一種獲得pcr擴(kuò)增片段的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獲得PCR擴(kuò)增片段的方法。步驟如下:首先將對(duì)象PCR加入模版DNA2ul,以及ddH2O36.5ul,并將混合物搖勻;待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性,時(shí)間1-6分鐘;再將混合物放置下列環(huán)境下:90-95攝氏度,18秒,55攝氏度,半分鐘,75攝氏度1分鐘;將上述步驟循環(huán)3次即得。所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏度條件下進(jìn)行保存。本發(fā)明的有益效果是,可以有效避免蛋白氨基酸丟失,且穩(wěn)定性好,表達(dá)量高,具有成本低,操作簡單的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】—種獲得P cR擴(kuò)增片段的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)方法,具體來說,一種獲得P C R擴(kuò)增片段的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒是真核細(xì)胞細(xì)胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳單位,包括真核生物的細(xì)胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細(xì)菌細(xì)胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?,F(xiàn)在習(xí)慣上用來專指細(xì)菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細(xì)胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細(xì)菌除了擬核中的DNA外,還有大量很小的環(huán)狀DNA分子,這就是質(zhì)粒(plasmid)(補(bǔ)充:部分質(zhì)粒為RNA)。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome),這類質(zhì)粒能夠整合進(jìn)真菌的染色體,也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細(xì)胞體內(nèi)外都可復(fù)制,通過個(gè)些特性,人們可以把一些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中,通過轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中,不斷的復(fù)制,來得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為克服上述技術(shù)問題,我們提出了以下技術(shù)方案:
一種獲得P C R擴(kuò)增片段的方法,步驟如下:首先將對(duì)象P C R加入模版DNA2ul,以及ddH2036.5ul,并將混合物搖勻;待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性,時(shí)間1-6分鐘;再將混合物放 置下列環(huán)境下:90-95攝氏度,18秒,55攝氏度,半分鐘,75攝氏度I分鐘;將上述步驟循環(huán)3次即得。
[0004]本發(fā)明中,所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏度條件下進(jìn)行保存。
[0005]本發(fā)明的有益效果是,可以有效避免蛋白氨基酸丟失,且穩(wěn)定性好,表達(dá)量高,具有成本低,操作簡單的優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0006]一種獲得P C R擴(kuò)增片段的方法,步驟如下:首先將對(duì)象P C R加入模版DNA2ul,以及ddH2036.5ul,并將混合物搖勻;待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性,時(shí)間3分鐘;再將混合物放置下列環(huán)境下:92攝氏度,18秒,55攝氏度,半分鐘,75攝氏度I分鐘;將上述步驟循環(huán)3次即得。所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏度條件下進(jìn)行保存。
[0007]以上所述,僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】,但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此,任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi),根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變,都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種獲得P c R擴(kuò)增片段的方法,其特征在于,步驟如下:首先將對(duì)象P C R加入模版DNA2ul,以及ddH2036.5ul,并將混合物搖勻;待其混合均勻后放置86攝氏度的環(huán)境下進(jìn)行變性,時(shí)間1-6分鐘;再將混合物放置下列環(huán)境下:90-95攝氏度,18秒,55攝氏度,半分鐘,75攝氏度I分鐘;將上述步驟循環(huán)3次即得。
2.如權(quán)利要求1所述的一種獲得PC R擴(kuò)增片段的方法,其特征在于,所得PCR擴(kuò)增片段需要在21攝氏 度條件下進(jìn)行保存。
【文檔編號(hào)】C12N15/10GK103602662SQ201310522527
【公開日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】徐麗 申請(qǐng)人:徐麗