgia, USA) 〇
[0027] 核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)的擴增采用真菌通用引物ITSl
[0028] (5，_TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3')和 ITS4(5' -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3，）。 50 μ LPCR 擴增反應(yīng)體系：Mix25 μ L，引物各 2 μ L (5 μ M)，模板 2-10 μ L，CldH2O 補足 50 μ L。 PCR擴增反應(yīng)條件：94°C預(yù)變性3min，94°C變性30s，55°C退火25s，72°C延伸30s，共35個循 環(huán)后，72°C C再延伸7min，暫時4°C C保存；如保存時間在2天以上，-20°C C保存。PCR擴 增產(chǎn)物經(jīng)0. 8 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序 所用引物與擴增反應(yīng)的相同。
[0029] 核糖核酸聚合酶II亞基（RPB2)的擴增采用引物RPB2-5f(5' -GAYGAYMGWGATCAY TTYGG-3')和 RPB2-7cr(5' -CCCATRGCTTGYTTRCCCAT-3'）。5(^1^?0?擴增反應(yīng)體系： Mix25 μ L，引物各 2 μ L(5 μ Μ)，模板 2-10 μ L，CldH2O 補足 50 μ L。PCR 擴增反應(yīng)條件：95°C 預(yù)變性5min，95°C變性60s，55°C退火120s，72°C延伸I. 5min，共35個循環(huán)后，72°C再延伸 lOmin，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊脂糖凝 膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序所用引物與擴增反應(yīng)的相 同。
[0030] β -微管蛋白（β-tublin)的擴增采用 bena-Tl(5 ' -AACATGCGTGAGATTG TAAGT-3'）和 bena-T22(5' -TCTGGATGTTGTTGGGAATCC-3'）。5(^1^?0?擴增反應(yīng)體系： Mix25 μ L，引物各 2 μ L(5 μ M)，模板 2-10 μ L，CldH2O 補足 50 μ L。PCR 擴增反應(yīng)條件：94°C 預(yù)變性3min，94°C變性30s，53°C退火50s，72°C延伸I. 5min，共35個循環(huán)后，72°C再延伸 lOmin，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊脂糖凝 膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序所用引物與擴增反應(yīng)的相 同。
[0031] 核糖體脫氧核糖核酸大亞基（28S)的擴增采用引物 擴增反應(yīng)體系：Mix25 μ L，引物各2 μ L (5 μ M)，模板2-10 μ L，CldH2O補足50 μ L。PCR擴增反 應(yīng)條件：95°C預(yù)變性3min，95°C變性45s，53°C退火45s，72°C延伸30s，共30個循環(huán)后，72°C 再延伸7min，暫時4°C保存；如保存時間在2天以上，-20°C保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)0. 8%瓊 脂糖凝膠電泳檢測，在紫外燈下觀察，有條帶的PCR產(chǎn)物進行測序。測序所用引物與擴增反 應(yīng)的相同。
[0032] 菌株 CGMCC No. 6378 的 ITS-rDNA、RPB2、β -tublin 和 28S 基因序列見序列表，序 列編號分別為 SEQ6378-1，SEQ6378-2, SEQ6378-3 和 SEQ6378-4。
[0033] BLASTn搜索結(jié)果表明，菌株CGMCC No. 6378與產(chǎn)氣霉屬菌株M25的ITS序列和 RPB2序列的相似性均為86%，與M yucatanensis的ITS序列相似性98%，與白色產(chǎn)氣霉菌 株S13-1-2的RPB2序列相似性99%，與白色產(chǎn)氣霉菌株9-6的β-tublin序列和28S序列 的相似性分別為82%和99%，與菌株S18-3-1的β -tublin序列的相似性為90%。
[0034] 以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 ITS序列構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖1)。在這個樹狀圖中，菌株CGMCC No. 6378與菌 株M25聚類在支持強度為88 %的分支C中。
[0035] 以Agaricus bisporus為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 RPB2序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖2)中，菌株CGMCC No. 6378與勐養(yǎng)產(chǎn)氣霉菌 株CGMCC No. 6372、白色產(chǎn)氣霉菌株S13-1-2和B-23聚類在分支強度為100%的分支C中。
[0036] 以Sordariafimicola為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他相關(guān)屬真菌的 β -tublin序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹狀圖（圖3)中，菌株CGMCC No. 6378與麻栗坡產(chǎn) 氣霉菌株CGMCC No. 6371、菌株S18-3-1聚類在分支強度為79%的分支A中。
[0037] 以Taphrinadeformans和Taphrina sp.為外類群，基于產(chǎn)氣霉屬和炭角菌科其他 相關(guān)屬真菌的28S序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進化發(fā)育樹（圖4)中，菌株CGMCC No. 6378與麻栗 坡產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6371、白色產(chǎn)氣霉菌株9-6聚類在支持強度為99%的分支A中。
[0038] 綜合多基因序列片段的比對和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖的結(jié)果，菌株CGMCC No. 6378 與麻栗坡產(chǎn)氣霉菌株CGMCC No. 6371和白色產(chǎn)氣霉的同源性較高。但在形態(tài)上，麻栗坡產(chǎn) 氣霉菌株CGMCC No. 6371的部分菌絲中間膨大形成具有"8"字形結(jié)構(gòu)的菌絲細胞，白色產(chǎn) 氣霉不具有菌絲膨大的特點。因此，菌株CGMCC No. 6378是產(chǎn)氣霉屬的一個新物種，命名為 動海產(chǎn)氣霉（Muscodor menghaiensis X.M. Tan et S.X. Guo)。
[0039] 實施例3.勐海產(chǎn)氣霉的抑菌譜測試及分析
[0040] 供試菌為勐海產(chǎn)氣霉。指示菌包括：①3種人體病原細菌：大腸桿菌（Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus)、枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis); ②2種人體病原酵母菌：白色念珠菌（Canidia albicans)、新型隱球酵母（Cryptococcus neoformans);③6種植物病原真菌：煙曲霉（Aspergillusfumigatu)、終極腐霉（Pythium ultimum)、灰葡萄抱（Botrytis cinerea)、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani)、腐皮鎌抱菌 (Fusarium solani)、誘腐柱抱（Cylindrocarpon distructans) 〇
[0041] 將新鮮的PDA倒入一次性分隔塑料培養(yǎng)皿（two-section Petri dish)中，在其中 一側(cè)接入一塊直徑為5mm的供試菌菌塊，25°C暗培養(yǎng)7天后，在分隔塑料培養(yǎng)皿的另一側(cè)接 種指示菌。指示菌的類型不同，接種方法會有差別。對細菌和酵母菌，采用劃線接種的方法； 對其它指示菌，接種相同直徑大小的菌塊。每個處理重復(fù)3皿，以不加供試菌菌塊的處理為 空白對照。25°C暗培養(yǎng)3天后觀察并記錄實驗結(jié)果。細菌和酵母菌的抗菌活性通過與空白 對照比較得出的百分比進行估算；對其它指示菌，用游標(biāo)卡尺測量供試菌處理組和空白對 照組中指示菌的菌落直徑。測量完成后，將指示菌菌塊轉(zhuǎn)接到新的PDA培養(yǎng)基上，觀察指示 菌的存活能力 [1'3]。研究結(jié)果見表1。
[0042] 研究結(jié)果表明：在供試的11種病原微生物中，勐海產(chǎn)氣霉產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體物質(zhì) 對其中的8種病原微生物具有不同程度的抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌、新型隱球酵 母和終極腐霉具有完全殺滅的作用，但對大腸桿菌、白色念珠菌和立枯絲核菌沒有抑制作 用。
[0043] 表1勐海產(chǎn)氣霉產(chǎn)生的揮發(fā)性氣體對指示菌生長的影響
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 能夠抑制植物病原微生物和人體病原微生物的一株真菌，它是保藏編號為CGMCC 1'1〇.6378 的動海產(chǎn)氣霉（]\1118(30(1〇1'11161^1131611818乂.]\113116七3.乂.6110);它能夠用于對植 物病原微生物和人類生活環(huán)境病原微生物的生物防治。
2. 權(quán)利要求1所述的一株真菌，其形態(tài)特征為： PDA培養(yǎng)基上菌落白色，背面無色，生長緩慢，25°C暗培養(yǎng)2周菌落直徑43-48mm，邊緣 不規(guī)則，呈花瓣狀，氣生菌絲毛狀，較發(fā)達，產(chǎn)生特殊的氣味；菌絲透明，壁薄，具有橫膈膜， 直徑1.4-3. 6 iim，常呈90°分枝，纏結(jié)在一起形成"繩索鏈"（rope-like strands)及網(wǎng)狀 結(jié)構(gòu)，有些菌絲形成菌絲圈結(jié)構(gòu)，菌絲圈直徑20-40 y m，部分菌絲中間膨大形成不規(guī)則塊狀 的菌絲細胞；菌絲體不育，未見無性或有性孢子，及產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)。
3. 權(quán)利要求1所述的一株真菌，其核糖體脫氧核糖核酸內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS-rDNA)、核 糖核酸聚合酶II亞基（RPB2)、￠-微管蛋白（卩-tublin)和核糖體脫氧核糖核酸大亞基 (28S)的序列分別為： (1) ITS-rDNA 序列 GAGGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACAGA 60 GTTTTCTAAACTCCCAACCCTATGTGAACTTACCTTTGTTGCTTCGGCGGCGGAGGCTAC 120 CCTGCGGGGGAATACCACCCAGTGGTTACCCTGTAGTCCCAGGTACAGCAGTACCCGGTA 180 GTCATCCCCGCCGGCGGCCAACTAAACTCTGTTTTCTTTGGAATTCTGAATCATAAACTT 240 AATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGMGAACGCAGCG 300 AAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACA 360 TTGCGCCCATTAGCATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACCACTTAAGCC 420 CTGTTGCTTAGCGTTGGGAGCCTACGGCACGGCCCGTAGCTCCTTAAAGTGATTGGCGGA 480 GTTGGTTCTCACTCTAAGCGTAGTAACTATATCTCGCTTCTGTAGTGGTTCCGGCCCCTG 540 CCGTAAAACTCCTTATACAAAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCo (2) RPB2 序列 CTCTTCCGCAACATTGTCCGACGCATGACGCAAGAGGTTCTGTCTCACCTGAAGAGAAGC 60 ATCGAACAGGGCAAGCAGTTCAACATTGCTCTGGCGGTGAAGTCCAACATCATTACAGCC 120 GGGCTCAAGTACTCGCTCGCCACAGGCAACTGGGGCGATCAGAAGAAAGCCATGTCCTCG 180 ACCGCAGGTGTGTCCCAGGTGTTGAATAGGTACACTTTTGCGTCCACGCTCTCGCATCTG 240 AGAAGAACAAACACTCCCGTGGGCCGAGATGGTAAACTTGCCAAGCCCCGCCAGCTTCAC 300 AACACACATTGGGGTCTGGTCTGCCCTGCGGAAACGCCCGAGGGCCAGGCTTGTGGCCTG 360 GTGAAGAACTTGTCCCTCATGTGCTCTGTCAGTGTCGGTACTTCGACAGAACCCATCATC 420 GACTACATGGCCTCCCGAAATATGGAGATTTTGGAAGAATACGAGCCCACACGATATCCC 480 AACGCTACCAAGATCTTTCTCAACGGCTCATGGATCGGTGTACACCATGATCCCAAATAT 540 CTGGTGAGAGATGTTCAGGAGCTGCGTCGCATGGGCCAGGTTCCTGTTGAAGTGTCTTTG 600 GTTCGTGACATTCGTGATCGTGAATTCAAGATCTTTTCGGATGCTGGGCGAGTTATGCGA 660 CCCTTGTTTGTCGTGGAACAAGAGGATTTCCGAGATCGTGTCAAAGGACAATTGGCCCTT 720 ACTAAAAAAATGGTCGACAAACTCAACGCCGACCAACAGCCTGAAAAACGTAAAGCTGAC 780 TGGAAATATTATGGCTGGCGTGGTTTGATCGAGGACGGTGCGATCGAGTATCTAGACGCA 840 GAGGAAGAAGAGACGGCCATGATCTGCATGTCGCCCGAAGATCTCGAAAATTACCGTCTT 900 AACAAACTAGGGGAGGGCGACGGCGAGGATTACGACAGGCTTGATGCTGAGCTAGCACCC 960 AACA。 (3) @ -tublin 序列 GTGACCCTCTGTTTACTTCGCCGCCGAGCCCAACCAAACCACATATTGAGTTTGCCTGTC 60 TCTGAACGCGTTTGGATCCAATCATCCTGGGTCCTGCGCCTCTCCACATCTATACTACAG 120 TCATGATATCAGCAACTTGGGCAACTACTGCCAGATCATGGCCTACCTACCTGTTCAGAG 180 GGAAAATATAGACTAGAGAAATCTGCTAACCCGTGTTCCTGCTTCTAGGTTCATCTTCAG 240 ACCGGTCAGTGCGTAAGTCAACCCTCGATCTTTCCTCTCCAATCTGTCAGTCGTTTTGTT 300 TGAATGTACTGACGAAGCTCTATAGGGTAACCAAATTGGTGCTGCTTTCTGGTGTGTATC 360 ACCGACGCGAAACACGGCCTGCCGCCTGCCGCATCAATATTGACTCTTGTACTACAGGCA 420 ACAGATCTCCGGCGAGCATGGCCTCGACGGCAATGGCGTGTATGTTTCTGTCGTTTTGCT 480 AGGGTTCCTGATGTTCGTTGGCTGACTTGGCAAACAGCTACAACGGCACCTCCGAGCTCC 540 AGCTCGAGCGCATGAGCGTCTACTTCAACGAGGTATGTACACAATGTGCTCCTTCCATAC 600 GGCATATTTGTAATGACTGCTCGTCTGACATTATATCTCTCTGTAGGGTGCCGGCAACAA 660 GTATGTCCCCCGCGCCGTCCTCGTCGATCTCGAGCCCGGCACCATGGATGCCGTCCGCGC 720 TGGTCCCTTCGGTCAGCTCTTCCGCCCCGACAACTTCGTCTTCGGCCAGTCTGGTGCCGG 780 CAACAACTGGGCCAAGGGTCATTACACCGAGGGTGCCGAGCTTGTCGACCAGTTCTCGAT 840 GTCGTCCGTCGCGAGGCTGAGGCTGCGACTGCCTTCAGGTTTo (4) 28S序列 ATTGCCCTAGTACGGCGAGTGAAGCGGCAACAGCTCAAATTTGAAATCTGGCTCTAGGGC 60 CCGAGTTGTAATTTGCAGAGGATGATTTTGGCGCGGTGCCTTCCGAGTTCCCTGGAACGG 120 GACGCCTTAGAGGGTGAGAGCCCCGTACGGTTGGACACCAAGCCTCTGTAAATCTCCTTC 180 GACGAGTCGAGTAGTTTGGGAATGCTGCTCTAAATGGGAGGTAAATTTCTTCTAAAGCTA 240 AATACCGGCCAGAGACCGATAGCGCACAAGTAGAGTGATCGAAAGATGAAAAGCACTTTG 300 AAAAGAGGGTTAAATAGCACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCATTTACTACCAGACCTTC 360 TCCCTGCGGATCATGCGGTGTTCTCACCGCTGCACTTCGCTTGGTTTAGGCCAGCATCGG 420 TTTTCGTAGAGGGATAAAAGCTTTAGGAACGTAGCTCCCTCGGGAGTGTTATAGCCTTTT 480 GCATAATACCTTTACGGGGACCGAGGACCGCGCTTTTGCAAGGATGCTGGCATAATGGTA 540 GTCAATGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTCGAACATTTGTGCGAGTGTTTGGGT 600 GTCAAACCCTCACGCGTAATGAAAGTGAACGTAGGTGAGAGCCCTTACGGGTGCATCATC 660 GACCGATCTTGATGTCTTCGGATGGATTTGAGTAAGAGCATAACTGTTCGGACCCGAAAG 720 ATGGTGAACTATGCGTGGATAGGGTGAAGCCAGAGGAAACTCTGGTGGAGGCTCGCAGCG 780 GTTCTGACGTGCAAATCGATCGTCAAATCTGCGCATGGGGGCGAAAGACTTATCGAACCA 840 TTAAACCAGCGGTAAAAATATTTACTAGGTGGTTAAGAGGCCCTCTGCAAAGAGAAGAAG 900 GCCTAGTGACCTACCTGGAAAGATGCTACCCGGCACTTCCCGGTAGGTTACCGACATCGC 960 TAAATTGCGGGAA。
【文檔編號】C12N1/14GK104419648SQ201310400775
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】郭順星, 譚小明, 陳曉梅, 王春蘭 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所