核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用試劑盒以及核酸提取用裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明提供新的核酸提取用器具及使用其的核酸提取方法。本發(fā)明的核酸提取器具具備管，所述管在其內(nèi)部依次具備：由第1油構成的第1管芯、由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第1清洗液構成的第2管芯、由第2油構成的第3管芯、由與油相分離的用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯、由第3油構成的第5管芯、由與油相分離的用于使上述核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體溶出的溶出液構成的第6管芯、由第4油構成的第7管芯。
【專利說明】核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用試劑盒以及核酸提取用裝置
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用試劑盒以及核酸提取用裝置。
【背景技術】
[0002]由Boom等報告了使用二氧化硅粒子等核酸結(jié)合性固相載體和促溶劑，從生物體材料中更簡便地提取核酸的方法(參照非專利文獻I)。包括該Boom等的方法，使用二氧化硅等核酸結(jié)合性固相載體和促溶劑使核酸吸附于載體并進行提取的方法主要由以下3個工序構成，即，(1)在促溶劑存在下，使核酸吸附于核酸結(jié)合性固相體的工序(吸附工序)、
[2]為了除去非特異性結(jié)合的夾雜物以及促溶劑，用清洗液清洗吸附有核酸的載體的工序(清洗工序)、以及(3)用水或者低鹽濃度緩沖液使核酸從載體中溶出的工序(溶出工序)。
[0003]現(xiàn)有技術文獻
[0004]非專利文獻
[0005]非專利文獻I J.Clin.Microbiol.，vol.28Νο.3，p.495-503 (1990)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供新的核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用試劑盒以及核酸提取用裝置。
[0007]本發(fā)明的一個實施方式的核酸提取用器具，其具備管，所述管在其內(nèi)部依次具備由第I油構成的第I管芯(7° 9々'')、由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第I清洗液構成的第2管芯、由第2油構成的第3管芯、由與油相分離的用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯、由第3油構成的第5管芯、由與油相分離的用于使上述核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體中溶出的溶出液構成的第6管芯、和由第4油構成的第7管芯。上述管還可以在第5管芯與第6管芯之間，從第5管芯側(cè)依次具備由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第2清洗液構成的清洗液構成的第10管芯、以及由油構成的第11管芯。上述溶出液可以含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。上述管的第7管芯側(cè)的端部是開放的開放端，可具有密封上述開放端的能夠裝卸的栓。也可以具備用于向上述管導入上述核酸結(jié)合性固相載體的罐。上述罐和上述管可裝卸。上述罐可以具有用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
[0008]本發(fā)明的又一實施方式的核酸提取方法，包括以下工序，即，將在罐中含有上述溶解液的核酸提取用器具以上述管的縱向與重力方向平行的方式進行設置的工序，將用于提取RNA的試樣投入上述罐中的工序，對上述管從第I管芯向第4管芯的方向施加磁場，使上述磁性體從上述罐內(nèi)移動至第4管芯的工序，在上述第4管芯的上述逆轉(zhuǎn)錄反應液中對上述RNA進行逆轉(zhuǎn)錄而合成cDNA的工序，在上述第6管芯的上述溶出液中使上述cDNA從上述核酸結(jié)合性固相載體中游離的工序。[0009]本發(fā)明的另一實施方式的核酸提取用試劑盒，具有上述任一項記載的核酸提取用器具、具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體、和用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
[0010]本發(fā)明的另一實施方式的核酸提取用裝置，具備具有管的核酸提取用器具和用于對上述管施加磁場的磁場施加器具，所述管在其內(nèi)部依次具備:由第I油構成的第I管芯、由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第I清洗液構成的第2管芯、由第2油構成的第3管芯、由與油相分離的用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯、由第3油構成的第5管芯、由與油相分離的用于使上述核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體中溶出的溶出液構成的第6管芯、由第4油構成的第7管芯。還可以具備用于沿上述管的縱向使上述管與上述磁場施加器具的位置關系相對變化的磁場施加器具移動裝置或者核酸提取用器具移動裝置。還可以具備設置在加熱上述管的第4管芯和/或第6管芯的位置的加熱裝置。上述管可以在第5管芯與第6管芯之間從第5管芯側(cè)依次具備:由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第2清洗液構成的第10管芯，以及由油構成的第11管芯。上述溶出液可以含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。上述管的第7管芯側(cè)的端部是開放的開放端，可以具有密封上述開放端的能夠裝卸的栓。還可以具備用于向上述管導入上述核酸結(jié)合性固相載體的罐。上述罐可以具有用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
[0011]根據(jù)本發(fā)明，能夠提供新的核酸提取用器具、使用其的核酸提取方法、核酸提取用試劑盒以及核酸提取用裝置。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1是本發(fā)明的一個實施例的核酸提取用器具的構成的示意圖。
[0013]圖2是本發(fā)明的一個實施例的核酸提取用器具的構成的示意圖。
[0014]圖3是本發(fā)明的一個實施例的核酸提取用裝置的構成的示意圖。
[0015]圖4是表示本發(fā)明的一個實施例的核酸提取方法中矩形磁鐵的使用方法的圖。
[0016]圖5是表示在本發(fā)明的一個實施例中，對于I步溶出用毛細管(Ι-step)和2步溶出毛細管(2-step),比較使用各自得到的含有核酸的溶出液而進行PCR時的檢測靈敏度的經(jīng)時變化的圖。
[0017]圖6是表示在本發(fā)明的一個實施例中，對于I步溶出用毛細管(Ι-step)和2步溶出毛細管(2-step),比較使用各自得到的含有核酸的溶出液而進行PCR時的檢測靈敏度的圖。
[0018]圖7是表示在本發(fā)明的一個實施例的2步溶出毛細管(2-step)中，在逆轉(zhuǎn)錄反應液管芯后，對于不進一步設置由清洗液構成的管芯和設置管芯的情況而言，比較使用各自得到的含有核酸的溶出液而進行PCR時的檢測靈敏度的圖。
【具體實施方式】
[0019]實施方式及實施例沒有特別說明的情況下，使用M.R.Green&J.Sambrook(Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (4th edition)，Cold Spring HarborPress, Cold Spring Harbor, New York (2012) ;F.M.Ausubelj R.Brent, R.E.Kingston, D.D.Moore, J.G.Seidmanj J.A.Smith, K.Struhl (Ed.)，Current Protocols in MolecularBiology, John ffiley&Sons Ltd.等標準的方案集中記載的方法,或者使用對其進行修飾或改變的方法。另外，使用市售的試劑盒、測定裝置時，沒有特別說明的情況下，可使用隨其添附的方案。
[0020]應予說明，根據(jù)本說明書的記載，本領域技術人員可明確本發(fā)明的目的、特征、優(yōu)點以及其想法，本領域技術人員可根據(jù)本說明書的記載容易地再現(xiàn)本發(fā)明。以下記載的發(fā)明的實施方式以及具體的實施例等顯示本發(fā)明優(yōu)選的實施方式，為了例示或者說明而示出，本發(fā)明并不限定于此。對于本領域技術人員而言可知在本說明書中公開的本發(fā)明的意圖和范圍內(nèi)，根據(jù)本說明書的記載，可進行各種改變和修飾。
[0021]核酸提取用器具
[0022]( I)罐
[0023]本發(fā)明的核酸提取用器具具備用于向單個或者多個管導入核酸結(jié)合性固相載體的罐。
[0024]罐可在內(nèi)部收容液體且具有從外部向內(nèi)部導入物質(zhì)的開口。罐中的開口的位置沒有特別限定，可以具有多個開口。開口可以具有能夠裝卸的蓋。
[0025]罐的內(nèi)容積沒有特別限定，例如可設為0.1mL~100mL。罐的材質(zhì)沒有特別限定，例如，可為玻璃、塑料等樹脂、金屬等。特別是如果選擇透明的玻璃、樹脂來作為罐的材質(zhì)，則能夠從罐的外部觀察內(nèi)部，因而更優(yōu)選。應予說明，罐和各管可以一體成形，也可以可裝卸地構成。罐的材質(zhì)如果利用橡膠、彈性體、高分子等具有柔軟性的材料，則通過在對罐安裝蓋的狀態(tài)下使罐變形，從而能夠?qū)薜膬?nèi)部加壓。由此，能夠從管的內(nèi)部向外部，從管的前端側(cè)擠出管的內(nèi)容物。
[0026]另外，罐優(yōu)選具有用于溶解提取核酸的試樣的溶解液，能夠與管一起振蕩，能夠充分攪拌罐內(nèi)的液體。
[0027]溶解液只要含有促溶物質(zhì)就沒有特別限定，出于破壞細胞膜或使細胞中所含的蛋白質(zhì)變性的目的， 可以含有表面活性劑。作為該表面活性劑，一般只要能夠用于從細胞等提取核酸就沒有特別限定，具體而言，可舉出Triton-X等Triton系表面活性劑、Tween20等Tween系表面活性劑這種非離子性表面活性劑，N-月桂酰肌氨酸鈉(SDS)等陰離子性表面活性劑。特別優(yōu)選使非離子性表面活性劑成為0.1~2%的范圍而使用。進而，溶解液中優(yōu)選含有2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇等還原劑。溶解液也可以是緩沖液，但優(yōu)選是pH6~8的中性溶液。考慮這些因素，具體而言，優(yōu)選含有3~7M的胍鹽、O~5%的非離子性表面活性劑、O~0.2mM的EDTA、0~0.2M的還原劑等。
[0028]促溶物質(zhì)只要是在水溶液中生成促溶離子(離子半徑大的I價的陰離子)，具有增加疏水性分子的水溶性的作用，有助于核酸對固相載體的吸附的物質(zhì)就沒有特別限定。具體而言，可舉出硫氰酸胍、鹽酸胍、碘化鈉、碘化鉀、高氯酸鈉等，其中，優(yōu)選蛋白質(zhì)變質(zhì)作用強的硫氰酸胍或鹽酸胍。這些促溶物質(zhì)的使用濃度根據(jù)各物質(zhì)而異，例如使用硫氰酸胍時，優(yōu)選在3~5.5M的范圍使用，使用鹽酸胍時，優(yōu)選以5M以上使用。
[0029]以與重力的方向平行的方式設置管時，以使罐位于管的上方的方式構成。在罐中加入試樣并進行振蕩，再次以與重力的方向平行的方式設置管。在罐內(nèi)，除溶解液以外，優(yōu)選預留空間。由此，僅通過顛倒或輕微振蕩該核酸提取用器具，能夠容易地混合罐內(nèi)的液體。[0030]對于管為多個的情形，以與重力的方向平行地設置管時，全部以相同的高度平行并排地構成。罐具備用于將含有核酸結(jié)合性固相載體的液體分配到各管的液體分配部，如果將含有核酸結(jié)合性固相載體的液體加入罐中，則液體與核酸結(jié)合性固相載體一起在液體分配部分配，核酸結(jié)合性固相載體以經(jīng)由液體加入到各管的方式構成。液體分配部可以具有隔開與各管連通的空間的隔壁。通過該隔壁，能夠每根管地劃分與各管連接的罐的底面。而且，如果底面在與重力方向垂直的方向擴展，隔壁與底面垂直，則與各管連接的底面的面積的比與分配到各管的核酸結(jié)合性固相載體的比一致。例如，如果與各管連接的底面的面積相等，則分配到各管的核酸結(jié)合性固相載體也相等地分配。在罐中加入試樣并進行振蕩，并再次以與重力方向平行地設置管時，在該設置狀態(tài)下，能夠使罐內(nèi)的液體高于隔壁。由此，液體能夠均等地流入多個管中。
[0031]核酸結(jié)合性固相載體只要是在促溶離子的存在下吸附核酸、即可通過可逆的物理結(jié)合進行保持的具有親水性表面的固體，就沒有特別限定。具體而言，優(yōu)選含有二氧化硅的物質(zhì)，例如二氧化硅、玻璃、硅藻土或利用化學修飾對它們實施表面處理而得的物質(zhì)，更優(yōu)選與磁性體、超常磁性金屬氧化物等的復合體。利用化學修飾實施表面處理時，可以以不妨礙與核酸可逆的結(jié)合的程度而帶有適度的正電荷。
[0032]另外，作為這些核酸結(jié)合性固相的形態(tài)，可具體舉出塊、粒子、粉體等，沒有特別限定。其中，如果考慮吸附和溶出的效率，則更優(yōu)選粒子的形態(tài)。此時的粒徑?jīng)]有特別限定，可以是0.05~500 μ m，優(yōu)選為I~100 μ m，特別優(yōu)選為I~10 μ m。
[0033]核酸結(jié)合性固相載體優(yōu)選密度大于溶解液的密度。例如，溶解液的密度為1.1~1.2g / mL時,核酸結(jié)合性固相載體的密度為1.5~2.0g / mL等即可。
[0034](2)管
[0035]本發(fā)明的核酸提取用器具具備管，所述管在其內(nèi)部依次具備:由第I油構成的第I管芯、由與油相分離的用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第I清洗液構成的第2管芯、由第2油構成的第3管芯、由與油相分離的用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯、由第3油構成的第5管芯、由與油相分離的用于將核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體中溶出的溶出液構成的第6管芯以及由第4油構成的第7管芯。應予說明，可以具備多個管。對于管為多個的情形，只要相互平行地配置，則整體可以在直線上配置，也可以成環(huán)狀地配置。直線上配置，容易將多個管整體同時地控制，但環(huán)狀的配置能夠使器具整體小型化。這里，管芯是指在管內(nèi)一種液體占據(jù)一區(qū)域時的液體。
[0036]管在內(nèi)部具有空洞，具有使液體能夠沿縱向流通的筒狀的形狀，可以稱為毛細管。管可以沿縱向彎曲，但優(yōu)選為直線狀。管的內(nèi)部的空洞只要將液體在管內(nèi)維持管芯的形狀，則其大小、形狀均沒有特別限定。另外，管內(nèi)的空洞的大小、與縱向垂直的截面的形狀優(yōu)選沿管的縱向為恒定，但也可以發(fā)生變化。
[0037]與管的外形的縱向垂直的截面的形狀也沒有限定，優(yōu)選為圓形，或近似于圓的橢圓。管的壁厚(從內(nèi)部的空洞的側(cè)面到外部的表面的長度)也沒有特別限定，優(yōu)選是均勻的壁厚。管為圓筒狀時，其內(nèi)徑(與內(nèi)部的空洞的縱向垂直的截面的圓的直徑)例如可以為0.5mm~3mm。如果管的內(nèi)徑為該范圍，則對于管的材質(zhì)、液體的種類,容易在廣泛的范圍形成液體的管芯。
[0038]管的材質(zhì)沒有特別限定，例如可以為玻璃、塑料等樹脂，金屬等。特別是如果選擇透明的玻璃或樹脂作為管的材質(zhì)，則能夠從管的外部觀察空洞內(nèi)，因而更優(yōu)選。另外，管的材質(zhì)如果選擇透過磁場的物質(zhì)或非磁性體，則使磁性粒子通過管等時，通過從管的外部給予磁場從而能夠容易地進行磁性粒子通過管，因而優(yōu)選。應予說明，管的材質(zhì)可以與罐的材質(zhì)相同。
[0039]管的第7管芯側(cè)的端部可以是開放的開放端，優(yōu)選進一步具有密封開放端的能夠裝卸的栓。栓例如可由橡膠、彈性體、樹脂等制成。栓能夠裝卸，其機構沒有特別限定。例如，可以栓的一部分插入管部的內(nèi)部而固定，也可以栓為帽狀。
[0040]在管芯中或管芯間，優(yōu)選沒有氣泡或其它液體，但只要能夠使核酸結(jié)合性固相載體通過管芯，也可以存在氣泡或其它液體。
[0041]由油構成的管芯具有抑制其兩側(cè)的水溶性的管芯相互混合的功能。
[0042]油通過形成更高粘度的油，從而在與上側(cè)的管芯的界面，使核酸結(jié)合性固相載體移動時，能夠提高油所致的“擦拭效果”。由此，使核酸結(jié)合性固相載體從上游側(cè)的管芯移動至由油構成的管芯時，能夠使附著于核酸結(jié)合性固相載體的水溶性的成分更難以帶到油內(nèi)。
[0043]相對于管的縱向的由油構成的管芯的長度只要是能夠形成管芯的范圍，均沒有特別限定，具體而言可以為1mm~50mm，為了不使核酸結(jié)合性固相載體的移動距離過大，優(yōu)選為1_~30mm,進一步優(yōu)選為5_~20mm。
[0044]第2管芯配置在管內(nèi)的第I管芯與第3管芯之間的位置，由第I清洗液構成。
[0045]第I清洗液是不與構成第I管芯的油以及構成第3管芯的油的任一種混合的液體。第I清洗液只要是實質(zhì)上不含有乙醇、異丙醇等有機溶劑和促溶物質(zhì)的溶液就沒有特是限定，但優(yōu)選為水或 低鹽濃度水溶液，為低鹽濃度水溶液時，優(yōu)選為緩沖液。低鹽濃度水溶液的鹽濃度優(yōu)選為IOOmM以下，更優(yōu)選為50mM以下，最優(yōu)選為15mM以下。另外，低鹽濃度水溶液的下限沒有特別限制，但優(yōu)選為0.1mM以上，進一步優(yōu)選為ImM以上，最優(yōu)選為IOmM以上。另外，該溶液可以含有TritoruTweeruSDS等表面活性劑，pH沒有特別限定。用于形成緩沖液的鹽沒有特別限定，可優(yōu)選使用Tris、HEPES, PIPES、磷酸等的鹽。
[0046]第2管芯的體積沒有特別限定，可將核酸結(jié)合性固相載體的量等作為指標進行適當?shù)卦O定。例如，核酸結(jié)合性固相載體的體積為0.5μ L時，第2管芯的體積如果為10 μ L以上則充分，優(yōu)選設為20 μ L~50 μ L，進一步優(yōu)選為20 μ L~30 μ L。如果第2管芯的體積為該范圍，則核酸結(jié)合性固相載體的體積為0.5μ L時，能夠充分進行核酸結(jié)合性固相載體的清洗。應予說明，對于核酸結(jié)合性固相載體的清洗，優(yōu)選第2管芯的體積更大，但考慮管的長度及粗細、依賴于其的第2管芯的管的縱向的長度等進行適當?shù)卦O定。
[0047]第2管芯可以被油的管芯分割而由任意個數(shù)的多個管芯構成。第2管芯由多個管芯構成時，各管芯的液體可以相同也可以不同。其中，只要至少一個是第I清洗液的管芯，則其它管芯的液體沒有特別限定，優(yōu)選全部的管芯為第I清洗液。分割第2管芯的個數(shù)，例如，可考慮管的長度、清洗的對象等進行適當?shù)卦O定。
[0048]第4管芯設置在管內(nèi)的第3管芯與第5管芯之間的位置，由逆轉(zhuǎn)錄反應液構成。
[0049]逆轉(zhuǎn)錄反應液含有逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP以及逆轉(zhuǎn)錄酶用引物(寡聚核苷酸)。溶劑優(yōu)選為水，逆轉(zhuǎn)錄反應液優(yōu)選實質(zhì)上不含有乙醇、異丙醇等有機溶劑和促溶物質(zhì)的溶液。另外，為了形成逆轉(zhuǎn)錄酶用緩沖液，優(yōu)選含有鹽。緩沖液含有的鹽，只要不阻礙酶反應，就沒有特別限定，可優(yōu)選使用Tris、HEPES, PIPES、磷酸等的鹽。逆轉(zhuǎn)錄酶沒有特別限定，例如可使用來自禽成髓細胞瘤病毒(Avian Myeloblast Virus)、Ras相關病毒2型(Ras AssociatedVirus2型)、莫洛尼小鼠白血病病毒(Mouse Molony Murine Leukemia Virus)、人類免疫缺陷病毒I型(Human Immunodefficiency Virusl型)的逆轉(zhuǎn)錄酶等,但優(yōu)選耐熱性的酶。逆轉(zhuǎn)錄反應液所含的dNTP、鹽的濃度是適于使用的逆轉(zhuǎn)錄酶的濃度即可，通常，使dNTP為10~1000 μ Μ,優(yōu)選為100~500 μ Μ,使Mg2 +為I~IOOmM,優(yōu)選為5~10mM，使Cr為I~2000mM，優(yōu)選為200~700mM即可，總離子濃度沒有特別限定，可以為高于50mM的濃度，優(yōu)選為高于IOOmM的濃度，更優(yōu)選為高于120mM的濃度，進一步優(yōu)選為高于150mM的濃度，進一步優(yōu)選為高于200mM的濃度。上限優(yōu)選為500mM以下，更優(yōu)選為300mM以下，進一步優(yōu)選為200mM以下。引物用寡聚核苷酸各自為0.1~10 μΜ，優(yōu)選使用0.1~ΙμΜ。作為載體，可以含有BSA或者明膠等，其濃度如果為Img / mL以下，則反應阻礙防止效果少，為IOmg /mL以上，則由于能夠阻礙逆轉(zhuǎn)錄反應或其后的酶反應，所以優(yōu)選為I~IOmg / mL。使用明膠時，其來源可例示牛皮、豬皮、牛骨，沒有特別限定。明膠難以溶解時，可通過加溫溶解。
[0050]第4管芯的體積沒有特別限定，可將吸附了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的量等作為指標進行適當?shù)卦O定。例如，核酸結(jié)合性固相載體的體積為0.5μ L時，第4管芯的體積為0.5 μ L以上則充分，優(yōu)選設為0.8 μ L~5 μ L，進一步優(yōu)選設為IyL~3yL。第4管芯的體積如果為這些范圍，則例如核酸結(jié)合性固相載體的體積即使為0.5 μ L，也能夠充分進行逆轉(zhuǎn)錄反應。
[0051]第6管芯設置在管內(nèi)的第5管芯與第7管芯之間的位置，由溶出液構成。
[0052]溶出液是指將吸附于核酸結(jié)合性固相載體的核酸從載體溶出到液體中的液體。溶出液也沒有特別限定，但優(yōu)選水或低鹽濃度水溶液，更優(yōu)選實質(zhì)上不含有乙醇、異丙醇等有機溶劑和促溶物質(zhì)。為低鹽濃度水溶液時，優(yōu)選為緩沖液。低鹽濃度水溶液的鹽濃度優(yōu)選為IOOmM以下，更優(yōu)選為50mM以下，最優(yōu)選為15mM以下。低鹽濃度水溶液的下限沒有特別限定，優(yōu)選為0.1mM以上，進一步優(yōu)選為ImM以上，最優(yōu)選為IOmM以上。用于形成緩沖液的鹽沒有特別限定，優(yōu)選使用Tris、HEPES, PIPES、磷酸等的鹽，最優(yōu)選為TE (IOmMTris鹽酸緩沖液，ImM EDTA，pH8.0 )。應予說明，第I清洗液和溶出液可以相同也可以不同。
[0053]溶出液還可以含有DNA聚合酶以及DNA聚合酶用引物(寡聚核苷酸)，也可以含有TaqMan探針、Molecular Beacon、循環(huán)探針等實時PCR用探針、SYBR綠等嵌入劑用突光色素。DNA聚合酶也沒有特別限定，優(yōu)選耐熱性的酶、PCR用酶，例如有Taq聚合酶、Tfi聚合酶、Tth聚合酶、或者它們的改進型等大量的市售品。進而，作為反應阻礙防止劑，優(yōu)選含有BSA (牛血清白蛋白)或者明膠。
[0054]溶出液所含的dNTP、鹽的濃度為適于使用的DNA聚合酶的濃度即可，通常使dNTP為10~1000 μ Μ,優(yōu)選為100~500 μ Μ，使Mg2 +為I~IOOmM,優(yōu)選為5~10mM，使Cr為I~2000mM，優(yōu)選為200~700mM即可，總離子濃度沒有特別限定，但可以為高于50mM的濃度，優(yōu)選為高于IOOmM的濃度，更優(yōu)選為高于120mM的濃度，進一步優(yōu)選為高于150mM的濃度，進一步優(yōu)選為高于200mM的濃度。上限優(yōu)選為500mM以下，更優(yōu)選為300mM以下，進一步優(yōu)選為200mM以下。引物用寡聚核苷酸各自可使用0.1~10 μ M,優(yōu)選使用0.1~I μ Μ。作為載體，可以含有BSA或者明膠等，其濃度如果為Img / mL以下，則反應阻礙防止效果少，為IOmg / mL以上時，則能夠阻礙聚合反應、其后的酶反應，所以優(yōu)選為I~IOmg / mL。使用明膠時，其來源可例示牛皮、豬皮、牛骨，沒有特別限定。明膠難以溶解時，可以通過加溫溶解。
[0055]第6管芯的體積沒有特別限定，可將吸附了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的量等作為指標進行適當?shù)卦O定。例如，核酸結(jié)合性固相載體的體積為0.5μ L時，第6管芯的體積如果為0.5 μ L以上則充分，優(yōu)選為0.8 μ L~5 μ L，進一步優(yōu)選為IyL~3yL。第6管芯的體積如果為這些范圍，則例如，即使核酸結(jié)合性固相載體的體積為0.5 μ L，也能夠充分進行逆轉(zhuǎn)錄反應。
[0056]溶出液含有DNA聚合酶和DNA聚合酶用引物時，可以將溶出后的溶出液直接用于DNA聚合酶反應。此時，可以在管內(nèi)進行反應，但可以從管向外排出溶出液，移至新的DNA聚合酶反應用容器進行反應。在管外進行DNA聚合酶反應時，可以使用溶出液的部分或者全部，使用部分時，優(yōu)選以用于調(diào)節(jié)DNA聚合酶用的緩沖液進行稀釋。用于調(diào)節(jié)DNA聚合酶用的緩沖液可以使用與溶出液相同的成分的溶液，但優(yōu)選可適當調(diào)節(jié)鹽濃度，DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物可以分別添加或不添加。
[0057]該核酸提取用器具，除第I~第7管芯以外，可以根據(jù)需要，在任意位置設置管芯。如果考慮由油構成的管芯抑制其兩側(cè)的水溶性的管芯相互混合，則優(yōu)選由油構成的管芯和水溶性的管芯交替配置，追加水溶性的管芯時，在與相鄰的水溶性的管芯之間設置由油構成的管芯即可。
[0058]例如，在第3管芯和第4管芯之間可以從第3管芯側(cè)依次具有由不與油混和的第2清洗液構成的第8管芯、以及由油構成的第9管芯。此時，第2清洗液是不與構成第3管芯的油以及構成第9管芯的油的任一種混和的液體。第2清洗液可以是與第I清洗液相同的組成，也可以是不同組成，第8管芯的基本的構成的選擇方法基于第2管芯。
[0059]這樣， 在逆轉(zhuǎn)錄反應液管芯前，設置多個由清洗液構成的管芯時，可以在上游側(cè)的清洗液中含有促溶劑。例如，如果在第2管芯的第I清洗液中含有鹽酸胍，則在第2管芯中，能夠維持或強化吸附于核酸結(jié)合性固相載體的核酸的吸附，并且能夠清洗吸附于核酸結(jié)合性固相載體的核酸。作為第2管芯含有鹽酸胍時的濃度，例如為3mol / L~IOmol / L，優(yōu)選為5mol / L~8mol / L。如果鹽酸胍的濃度在該范圍，則能夠使核酸結(jié)合性固相載體所吸附的核酸更穩(wěn)定地吸附，并且能夠清洗其它雜質(zhì)等。而且，通過使第8管芯的第2清洗液為水或者緩沖液，從而在第2管芯中，能夠使吸附于核酸結(jié)合性固相載體的核酸更穩(wěn)定地吸附同時進行清洗，并且，在第8管芯中，可除去促溶劑的同時進一步清洗載體。
[0060]另外，在第5管芯和第6管芯之間，可以從第5管芯側(cè)，依次具有由不與油混和的第3清洗液構成的第10管芯、以及由油構成的第11管芯。此時，第3清洗液也是不與構成第5管芯的油以及構成第11管芯的油中的任一種混和的液體。第3清洗液可以是與第I清洗液相同的組成，也可以是不同的組成，第10管芯的基本的構成的選擇方法基于第2管
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[0061]這樣，在逆轉(zhuǎn)錄反應液管芯后，設置由清洗液構成的管芯時，特別是在第7管芯進行DNA聚合酶反應時，帶入DNA聚合酶反應溶液的逆轉(zhuǎn)錄反應液變少，所以具有DNA聚合酶反應的效率上升的效果。
[0062]核酸提取用裝置
[0063]本發(fā)明的核酸提取用裝置具有:上述核酸提取用器具，和用于對管、需要時也對罐施加磁場的磁場施加器具。有多個管時，優(yōu)選以能夠?qū)艿膶客瑫r施加磁場的方式構成磁場施加器具。磁場施加器具沒有特別限定，例如可例示永磁鐵、電磁鐵等，從不產(chǎn)生發(fā)熱等的角度考慮，更優(yōu)選永磁鐵。核酸提取時，由于需要移動磁場施加器具，所以可以具備用于使磁場施加器具自動地移動的磁場施加器具移動裝置?；蛘?，可以使核酸提取用器具相對于磁場施加器具移動，此時，可以具備核酸提取用器具移動裝置。
[0064]另外，本發(fā)明的核酸提取用裝置還可以具備加熱裝置，所述加熱裝置設置于加熱由逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯以及由管的溶出液構成的第6管芯的位置。這里，可以設置控制第4管芯和第6管芯的加熱裝置，也可以設置分別控制的多個加熱裝置。加熱裝置沒有特別限定，例如，可例示加熱塊、加熱器、電磁加熱等。
[0065]應予說明，可以將用于溶解提取核酸的試樣的溶解液、具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體、和核酸提取用器具作為核酸提取用試劑盒。由此，僅將在該核酸提取用裝置中使用的可一次性使用的部分試劑盒化。
[0066]核酸提取方法
[0067]上述核酸提取用裝置，可適用于本發(fā)明的核酸提取方法。用于提取核酸的試樣只要含有核酸就沒有特是限定，可以是細胞、組織等細胞塊等生物體試樣，病毒、合成核酸、在暫時離析的核酸中混入了雜質(zhì)或夾雜物的試樣等。
[0068]首先，以使單個或者多個管的縱向與重力方向平行的方式將上述核酸提取用器具設置于固定器具。
[0069]接下來，將具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體、溶解液、用于提取核酸的試樣投入罐中。投入的順序沒有限定，具體的方法例如可以包含下述工序，此時，進行各工序的順序沒有特別限定。
[0070](I)向溶解液投入試樣，混合溶解液的工序，
[0071](2)向溶解液添加具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體的工序，
[0072](3)向核酸提取用器具的罐中投入混合了試樣的溶解液的工序，
[0073](4)在溶解液中，使與核酸結(jié)合的核酸結(jié)合性固相載體變得均勻的均勻工序
[0074]例如，在用于溶解提取核酸的試樣的溶解液中投入并混合試樣和核酸結(jié)合性固相載體(1) (2 )，通過均質(zhì)機、漩渦混合器等使試樣溶解(4)后，可以將該粉碎物加入罐中(3 )?；蛘撸梢栽嚇觾H溶解(1)，分別向罐中加入溶解了的試樣和核酸結(jié)合性固相載體(2) (3)，在核酸提取用器具的開口部安裝蓋，充分混合(4)?；蛘撸梢栽嚇觾H溶解(1)，使溶解了的試樣和核酸結(jié)合性固相載體混合(2 )，充分混合(4)，將混合物投入罐中(3 )。在該工序中，試樣中的核酸吸附于核酸結(jié)合性固相載體。
[0075]應予說明，如果在罐中已經(jīng)加入具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體和/或溶解液，則向其中投入用于提取核酸的試樣即可，如果缺失載體或者溶解液，將其一同投入即可。
[0076]設置多個管時，核酸提取用器具由于以使管的縱向與重力方向平行的方式設置于固定器具，所以在全部管中均等地加入載體。在罐內(nèi)設置隔開與各管連通的空間的隔壁時，通過使含有試樣溶解物和載體的溶解液高于隔壁，從而在各管中均等加入載體。
[0077]其后，由于核酸結(jié)合性固相載體具有磁性體，所以使用能夠?qū)蝹€或者多個管的對應部同時施加磁場的磁場施加器具，從第I管芯向第6管芯的方向施加磁場,使核酸結(jié)合性固相載體從罐內(nèi)向第6管芯移動。此時，使用永磁鐵時，可以用操作者的手移動磁鐵來進行，也可以利用磁場施加器具移動裝置等進行。核酸結(jié)合性固相載體通過各管芯時的在各管芯的停留時間沒有特別限定。應予說明，磁場施加器具可以在相同管芯內(nèi)沿管的縱向進行往復地移動。另外，也可以使磁場施加器具沿相對于行進方向呈角度的方向(例如，幾乎垂直)振動。該振動能夠給予任一個管芯，例如，通過在由清洗液構成的第2管芯中給予這種振動，從而增強清洗效果。
[0078]使在第2管芯清洗后的核酸結(jié)合性固相載體移動至第4管芯時，由此進行逆轉(zhuǎn)錄反應。反應在適于使用的逆轉(zhuǎn)錄酶的條件下進行即可。例如，將逆轉(zhuǎn)錄反應液加熱至30~50°C，優(yōu)選為42~45°C，其中通過將核酸結(jié)合性固相載體保持一定時間，從而能夠在保持RNA與載體結(jié)合的狀態(tài)下發(fā)生逆轉(zhuǎn)錄反應。作為加熱方法，沒有特別限定，例如可例示使加熱塊等的熱介質(zhì)與對應于管的第4管芯的位置接觸的方法，使用加熱器等熱源的方法，利用電磁加熱的方法等。實施者也可適時選擇保持時間，保持10秒~5分鐘，優(yōu)選保持30秒~I分鐘即可。該步驟合成的cDNA在保持與RNA結(jié)合的狀態(tài)下，與固相載體結(jié)合。
[0079]其后，使核酸結(jié)合性固相載體在第6管芯的溶出液中移動。這里，為了使核酸、特別是cDNA高效地從核酸結(jié)合性固相載體游離，優(yōu)選對第6管芯進行加熱。作為加熱方法，沒有特別限定，可使用與在第4管芯的加熱中使用的方法相同的方法。加熱溫度高于40°C即可，優(yōu)選為50°C以上，更優(yōu)選為60°C以上。加熱溫度的上限沒有特別限定，優(yōu)選為70°C以下，更優(yōu)選為65°C以下，進一步優(yōu)選為60°C以下，最優(yōu)選為60°C。
[0080]使核酸從核酸結(jié)合性固相載體游離后，使用磁場施加器具，使核酸結(jié)合性固相載體從第6管芯移動至上方。只要沒有混入第6管芯的溶出液，則可以移動至任何地方。
[0081]其后，回收游離于第6管芯的溶出液的核酸。例如,罐的材質(zhì)利用橡膠、彈性體、高分子等具有柔軟性的材料時，卸下管的前端的栓，在罐安裝蓋的狀態(tài)下，通過使罐變形而對罐的內(nèi)部進行加壓，則 管內(nèi)部的溶液從管的前端排出。首先，排出第7管芯的油，其后，排出第6管芯的溶出液。
[0082]這樣溶出的cDNA在不實施透析或乙醇沉淀法等脫鹽、濃縮操作的情況下，可以直接用于PCR等的酶反應中。應予說明，可以從溶出液中離析cDNA，例如為了除去RNA，可以在得到的溶出液中添加RNase，也可以預先在溶出液中含有RNase。例如，通過使溶出液含有10~20yg/ mL的Ribonuclease A,從而能夠高效地分解RNA。通常，可以在含有RNase的情況下直接進行PCR等操作，但在除去RNase時，可以再次反復實施本發(fā)明的方法或通過其它公知的方法精制cDNA。
[0083]另一方面，也可以使溶出液預先含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物(寡聚核苷酸)。由此，可以使用由第6管芯回收的溶液直接進行PCR。
[0084]應予說明，可以不回收游離于第6管芯的溶出液的核酸，以保持在管的狀態(tài)在第6管芯內(nèi)進行PCR。此時，需要使溶出液預先含有PCR酶、dNTP以及PCR酶用引物(寡聚核苷酸)。作為用于PCR的加熱方法，沒有特別限定，可以使用與在第4管芯的加熱中使用的方法相同的方法，也可以使用升降PCR法。PCR反應后，回收擴增的cDNA即可，回收方法沒有特別限定，可使用與不進行擴增地回收時相同的方法。
[0085]實施例
[0086](I)核酸提取用器具的構成I[0087]圖1表示核酸提取用器具組裝前的分解圖(圖1A)和組裝后的完成圖(圖1B)。
[0088]該器具具有I根的毛細管100、用于向該毛細管100注入液體的罐120。該毛細管100與罐120可構成核酸提取用器具組裝用試劑盒130。
[0089]毛細管100具有栓110，在內(nèi)部設置第I~第7管芯，分別按順序填充油10、清洗液20、油30、逆轉(zhuǎn)錄反應液40、油50、溶出液60、油70。油具有用于分離各水溶液的作用。
[0090]罐120具有開口部121、相對于開口部121能夠裝卸的蓋122、空間123、溶解液124。另外，溶解液124中含有核酸吸附在涂覆于表面的二氧化硅的磁性珠125。
[0091]毛細管100和罐120可各自卸下栓110和蓋122以圖1B的方式進行連接。
[0092](2)核酸提取用器具的構成II
[0093]圖2的裝置具有多個毛細管100以及用于向該毛細管100注入液體的罐220、矩形磁鐵260。
[0094]罐220具有開口部221、相對于開口部221可裝卸的蓋222、空間223、溶解液224、液體分配部的隔壁240、由罐220的內(nèi)壁和隔壁240圍成的隔室250。另外，溶解液224中顯示核酸吸附在涂覆于表面的二氧化硅的磁性珠225。
[0095]多個毛細管100設置為相互獨立地平行且直線狀的排列。通過使毛細管100呈直線的排列，從而相互正對的矩形磁鐵260可容易夾持多個毛細管100，通過上下運動這種單純操作從而同時對多個毛細管100的對應部同時施加磁場。由此，在多個毛細管100內(nèi)對于磁性珠225，可 容易地進行相同運動，能夠進行自動化裝置的單純化。應予說明，在毛細管100的內(nèi)部設置第I~第7管芯，各自按順序，填充有油10、清洗液20、油30、逆轉(zhuǎn)錄反應液40、油50、溶出液60、油70。
[0096](3)核酸提取用裝置的構成
[0097]本發(fā)明的核酸提取用裝置3000是安裝(I)的核酸提取用器具2000進行核酸的提取的裝置(圖3)。該裝置3000具有:用于邊用毛細管200支承邊安裝核酸提取用器具2000的安裝部300 ;在安裝部300安裝核酸提取用器具2000時，用于從毛細管200以及根據(jù)需要從罐120的側(cè)面施加磁場的磁場施加部400 ;用于沿毛細管200的縱向使安裝部300和磁場施加部400的相對配置改變的移動機構500 ;用于加熱毛細管200的一部分的加熱部600。而且，通過改變安裝部300與磁場施加部400的相對位置關系，從而能夠使核酸提取用器具2000內(nèi)的磁性粒子在其內(nèi)部移動。
[0098]安裝部300具有沿毛細管200配置的覆板(添λ板)310。通過該覆板310能夠抑制毛細管200的振動等。另外，安裝部300具有夾具機構320，由此在2處固定毛細管200。
[0099]安裝部300以與磁場施加部400的位置關系可相對于毛細管200的縱向相對變化的方式構成。本實施例中，以不進行磁場施加部400的移動地使安裝部300相對于磁場施加部400相對移動的方式設計，所以可設置使安裝部300移動的移動機構500。應予說明，在安裝部300設置鉸鏈330、導軌340、驅(qū)動帶350、馬達420。
[0100]磁場施加部400具有夾著罐120和毛細管200地對置設置的一對矩形磁鐵410。一對矩形磁鐵410以隔開大于毛細管200的外徑的間隔來設置。另外，磁場施加部400以一對的矩形磁鐵410的一方接近毛細管200時另一方離開毛細管200地配置，通過馬達420可使一對矩形磁鐵410接近毛細管200或離開地進行擺動(詳細內(nèi)容如后所述)。無論在罐120、毛細管200任何位置施加磁場，馬達420都可以根據(jù)需要進行驅(qū)動。[0101]在安裝部300安裝有毛細管200時，加熱部600可加熱毛細管200的第4管芯和第6管芯，具備可獨立控制的2個加熱器。
[0102]核酸提取裝置3000通過基于第2管芯20的第I清洗液及第6管芯60的第2清洗液的至少一方的清洗，即使吸附于磁性粒子M的核酸的量減少的情況下，相對于第4管芯40的溶出液，也能夠溶出足夠量的核酸。由此，能夠提高清洗效果，并且相對于溶出液能夠溶出用于PCR的充分的濃度的核酸。
[0103](4)矩形磁鐵的使用方法
[0104]圖4表示在核酸提取用裝置中毛細管200與矩形磁鐵410以及矩形磁鐵410的使用方法。
[0105]相互正對的矩形磁鐵410容易地夾入毛細管200，通過上下運動這種單純操作對毛細管200施加磁場，能夠使毛細管200內(nèi)的磁性珠125上下運動。由此，能夠使自動化裝
置單純化。
[0106]另外，例如，如A所示，位于兩側(cè)的2個矩形磁鐵410中，通過使左側(cè)接近毛細管200，從而將磁性珠125固定在毛細管200的左側(cè)，如B所示，通過使右側(cè)接近毛細管200，從而將磁性珠125固定在毛細管200的右側(cè)。另外，如C所示，兩方的矩形磁鐵410均遠離毛細管200，由此磁性珠125在毛細管200內(nèi)分散存在。因此，通過在相同的場所使矩形磁鐵410沿左右運動，從而能夠反復進行A的狀態(tài)和B的狀態(tài)，能夠使磁性珠125擺動。
[0107](5)核酸提取方法
[0108]以下，示出使用具有I根毛細管200的核酸提取用裝置3000的核酸提取方法。
[0109]在流感的診斷中，在 卸下罐130的蓋122后將用棉棒從咽部內(nèi)的粘膜采取的檢體插入含有溶解液124的罐130內(nèi)，通過將采取了檢體的棉棒浸入溶解液124，從而在溶解液124中采取病毒。在溶解液124內(nèi)加入表面被二氧化硅涂覆了的磁性珠125，關閉蓋122，通過振蕩罐130，從而使核酸吸附于磁性珠125。
[0110]接下來，再次卸下罐130的蓋122，卸下毛細管100的上栓110，連接罐130和毛細
管100，以與重力方向平行地設置毛細管。
[0111]其后，使用矩形磁鐵410，沿毛細管100，在重力方向運動，使磁性珠125在各管芯內(nèi)通過。中途，如圖4所示，通過交替使用左右的矩形磁鐵410，可以使磁性珠125左右振動。
[0112]使磁性珠125移動至預先用加熱塊加熱至45°C的第4管芯后，靜止30秒，進行逆轉(zhuǎn)錄反應。
[0113]其后，再使磁性珠125移動至預先用加熱塊加熱至80°C的第6管芯，使矩形磁鐵410擺動30秒，溶出磁性珠上的cDNA。
[0114]最后，卸下毛細管100的下栓110，用手指從兩側(cè)擠壓罐120使其凹陷，對罐120內(nèi)進行加壓，通過從毛細管100的下端擠出油70和溶出液60，從而能夠在其它容器接收溶出的含有cDNA的溶出液60。
[0115]或者，可以在第6管芯內(nèi)進行PCR反應。
[0116](6) I步溶出和2步溶出的比較
[0117]使用內(nèi)徑1.0mm、長度IOOmm的毛細管以及IOmL的罐,制作具有第I~第7管芯的核酸提取用器具(2步溶出用)。這里，第2管芯為25yL，第4及第6管芯為2yL。另外，各油管芯的長度為12.5mm。各管芯的溶液使用以下物質(zhì)。
[0118]第2管芯:5mM Tris鹽酸緩沖液
[0119]第4管芯:
[0120]
【權利要求】
1.一種核酸提取用器具，具備管，所述管在其內(nèi)部依次具備: 由第I油構成的第I管芯， 由與油相分離、用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第I清洗液構成的第2管芯， 由第2油構成的第3管芯， 由與油相分離、用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯， 由第3油構成的第5管芯， 由與油相分離、用于使所述核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體溶出的溶出液構成的第6管芯，和 由第4油構成的第7管芯。
2.根據(jù)權利要求1所述的核酸提取用器具，其中，所述管在第5管芯和第6管芯之間、從第5管芯側(cè)依次具備: 由與油相分離、用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第2清洗液構成的第10管芯，以及 由油構成的第11管芯。
3.根據(jù)權利要求 1或2所述的核酸提取用器具，其中，所述溶出液含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。
4.根據(jù)權利要求1~3中任一項所述的核酸提取用器具，其中，所述管的第7管芯側(cè)的端部是開放的開放端，具有密封所述開放端的能夠裝卸的栓。
5.根據(jù)權利要求1~4中任一項所述的核酸提取用器具，其中，具備用于向所述管導入所述核酸結(jié)合性固相載體的罐。
6.根據(jù)權利要求5所述的核酸提取用器具，其中，所述罐和所述管可裝卸。
7.根據(jù)權利要求5或6所述的核酸提取用器具，其特征在于，所述罐具有用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
8.—種核酸提取方法，包括以下工序: 將權利要求7所述的核酸提取用器具以所述管的縱向與重力方向平行的方式設置的工序， 將用于提取RNA的試樣投入所述罐的工序， 對所述管從第I管芯向第4管芯的方向施加磁場，使磁性體從所述罐內(nèi)移動至第4管芯的工序， 在所述第4管芯的所述逆轉(zhuǎn)錄反應液中對所述RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，合成cDNA的工序，和 在所述第6管芯的所述溶出液中使所述cDNA從所述核酸結(jié)合性固相載體游離的工序。
9.一種核酸提取用試劑盒，具有: 權利要求1~7中任一項所述的核酸提取用器具， 具有磁性體的核酸結(jié)合性固相載體，和 用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
10.一種核酸提取用裝置，具備具有管的核酸提取用器具和用于對所述管施加磁場的磁場施加器具，所述管在其內(nèi)部依次具備: 由第I油構成的第I管芯，由與油相分離、用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第I清洗液構成的第2管芯， 由第2油構成的第3管芯， 由與油相分離、用于進行逆轉(zhuǎn)錄反應的逆轉(zhuǎn)錄反應液構成的第4管芯， 由第3油構成的第5管芯， 由與油相分離、用于使所述核酸從結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體溶出的溶出液構成的第6管芯，和 由第4油構成的第7管芯。
11.根據(jù)權利要求10所述的核酸提取用裝置，其中，具備用于沿所述管的縱向使所述管與該所述磁場施加器具的位置關系相對變化的磁場施加器具移動裝置或者核酸提取用器具移動裝置。
12.根據(jù)權利要求10或11所述的核酸提取用裝置，其中，具備設置在加熱所述管的第4管芯和/或第6管芯的位置的加熱裝置。
13.根據(jù)權利要求10~12中任一項所述的核酸提取用裝置，其中，所述管在第5管芯與第6管芯之間、從第5管芯側(cè)依次具備: 由與油相分離、用于清洗結(jié)合了核酸的核酸結(jié)合性固相載體的第2清洗液構成的第10管芯，以及 由油構成的第11管芯。`
14.根據(jù)權利要求10~13中任一項所述的核酸提取用裝置，其中，所述溶出液含有DNA聚合酶、dNTP以及DNA聚合酶用引物。
15.根據(jù)權利要求10~14中任一項所述的核酸提取用裝置，其中，所述管的第7管芯側(cè)的端部是開放的開放端，具有密封所述開放端的能夠裝卸的栓。
16.根據(jù)權利要求10~15中任一項所述的核酸提取用裝置，其中，具備用于向所述管導入所述核酸結(jié)合性固相載體的罐。
17.根據(jù)權利要求16所述的核酸提取用裝置，其中，所述罐和所述管可裝卸。
18.根據(jù)權利要求16或17所述的核酸提取用裝置，其特征在于，所述罐具有用于溶解提取核酸的試樣的溶解液。
【文檔編號】C12M1/24GK103789201SQ201310512272
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權日:2012年10月26日
【發(fā)明者】齊藤祐司, 高城富美男 申請人:精工愛普生株式會社