菇娘在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了菇娘的新用途——菇娘在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物的制備方法。研究表明，菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物能夠激活Nrf2信號(hào)通路，促進(jìn)抗氧化和II相解毒酶的表達(dá)，增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)還原能力，并能夠抑制致癌物砷引起的細(xì)胞毒性，減弱活性氧H2O2誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性。因此，可將其制備成相應(yīng)的口服制劑和注射劑，并用于腫瘤、神經(jīng)退行性疾病預(yù)防。
【專利說(shuō)明】菇娘在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及菇娘的新用途，尤其涉及菇娘在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著社會(huì)的發(fā)展，人類生活水平和醫(yī)療環(huán)境的改善，人類壽命得到了顯著的延長(zhǎng)，但同時(shí)，惡性腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病率也在提高，嚴(yán)重威脅人類健康，給國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。在尚無(wú)有效藥物實(shí)現(xiàn)對(duì)上述疾病有效治療的前提下，研發(fā)具有預(yù)防作用的藥物和保健品，防止疾病的早期形成和發(fā)生成為有效的應(yīng)對(duì)策略。
[0003]核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2(Nuclear factor-erythroid2-related factor2)是調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原平衡的重要轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)與抗氧化酶和II相解毒酶啟動(dòng)子區(qū)域抗氧化反應(yīng)原件(ARE)結(jié)合調(diào)控細(xì)胞氧化還原平衡，其目標(biāo)基因包括編碼GST、UGT、y GCS, NQOl的II相解毒酶，及GCUHO-1等內(nèi)源性抗氧化蛋白。當(dāng)機(jī)體暴露于親電性異物、化學(xué)致癌物、內(nèi)源性氧化劑等對(duì)機(jī)體有損傷作用的物質(zhì)下，Nrf2便會(huì)被激活并通過(guò)上調(diào)抗氧化酶和II相解毒酶清除有害物，保護(hù)機(jī)體免受毒物的損傷(Lau et al.，Pharmacol.Res.，2008，58，262-270)。因此，通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路，增強(qiáng)機(jī)體自身清除毒物的能力，能夠預(yù)防多種疾病的發(fā)生，例如腫瘤和神經(jīng)退行性疾病。
[0004]在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，面對(duì)內(nèi)源性和外源性毒物對(duì)機(jī)體的侵害,利用外源性Nrf2激動(dòng)劑上調(diào)機(jī)體Nrf2水平，能夠增強(qiáng)機(jī)體自身防御能力，對(duì)于預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生具有重要意義(Magesh etal.,Med.Res.Rev.，2012，32，4，687-726)。激活 Nrf2 信號(hào)通路，能夠上調(diào)II相解毒酶水平，清除致癌物或降低其毒性，抑制致癌物誘導(dǎo)的DNA損傷、基因突變，從而預(yù)防腫瘤的發(fā)生。通過(guò)上調(diào)Nrf2表達(dá)，能夠增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平，增強(qiáng)抗氧化酶活性，清除細(xì)胞內(nèi)活性氧，抑制細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化，降低阿爾茨海默氏癥和帕金森氏病等神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病率。因此，具有Nrf2激動(dòng)作用的單體化合物、植物提取物等能夠有效預(yù)防腫瘤和神經(jīng)退行性疾病發(fā)生。
[0005]菇娘為茄科酸漿屬(Physalis)植物，廣泛的分布于我國(guó)東北、華北、長(zhǎng)江中下游地區(qū)。市場(chǎng)銷售的燕娘果通常為酸漿 (Physalis alkekengil var.francheti (Mast.)Makino)、毛酸衆(zhòng)(Physialis pubescensL.)、小果酸漿(Physialis peruviana)的外被宿萼的果實(shí)。其果實(shí)和宿萼中含有大量的油酸，亞油酸等不飽和脂肪酸，豐富的無(wú)機(jī)元素(以鉀、磷、鈉、鎂和鈣的含量較高)、18種氨基酸和豐富的維生素(安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40，16113-16114)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了菇娘的新用途——在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。另外，本發(fā)明還提供了菇娘提取物——菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物的制備方法。
[0007]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0008]本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物能夠激活Nrf2信號(hào)通路，并能保護(hù)細(xì)胞抵抗砷和雙氧水產(chǎn)生的細(xì)胞毒性，因此，可以以菇娘為原料制備預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的保健品，也可以制備治療腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物(經(jīng)查閱文獻(xiàn)，迄今為止未見有菇娘激活Nrf2信號(hào)通路的報(bào)道，亦未見菇娘用于腫瘤、神經(jīng)退行性疾病預(yù)防的報(bào)道)。
[0009]具體應(yīng)用時(shí)，可以以菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物等菇娘提取物為原料，添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑(包括軟膠囊)、片劑、散劑、顆粒、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑等劑型，優(yōu)選顆粒劑、膠囊劑、片劑；或者將提菇娘取物進(jìn)一步純化制成注射制劑。也可以將菇娘提取物與其它對(duì)腫瘤、神經(jīng)退行性疾病有治療或預(yù)防作用的藥物混合，再添加或不添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑(包括軟膠囊)、片劑、散劑、顆粒、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑、注射劑等劑型。
[0010]所述菇娘果汁，是通過(guò)以下方法制備得到的:將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取果榨汁，過(guò)濾，濾液即為菇娘果汁，可以根據(jù)需求再加入適量水，以配制成不同濃度的果汁。
[0011]所述菇娘果肉種子提取物，是通過(guò)以下方法制備得到的:
[0012]將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取果榨汁，過(guò)濾得果汁、果肉和種子；取果肉和種子，用0?95%乙醇(指體積份數(shù)，當(dāng)取到“0”時(shí)即為純水)回流提取I?8次，每次溶劑用量為藥材重量(果肉和種子)的I?20倍，每次提取時(shí)間為0.5?10小時(shí)；合并提取液，過(guò)濾，回收乙醇(如減壓回收)，濃縮得浸膏；向浸膏中加入浸膏重量I?20倍的水混懸后，用混懸液體積I?20倍的二氯甲烷萃取，分離水相和二氯甲烷相，對(duì)二氯甲烷相進(jìn)行濃縮、干燥，SP得果肉種子提取物。
[0013]所述菇娘宿萼提取物，是通過(guò)以下方法制備得到的:
[0014]將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取宿萼，用0?95%乙醇(指體積份數(shù)，當(dāng)取到“0”時(shí)即為純水)回流提取I?8次，每次溶劑用量為宿萼重量的I?20倍，每次提取時(shí)間為0.5?10小時(shí)；合并提取液，過(guò)濾，回收乙醇(如減壓回收)，濃縮、干燥，即得菇娘宿萼提取物。
[0015]所述菇娘果汁、菇娘果肉種子提取物、菇娘宿萼提取物，均可以用于制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品。
[0016]本發(fā)明的發(fā)明人完成了菇娘果汁、果肉和種子提取物、宿萼提取物對(duì)Nrf2信號(hào)激活作用的研究。結(jié)果表明，上述三種菇娘提取物能夠在蛋白水平激活Nrf2，增加Nrf2及其下游基因NQOl和GCS的表達(dá)，通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽的水平增強(qiáng)細(xì)胞還原能力。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)它們能夠抑制致癌物砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，表現(xiàn)出抑制細(xì)胞癌變的能力；能夠降低H2O2誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞毒性，表現(xiàn)出預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的潛力。下面以菇娘果汁為例，介紹其對(duì)Nrf2信號(hào)通路的作用:
[0017]采用能夠穩(wěn)定表達(dá)含ARE依賴的熒光素酶質(zhì)粒的MDA-MB-231-Luc細(xì)胞系，比較了菇娘果汁與其他水果(草莓、櫻桃、西紅柿)對(duì)Nrf2的作用，結(jié)果表明菇娘果汁具有激活Nrf2信號(hào)通路的作用，其活性強(qiáng)于其他水果(圖1)。采用ARE依賴的熒光素酶報(bào)告篩選試驗(yàn)作為活性指導(dǎo)，按照?qǐng)D2所示提取流程，活性追蹤了具有Nrf2激動(dòng)作用的菇娘果實(shí)和宿萼部位，結(jié)果表明菇娘果果汁、果肉種子提取物二氯甲烷部位、宿萼提取物均具有激活Nrf2信號(hào)通路的作用(圖3)。
[0018]選擇人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作為檢測(cè)細(xì)胞，評(píng)價(jià)菇娘果汁對(duì)Nrf2信號(hào)通路的作用。蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果表明，菇娘果汁能夠上調(diào)Nrf2蛋白的表達(dá)，并能促進(jìn)下游抗氧化和II相解毒酶蛋白NQOl和YGCS的表達(dá)(圖4)。
[0019]選擇人正常肺上皮HBE細(xì)胞，檢測(cè)了菇娘果汁對(duì)細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平的影響。結(jié)果顯示，菇娘果汁能增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平(圖5)，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)還原能力和清除活性氧能力。
[0020]選擇致癌物砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性模型，評(píng)價(jià)菇娘果汁對(duì)人正常肺上皮HBE細(xì)胞的保護(hù)作用。經(jīng)菇娘果汁處理后，細(xì)胞生存率顯著高于未加藥處理組，證明菇娘果汁能夠抑制三價(jià)砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(圖6)，表明菇娘果汁可用于腫瘤的預(yù)防。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，果肉種子提取物和宿萼提取物具有與菇娘果汁相同的預(yù)防腫瘤形成的能力。
[0021]選擇活性氧H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性模型，評(píng)價(jià)菇娘果汁對(duì)神經(jīng)細(xì)胞PC12的保護(hù)作用。結(jié)果表明菇娘果汁能夠抑制H2O2產(chǎn)生的毒性，提高細(xì)胞生存率(圖7)。神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生多與活性氧產(chǎn)生的毒性密切相關(guān)，該結(jié)果證明菇娘果汁可用于神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防。果肉種子提取物和宿萼提取物具有與菇娘果汁相同的預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的能力。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1:ARE依賴的熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)表明菇娘果汁能夠激活Nrf2信號(hào)通路，圖中的1:500、1:100、1:50表示的含義為果汁的稀釋倍數(shù)。
[0023]圖2:菇娘果實(shí)和宿萼分部提取流程圖。
[0024]圖3 =ARE依賴的熒光素報(bào)告試驗(yàn)測(cè)定菇娘各部分激活Nrf2信號(hào)通路的作用。
[0025]圖4:蛋白質(zhì)印跡分析表明菇娘果汁能夠在蛋白水平激活Nrf2其下游基因，圖中的1:500、1:100、1:50表示的含義為果汁的稀釋倍數(shù)。
[0026]圖5:菇娘果汁能夠增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平，圖中的1:500、1:100、1:50表示的含義為果汁的稀釋倍數(shù)。
[0027]圖6:菇娘果汁能夠降低砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(*p〈0.05)。
[0028]圖7:菇娘果汁能夠降低H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性(*p〈0.05)。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，下述實(shí)施例僅為說(shuō)明之目的，并非用于限制本發(fā)明。
[0030]實(shí)施例1:菇娘果汁對(duì)Nrf2信號(hào)通路的激活作用
[0031]方法:(1)菇娘果汁的制備
[0032]菇娘果200g，將果實(shí)與宿萼分開，取果榨汁，過(guò)濾，得濾液130mL，即為菇娘果汁。草莓、櫻桃、西紅柿采用相同方法制備果汁，用于活性評(píng)價(jià)。
[0033](2)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞系的培養(yǎng)
[0034]人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(ATCC)，采用含10%胎牛血清(FBS)、2mMHEPES和6ng/mL胰島素的MEM培養(yǎng)基，置于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0035](3) ARE依賴 的熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)[0036]將MDA-MB-231-Luc細(xì)胞接種于96孔板上，24小時(shí)后加入不同濃度的待測(cè)化合物，處理16小時(shí)，采用細(xì)胞裂解液[0.1M磷酸鉀和ImM 二硫蘇糖醇]裂解細(xì)胞，用檢測(cè)液(25mM雙甘氨肽，15mM硫酸鎂，500 u MATP, 250 u M熒光素和250 y M輔酶A)，測(cè)定熒光強(qiáng)度。
[0037]結(jié)果:如圖1所示，菇娘果汁能夠顯著增強(qiáng)ARE依賴的熒光素酶活性，1:50濃度處理細(xì)胞組，其強(qiáng)度是空白對(duì)照組的4倍，是陽(yáng)性對(duì)照藥物蘿卜硫素(2.5 PM)的1.5倍。在測(cè)定濃度下(I: 50-1:500)，草莓、櫻桃、西紅柿果汁未表現(xiàn)出明顯的Nrf2激活作用。上述結(jié)果表明，與草莓、櫻桃、西紅柿果汁相比，菇娘果汁能夠更好的誘導(dǎo)Nrf2信號(hào)通路，對(duì)機(jī)體具有更好的保護(hù)作用。
[0038]實(shí)施例2:不同菇·娘部位的制備及其對(duì)Nrf2信號(hào)通路的作用
[0039]方法:(1)不同菇娘部位的制備(分部提取流程圖如圖2所示)
[0040]菇娘果200g，將果實(shí)與宿萼分開，取果實(shí)榨汁，過(guò)濾，得130mL濾液(菇娘果汁)和50g濾渣(果肉和種子)；果肉和種子50g，以其重量10倍的75%乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濃縮至浸膏，加水IOOmL混懸，并以二氯甲烷萃取(2 X IOOmL),蒸干二氯甲烷相得果肉種子提取物1.1g ;宿萼6g，以其重量10倍的75%乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濃縮至宿萼提取物1.2g。
[0041](2) ARE依賴的熒光素酶報(bào)告試驗(yàn)
[0042]方法如實(shí)施例1所示。
[0043]結(jié)果:如圖3所示，按照上述方法制備的果肉種子提取物和宿萼提取物能夠增強(qiáng)ARE依賴的熒光素酶活性，表明這兩種提取物具有激活Nrf2信號(hào)通路的作用。
[0044]實(shí)施例3:菇娘果汁能夠上調(diào)Nrf2及以下游基因蛋白水平的表達(dá)
[0045]方法:蛋白質(zhì)印跡分析(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞中蛋白水平的變化
[0046]將MDA-MB-231細(xì)胞接種于直徑35mm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)至密度達(dá)到70%?80%后，力口入不同濃度的菇娘果汁(菇娘果汁為實(shí)施例1制備)處理16h，PBS洗滌2次，加入細(xì)胞裂解液(50 V- g/ml抑肽酶，0.5mM苯甲基磺酰氟，ImM正I凡酸鈉，IOmM氟化鈉，IOmMP -磷酸甘油)，收集蛋白并采用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。各取樣品蛋白(100 y g)上樣，SDS-PAGE分離蛋白組分并采用電轉(zhuǎn)移法將蛋白條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素薄膜上。薄膜經(jīng)TBS配制5%的脫脂奶粉溶液室溫封閉Ih后，分別與各待測(cè)蛋白抗體4°C孵育過(guò)夜。經(jīng)TBS洗滌后分別加入辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗孵育Ih后，用增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光進(jìn)行蛋白分析。
[0047]結(jié)果:如圖4所示，細(xì)胞經(jīng)菇娘果汁處理16h后，Nrf2及其下游抗氧化和II相解毒酶蛋白NQOl和Y GCS蛋白水平呈現(xiàn)劑量依賴性增加，證實(shí)菇娘果汁能夠在蛋白水平上計(jì)劃Nrf2信號(hào)通路。
[0048]實(shí)施例4:菇娘果汁增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平
[0049]方法:(I)人正常肺上皮細(xì)胞HBE細(xì)胞的培養(yǎng)
[0050]人正常肺上皮細(xì)胞HBE購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(ATCC)，采用MEM培養(yǎng)基，并向其中加入10%胎牛血清(FBS)，5%谷氨酰胺，置于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0051](2)細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量的測(cè)定
[0052]將HBE細(xì)胞接種于直徑35mm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)至密度達(dá)到70%?80%后，加入不同濃度的菇娘果汁(菇娘果汁為實(shí)施例1制備)處理24小時(shí)，PBS洗滌2次，加入0.5mL50mM磷酸鈉和ImMEDTA緩沖液收細(xì)胞，超聲lmin，IOOOOg離心15分鐘，取上清液，按照谷胱甘肽測(cè)定試劑盒說(shuō)明書操作，412nm測(cè)定吸光度并計(jì)算谷胱甘肽含量。
[0053]結(jié)果:如圖5所示，菇娘果汁能夠顯著增加細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽水平，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)還原能力。
[0054]實(shí)施例5:菇娘果汁能夠抑制三價(jià)砷對(duì)人肺支氣管上皮HBE細(xì)胞的毒性
[0055]方法:MTT法測(cè)定化合物對(duì)砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的保護(hù)作用
[0056]將HBE細(xì)胞接種于96孔板上，加入不同濃度待測(cè)化合物處理16小時(shí)，然后加入不同濃度的砷和待測(cè)濃度果汁(菇娘果汁為實(shí)施例1制備)處理24小時(shí)，加入MTT3小時(shí)后，590nm測(cè)定吸光度并計(jì)算細(xì)胞生存率。
[0057]結(jié)果:如圖6所示，采用1:100濃度菇娘果汁預(yù)處理細(xì)胞16小時(shí)，然后加入20 iiM、40 u M的砷和1:100濃度菇娘果汁處理細(xì)胞24小時(shí)，結(jié)果表明菇娘果汁對(duì)HBE細(xì)胞具有保護(hù)作用，能夠抑制砷誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。果汁處理組的細(xì)胞生存率明顯高于未加藥物處理組。結(jié)果證明，菇娘果汁能夠抑制致癌物砷誘導(dǎo)的毒性，能夠用于腫瘤的預(yù)防和治療。
[0058]實(shí)施例6:菇娘果汁能夠抑制H2O2對(duì)神經(jīng)細(xì)胞株P(guān)C12的毒性
[0059]方法:(I)神經(jīng)細(xì)胞PCl2的培養(yǎng)
[0060]神經(jīng)細(xì)胞株P(guān)C12購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)(ATCC，)采用含15%胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，置于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0061](2) MTT法測(cè)定化合物對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的保護(hù)作用
[0062]將PC12細(xì)胞接種于96孔板上，加入不同濃度待測(cè)菇娘果汁(菇娘果汁為實(shí)施例1制備)處理16小時(shí)，然后加入不同濃度的砷和待測(cè)菇娘果汁處理24小時(shí)，加入MTT3小時(shí)后，590nm測(cè)定吸光度并計(jì)算細(xì)胞生存率。
[0063]結(jié)果:圖7所示，采用1:100濃度菇娘果汁預(yù)處理細(xì)胞16小時(shí)，然后加入100 U M、200 ii M的H2O2和1:100濃度菇娘果汁處理細(xì)胞24小時(shí)，結(jié)果表明菇娘果汁對(duì)PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用，能夠抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。菇娘果汁處理組的細(xì)胞生存率明顯高于未加藥物處理組。結(jié)果證明，菇娘果汁能夠抑制活性氧H2O2產(chǎn)生的神經(jīng)細(xì)胞毒性，能夠用于神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防和治療。
[0064]實(shí)施例7:菇娘果肉種子提取物的制備
[0065]菇娘果5kg，果實(shí)與宿萼分開，將果實(shí)榨汁，過(guò)濾，得1.25kg濾渣(果肉和種子)，以其重量10倍的75%乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濃縮至浸膏，加水IOOOmL混懸，并以二氯甲烷萃取(2\10001 )，蒸干二氯甲烷相得果肉種子提取物25g，收率為0.5%。
[0066]實(shí)施例8:菇娘宿萼提取物的制備
[0067]菇娘果5kg，將果實(shí)與宿萼分開，得宿萼150g，以其重量10倍的75%乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，過(guò)濾，濃縮至浸膏，即得宿萼提取物30g，收率0.6%。
[0068]實(shí)施例9:片劑的制備
[0069]菇娘宿萼提取物(實(shí)施例8制備)20g，加入玉米淀粉30g，糊精15g，充分混勻，制顆粒，干燥，整粒，加適量滑石粉，壓片，即得。
[0070]實(shí)施例10:膠囊劑的制備
[0071]菇娘宿萼提取物(實(shí)施例8制備)20g，加入淀粉20g、糊精15g，微晶纖維素8g，充分混勻，制顆粒，干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂，裝膠囊，即得。
【權(quán)利要求】
1.菇娘在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:具體應(yīng)用時(shí)，以菇娘提取物為原料，添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑或酊劑；或者將提菇娘取物純化制成注射制劑；或者:將菇娘提取物與其它對(duì)腫瘤、神經(jīng)退行性疾病有治療或預(yù)防作用的藥物混合，再添加或不添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑或注射劑；所述菇娘提取物選自菇娘果汁、果肉種子提取物、宿萼提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:所述菇娘為酸漿(Physalisalkekengil var.franchet1、毛酸衆(zhòng)(Physialis pubescens L.)、小果酸衆(zhòng)(Physialisperuviana)的外被宿萼的果實(shí)。
4.一種菇娘果汁，其特征在于:是通過(guò)以下方法制備得到的:將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取果榨汁，過(guò)濾，濾液即為菇娘果汁。
5.權(quán)利要求4所述的菇娘果汁在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。
6.一種菇娘果肉種子提取物，其特征在于:是通過(guò)以下方法制備得到的:將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取果榨汁，過(guò)濾得果汁、果肉和種子；取果肉和種子，用O?95%乙醇回流提取I?8次，每次溶劑用量為藥材重量的I?20倍，每次提取時(shí)間為0.5?10小時(shí)；合并提取液，過(guò)濾，回收乙醇，濃縮得浸膏；向浸膏中加入浸膏重量I?20倍的水混懸后，用混懸液體積I?20倍的二氯甲烷萃取，分離水相和二氯甲烷相，對(duì)二氯甲烷相進(jìn)行濃縮、干燥，SP得果肉種子提取物。
7.權(quán)利要求6所述的菇娘果肉種子 提取物在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。
8.一種菇娘宿萼提取物，其特征在于:是通過(guò)以下方法制備得到的:將菇娘果實(shí)與宿萼分開，取宿萼，用0?95%乙醇回流提取I?8次，每次溶劑用量為宿萼重量的I?20倍，每次提取時(shí)間為0.5?10小時(shí)；合并提取液，過(guò)濾，回收乙醇，濃縮、干燥，即得菇娘宿萼提取物。
9.權(quán)利要求8所述的菇娘宿萼提取物在制備治療或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)退行性疾病的藥物或保健品中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求5或7或9所述的應(yīng)用，其特征在于:具體應(yīng)用時(shí)，以菇娘果汁、果肉種子提取物或/和宿萼提取物為原料，添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑或酊劑；或者將菇娘果汁、果肉種子提取物或/和宿萼提取物純化制成注射制劑；或者:將菇娘果汁、果肉種子提取物或/和宿萼提取物與其它對(duì)腫瘤、神經(jīng)退行性疾病有治療或預(yù)防作用的藥物混合，再添加或不添加醫(yī)學(xué)上可接受的輔料，制成膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑或注射劑。
【文檔編號(hào)】A23L2/02GK103432283SQ201310415523
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】沈濤, 張?zhí)颇? 任冬梅 申請(qǐng)人:山東大學(xué)