一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，首先定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣1L，再將采集到的水樣經(jīng)孔徑約為0.45μm的微孔濾膜過濾，然后將過濾后附著在微孔濾膜上的微囊藻群體樣品懸浮在含有10mL10-3mol/L?EDTA溶液的100mL燒杯中，然后向其中加入100個小玻璃珠后1600rm/min磁力攪拌100min，獲得完全分散的單細(xì)胞微囊藻樣品且無破損，最后采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。本發(fā)明體現(xiàn)了簡化實驗步驟，耗時較短，可準(zhǔn)確計數(shù)微囊藻群體細(xì)胞的數(shù)目。
【專利說明】一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于水體污染控制領(lǐng)域，特別是涉及一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]微囊藻(Microcystis sp.)是全球廣布性的水華藍(lán)藻種類,也是我國富營養(yǎng)化水體中最常見的藍(lán)藻水華主要構(gòu)成種類。微囊藻在實驗室培養(yǎng)條件下通常以單細(xì)胞或雙細(xì)胞形式存在，而在野外自然水體中是以大量肉眼可見的群體形式存在?，F(xiàn)在有關(guān)野外微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法有漩渦震蕩法、煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法，然而在漩渦震蕩法作用下囊藻群體細(xì)胞無法完全分散為單細(xì)胞，而在煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法作用下微囊藻群體細(xì)胞均有不同程度的破損，因而上述計數(shù)方法均不同程度地降低了微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就在于提供一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，用于人工供水系統(tǒng)、湖泊、水庫和池塘等各種淡水水體經(jīng)常爆發(fā)藍(lán)藻水華的水體中微囊藻密度的監(jiān)控，用于自然水體中微囊藻細(xì)胞數(shù)目的常規(guī)監(jiān)測及微囊藻水華的預(yù)警與防治。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，包括下述步驟:
[0005]( I)定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣；
[0006](2)將采集到的水樣經(jīng)孔徑不大于2 μ m的篩網(wǎng)過濾，微囊藻樣品附著在篩網(wǎng)上；
[0007](3)將過濾后附著在篩網(wǎng)上的微囊藻群體樣品再次懸浮在濃度為10_3mol/L EDTA溶液的燒杯中；
[0008](4)向上述燒杯加入小玻璃珠后，磁力攪拌；
[0009](5)吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。
[0010]所述步驟⑵中，所述篩網(wǎng)為孔徑0.45μπι的微孔濾膜或孔徑不大于2μπι的篩鄉(xiāng)目。
[0011]所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。
[0012]所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。
[0013]所述步驟(4)中，磁力攪拌速度1000-2000轉(zhuǎn)/min，磁力攪拌時間90_110min。
[0014]所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取，并將血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目換算成每升水樣的微囊藻細(xì)胞數(shù)量。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:可以克服漩渦震蕩法作用下囊藻群體細(xì)胞無法完全分散為單細(xì)胞及煮沸法、二氧化鈦或紫外線處理法作用下微囊藻群體細(xì)胞均有不同程度的破損的缺陷，可準(zhǔn)確計數(shù)自然水體中微囊藻群體細(xì)胞的數(shù)目。實驗步驟簡單，耗時較短，且可準(zhǔn)確提高計數(shù)微囊藻群體細(xì)胞的數(shù)目。廣泛應(yīng)用于人工供水系統(tǒng)、湖泊、水庫和池塘等各種淡水水體微囊藻水華的防控。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是微囊藻群體在本發(fā)明方法作用下第一實施例的形態(tài)的變化。
[0017]圖2是微囊藻群體在本發(fā)明方法作用下第二實施例的形態(tài)的變化。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合【具體實施方式】和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明:
[0019]本發(fā)明的微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，包括下述步驟:
[0020]( I)定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣；
[0021](2)將采集到的水樣經(jīng)孔徑不大于2 μ m的篩網(wǎng)過濾，微囊藻樣品附著在篩網(wǎng)上；
[0022](3)將過濾后附著在篩網(wǎng)上的微囊藻群體樣品再次懸浮在濃度為10_3mol/L EDTA溶液的燒杯中；
[0023](4)向上述燒杯加入小玻璃珠后，磁力攪拌；
[0024](5)吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。
[0025]所述步驟⑵中，所述篩網(wǎng)為孔徑0.45μπι的微孔濾膜或孔徑不大于2μπι的篩鄉(xiāng)目。
[0026]所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。
[0027]所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。
[0028]所述步驟(4)中，磁力攪拌速度1000-2000轉(zhuǎn)/min，磁力攪拌時間90_110min。
[0029]所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取，并將血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目換算成每升水樣的微囊藻細(xì)胞數(shù)量。
[0030]高速磁力攪拌結(jié)合玻璃珠的作用，在EDTA溶液的配合下可將細(xì)菌及真菌細(xì)胞的胞外多糖洗脫下來且不破壞細(xì)菌或真菌細(xì)胞的完整性。
[0031]實施例1本發(fā)明方法應(yīng)用于自然水體微囊藻細(xì)胞密度監(jiān)測的實例
[0032]使用本發(fā)明計數(shù)天津市津河流域2013年7月3日八里臺段爆發(fā)微囊藻水華時的微囊藻細(xì)胞數(shù)目:
[0033](I)利用IL的采水器采取津河微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣IL ; (2)將采集到的津河水樣經(jīng)孔徑約為0.45 μ m的微孔濾膜過濾，微囊藻樣品則附著在微孔濾膜上 ；
[0034](3)將過濾后附著在微孔濾膜上的微囊藻群體樣品再次懸浮在含有10mL10_3mol/L EDTA溶液的IOOmL燒杯中；
[0035](4)向上述IOOmL燒杯加入100個小玻璃珠后，1600rm/min磁力攪拌90_110min ；(見圖1)[0036](5)吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計
[0037]數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。
[0038]所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。
[0039]所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。
[0040]所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取。
[0041]經(jīng)本發(fā)明的方法的實施得到2013年7月3日津河八里臺段爆發(fā)微囊藻水華時的微囊藻細(xì)胞(含銅綠微囊藻M.aeruginosa和魚害微囊藻M.1chthyoblabe)密度為
2.42X 108ind/L。
[0042]實施例2本發(fā)明方法應(yīng)用于養(yǎng)殖水體微囊藻細(xì)胞密度監(jiān)測的實例
[0043]2013年7月5日在天津農(nóng)學(xué)院鯉魚良種場，依據(jù)本發(fā)明方法測得鯉魚良種場3號池養(yǎng)殖水體的微囊藻細(xì)胞(含銅綠微囊藻M.aeruginosa和魚害微囊藻M.1chthyoblabe)密度為 6.42X 107ind/L。
[0044]方法同實施例1，只是將孔徑0.45 μ m的微孔濾膜換成孔徑不大于2 μ m的篩絹，結(jié)果見圖2。
[0045]以上所述的實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)思想及特點，其目的在于使本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，不能僅以本實施例來限定本發(fā)明的專利范圍，即凡本發(fā)明所揭示的精神所作`的同等變化或修飾，仍落在本發(fā)明的專利范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種微囊藻群體細(xì)胞的計數(shù)方法，其特征在于，包括下述步驟: (1)定量采取微囊藻水華爆發(fā)盛期的自然水體的水樣； (2)將采集到的水樣經(jīng)孔徑不大于2μ m的篩網(wǎng)過濾，微囊藻樣品附著在篩網(wǎng)上； (3)將過濾后附著在篩網(wǎng)上的微囊藻群體樣品再次懸浮在濃度為10_3mol/LEDTA溶液的燒杯中； (4)向上述燒杯加入小玻璃珠后，磁力攪拌； (5)吸取顯微鏡下觀察已完全分散開來的微囊藻單細(xì)胞樣品，采用血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述篩網(wǎng)為孔徑0.45 μ m的微孔濾膜或孔徑不大于2 μ m的篩絹。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，利用移液槍吸取EDTA溶液反復(fù)沖洗篩網(wǎng)，直至微囊藻群體完全從篩網(wǎng)上洗脫下來。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，在磁力攪拌過程中，在顯微鏡下每過5分鐘查看微囊藻群體細(xì)胞分散過程，直至微囊藻群體細(xì)胞完全分散為單細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的方法，其特征在于，所述步驟(4)中，磁力攪拌速度1000-2000轉(zhuǎn)/min，磁力攪拌時間90_110min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微囊藻群體細(xì)胞計數(shù)的方法，其特征在于，所述步驟(5)中，吸取微囊藻單細(xì)胞樣品前，要混合均勻后再吸取，并將血球計數(shù)板計數(shù)微囊藻細(xì)胞數(shù)目換算成每升水樣的微囊藻細(xì)胞數(shù)量。
【文檔編號】C12Q1/06GK103484523SQ201310425334
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】畢相東, 張樹林, 郭永軍, 戴偉, 邢克智 申請人:天津農(nóng)學(xué)院