一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，即將人參皂甙Rb1降解生成人參皂甙Rd的方法。在常溫條件下將人參皂甙Rb1溶液和酶制劑混合均勻，直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為5-20kV/cm，處理的脈沖數(shù)為1-10個(gè)，酶制劑的添加量為1-4%，所采用的酶為價(jià)格低廉的商業(yè)化纖維素酶和β-葡萄糖苷酶。本方法在人參皂甙Rb1酶解過程中引入高壓脈沖電場(chǎng)，提高了酶活性，加速了人參皂甙Rb1降解的反應(yīng)速度，快速、高效地促進(jìn)人參皂甙Rb1轉(zhuǎn)化生成稀有人參皂甙Rd。本方法與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)化方法相比，無需加熱、制備時(shí)間短、得率高、能耗少。
【專利說明】一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，特別是涉及高壓脈沖電場(chǎng)耦合酶解制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人參(Panax ginseng C.A.Meyer)為五加科人參屬植物,廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域。人參皂甙作為人參代謝重要次級(jí)產(chǎn)物，具有多種藥理活性。其中稀有人參皂甙Rd屬于原人參二元醇，具有神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用、抗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、預(yù)防化學(xué)藥物引起腎損傷及阻止血管收縮等作用。
[0003]但是稀有人參皂甙Rd在人參中含量較低，含量只有千分之幾，從人參中直接提取顯然不符合實(shí)際。目前的化學(xué)合成技術(shù)步驟復(fù)雜、產(chǎn)率很低，也難以工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004]稀有人參皂甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)與人參中某些含量高的人參皂甙如Rbl相比，只是缺少了一個(gè)或幾個(gè)糖基，因此可以通過水解某些高含量人參皂甙的糖基來獲得稀有人參皂甙。目前，用于人參皂甙糖基水解的方法主要有化學(xué)轉(zhuǎn)化法和生物轉(zhuǎn)化法。其中化學(xué)轉(zhuǎn)化法反應(yīng)包括酸水解和堿水解，但存在專一性差，副產(chǎn)物多、產(chǎn)率低的缺點(diǎn)；生物轉(zhuǎn)化法包括微生物轉(zhuǎn)化和酶法轉(zhuǎn)化，但反應(yīng)周期長，工藝復(fù)雜。本發(fā)明方法具有條件溫和、不破壞皂甙結(jié)構(gòu)、操作步驟簡(jiǎn)單、選擇性高、得率高等優(yōu)點(diǎn)，并且采用的酶為價(jià)格低廉的商業(yè)化用酶。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提出一種高壓脈沖電場(chǎng)與酶耦合降解人參皂甙Rbl制備稀有人參皂甙Rd的方法，以克服目前化學(xué)法和生物法降解人參皂甙Rbl的缺點(diǎn)。
[0006]本發(fā)明涉及一種降解人參皂甙Rbl快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，利用高壓脈沖電場(chǎng)技術(shù)耦合酶制劑降解人參皂甙Rbl制備稀有人參皂甙Rd，在常溫下將人參皂甙Rbl樣品溶解于緩沖溶液中，加入酶制劑混合均勻，直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為5-20kV/cm，處理的脈沖數(shù)為1-10個(gè)，將高壓脈沖電場(chǎng)處理后的物料加入有機(jī)溶劑萃取，離心分離，取上清液，揮發(fā)除掉溶劑，即獲得人參皂甙Rd。
[0007]所述的酶制劑為纖維素酶或β -葡萄糖苷酶。
[0008]所述酶制劑添加量為1_4%。
[0009]所述緩沖溶液使用醋酸鈉-醋酸緩沖液。
[0010]所述有機(jī)溶劑使用正丁醇時(shí)用水飽和溶液。
[0011]本方法由于在酶解反應(yīng)過程中引入高壓脈沖電場(chǎng)，提高酶活性，加速酶解反應(yīng)速度，快速、高效地促進(jìn)人參皂甙Rbl轉(zhuǎn)化生成稀有人參皂甙Rd。
[0012]本發(fā)明將高壓脈沖電場(chǎng)技術(shù)與商業(yè)化酶制劑進(jìn)行耦合制備稀有人參人參皂甙Rd，具有非熱、反應(yīng)速度快、副產(chǎn)物少、成本低等優(yōu)點(diǎn)，為人參皂甙結(jié)構(gòu)修飾提供新方法。
【專利附圖】

【附圖說明】[0013]圖1人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的反應(yīng)途徑【具體實(shí)施方式】
[0014]結(jié)合以下給出的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0015]實(shí)施例1
[0016]本發(fā)明將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入3%β -葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為8 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為91.42%。
[0017]實(shí)施例2
[0018]將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為70.35%。
[0019]實(shí)施例3
[0020]將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為20kV/cm，脈沖數(shù)為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為44.52%。
[0021]實(shí)施例4
[0022]將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入4%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為20kV/cm，脈沖數(shù)為8 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為56.29%。
[0023]實(shí)施例5
[0024]將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入2%纖維素酶Cellulasel.5L FG，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為51.06%。
[0025]實(shí)施例6
[0026]將人參皂甙Rbl降解生成人參皂甙Rd的方法，是在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入2%纖維素酶Cellulase (Aspergillus niger),混合均勻,在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂甙Rd的得率為46.81%。
【權(quán)利要求】
1.一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，利用高壓脈沖電場(chǎng)技術(shù)耦合酶制劑降解人參皂甙Rbl制備稀有人參皂甙Rd，其特征在于: 在常溫下將人參皂甙Rbl樣品溶解于緩沖溶液中，加入酶制劑混合均勻，直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為5-20kV/cm，處理的脈沖數(shù)為1-10個(gè)，將高壓脈沖電場(chǎng)處理后的物料加入有機(jī)溶劑萃取，離心分離，取上清液，揮發(fā)除掉溶劑，即獲得人參皂甙Rd。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述的酶制劑為纖維素酶或葡萄糖苷酶，添加量為1_4%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述緩沖溶液使用醋酸鈉-醋酸緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述有機(jī)溶劑使用正丁醇時(shí)用水飽和溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參皂甙Rbl溶液中 加入3%β -葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為8 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為91.42%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入3% β -葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為70.35%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入3% β -葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為20kV/cm，脈沖數(shù)為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為44.52%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入4%β-葡萄糖苷酶，混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為20kV/cm，脈沖數(shù)為8 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為56.29%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參皂甙Rbl溶液中加入2%纖維素酶Cellulasel.5L FG,混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為51.06%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的一種快速制備稀有人參皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人參阜式Rbl溶液中加入2%纖維素酶Cellulase, Aspergillus niger,混合均勻，在常溫下直接通入高壓脈沖電場(chǎng)進(jìn)行處理，其電場(chǎng)強(qiáng)度為15kV/cm，脈沖數(shù)為10 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分`離，上清液揮發(fā)除去溶劑，人參皂甙Rd的得率為46.81%。
【文檔編號(hào)】C12P33/20GK103525892SQ201310429027
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年9月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月20日
【發(fā)明者】盧丞文, 殷涌光 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)