利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微衛(wèi)星分子標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)，堿基序列見(jiàn)序列表中序列1-12。利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在鑒定魯西黃牛和利木贊牛雜交后代利魯牛中的應(yīng)用。利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在利魯牛篩選或輔助育種中的應(yīng)用。建立了利魯牛的微衛(wèi)星DNA分子標(biāo)記技術(shù)體系，并利用這些標(biāo)記的引物對(duì)進(jìn)行利魯牛遺傳多樣性分析、指紋圖譜構(gòu)建及分子標(biāo)記輔助育種，在利木贊牛和魯西黃牛的育種實(shí)踐中，利用這種分子標(biāo)記引物對(duì)可以快速鑒定雜交后代的真實(shí)性，高效獲得雜種后代，加快育種進(jìn)程。
【專利說(shuō)明】利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)及其應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及微衛(wèi)星分子標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)，還涉及所述引物對(duì)在利魯牛品質(zhì)鑒定中的應(yīng)用。
[0002]【背景技術(shù)】 利魯牛的育種工作最早從1976年開(kāi)始，通過(guò)以利木贊牛為父本，魯西黃牛為母本，采用開(kāi)放式核心群育種方案，經(jīng)過(guò)“雜交創(chuàng)新、橫交、選育提高”3個(gè)階段，培育出含利木贊牛血液62.5%,魯西黃牛血液37.5%,體型外貌一致,遺傳性能穩(wěn)定的利魯牛。
[0003]山東省地處我國(guó)肉牛優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)一中原肉牛產(chǎn)業(yè)帶的核心區(qū)域，歷史上曾培育出了我國(guó)著名的地方良種魯西黃牛和渤海黑牛，牛的存欄和牛肉產(chǎn)量一直穩(wěn)居全國(guó)前三位。魯西黃牛和渤海黑牛雖然具有許多優(yōu)良的特性，但均不是專門的肉牛品種。為了快速提高牛肉產(chǎn)肉，建國(guó)以后山東省先后引進(jìn)了利木贊、皮埃蒙特、夏洛萊、安格斯、德國(guó)黃牛、西門塔爾等眾多國(guó)外品種與魯西黃牛等地方品種雜交，取得了顯著效果，對(duì)于快速提高全省的肉牛生產(chǎn)水平和牛肉產(chǎn)量做出了突出貢獻(xiàn)。但由于在雜交過(guò)程中忽略了對(duì)魯西黃牛等地方良種的選育和保護(hù)，加上養(yǎng)殖效益低于雜交牛，導(dǎo)致作為雜交母本的純種數(shù)量急劇下降。而隨著級(jí)進(jìn)雜交代數(shù)的提高，不僅雜交優(yōu)勢(shì)不再明顯，還出現(xiàn)了很多負(fù)面效果。同時(shí)，國(guó)外良種肉牛的引進(jìn)僅是單純的種公牛引進(jìn)，即使引進(jìn)母牛數(shù)量也很小，根本沒(méi)法自主進(jìn)行種公牛的培育，不得不從國(guó)外重復(fù)引種。利魯牛的培育成功，一是填補(bǔ)了山東省沒(méi)有專門化肉用品種的空白；二是穩(wěn)定了雜交所產(chǎn)生的雜交優(yōu)勢(shì)，且不需要再維持龐大的地方良種牛群體；三是可實(shí)現(xiàn)優(yōu)秀種公牛的自主培育，減少對(duì)進(jìn)口種公牛的依賴。利魯牛適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)速度快，產(chǎn)肉性能好，牛肉品質(zhì)較好，易飼養(yǎng)，兼具父本利木贊牛和母本魯西黃牛的多數(shù)優(yōu)良特性，因此，推廣應(yīng)用前景良好。
[0004]在育種實(shí)踐過(guò)程中，隨著對(duì)個(gè)體及其產(chǎn)品要求的提高，通常用到畜群系譜圖，根據(jù)親屬信息來(lái)決定個(gè)體的選留，因此準(zhǔn)確的系譜記錄是非常必要的，然而，在某些情況下(如寄養(yǎng)、母畜返情重配等)卻不能準(zhǔn)確判斷該個(gè)體的親代。
[0005]在現(xiàn)代種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)管理中，部分種質(zhì)企業(yè)從國(guó)內(nèi)外引進(jìn)了不同的品種品系以滿足現(xiàn)代市場(chǎng)的多元化需求，在制種或售種過(guò)程中，不僅有純系，還生產(chǎn)了各種各樣的系間雜交群體，個(gè)別企業(yè)為了追求利益，可能會(huì)將系間雜交群體作為純系進(jìn)行銷售，而客戶單純從體型外貌觀察難以分辨純系和系間雜交群體的差異，如果用作種質(zhì)進(jìn)行繁育后代則容易出現(xiàn)性狀分離，影響種群整齊度。
[0006]Van Zeveren等(1995)利用7個(gè)微衛(wèi)星座位對(duì)4個(gè)比利時(shí)豬種進(jìn)行血緣關(guān)系鑒定，排除概率在95%以上。Heyen等(1997)使用分屬17條染色體的22個(gè)微衛(wèi)星座位，采用排除概率法，對(duì)5個(gè)品種牛進(jìn)行血緣關(guān)系分析，使鑒定準(zhǔn)確率達(dá)到99.99%。因此，可以通過(guò)微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)科學(xué)鑒定純系與系間雜交群體。在地方品種的有效保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用方面，微衛(wèi)星標(biāo)記也起著重要作用。因此，利用微衛(wèi)星引物多態(tài)性，通過(guò)計(jì)算分析排除概率即可進(jìn)行親子鑒定及血緣控制?，F(xiàn)有技術(shù)中還沒(méi)有使用微衛(wèi)星分子標(biāo)記對(duì)利魯牛進(jìn)行品種鑒定的記載。[0007]
【發(fā)明內(nèi)容】

為了解決以上利魯牛在品種鑒定方面的難題，本發(fā)明提供了一種使用微衛(wèi)星分子標(biāo)記鑒定利魯牛品種的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)。
[0008]本發(fā)明還提供了上述利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在利魯牛品種鑒定、篩選或輔助育種中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的通過(guò)以下步驟得到的:
一種利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)，堿基序列如下:
1)INRA032 F: 5’ - AAACTGTATTCTCTAATAGCTAC-3’(序列表中序列 I)
INRA032 R: 5’ -GCAAGACATATCTCCATTCCTTT-3’(序列表中序列 2)
2)TGLA126 F: 5’- CTAATTTAGAATGAGAGAGGCTTCT-3’(序列表中序列 3)
TGLA126 R: 5’- TTGGTCTCTATTCTCTGAATATTCC-3’(序列表中序列 4)
3)ETHlO F: 5’- GTTCAGGACTGGCCCTGCTAACA-3，(序列表中序列 5)
ETHlO R: 5’- CCTCCAGCCCACTTTCTCTTCTC-3’ (序列表中序列 6)
4)INRA035 F: 5，- TTGTGCTTTATGACACTATCCG-3’(序列表中序列 7)
INRA035 R: 5’ - ATCCTTTGCAGCCTCCACATTG-3’(序列表中序列 8)
5)DVGA46 F: 5’- AAATCCTTTCAAGTATGTTTTCA-3’(序列表中序列 9)
DVGA46 R: 5’ - ACTCACTCCAGTATTCTTGTCTG-3’(序列表中序列 10)
6)BM1818 F: 5’ - AGCTGGGAATATAACCAAAGG-3’(序列表中序列 11)
BM1818 R: 5’ - AGTGCTTTCAAGGTCCATGC-3’。(序列表中序列 12)
所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在鑒定魯西黃牛和利木贊牛雜交后代利魯牛中的應(yīng)用。
[0010]所述的應(yīng)用，包括以下步驟:
(1)對(duì)目標(biāo)血液或精液進(jìn)行DNA提取；
(2)使用權(quán)利要求1所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)對(duì)步驟(1)中提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
(3)當(dāng)步驟(2)中的擴(kuò)增產(chǎn)物同時(shí)顯示出魯西黃牛和利木贊牛的譜帶類型時(shí)，為真實(shí)雜種利魯牛。
[0011]所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在利魯牛篩選或輔助育種中的應(yīng)用。
[0012]本發(fā)明的有益效果:建立了利魯牛的微衛(wèi)星DNA分子標(biāo)記技術(shù)體系，并利用這些標(biāo)記的引物對(duì)進(jìn)行利魯牛遺傳多樣性分析、指紋圖譜構(gòu)建及分子標(biāo)記輔助育種，在利木贊牛和魯西黃牛的育種實(shí)踐中，利用這種分子標(biāo)記引物對(duì)可以快速鑒定雜交后代的真實(shí)性，高效獲得雜種后代，加快育種進(jìn)程。
[0013]【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
圖1為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在INRA032位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中，粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖；
圖2為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在TGLA126位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖；
圖3為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在ETHlO位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中，粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖；
圖4為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在INRA035位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中，粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖；
圖5為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在DVGA46位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中，粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖；
圖6為利木贊牛與魯西黃牛及其雜交后代在BM1818位點(diǎn)上的SSR分型圖；其中，粗線峰為內(nèi)標(biāo)峰，每個(gè)峰下面均標(biāo)有其相對(duì)應(yīng)的片段長(zhǎng)度；上一為利木贊牛的SSR分形圖；上二為魯西黃牛的SSR分形圖；后三幅圖為利木贊牛與魯西黃牛三個(gè)不同雜交后代的SSR分形圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下通過(guò)實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)敘述。
[0015](I)選擇純種的利木 贊牛、魯西黃牛及其3個(gè)雜交后代利魯牛，從其全血或凍精中提取基因組DNA (全血采用Lab-Aid基因組DNA分離試劑盒提取，凍精采用高鹽法提取)。
[0016](2)準(zhǔn)備魯西黃牛、利木贊牛、3個(gè)雜交后代利魯牛6個(gè)品種牛的基因組DNA各一份，對(duì)30對(duì)適合牛用的微衛(wèi)星一一進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后凝膠電泳檢測(cè)是否有擴(kuò)增條帶。選擇能使魯西黃牛、利木贊牛、利魯牛三個(gè)品種牛完全擴(kuò)增出的微衛(wèi)星引物。結(jié)果篩選出20對(duì)符合條件的微衛(wèi)星位點(diǎn)，分別為 INRA032、TGLA126, TGLA227、TGLA122、ETH10、INRA035、HEL5、HEL13、DVGA44、ETH225、BM1824、SPSl 15、BM2113、INRA063、DVGA46、DVGA55、BM1818、HAUT24、TGLA53、INRA023。堿基序列如下:
1)INRA032 F: 5’ - AAACTGTATTCTCTAATAGCTAC-3’
INRA032 R: 5’ -GCAAGACATATCTCCATTCCTTT-3’
2)TGLAI26 F: 5’ - CTAATTTAGAATGAGAGAGGCTTCT-3’
TGLAI26 R: 5’ - TTGGTCTCTATTCTCTGAATATTCC-3’
3)TGLA227 F: 5’ - CGAATTCCAAATCTGTTAATTTGCT-3’
TGLA227 R: 5， - ACAGACAGAAACTCAATGAAAGCA-3’
4)TGLA122 F: 5’ - CCCTCCTCCAGGTAAATCAGC-3，
TGLA122 R: 5’ - AATCACATGGCAAATAAGTACATAC-3’
5)ETHlO F: 5’ - GTTCAGGACTGGCCCTGCTAACA-3’
ETHlO R: 5’ - CCTCCAGCCCACTTTCTCTTCTC-3’6)INRA035 F: 5’ - TTGTGCTTTATGACACTATCCG-3’
INRA035 R: 5’ - ATCCTTTGCAGCCTCCACATTG-3’
7)HEL5 F: 5’ - GCAGGATCACTTGTTAGGGA-3’
HEL5 R: 5’ - AGACGTTAGTGTACATTAAC-3’
8)HEL13 F: 5’ - TAAGGACTTGAGATAAGGAG-3’
HEL13 R: 5’ - CCATCTACCTCCATCTTAAC-3’
9)DVGA44 F: 5’ _ GGGAGAATGGATGGAACCAAAT-3’
DVGA44 R: 5’ - TTCGAAGACGGGCAGACAGG-3’
10)ETH225 F: 5’ - GATCACCTTGCCACTATTTCCT-3’
ETH225 R: 5’ - ACATGACAGCCAGCTGCTACT-3’
11)BM1824 F: 5’ - GAGCAAGGTGTTTTTCCAATC-3’
BM1824 R: 5’ - CATTCTCCAACTGCTTCCTTG-3’
12)SPSl15 F: 5’ - AAAGTGACACAACAGCTTCTCCAG-3’
SPSl15 R: 5’ - AACGAGTGTCCTAGTTTGGCTGTG-3’
13)BM2113 F: 5’ - GCTGCCTTCTACCAAATACCC-3’
BM2113 R: 5’ - CTTCCTGAGAGAAGCAACACC-3’
14)INRA063 F: 5’ - ATTTGCACAAGCTAAATCTAACC-3’
INRA063 R: 5’ - AAACCACAGAAATGCTTGGAAG-3’
15)DVGA46 F: 5’ - AAATCCTTTCAAGTATGTTTTCA-3’
DVGA46 R: 5’ - ACTCACTCCAGTATTCTTGTCTG-3’
16)DVGA55 F: 5’ - GTGACTGTATTTGTGAACACCTA-3’
DVGA55 R: 5’ - TCTAAAACGGAGGCAGAGATG-3’
17)BM1818 F: 5’ - AGCTGGGAATATAACCAAAGG-3J
BM1818 R: 5’ - AGTGCTTTCAAGGTCCATGC-3’
18)HAUT24 F: 5’ - CTCTCTGCCTTTGTCCCTGT-3’
HAUT24 R: 5’ - AATACACTTTAGGAGAAAAATA-3’
19)TGLA53 F: 5’ - GCTTTCAGAAATAGTTTGCATTCA-3’
TGLA53 R: 5’ - ATCTTCACATGATATTACAGCAGA-3’
20)INRA023 F: 5’ - GAGTAGAGCTACAAGATAAACTTC
INRA023 R: 5’ - TAACTACAGGGTGTTAGATGAACTC-3’。
[0017]首先檢測(cè)所選取的20對(duì)微衛(wèi)星引物的最佳退火溫度，采用溫度梯度PCR儀進(jìn)行普通產(chǎn)物擴(kuò)增，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，選取條帶最亮的為最佳退火溫度，分別為54°C、54 °C >54 °C >54 °C >56 °C >60 °C >54 °C >52 °C >58 °C >58 °C >52 °C >54 °C >54 °C >52 °C >52 °C >54 °C >52 V、54°C、52 V、50°C。然后分別對(duì)20對(duì)微衛(wèi)星引物的正向引物5’段進(jìn)行熒光標(biāo)記，其中微衛(wèi)星引物 INRA032、TGLA227、ETHlO、INRA035、HEL5、DVGA44、ETH225、SPS115、BM2113、DVGA46、BM1818、HAUT24、TGLA53進(jìn)行FAM (藍(lán)色)熒光標(biāo)記，剩余微衛(wèi)星引物TGLA126、TGLA122、HEL13、BM1824、INRA063、DVGA55、INRA023 進(jìn)行 HEX (綠色)熒光標(biāo)記。
[0018](3)PCR擴(kuò)增:PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體系為20 μ L，其中SuperMix 10 μ L，每個(gè)引物對(duì)中的上、下游引物各0.8 ULClO pmol/μ?)，模板I yL(100 ng/μ I )。模板為魯西黃牛、利木贊牛、利魯牛(利木贊和魯西黃牛雜交后代)DNA。PCR擴(kuò)增程序:94 °C預(yù)變性3 min ；94 °C變性 30 s, 50-60 °C復(fù)性 30 s，72 °C延伸 40 s，30 個(gè)循環(huán)；60 °C 45 min。
[0019](4)基因型檢測(cè):利用毛細(xì)管電泳多色熒光檢測(cè)，主要操作步驟如下:1)PCR產(chǎn)物稀釋:FAM，HEX熒光標(biāo)記的引物PCR產(chǎn)物需要稀釋30倍；取96孔板按PCR產(chǎn)物板號(hào)對(duì)應(yīng)的做好標(biāo)記，加滅菌雙蒸水(DNA 2 μ L，若稀釋30倍，ddH20加58 μ L)。2) DNA變性:將20μ L SIZ-500內(nèi)標(biāo)加入980 μ L去離子甲酰胺內(nèi)，渦旋混勻，離心，以每孔10 μ L分裝到新的96孔板內(nèi)，取I yL PCR產(chǎn)物稀釋物對(duì)應(yīng)的加入各孔中；95 °C變性5 min，于4 °C保溫10 min ；3000 rpm離心I min,于3730x1 DNA分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳。3)輸入跑樣表,用DataCollection軟件收集原始數(shù)據(jù)。4)分析數(shù)據(jù)，用GeneMapper軟件對(duì)DataCollection軟件收集的原始數(shù)據(jù)分析。
[0020](5)為了對(duì)得到的雜交子代進(jìn)行DNA分子鑒定，首先篩選出在父母本中擴(kuò)增出不同譜帶類型的微衛(wèi)星引物作為雜種鑒定的標(biāo)記，然后對(duì)子代連同親本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，當(dāng)子代顯示出上雙親的譜帶類型時(shí)，可鑒定為真實(shí)雜種，最終在子代中顯示出雙親的譜帶類型的為 INRA032、TGLA126、ETH10、INRA035、DVGA46 和 BM1818 引物對(duì)。圖譜分別見(jiàn)圖 1-6。
[0021]引物對(duì)的準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)
為了對(duì)上述得到的6對(duì)引物的準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)價(jià)，特設(shè)置以下實(shí)驗(yàn):
采集員采集若干個(gè)牛品種的血液，并編號(hào)，其中有3個(gè)是利魯牛(來(lái)自利魯牛的培育基地-山東省海陽(yáng)市畜牧獸醫(yī)局)，3個(gè)是利木贊牛(其中1頭來(lái)自洛陽(yáng)市瑞牧有限公司，2頭來(lái)自山東省種公牛站有限責(zé)任公司)、3個(gè)魯西黃牛(來(lái)自山東省種公牛站有限責(zé)任公司)，采集員知曉哪些編號(hào)是真實(shí)的利魯牛，哪些編號(hào)不是利魯牛，但他沒(méi)有告知實(shí)驗(yàn)人員，實(shí)驗(yàn)人員使用上述篩選出的6對(duì)引物按照上述方法對(duì)6個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)鑒定，鑒定結(jié)果經(jīng)采集員確認(rèn)，準(zhǔn)確率達(dá)到100%。說(shuō)明上述篩選出的6對(duì)引物的鑒定準(zhǔn)確度高。
【權(quán)利要求】
1.一種利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)，其特征在于堿基序列如下:
1)INRA032 F: 5’ - AAACTGTATTCTCTAATAGCTAC-3’
INRA032 R: 5’ -GCAAGACATATCTCCATTCCTTT-3’
2)TGLA126 F: 5’- CTAATTTAGAATGAGAGAGGCTTCT-3’
TGLAI26 R: 5’ - TTGGTCTCTATTCTCTGAATATTCC-3’
3)ETHlO F: 5’ - GTTCAGGACTGGCCCTGCTAACA-3’
ETHlO R: 5’ - CCTCCAGCCCACTTTCTCTTCTC-3’
4)INRA035 F: 5’ - TTGTGCTTTATGACACTATCCG-3’
INRA035 R: 5’ - ATCCTTTGCAGCCTCCACATTG-3’
5)DVGA46 F: 5’ - AAATCCTTTCAAGTATGTTTTCA-3’
DVGA46 R: 5’ - ACTCACTCCAGTATTCTTGTCTG-3’
6)BM1818 F: 5’ - AGCTGGGAATATAACCAAAGG-3’
BM1818 R: 5’ - AGTGCTTTCAAGGTCCATGC-3’。
2.—種權(quán)利要求1所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在鑒定魯西黃牛和利木贊牛雜交后代利魯牛中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是包括以下步驟: (1)對(duì)目標(biāo)血液或精液進(jìn)行DNA提?。? (2)使用權(quán)利要求1所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)對(duì)步驟(1)中提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增； (3)當(dāng)步驟(2)中的擴(kuò)增產(chǎn)物同時(shí)顯示出魯西黃牛和利木贊牛的譜帶類型時(shí)，為真實(shí)雜種利魯牛。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于步驟(2)中的PCR擴(kuò)增反應(yīng)總體系為20μ L，其中SuperMix 10 μ L，上、下游引物各0.8 yL，模板I μ L ;PCR擴(kuò)增程序:94°C預(yù)變性 3 min;94°C變性 30 s，50_60°C復(fù)性 30 s，72°C延伸 40 s，30 個(gè)循環(huán)；60°C 45 min。
5.一種權(quán)利要求1所述的利魯牛微衛(wèi)星分子標(biāo)記引物對(duì)在利魯牛篩選或輔助育種中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103484457SQ201310437459
【公開(kāi)日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】劉桂芬, 萬(wàn)發(fā)春, 劉曉牧, 游偉, 成海建, 宋恩亮, 王改英 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所