生孢梭菌及其用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于釀酒【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種生孢梭菌及其用途。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一株產(chǎn)己酸能力強(qiáng)的新菌株。本發(fā)明的技術(shù)方案是生孢梭菌Clostridium?sporogense，該菌株已于2012年2月1日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC），保藏號(hào)為CGMCC?No.5741，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：10010。本發(fā)明生孢梭菌產(chǎn)己酸能力可以達(dá)到9000mg/L，是一株高產(chǎn)己酸的新菌株。本發(fā)明為己酸生產(chǎn)提供了一種新選擇。
【專利說明】生孢梭菌及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于釀酒【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種生孢梭菌及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002]在濃香型大曲酒生產(chǎn)中，發(fā)酵窖池越老，產(chǎn)酒的質(zhì)量越好，這是傳統(tǒng)工藝的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。為了揭示老窖出佳品的奧秘，我國自本世紀(jì)60年代起就開展了濃香型白酒與窖泥微生物關(guān)系的研究，發(fā)現(xiàn)老窖泥中富集了多種厭氧功能菌，主要為嫌氣性梭狀芽孢桿菌，它們參與濃香型白酒發(fā)酵的生香作用。己酸乙酯作為濃香型白酒的主體香成分，無疑，其中代謝生成己酸的菌株就是老窖發(fā)酵生香的一種主要功能菌。
[0003]70年代以后，白酒技術(shù)工作者在己酸菌的分離、培育和應(yīng)用方面，作了不少的報(bào)道，但大部分側(cè)重于生產(chǎn)性的實(shí)用技術(shù)，而有關(guān)微生物學(xué)方面的研究，尤其是菌種的鑒定和生理學(xué)的研究內(nèi)容相對(duì)較少。
[0004]目前報(bào)道的從窖泥中分離得到的代謝己酸能力較強(qiáng)的并經(jīng)微生物學(xué)鑒定定名的菌株只有克氏梭菌(Clos`tridium kluyveri)、耳蝸形梭菌(Clostridium cocleatum)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的第一個(gè)技術(shù)問題是提供一株產(chǎn)己酸能力強(qiáng)的新菌株。本發(fā)明的技術(shù)方案是生孢梭菌Clostridium sporogense,該菌株已于2012年2月I日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC N0.5741，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編:10010。
[0006]進(jìn)一步的，所述生孢梭菌的16S rDNA的序列如SEQ ID N0.1所示。
[0007]本發(fā)明還提供了所述的生孢梭菌在生產(chǎn)己酸中的用途。
[0008]本發(fā)明還提供了所述的生孢梭菌在釀酒生產(chǎn)中的用途。
[0009]本發(fā)明的菌株是從四川劍南春(集團(tuán))有限責(zé)任公司的劍南春老窖泥中分離獲得。該菌株為生孢梭菌，特征如下:
[0010](I)微生物形態(tài)特征
[0011]挑取新培養(yǎng)的菌苔少許，從一邊開始均勻涂抹劃線，重復(fù)數(shù)次，以劃滿平板(培養(yǎng)基:乙酸鈉1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.01%、硫酸銨0.03%、硫酸亞鐵0.02%、酵母膏0.5%、瓊脂粉2%，滅菌后再加入2%碳酸鈣，無水乙醇2%)為宜，倒置平板，于37°C厭氧培養(yǎng)3~5天，觀察菌落形態(tài)。
[0012]培養(yǎng)后的形態(tài)特征:菌株不成鏈狀、無莢膜，表面菌落呈圓形，扁平狀，邊緣擴(kuò)散，半透明狀，灰到白色，無光澤。該菌株經(jīng)革蘭氏染色鑒定為革蘭氏陽性桿狀菌、產(chǎn)芽孢。
[0013](2)培養(yǎng)條件
[0014]乙酸鈉1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.01%、硫酸銨0.03%、硫酸亞鐵0.02%、酵母膏0.5%、瓊脂粉2%，滅菌后再加入2%碳酸鈣，無水乙醇2%。培養(yǎng)基在121°C下滅菌20分鐘；培養(yǎng)溫度35~37°C，厭氧培養(yǎng)。
[0015]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)一株產(chǎn)己酸的生孢梭菌。該菌株產(chǎn)己酸能力可以達(dá)到9000mg/L(實(shí)施例2)，為濃香型白酒關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)的形成提供了寶貴的菌株資源。本發(fā)明菌株可用于己酸生產(chǎn)。本發(fā)明的生孢梭菌是從劍南春老窖泥中分離出來的，應(yīng)用于釀酒生產(chǎn)可有效提高濃香型白酒關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)己酸乙酯含量及促進(jìn)新窖老熟，大幅提高產(chǎn)品優(yōu)級(jí)品率，具有極大的應(yīng)用和推廣價(jià)值。
[0016]本發(fā)明的生孢梭菌Clostridium sporogense已于2012年2月I日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏號(hào)為CGMCC N0.5741，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編:10010。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1菌株產(chǎn)己酸量對(duì)比分析圖表
[0018]圖2本發(fā)明菌株形態(tài)圖
【具體實(shí)施方式】
[0019]本發(fā)明的生孢梭菌(Clostridium sporogense)于2012年2月I日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC N0.5741。保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。
[0020]進(jìn)一步的，所述生孢梭菌的16S rDNA的序列如SEQ ID N0.1所示。
[0021]本發(fā)明還提供了所述的生孢梭菌在生產(chǎn)己酸中的用途。
[0022]本發(fā)明還提供了所述的生孢梭菌在釀酒生產(chǎn)中的用途。
[0023]本發(fā)明的生孢梭菌菌株是從四川劍南春(集團(tuán))有限責(zé)任公司的劍南春老窖泥中分離獲得。
[0024]本發(fā)明的生孢梭菌產(chǎn)己酸能力可以達(dá)到9000mg/L，是一株高產(chǎn)己酸的新菌株。本發(fā)明的生孢梭菌是從劍南春老窖泥中分離出來的，應(yīng)用于釀酒生產(chǎn)可有效提高濃香型白酒關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)己酸乙酯含量及促進(jìn)新窖老熟，大幅提高產(chǎn)品優(yōu)級(jí)品率，具有極大的應(yīng)用和推廣價(jià)值。
[0025]實(shí)施例1菌株篩選
[0026]I菌株的篩選
[0027]1.1菌株的初篩
[0028]1.1.1材料:劍南春老窖泥
[0029]1.1.2 培養(yǎng)基:
[0030]乙酸鈉 8g, MgC 2200mg, NH4Cl500mg, MnS042.5mg, CaSO4IOmg, FeS045mg,鑰酸鈉
2.5mg,生物素5ug,對(duì)氨基苯甲酸IOOug,蒸懼水1000mL,自然pH, 121°C滅菌20min,冷卻后，無菌加入乙醇25mL。
[0031]培養(yǎng)基在121°C下滅菌20分鐘；培養(yǎng)溫度:35~37°C，培養(yǎng)條件:厭氧培養(yǎng)。
[0032]1.1.3實(shí)驗(yàn)方法
[0033]無菌條件下取10克劍南春老窖泥于裝有90mL無菌水并放有玻珠的250mL三角瓶中，置搖床上室溫振蕩30分鐘。在80度水浴中處理lOmin，取菌液按10倍梯度稀釋到10_6，取各稀釋度菌液ImL放入無菌平皿中，倒入滅菌后冷卻至50°C的培養(yǎng)基，混勻，待凝固后放入?yún)捬豕ぷ髡居?7°C培養(yǎng)7天，挑單菌落于液體培養(yǎng)中于37度培養(yǎng)至產(chǎn)氣為止。取發(fā)酵液ImL于小試管中，加入0.5mL乙醚和2%硫酸銅溶液lmL，充分搖勻，靜置分層后，在乙醚層呈現(xiàn)藍(lán)色，即證明有己酸生成。顏色越深含量越高，共篩選到8株產(chǎn)己酸能力較高的單菌株，分別命名為 F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8。
[0034]實(shí)施例2菌株的產(chǎn)己酸條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
[0035]1.1菌株產(chǎn)己酸發(fā)酵條件優(yōu)化
[0036]選取溫度、發(fā)酵天數(shù)、醋酸鈉和乙醇濃度四因素三水平設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表I所示。
[0037]正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇濃度對(duì)菌株產(chǎn)己酸影響較大，其次為醋酸鈉濃度，溫度和發(fā)酵時(shí)間影響相對(duì)較小。產(chǎn)己酸的最適條件為:溫度37°C，培養(yǎng)時(shí)間15天為宜，乙醇濃度2%，醋酸鈉濃度1%。
[0038]采用優(yōu)化后發(fā)酵培養(yǎng)條件對(duì)8株代謝己酸的單菌株進(jìn)行產(chǎn)己酸試驗(yàn)，菌株發(fā)酵產(chǎn)己酸培養(yǎng)基:乙酸鈉1%、磷酸氫二鉀0.05%、硫酸鎂0.01%、硫酸銨0.03%、硫酸亞鐵0.02%、酵母膏0.5%、滅菌后再加入2%碳酸鈣，無水乙醇2%。
[0039]產(chǎn)己酸對(duì)比分析結(jié)果見圖1，從圖1可得出F6產(chǎn)己酸能力最強(qiáng)，可達(dá)到9289mg/L。由此可以看出:在篩選的八株菌株中，F(xiàn)6菌株產(chǎn)己酸能力最強(qiáng)，并將該菌株命名為JNC-004。后續(xù)將對(duì)F6菌株進(jìn)行16SrDNA基因的序列分析和全自動(dòng)微生物鑒定儀分析。
[0040]表1不同條件對(duì)產(chǎn)己酸的影響
[0041]
【權(quán)利要求】
1.生抱梭菌Clostridium sporogenes，其保藏號(hào)為 CGMCC N0.5741。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生孢梭菌，其特征在于:其16Sri)NA序列如SEQ ID N0.1所/Jn ο
3.權(quán)利要求1或2所述的生孢梭菌在生產(chǎn)己酸中的用途。
4.權(quán)利要求1或 2所述的生孢梭菌在釀酒生產(chǎn)中的用途。
【文檔編號(hào)】C12P7/40GK103525743SQ201310532509
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】樊科權(quán), 唐清蘭, 徐姿靜, 徐占成 申請(qǐng)人:四川綿竹劍南春酒廠有限公司