一種芽孢桿菌、培養(yǎng)基及其處理選礦廢水的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種芽孢桿菌，該菌種的名稱為(Bacillus Biometek-T1)，保藏單位為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為：中國科學院微生物研究所，保藏日為：2013年1月10日，保藏登記號為：CGMCC7115。該菌可高效降解選礦藥劑，可用于選礦廢水處理。
CGMCC No 7115
20130110
【專利說明】一種芽孢桿菌、培養(yǎng)基及其處理選礦廢水的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物【技術領域】。特別是涉及一種芽孢桿菌810111的6卜11)、其培養(yǎng)方法以及其在處理選礦廢水的應用。

【背景技術】
[0002]2010年環(huán)境統(tǒng)計年報數(shù)據(jù)顯示，我國有色金屬礦山采選工藝重金屬排放量占重金屬排放總量的41.6%。多金屬礦山選礦廢水排放量約占有色金屬選礦廢水30%。以鉛鋅硫化礦為例，處理每噸礦石需耗水4-1003。常規(guī)的鉛鋅硫化礦浮選分離過程中，首先添加硫酸鋅抑制閃鋅礦，再加入乙硫氮等捕收劑優(yōu)先浮選方鉛礦。選鉛尾礦分別添加硫酸銅和黃藥等藥劑活化捕收閃鋅礦。由于優(yōu)先浮選兩階段藥劑制度不同，選鋅廢水中含有乙硫氮、黃藥和二號油等殘余藥劑，若不加處理直接回用，會嚴重影響選礦指標，而外排則對環(huán)境污染影響嚴重。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的第一個目的是提供一株高效的芽孢桿菌菌種，該菌株的名稱為8^:11111881011161:61^-11，該菌種可高效的降解鉛鋅硫化礦浮選藥劑。
[0004]本發(fā)明的第二個目的是提供一種可以富集、分離、培養(yǎng)該細菌的培養(yǎng)基。
[0005]本發(fā)明的第三個目的是提供一種利用該菌處理選礦廢水的工藝。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的:
[0007]一種芽孢桿菌鄧.),該菌種的保藏單位為:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏日為:2013年1月10日，保藏登記號為:06100如.7115。
[0008]—種用于富集、分離培養(yǎng)如上所述芽孢桿菌的液體培養(yǎng)基，其配方為:0.25重量份酵母粉、0.5重量份蛋白胨、0.25重量份版1(:10.01重量份乙硫氮、0.01重量份黃藥、0.01重量份二號油和1000重量份蒸餾水，邱為7.0。
[0009]一種用于富集、分離培養(yǎng)如上所述芽孢桿菌的固體培養(yǎng)基，其配方為:0.25重量份酵母粉、0.5重量份蛋白胨、0.25重量份版1(:10.01重量份乙硫氮、0.01重量份黃藥、0.01重量份二號油、1000重量份蒸餾水和30重量份結冷膠，邱為7.0。
[0010]如上所述芽孢桿菌的富集、分離培養(yǎng)方法，該方法包括:將所述芽孢桿菌菌種接種入如權利要求2所述的液體培養(yǎng)基中，在25-351的培養(yǎng)溫度下，搖床培養(yǎng)2?5天。
[0011]如上所述的方法，優(yōu)選地，所述芽孢桿菌菌種為含有菌濃度為00600=0.6的權利要求2所述的液體培養(yǎng)基，其與空白液體培養(yǎng)基的體積比為1:19。
[0012]如上所述芽孢桿菌處理選礦廢水的方法，其包括，將所述芽孢桿菌的菌種，接種至臭氧氧化-填料生物膜反應器內，接種量為每立方米體積31液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中菌種濃度為108?109#11 / “，隨后采用生物膜接觸氧化法處理選礦廢水。
[0013]如上所述的方法，優(yōu)選地，所述臭氧氧化-填料生物膜反應器的臭氧曝氣量為50?3001111 / 111111，處理時間為0.5?1小時。
[0014]如上所述的方法，優(yōu)選地，所述臭氧氧化-填料生物膜反應器的填料為活性炭。
[0015]本發(fā)明使用的酵母粉可以是市售的各種酵母粉。
[0016]本發(fā)明使用的蛋白胨可以是市售的各種蛋白胨，例如動物性蛋白胨、植物性蛋白胨、微生物蛋白胨等，優(yōu)選胰蛋白胨。
[0017]本發(fā)明使用的結冷膠可以是市售的各種結冷膠。
[0018]本發(fā)明使用的黃藥可以是市售的各種黃藥，例如乙基黃藥、丁基黃藥、異丙基黃藥、異丁基黃藥、戊基黃藥、己基黃藥等，優(yōu)選丁基黃藥。
[0019]本發(fā)明的有益效果在于:
[0020]本發(fā)明提供了一種芽孢桿菌81006仏卜11),該菌可高效降解浮選廢水中的選礦藥劑，一方面可實現(xiàn)浮選廢水的處理回用，另一方面可大幅度減緩浮選廢水對環(huán)境污染的影響。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為本發(fā)明菌種的掃描電鏡照片。
[0022]圖2為本發(fā)明菌種在不同生長溫度下的培養(yǎng)結果。
[0023]圖3本發(fā)明菌種對三種選礦藥劑的降解情況。
[0024]圖4接種本發(fā)明菌種的5001113 / (1臭氧填料生物膜工藝對實際選礦廢水處理情況。

【具體實施方式】
[0025]本發(fā)明所涉及的芽孢桿菌于2013年1月10日進行保藏，菌種名稱為8狀11111881011161:61^-11，保藏單位為:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為:中國科學院微生物研究所，保藏登記號為如.7115，經檢測結果為存活。
[0026]實施例1本發(fā)明芽孢桿菌8^111118 0101116^6^-11的獲取及鑒定
[0027](1)配制富集培養(yǎng)芽孢桿菌的液體培養(yǎng)基:稱取0.258酵母粉、0.蛋白胨、0.258 10呢乙硫氮、10呢黃藥、10呢二號油加入1000111[蒸懼水中，用111101 / I 水溶液調邱為7.0，121。。滅菌25分鐘。
[0028]配制富集培養(yǎng)芽孢桿菌的固體培養(yǎng)基:稱取0.258酵母粉、0.蛋白胨、0.25^01 ? 10111^乙硫氮、1011?黃藥、1011? 二號油、30@結冷膠加入10001111蒸懼水中，用111101 / I版10?水溶液調邱為7.0，1211滅菌25分鐘，滅菌后倒平板。
[0029](2)將100此采白廣西車河某選礦廠浮選廢水水樣加入0.酵母粉，在301震蕩培養(yǎng)1周。利用顯微鏡檢測判斷細菌生長情況。測量細菌培養(yǎng)液在600=0處的吸光值，得到的00600的數(shù)值如果在0.6-0.8之間，即可進行下一步操作。
[0030](3)采用膜過濾將上述培養(yǎng)液中的細菌過濾，并將細菌用2001無菌水洗下。以5體積％的接種量分別接種于多個1001上述液體培養(yǎng)基的搖瓶中，301進行恒溫培養(yǎng)，并設置不接種對照(00。10011)0培養(yǎng)兩周后觀察細菌生長情況。將液體培養(yǎng)基梯度稀釋(川―、10一2，10—3，10—4，101，分別取100 ^ [稀釋液涂于固體培養(yǎng)基制備的平板，451培養(yǎng)三天。挑取單菌落后，轉入新的固體培養(yǎng)基，利用平板劃線分離法進行分離培養(yǎng)，直至獲得單菌落。
[0031]用掃描電鏡觀察菌體形態(tài)，菌體形態(tài)如圖1所示。
[0032]通過溫度梯度搖床培養(yǎng)，其生長溫度區(qū)間如圖2所示。
[0033]用163『0嫩克隆文庫技術分析鑒定菌種。將單菌落利用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)至00600=0.6后所得菌液1此離心得到菌泥，提取總0嫩，利用技術以原核生物通用引物530？和1490^擴增163 1*0嫩片段。產物純化后與？1~01116職的1-6狀7載體連接，轉化于0??！5 ^感受態(tài)細胞中，按常規(guī)操作，涂布到含氨芐青霉素的⑶瓊脂平板培養(yǎng)，之后，挑取單克隆菌落進行菌落？⑶鑒定，引物為530？ / 14901'，確定陽性菌落，經內切酶內切分型，對4個克隆測序。所得序列經8匕0比較表明，該菌株系8狀111118屬細菌。
[0034]實施例2本發(fā)明芽孢桿菌8^111118 0101116^6^-11的富集、分離培養(yǎng)
[0035]將實施例1純化的芽孢桿菌菌種(菌濃度為00600=0.6的含芽孢桿菌液體培養(yǎng)基)按照5體積％接種入實施例1制備的液體培養(yǎng)基中，在25-351的培養(yǎng)溫度下，搖床培養(yǎng)，5天，通過離心機離心收集獲得芽孢桿菌。
[0036]實施例3本發(fā)明芽孢桿菌對選礦藥物的降解率
[0037]用兩個3001111燒瓶分別裝入150111[含丁黃藥401118 / I，2號油3011? / [，乙硫氮30呢/ [的模擬浮選廢水，其中一個燒瓶中接入芽孢桿菌8^111118 810111的4-11，接種量為:實施例2制備的菌濃度為00600=0.6的含芽孢桿菌液體培養(yǎng)基按照5體積％接種入模擬浮選廢水，另一個為空白對照，搖床培養(yǎng)21利用分光光度法測試降解率。結果如圖3所示，與空白對比，丁黃藥的降解率提高57%，2號油的降解率提高21%，乙硫氮的降解率提高57%。證明本發(fā)明菌種確實具有高效降解三種選礦藥劑的能力。
[0038]實施例4
[0039]將實施例2富集培養(yǎng)的芽孢桿菌8狀111118 81011161:6卜11接種至臭氧氧化-填料生物膜反應器內，接種量為每V填料約31含芽孢桿菌的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中菌濃度為108#11丨“，并采用車河選礦廠選礦廢水進行驗證，臭氧曝氣量為3001111丨111111，處理時間為1小時，填料為活性炭，結果見圖4。從圖中可以看出，接種芽孢桿菌8^111118810！?。〉?卜II后，填料生物膜反應器化學需氧量￠00)降解率大于67%，可有效降解廢水中殘余藥劑。
【權利要求】
1.一種芽孢桿菌(Bacillus B1metek-Tl),其特征在于,該菌種的保藏單位為:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為:中國科學院微生物研究所，保藏日為:2013年I月10日，保藏登記號為:CGMCC N0.7115。
2.一種用于富集、分離培養(yǎng)如權利要求1所述芽孢桿菌的液體培養(yǎng)基，其特征在于，其配方為:0.25重量份酵母粉、0.5重量份蛋白胨、0.25重量份NaCl、0.01重量份乙硫氮、0.01重量份黃藥、0.01重量份二號油和1000重量份蒸餾水，pH為7.0。
3.一種用于富集、分離培養(yǎng)如權利要求1所述芽孢桿菌的固體培養(yǎng)基，其特征在于，其配方為:0.25重量份酵母粉、0.5重量份蛋白胨、0.25重量份NaCl、0.01重量份乙硫氮、0.01重量份黃藥、0.01重量份二號油、1000重量份蒸餾水和30重量份結冷膠，pH為7.0。
4.權利要求1所述芽孢桿菌的富集、分離培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括:將所述芽孢桿菌菌種接種入如權利要求2所述的液體培養(yǎng)基中，在25-35°C的培養(yǎng)溫度下，搖床培養(yǎng)2?5天。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述芽孢桿菌菌種為含有菌濃度為0D600=0.6的權利要求2所述的液體培養(yǎng)基，其與空白液體培養(yǎng)基的體積比為1:19。
6.一種利用如權利要求1所述芽孢桿菌處理選礦廢水的方法，其特征在于，將權利要求I所述芽孢桿菌的菌種，接種至臭氧氧化-填料生物膜反應器內，接種量為每立方米體積3L液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中菌種濃度為18?19Cfu / ml，隨后采用生物膜接觸氧化法處理選礦廢水。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述臭氧氧化-填料生物膜反應器的臭氧曝氣量為50?300ml / min，處理時間為0.5?I小時。
8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述臭氧氧化-填料生物膜反應器的填料為活性炭。
【文檔編號】C12N1/20GK104450545SQ201310425605
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月17日 優(yōu)先權日:2013年9月17日
【發(fā)明者】劉興宇, 劉文彥, 陳勃偉, 宋永勝, 溫建康 申請人:北京有色金屬研究總院