一種提高植物葉綠素含量以及油菜含油量的基因及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高植物葉綠素含量以及油菜含油量的基因及應(yīng)用。該基因是來源于油菜的BnCHS基因，其核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示；其編碼的蛋白質(zhì)的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2所示。通過酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明其編碼蛋白具有長鏈脂酰CoA合成酶活性；通過在油菜作物中的表達(dá)譜分析，顯示其在幼苗中主要在葉中表達(dá)而在成熟植株中則主要在花中等脂合成旺盛的部位表達(dá)；通過基因工程技術(shù)提高BnCHS表達(dá)量發(fā)現(xiàn)提高了煙草以及甘藍(lán)型油菜葉片的葉綠素含量以及酵母和甘藍(lán)型油菜種子油脂含量，并且增加了甘藍(lán)型油菜的生物量。表明BnCHS編碼的蛋白具有提高甘藍(lán)型油菜葉綠素含量、提高甘藍(lán)型油菜種子含油量的功能。
【專利說明】一種提高植物葉綠素含量以及油菜含油量的基因及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物基因工程領(lǐng)域。具體的說，是涉及一種提高甘藍(lán)型油菜葉綠素含量，提高甘藍(lán)型油菜生物量以及油菜種子含油量的基因。采用分子生物學(xué)方法，從油菜中分離克隆出能提高葉片葉綠素含量的基因BnCHS Qrassica napus Chloropyll Synthesis),它編碼一個(gè)脂酰輔酶A合成酶。通過在酵母，煙草以及油菜中過量表達(dá)分析，證明BnCHS的生化功能及參與葉綠素合成及油脂代謝合成的生物學(xué)功能。在油菜中過量表達(dá)能提高油菜的葉綠素含量和種子的含油量。 【背景技術(shù)】
[0002]綠色植物能夠進(jìn)行光能合成作用，就是在可見光的照射下，經(jīng)過光反應(yīng)和暗反應(yīng)，利用葉綠素吸收光能，將二氧化碳(或硫化氫)和水轉(zhuǎn)化為有機(jī)物，并釋放出氧氣(或氫氣)的生化過程。葉片是進(jìn)行光合作用的主要器官，而葉綠體吸收光能則是由葉綠素完成的。光合作用一系列復(fù)雜的代謝反應(yīng)的總和，是植物自身生長所需能量的來源，也是其它以植物為依靠生活的物種有機(jī)物質(zhì)和能量的來源?？梢娙~綠素與生物的生存息息相關(guān)。對于生物界的幾乎所有生物來說，葉綠素吸收光能從而在葉綠體進(jìn)行光合作用是它們賴以生存的關(guān)鍵。目前通過對模式植物的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并鑒定出了參與葉綠素合成過程的所有酶類(Beale等2005)。然而葉綠素的合成過程是一個(gè)復(fù)雜的過程，除了受外部環(huán)境條件以及生長發(fā)育過程影響之外有些基因也對葉綠素的合成過程具有調(diào)控作用。從而影響葉綠素的含量。我們利用基因工程技術(shù)通過對某一基因進(jìn)行調(diào)控從而達(dá)到了增加葉綠素的含量的目的。在研究中我們發(fā)現(xiàn)BnCHS基因，在油菜以及煙草中過量表達(dá)，能提高葉片的葉綠素含量和生物量的積累。另外由于葉綠素含量的提高，增加了光合效率，油菜種子的含油量和對照相比也有提高。目前，人類食用油70%以上是植物油。在我國，食用油需50%以上依賴進(jìn)口，提高植物油的含量具有重要意義。因此BnCHS基因可以作為具有提高油料作物種子含油量的候選基因。由于BnCHS能提高葉綠素含量，增加植物的光合效率，所以其在提高作物產(chǎn)量上也有重要的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種提高油料作物甘藍(lán)型油菜葉綠素含量及含油量的基因 BnCHS。
[0004]一種來源于油菜的基因BnCHS，其核苷酸序列為SEQ ID N0.1所示。
[0005]BnCHS基因編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列為SEQ ID N0.2所示。
[0006]本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述BnCHS基因在提高植物葉綠素含量中的應(yīng)用，以及在提高油料作物含油量中的應(yīng)用。本發(fā)明通過過量表達(dá)該蛋白來達(dá)到提高甘藍(lán)型油菜葉綠素含量及含油量的目的。
[0007]本發(fā)明還公開了帶有BnCHS基因的重組載體pB2WG7.Ο-BnCHS, pK7GW2.0-BnCHS,pYES2-BnCHS。[0008]其中重組載體pYES2-BnCHS是在pYES2的BamHI/Kpnl酶切位點(diǎn)插入基因BnCHS。
[0009]重組載體pB2WG7.0-35S_BnCHS 以及重組載體 pK7GW2.Ο-BnCHS，是以 BnCHS-F (SEQID N0.3)，BnCHS-R (SEQ ID N0.4)為引物擴(kuò)增出目的基因BnCHS，然后將目的基因連接到pEh—TR/D-T()P0? (Invitrogen Corporation),進(jìn)而按照 gateway 試劑盒(Gateway?
LR Clonase?II Enzyme Mix, Invitrogen Corporation)操作將目的基因分別克隆到pB2WG7.0, pK7GW2.0(來自 plant systems biology http://gateway.psb.ugent.be/search)上，得到 pB2WG7.0-35S_BnCHS 以及 pK7GW2.0-BnCHS0
[0010]本發(fā)明還包括含有BnCHS基因的重組載體pB2WG7.0-35S-BnCHS, pK7GW2.0-BnCHS，pYES2-BnCHS轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和宿主菌，以及油菜種子，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0011]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一個(gè)提高植物中葉綠素含量的方法。
[0012]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種提高植物中，特別是植物種子中油脂含量的方法。
[0013]本發(fā)明提供的提高葉綠素含量及植物含油量的方法是將BnCHS導(dǎo)入植物組織活細(xì)胞從而提高葉綠素含量以及植物含油量。
[0014]本發(fā)明還包括將BnCHS導(dǎo)入植物組織活細(xì)胞的方法一農(nóng)桿菌直接浸花法。步驟是:
[0015](I)、在含有相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基的試管中培養(yǎng)含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌GV3101，然后按10%的比例接入含有相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基的三角瓶使農(nóng)桿菌培養(yǎng)液終濃度為0D600約為2.0左右。
[0016](2)、在培養(yǎng)基內(nèi)加入轉(zhuǎn)化緩沖液:
[0017]0.1%Silwet-77
[0018]2ng/L6-BA
[0019]8mg/L乙酰丁香酮
[0020](3)、把油菜的整個(gè)未開的花蕾部分浸泡在農(nóng)桿菌溶液中3_5min，同時(shí)輕輕搖動(dòng)使花蕾充分接觸農(nóng)桿菌液。把浸泡過的花蕾套入羊皮紙袋24h，以保持花蕾具有較高的濕度，避免花蕾在過量的陽光中暴曬，防止農(nóng)桿菌失去活性。
[0021](4)、隔一天重復(fù)步驟(3)，并把整個(gè)花蕾套在羊皮紙袋中48h。
[0022](5)、浸花結(jié)束后，去掉花序上的羊皮紙袋，剪切新生出的側(cè)枝花序以及經(jīng)過浸花的花序其頂端新萌發(fā)的花蕾，并利用彩色絲線對浸染過農(nóng)桿菌的花序進(jìn)行系線標(biāo)記，不同重組質(zhì)粒的構(gòu)建進(jìn)行標(biāo)簽標(biāo)記。
[0023](6)、正常的澆灌培養(yǎng)植株，并定時(shí)剪除新生的側(cè)枝花序以及新生花蕾，直到種子成熟時(shí)停止灌溉。收獲干種子。通過重組質(zhì)粒上攜帶的選擇標(biāo)記進(jìn)行轉(zhuǎn)化子的篩選。通過此方法我們已篩選出大量的轉(zhuǎn)基因植株。
[0024]本發(fā)明從甘藍(lán)型油菜花cDNA中分離出一個(gè)cDNA，命名為BnCHS。序列分析顯示BnCHS屬于AMP-連接蛋白(AMP)超家族。酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證明BnCHS具有LACS活性。RT-PCR分析顯示在幼嫩的葉和花組織中BnCHS高度表達(dá)。將該基因轉(zhuǎn)入煙草中過量表達(dá)，TAG，CoA，脂肪酸含量顯著提高，將該基因轉(zhuǎn)入油菜中，油菜種子含油量顯著提高，并且該基因引起葉綠素含量的提高。這些結(jié)果表明BnCHS具有顯著提高油料作物含油量，并且提聞葉綠素含量的功能。[0025]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0026]1.在分子水平上從cDNA中克隆基因可靠性高、速度快、效率高。
[0027]2.本發(fā)明克隆的BnCHS基因能夠顯著提高甘藍(lán)型油菜含油量，這對闡明BnCHS基因的生物學(xué)功能和在生產(chǎn)中的應(yīng)用有重要意義。
[0028]3.BnCHS的轉(zhuǎn)基因植株顯著提高含油量，這對植物油的生產(chǎn)具有重要應(yīng)用前景。
[0029]4.BnCHS的轉(zhuǎn)基因植株葉綠素含量顯著提高，這對提高植株光合作用的能力從而提聞生物量有重要意義。
[0030]5.含油量遺傳研究對指導(dǎo)育種實(shí)踐、品種改良及品種推廣均具有重要意義，因此發(fā)掘和鑒定提高含油量基因，并深入探討油脂代謝的分子作用機(jī)理，具有重要的理論意義和實(shí)踐應(yīng)用價(jià)值。【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1.BnCHS與其它物種LACS的氨基酸序列比對。
[0032]圖2.BnCHS在煙草中與油菜中的亞細(xì)胞定位。A:煙草葉片BnCHS與GFP融合瞬時(shí)表達(dá)B:葉綠體自發(fā)熒光C:A和B疊加圖；D:油菜子葉BnCHS與GFP融合瞬時(shí)表達(dá)E:葉綠體自發(fā)熒光F:D和E疊加圖
[0033]圖3.BnCHS酵母互補(bǔ)試驗(yàn)和煙草瞬時(shí)表達(dá)分析油脂代謝途徑中各物質(zhì)的含量。A:轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞在含有16:0脂肪酸作為唯一碳源的液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)到對數(shù)期中期(84h)。a:轉(zhuǎn)化pYES2空載體的酵母細(xì)胞；b:轉(zhuǎn)化pYES2-BnCHS的酵母細(xì)胞。B，C:煙草中瞬時(shí)過量表達(dá)BnCHS葉片中CoA含量變化。
[0034]圖4.煙草過量表達(dá)BnCHS顯著提高煙草葉片脂肪酸以及半乳糖脂含量。
[0035]Α,Β:煙草中瞬時(shí)過表達(dá)BnCHS使脂肪酸總量增加。C:煙草瞬時(shí)過表達(dá)BnCHS使葉片中糖脂總量增加
[0036]圖5.BnCHS在煙草中瞬時(shí)過表達(dá)使煙草葉片葉綠素含量提高
[0037]橫坐標(biāo)為葉綠素濃度，縱坐標(biāo)為取樣時(shí)間。分別為轉(zhuǎn)化煙草后第4，5，6，7，8，9天
[0038]圖6.轉(zhuǎn)基因油菜的鑒定以及獲得的轉(zhuǎn)基因植株中BnCHS的表達(dá)量，以及BnCHS在甘藍(lán)型油菜中的表達(dá)譜。Α:轉(zhuǎn)基因油菜植株的鑒定，共鑒定出5棵Β:5棵轉(zhuǎn)基因植株的表達(dá)量C = BnCHS在甘藍(lán)型油菜中的表達(dá)譜，在成熟植株中的不同組織中的表達(dá)量。D:過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因株苗期BnCHS在表達(dá)量提高。
[0039]圖7.BnCHS轉(zhuǎn)基因植株葉片葉綠素含量分析。Α:子葉期；C:子葉期葉綠素含量；B:五葉期葉片；D:五葉期葉綠素含量。轉(zhuǎn)基因植株后代葉綠素含量提高。
[0040]圖8.BnCHS轉(zhuǎn)基因油菜種子含油量以及幼苗鮮重分析。
[0041]A:油菜種子含油量分析B:苗期植株鮮重?？梢娹D(zhuǎn)基因油菜種子含油量明顯提高，植株的生物量增加。
【具體實(shí)施方式】
[0042]實(shí)施例一 =BnCHS基因的克隆以及序列分析
[0043]1.RNA 的提取
[0044]取油菜品系寧油16花組織，利用植物Trizol試劑抽提其總RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA。
[0045]2.目的基因BnCHS的獲得
[0046]以 BnCHS-F:5，-ATGATTCCTTACGCT-3’ (SEQ ID N0.3)
[0047]BnCHS-R:5’-TTAGGAAGCATATAGCTT-3，(SEQ ID N0.4)
[0048]為引物，以cDNA 為模板，利用 LA-Taq 酶(TaKaRa Biotechnology C0.)進(jìn)行 PCR，按照下列條件:94°C 4min，然后 25cycles(94°C 40s, 54°C 40s, 72°C 2min，72°C lOmin)。從瓊脂糖凝膠中回收PCR產(chǎn)物，然后連接PMD18-T載體(TaKaRa Biotechnology C0.)并進(jìn)行測序。含有BnCHS-pMD18-T的大腸桿菌目前保存于江蘇大學(xué)生命科學(xué)研究院。基因BnCHS的序列如SEQ ID N0.1所示。
[0049]3.BnCHS基因序列分析
[0050]BnCHS的氨基酸序列(SEQ ID N0.2)與其他物種LACS包括:Arabidopsisthaliana =AtLACSU AtLACS2、AtLACS3、AtLACS4、AtLACS5、AtLACS6、AtLACS7、AtLACS8、AtLACS9 ；Saccharomyces cerevisiae:ScFAAK ScFAA2> ScFAA3 ；Brassica napus:BnLACSI和BnLACS2氨基酸序列分析，發(fā)現(xiàn)BnCHS具有LACS家族共有的三個(gè)基序(圖1.A)，是LACS家族的成員。BnCHS與其他物種LACS氨基酸序列親緣關(guān)系分析發(fā)現(xiàn)，BnCHS與擬南芥LACS基因AtLACS9親緣關(guān)系最近(圖1.B)。
[0051]實(shí)施例二: BnCHS的功能分析
[0052]1.BnCHS定位載體的構(gòu)建
[0053]為了在煙草以及油菜中研究BnCHS的亞細(xì)胞定位，我們將獲得的目的基因首先克隆到pENTR (Invitrogene公司)，然后利用gateway技術(shù)，將目的基因克隆到定位載體pK7WG2.0 (Plant systems biology)上，得到與GFP串聯(lián)融合表達(dá)的定位載體pK7WG2.0-BnCHS-GFP。
[0054]2.煙草，油菜子葉中BnCHS的亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
[0055]將構(gòu)建的定位載體轉(zhuǎn)入煙草及油菜子葉瞬時(shí)表達(dá)，轉(zhuǎn)化的方法采用微型注射器注射，轉(zhuǎn)化第7天時(shí)采取葉片在熒光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)在油菜與煙草葉片中BnCHS均定位在葉綠體上(圖2)。葉綠體是光合作用和脂代謝合成重要的細(xì)胞器。
[0056]3.酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
[0057]為了在酵母中表達(dá)，設(shè)計(jì)一對引物BnCHS-Fl和BnCHS-Rl WcDNA中擴(kuò)增BnCHS，如下
[0058]BnCHS-Fl: 5，-ggatccATGATTCCTTACGCT-3’ (BamHI) (SEQ ID N0.5)
[0059]BnCHS-Rl:5’-ggtaccTTAGGAAGCATATAGCTTG-3’ (KpnI)(SEQ ID N0.6)
[0060]利用LA-Taq 酶(TaKaRa Biotechnology C0.)進(jìn)行 PCR。從瓊脂糖凝膠中回收PCR產(chǎn)物，然后連接pMD18_T載體(TaKaRa Biotechnology C0.)。將測序以后的陽性克隆利用BamHI/Kpnl酶切，同時(shí)用BamHI/Kpnl酶切酵母表達(dá)載體pYES2 (InvitrogenCorporation)，將BnCHS克隆到酵母表達(dá)載體pYES2的相應(yīng)位點(diǎn)，得到pYES2_BnCHS。
[0061]4.酵母互補(bǔ)試驗(yàn)
[0062]為了確定BnCHS是否具備LACS活性，采用了酵母互補(bǔ)表達(dá)體系。把BnCHS克隆到酵母表達(dá)載體PYES2中，再轉(zhuǎn)化缺乏LACS活性的酵母(S.cerevisiae)菌株YB525 (購自ATCC http://www.atcc.0rg/)中來驗(yàn)證BnCHS是否具有補(bǔ)救缺陷型的能力。以pYES2空載體轉(zhuǎn)化酵母YB525作為負(fù)對照。轉(zhuǎn)化子培養(yǎng)在含有18:0脂肪酸作為唯一碳源的缺省尿嘧啶液體培養(yǎng)基(去氨基酸的酵母培養(yǎng)用酵母氮堿(0.67%)，省卻尿嘧啶混合物(0.077%))中，30°C培養(yǎng)84h至對數(shù)期中期。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)化pYES2-BnCHS的轉(zhuǎn)化子能夠正常生長(圖3A.b)，轉(zhuǎn)化pYES2空載體的酵母細(xì)胞不能生長(圖3A.a)，說明BnCHS能夠互補(bǔ)LACS酵母缺陷型具有LACS活性。
[0063]5.煙草，油菜表達(dá)載體的構(gòu)建
[0064]利用I所述的方法將BnCHS克隆到表達(dá)載體pB2GW7.0，得到具有BnCHS的植株表達(dá)載體 pB2GW7.0-BnCHS。
[0065]6.煙草中BnCHS的功能分析
[0066]將PB2GW7.0-BnCHS轉(zhuǎn)入煙草中，轉(zhuǎn)化7天時(shí)取葉片。用液相色譜分析參與油脂合成的CoA，脂的含量，用氣相色譜分析脂肪酸的含量。結(jié)果表明轉(zhuǎn)入BnCHS的植株葉片CoA，脂肪酸，以及半乳糖脂含量均增加(圖3.B，C;圖4.A, B, C)。說明BnCHS能夠提高植物的含油量。取注射PB2GW7.0-BnCHS后4，5，6，7，8，9天煙草葉片分析葉綠素含量，取0.2g葉片定容至5ml，發(fā)現(xiàn)從第七天開始注射pB2GW7.0-BnCHS的煙草葉片與只注射空載體的煙草葉片相比葉綠素含量增加(圖5)，說明BnCHS能提高葉綠素的含量。
[0067]實(shí)施例三:BnCHS在油菜的表達(dá)分析
[0068]1.轉(zhuǎn)基因油菜的獲得
[0069]將pB2GW7.0-BnCHS轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101，浸染油菜花三次，每次五分鐘。收獲的種子出苗以后先用除草劑進(jìn)行篩選，進(jìn)而選取抗除草劑的植株，提取其基因組，用PCR進(jìn)行篩選，鑒定引物如下:
[0070]pw35s5，-TAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAG-3，(SEQ ID N0.7)
[0071]BnCHS2R5’-CCTAAAGACGAGTAGATAGTAACCAC-3’ (SEQ ID N0.8)
[0072]得到5個(gè)轉(zhuǎn)基因植株(圖6.A)。
[0073]2.轉(zhuǎn)基因油菜植株BnCHS表達(dá)量分析
[0074]為了確定BnCHS在油菜中的生物學(xué)功能，在油菜中對BnCHS進(jìn)行QRT-PCR表達(dá)分析。
[0075]利用引物BnCHSQRT F (5 ’-ATTGGGCACAAGTCTGAGGA-3 ’，SEQ ID N0.9)和BnCHSQRT (5’-TGTAACCTCTGTCTCATTAAGCG-3’，SEQ ID N0.10),根據(jù) BnActin 序列設(shè)計(jì)特異性引物 BnActin F (5，-ATGGCCGATGGTGAGGACATTC-3，，SEQ ID N0.11)和 BnActin R(5，-GGTGCGACCACCTTGATCTT C_3’，SEQ ID N0.12)，送上海生工合成。按照下列程序:95°C預(yù)變性30S，然后經(jīng)40個(gè)循環(huán)(95°C 10s、57°C 10s、72°C 26s)。同樣的cDNA也作為模板，使用Actin F和Actin R作為引物，擴(kuò)增Actin作為內(nèi)參。研究發(fā)現(xiàn)在獲得的轉(zhuǎn)基因植株中BnCHS的表達(dá)量均提高(圖6.B)。
[0076]3.BnCHS在油菜中的表達(dá)譜
[0077]利用2中引物對油菜不同組織中BnCHS表達(dá)量進(jìn)行實(shí)時(shí)定量(圖6.C)分析發(fā)現(xiàn)，BnCHS在植株幼苗中王要在葉片表達(dá)，而在成熟植株的根和葉中的表達(dá)量很低，而在花和中的表達(dá)量相對較高(圖6.C)?；ㄊ怯椭罅亢铣傻慕M織，在花中BnCHS的大量表達(dá)說明BnCHS可能參與油脂的合成代謝。
[0078]實(shí)施例四:過表達(dá)BnCHS的轉(zhuǎn)基因油菜葉綠素含量以及種子含油量分析。[0079]1.轉(zhuǎn)基因油菜葉綠素含量分析
[0080]將收獲的Tl代種子種植在恒溫培養(yǎng)箱中，白天光照5000，濕度60%，溫度25度，12h。夜晚光照0，濕度60%，溫度22度，12個(gè)小時(shí)，如此輪回。第7天時(shí)用轉(zhuǎn)基因植株鑒定PCR引物進(jìn)行鑒定。在第10天，20天時(shí)取葉片分析葉綠素含量發(fā)現(xiàn)。轉(zhuǎn)基因油菜葉綠素含量比非轉(zhuǎn)基因植株明顯提高(圖7.A，B, C，D)。[0081]2.轉(zhuǎn)基因油菜T2代種子含油量分析以及植株鮮重分析
[0082]收取5個(gè)系的T2代種子，用核磁共振的方法測種子的含油量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)5個(gè)轉(zhuǎn)基因系種子的含油量均明顯提高。其Linel2與對照相比含油量高了 15.34%。證明BnCHS參與油菜油脂的合成，能夠提高植物的含油量(圖8.A)。并且我們測了轉(zhuǎn)基因植株第9，16，23，30, 37天的植株鮮重，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株的植株鮮重要比非轉(zhuǎn)基因植株重(圖8.B)，我們推測因?yàn)槿~綠素含量增加，增加了光合速率從而增加了植株的生物量。
[0083]以上證明BnCHS參與油脂代謝，并能提高植物葉綠素含量以及提高植物含油量。
【權(quán)利要求】
1.一種來源于油菜的基因及?CK?，其核苷酸序列為SEQ ID N0.1所示。
2.一種由權(quán)利要求1所述基因編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列為SEQ ID N0.2所示。
3.權(quán)利要求1所述基因在提高植物葉綠素含量中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的基因在提高油料作物含油量中的應(yīng)用。
5.一種提高植物中葉綠素含量及植物含油量的方法，是將BnCHS導(dǎo)入植物組織活細(xì)胞從而提高葉綠素含量以及植物含油量。
6.一種酵母表達(dá)載體pYES2-BnCHS，其特征在于，是在酵母表達(dá)載體pYES2的BamHI/KpnI酶切位點(diǎn)插入權(quán)利要求1所述基因
7.含有權(quán)利要求1所述基因BnCHS的植物表達(dá)載體pB2WG7.0-35S_BnCHS以及植物定位載體 PK7GW2.0-BnCHS0
8.含有權(quán)利要求1所述BnCHS基因的重組載體pB2WG7.0-35S_BnCHS、pK7GW2.0-BnCHS或pYES2-BnCHS的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和宿主菌，以及油菜種子。
【文檔編號(hào)】C12N1/21GK103540602SQ201310470056
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月10日
【發(fā)明者】譚小力, 鄭香峰, 王政, 張志燕, 顧守來, 陳克平 申請人:江蘇大學(xué)