燕麥干細(xì)胞啤酒的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提出了燕麥干細(xì)胞啤酒的制備方法，它是以燕麥籽粒的原細(xì)胞系形成層細(xì)胞進(jìn)行放大培養(yǎng)后，乙醇提取、冷凍、干燥與啤酒的有機(jī)組合，制備的燕麥干細(xì)胞啤酒，這種燕麥干細(xì)胞啤酒除含有啤酒的原有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，增加了燕麥全能干細(xì)胞和微量元素鍺、硒等礦物微量成份，對(duì)軟化血管、抗氧化、延緩細(xì)胞衰老、抑制變異細(xì)胞轉(zhuǎn)癌有較好的益處。
【專利說(shuō)明】燕麥干細(xì)胞啤酒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是涉及食品【技術(shù)領(lǐng)域】中的一種燕麥干細(xì)胞啤酒，是一種具有能夠軟化血管，調(diào)節(jié)免疫力，抑制變異細(xì)胞轉(zhuǎn)癌的養(yǎng)生保健食品。
【背景技術(shù)】
[0002]本發(fā)明作為生物工程學(xué)技術(shù)中的植物干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法被世界生物界評(píng)價(jià)為不會(huì)誘發(fā)環(huán)境問(wèn)題，且作為可穩(wěn)定的供給植物來(lái)源作為抗氧化物質(zhì)添加到多種食品中最理想的技術(shù)。根據(jù)韓國(guó)公開(kāi)專利:1995-0000870(1995.01.03) ；2008801112097 (2008.10.10)；2010800289233(2010.05.26)。
[0003]從各種植物細(xì)胞系中提取有價(jià)值的物質(zhì)與從植物中直接提取生產(chǎn)方法相比有諸多的優(yōu)點(diǎn)，尤其是與往的提取方法不同，它不受外界的影響，可持續(xù)的大量的培育和生產(chǎn)，被認(rèn)為可解決如生態(tài)系統(tǒng)被破壞的最好的方法。但是盡管也有對(duì)于植物細(xì)胞培養(yǎng)的企業(yè)對(duì)此生物工程的認(rèn)知，但真正產(chǎn)業(yè)化的成功例并不多。尤其是那些具有較好抗氧化作用的植物果實(shí)資源的細(xì)胞培育與大量傳代擴(kuò)增更不為多見(jiàn)，這是因?yàn)樵趶?fù)雜的細(xì)胞培養(yǎng)基中，離體材料的褐化、細(xì)胞在增殖與生產(chǎn)過(guò)程中細(xì)胞變異仍是失敗的主要原因。
[0004]在植物全息。全能表達(dá)系統(tǒng)中，在利用植物果實(shí)細(xì)胞及分化組織。例如葉、莖、根系及果實(shí)等都是以具有喪失能力的永久組織，所以，為將轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹至涯芰Φ募?xì)胞系必先進(jìn)行脫分化過(guò)程是指用植物體內(nèi)的一種組織或某器官組織培養(yǎng)時(shí)，解決組織或細(xì)胞系的已經(jīng)施行特定功能而分化的狀態(tài)。即使這樣的脫分化過(guò)程中，由染色體變異還會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞系細(xì)胞變異的壞象。尤其是通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，只要能保證在長(zhǎng)期培養(yǎng)期間能夠穩(wěn)定的維持較快的細(xì)胞增殖并與高的代謝物質(zhì)時(shí)，其生產(chǎn)能力可產(chǎn)業(yè)化，克服細(xì)胞變異問(wèn)題，在通過(guò)植物細(xì)胞培養(yǎng)有較高應(yīng)用價(jià)值物質(zhì)生產(chǎn)中，能夠獲得遺傳穩(wěn)定的細(xì)胞系的最佳工藝是切實(shí)可行的。
[0005]對(duì)此，本發(fā)明是從燕麥籽粒的內(nèi)皮層誘導(dǎo)，形成細(xì)胞中的脫分化的形成層未分化的細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)，獲得了遺傳較穩(wěn)定的植物干細(xì)胞，并確認(rèn)為培養(yǎng)過(guò)程無(wú)細(xì)胞變異，利用小分子活性水培養(yǎng)，先進(jìn)的提取工藝，制備具有較高生理活性的番茄，干細(xì)胞制備口服液和飲料，從而完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供燕麥干細(xì)胞分離培養(yǎng)，以其國(guó)內(nèi)外現(xiàn)有的技術(shù)相比，能夠解決細(xì)胞變異和離體材料易褐化的技術(shù)難題。
[0007]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供燕麥干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、提取方法。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供燕麥干細(xì)胞分離培養(yǎng)提取制備與燕麥干細(xì)胞啤酒的制備方法。
[0009]本發(fā)明別的特征及實(shí)施方式將通過(guò)以下詳述及隨附的權(quán)利要求書(shū)中更加明晰。
[0010]1、本發(fā)明的選材[0011 ] 本發(fā)明選用純有機(jī)方式種植的燕麥籽粒，作為燕麥干細(xì)胞形成層的培養(yǎng)材料。
[0012]2、固態(tài)培養(yǎng)基的組成成分:
[0013](I)可選擇的無(wú)機(jī)鹽類:
[0014]硝酸鉀2480-2500mg/L，硫酸鎂 120_122mg/L，硫酸錳 ΙΟ-llmg/L，硫酸鋅 L 8_3mg/L。硫酸銅 0.02-0.06mg/L，硫酸胺 130_140mg/L，氯化鈣 112_114mg/L，碘化鉀 0.6-0.75mg/L,氯化鈷 0.023-0.025mg/L,磷酸二氫鈉 130_135mg/L，硼酸 2.6_3mg/L，鑰酸鈉 0.2-0.25，乙二胺四乙酸鐵鈉鹽35-37mg/L。
[0015](2)可選擇的維生素:
[0016]肌醇200-230mg/L，硫胺素 18_21mg/L，煙酸 1.8-2.lmg/L，吡哆醇 1.8-2.lmg/L，L-抗壞血酸 50_55mg/L,朽1 檬酸 70_80mg/L。
[0017](3)可選擇的氨基酸:
[0018]L-天冬氨酸 130-140mg/L，L-精氨酸 170_180mg/L，甘氨酸 75_85mg/L，脯氨酸115-125mg/L。
[0019](4)可選擇的生長(zhǎng)素:a-萘乙酸1.5-3.0mg/L。
[0020](5)可選擇的糖類:蔗糖或果糖10.000mg/Lo
[0021](6)可選擇的炭:活性炭400_500mg/L。
[0022](7)可選擇的固化劑`:瓊脂3.600-3.800mg/L。
[0023](8)可選擇的水:為磁化水I升。
[0024]3、液態(tài)培養(yǎng)基的組成成分:
[0025](I)可選擇的無(wú)機(jī)鹽類:
[0026]硫酸鉀990-995mg/L，磷酸氫鉀 160_170mg/L，硫酸鎂 180_185mg/L，硫酸錳20-25mg/L，硫酸鋅 8-lOmg/L，硫酸銅 0.2-0.3mg/L，氯化鈣 70_75mg/L，硝酸鈣 460_490mg/L，鑰酸鈉0.2-0.4mg/L,硼酸6_8mg/L，硝酸胺400_420mg/L，乙二胺四乙酸鐵鈉鹽35_38mg/L0
[0027](2)可選擇的維生素類:
[0028]肌醇195_230mg/L,硫胺素 21_22mg/L,煙酸 2_4mg/L,吡卩多醇 2_4mg/L, L-抗壞血酸 55-65mg/L，檸檬酸 72_82mg/L。
[0029](3)可選擇的氨基酸類:
[0030]L-天冬氨酸 132-142mg/L，L-精氨酸 172_182mg/L，甘氨酸 76_86mg/L，脯氨酸115-125mg/L。
[0031](4)可選擇的生長(zhǎng)素類:
[0032]a-萘乙酸 2_3mg/L。
[0033](5)可選擇的糖類:鹿糖 31.000mg-32.000mg/L。
[0034](6)可選擇的添加物:麥飯石顆粒60.000mg/L,鍺石顆粒60.000mg/L。
[0035](7)可選擇的水:為磁化水I升。
[0036]本發(fā)明無(wú)機(jī)鹽類包括植物細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氮、磷、鉀、鎂、硫等大中量元素及鐵、錳、鋅、硼、鑰、鈷等微量元素。大中量幾乎在任何培養(yǎng)基中都是不可缺少的，它們是植物細(xì)胞生長(zhǎng)所需的最基本的無(wú)機(jī)元素營(yíng)養(yǎng)源。
[0037]本發(fā)明培養(yǎng)基中的有機(jī)物質(zhì)，有維生素、氨基酸兩大類。維生素能夠直接參與植物細(xì)胞生命活動(dòng)中最重要的營(yíng)養(yǎng)過(guò)程，如醇的合成，細(xì)胞蛋白質(zhì)和脂肪的代謝等。植物離體材料或細(xì)胞培養(yǎng)的自身雖有合成維生素能力，但還不能滿足細(xì)胞快速生長(zhǎng)的需要。因此，在培養(yǎng)基中常添加一些維生素能夠促進(jìn)培養(yǎng)物形成層的細(xì)胞快速生長(zhǎng)和一些器官的分化。
[0038]基中氨基酸類，氨基酸是植物離體材料形成層細(xì)胞系的氮元素營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充源，它能夠促進(jìn)植物細(xì)胞蛋白質(zhì)及細(xì)胞核的形成。
[0039]其中肌醇，為環(huán)乙六醇，它本身沒(méi)有直接的生長(zhǎng)促進(jìn)作用，但能協(xié)助其它營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)發(fā)揮出許多作用，并能參與糖代謝，有間接的促進(jìn)不定胚細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
[0040]其中糖類:糖作為碳源在植物離體材料及形成層細(xì)胞系培養(yǎng)中是不可缺少的。常用的糖類有蔗糖、葡萄糖、果糖等，在本發(fā)明的培養(yǎng)基中采用蔗糖為好，它對(duì)燕麥細(xì)胞的生長(zhǎng)和一些化合物的轉(zhuǎn)化合成要好于其它糖種。
[0041]本發(fā)明中的生長(zhǎng)素為a-萘乙酸(NAA)是本發(fā)明培養(yǎng)基中促進(jìn)植物細(xì)胞生長(zhǎng)至關(guān)重要的元素，尤其對(duì)細(xì)胞形態(tài)健成起著極其重要的作用。
[0042]其活性炭:在植物離體材料培養(yǎng)與細(xì)胞系形成層的形成，這一培養(yǎng)過(guò)程看似比較簡(jiǎn)單，但在某些草木植物尤其是燕麥籽粒的離體材料的內(nèi)層組織培養(yǎng)過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)許多問(wèn)題。燕麥內(nèi)層組織容易褐化的主要原因是通過(guò)含銅的氧化酶和多酚氧化酶以及氨基酸中某些成分起作用所致，其作用的底物通常是某些氨基酸和培養(yǎng)基中鄰位羥酚尖化合物綠源酸等，酶和底物在植物細(xì)胞正常生長(zhǎng)的情況下是在組織中不同位置存在，當(dāng)細(xì)胞組織受損垂死時(shí)，酶和底物又很快被氧化和變成復(fù)雜的抑制物質(zhì)，從而導(dǎo)致燕麥離體材料內(nèi)層組織褐化壞變并導(dǎo)致誘導(dǎo)失敗。
[0043]本發(fā)明經(jīng)多年微生物研究實(shí)驗(yàn)表明，將活性炭放入固態(tài)培養(yǎng)基中可有效的吸附酚及其它有害物質(zhì)，能夠確保培養(yǎng)材料的褐化，因此，也就促使了形成層細(xì)胞系細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0044]其中固化劑:本發(fā)明采用的瓊脂作為固態(tài)培養(yǎng)基中起固化作用。瓊脂是一種從海藻中提取的一種凝膠劑，植物與細(xì)胞生長(zhǎng)并不能利用它，但由于其無(wú)毒、可塑、遇熱溶化、冷卻后固形化等特征，它能使培養(yǎng)基中各種養(yǎng)分均勻的分散分布，因此，固態(tài)培養(yǎng)基中使用瓊脂為好。
[0045]其中麥飯石顆粒、鍺石顆粒，是來(lái)自天然的營(yíng)養(yǎng)石，內(nèi)含幾十種礦物質(zhì)微量元素，尤其是含有硒鍺元素的礦石顆粒，它們是一種含抗氧化劑的礦物質(zhì)，是一種無(wú)機(jī)元素，是谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的組成部分，這種酶不僅能保護(hù)身體組織細(xì)胞免受自由基的損害，同時(shí)也具有調(diào)節(jié)前例腺素的制造功能。硒鍺對(duì)人體的正常生長(zhǎng)和生殖非常重要，肝臟要發(fā)揮其正常功能以及體內(nèi)重要的激素制造也少不了硒，研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)機(jī)硒和鍺元素在液態(tài)培養(yǎng)基中能夠通過(guò)復(fù)雜的生物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒和有機(jī)鍺。有機(jī)硒和有機(jī)鍺在活性甲狀腺激素的形成、毛發(fā)和皮膚的健康、以及維持正常視力、抗癌、抗氧化方面均起作用。因此，本發(fā)明利用無(wú)機(jī)硒鍺礦石顆粒，將其無(wú)機(jī)物轉(zhuǎn)化為有機(jī)物，對(duì)增加燕麥干細(xì)胞的生理活性，很有益處。
[0046]本發(fā)明中固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基中使用的磁化水，是一種普通自來(lái)水經(jīng)4600高斯磁場(chǎng)磁化的水，即為小分子活性水，磁化后的水帶有磁記憶，張力、滲透壓等都比自來(lái)水、礦泉水或山泉水要高十幾倍。帶有磁記憶的小分子水。能夠快速滲透到離體愈傷組織層，激活細(xì)胞修復(fù)與生長(zhǎng)能力，減少其褐化的發(fā)生，在液態(tài)培養(yǎng)基中對(duì)細(xì)胞系細(xì)胞傳代，增殖具有較好的作用，同時(shí)也減少了細(xì)胞變異問(wèn)題。[0047]4、本發(fā)明離體材料的制備:
[0048](I)優(yōu)選無(wú)化肥農(nóng)藥污染、純農(nóng)家肥有機(jī)栽培方式的燕麥。水沖洗表面附著物，放進(jìn)120mg/L，L-抗壞血酸中浸泡I分鐘，目的是減少離體組織的氧化。然后在放進(jìn)1%升的苯菌靈溶液中殺菌10分鐘后，用無(wú)菌水沖洗10分鐘，以便除去酚苯類化合物和殘留的化學(xué)物質(zhì)，然后將燕麥籽粒在放入75%的乙醇液中殺菌I分鐘，用無(wú)菌水沖洗干凈后，在放入30%的過(guò)氧化氫液中殺菌20分鐘，然后用無(wú)菌水沖冼10分鐘。
[0049]5、本發(fā)明優(yōu)選固態(tài)培養(yǎng)基的制備方法:
[0050]在如上所述的離體材料滅菌后，僅用于離體材料形成層細(xì)胞系的優(yōu)選固態(tài)培養(yǎng)基下表1中顯示。
[0051]表1
[0052]`
【權(quán)利要求】
1.將優(yōu)質(zhì)啤酒200ml放入一玻璃杯內(nèi)，加入燕麥干細(xì)胞粉lg，攪勻后放進(jìn)一50HZ的超聲波清洗機(jī)內(nèi)，超聲粉碎15-20分鐘。
2.將超聲粉碎后的干細(xì)胞啤酒混溶液過(guò)濾1000目，注入一盛有4800ml的啤酒容器內(nèi)，攪勻后，以每瓶500ml的計(jì)量 灌入玻璃瓶?jī)?nèi)，注入食品級(jí)二氧化碳?xì)怏w后封口。
【文檔編號(hào)】C12C5/00GK103602538SQ201310414621
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年9月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月13日
【發(fā)明者】林樹(shù)芳 申請(qǐng)人:林樹(shù)芳