一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法。步驟如下：首先，將目的衣藻培養(yǎng)至其對數(shù)生長期；然后取3-5好身體更的培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)處理，即首先將其進(jìn)行離心處理，用0.5毫升的轉(zhuǎn)化也對其進(jìn)行懸空處理；然后加入烤箱中烘干，高溫殺菌；加入1-2ug的質(zhì)粒；充分振蕩、搖勻；暗處培養(yǎng)至少24小時(shí)；即可進(jìn)行染色驗(yàn)鏡；其中所述質(zhì)粒需要轉(zhuǎn)入到萊茵衣藻硝酸還原酶缺陷型突變物種中；所述振蕩，時(shí)間不能超過5分鐘，需要瞬間剪切。本發(fā)明的有益效果是，成本較低、重復(fù)性好，轉(zhuǎn)化效率低，整合基因的拷貝數(shù)不高，可以獲得比較成功的表達(dá)。
【專利說明】一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)方法，具體來說一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]衣藻，(Chlamydomonas)亦稱“單衣藻”。綠藻門，衣藻科。藻體為單細(xì)胞，球形或卵形，前端有兩條等長的鞭毛，能游動。鞭毛基部有伸縮泡兩個(gè)；另在細(xì)胞的近前端，有紅色眼點(diǎn)一個(gè)。載色體大型杯狀，具淀粉核一枚。無性繁殖產(chǎn)生游動孢子；有性生殖為同配、異配和卵式生殖。在不利的生活條件下，細(xì)胞停止游動，并進(jìn)行多次分裂，外圍厚膠質(zhì)鞘，形成臨時(shí)群體稱“不定群體”。環(huán)境好轉(zhuǎn)時(shí)，群體中的細(xì)胞產(chǎn)生鞭毛，破鞘逸出。廣布于水溝、洼地和含微量有機(jī)質(zhì)的小型水體中，早春晚秋最為繁盛。一些含蛋白質(zhì)較豐富的種類，可培養(yǎng)作飼料或食用。衣藻屬于真核生物，葉綠體為大型杯狀，具淀粉核(starchstorage) —枚。無性繁殖產(chǎn)生游動孢子；有性生殖為同配、異配和卵式生殖。在不利的生活條件下，細(xì)胞停止游動，并進(jìn)行多次分裂，外圍厚膠質(zhì)鞘，形成臨時(shí)群體稱“不定群體”。環(huán)境好轉(zhuǎn)時(shí)，群體中的細(xì)胞產(chǎn)生鞭毛，破鞘逸出。廣布于水溝、洼地和含微量有機(jī)質(zhì)的小型水體中，早春晚秋最為繁盛。一些含蛋白質(zhì)較豐富的種類，可培養(yǎng)作飼料或食用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種采用玻璃珠 法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法，步驟如下:首先，將目的衣藻培養(yǎng)至其對數(shù)生長期；然后取3-5好身體更的培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)處理，即首先將其進(jìn)行離心處理，用0.5毫升的轉(zhuǎn)化也對其進(jìn)行懸空處理；然后加入烤箱中烘干，高溫殺菌；加入l_2ug的質(zhì)粒；充分振蕩、搖勻；暗處培養(yǎng)至少24小時(shí)；即可進(jìn)行染色驗(yàn)鏡。
[0004]本發(fā)明中，其中所述質(zhì)粒需要轉(zhuǎn)入到萊茵衣藻硝酸還原酶缺陷型突變物種中。
[0005]本發(fā)明中，所述振蕩，時(shí)間不能超過5分鐘，需要瞬間剪切。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，成本較低、重復(fù)性好，轉(zhuǎn)化效率低，整合基因的拷貝數(shù)不高，可以獲得比較成功的表達(dá)。
【具體實(shí)施方式】
[0007]—種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法，步驟如下:首先，將目的衣藻培養(yǎng)至其對數(shù)生長期；然后取3-5好身體更的培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)處理，即首先將其進(jìn)行離心處理，用0.5毫升的轉(zhuǎn)化也對其進(jìn)行懸空處理；然后加入烤箱中烘干，高溫殺菌；加入2ug的質(zhì)粒；充分振蕩、搖勻；暗處培養(yǎng)至少24小時(shí)；即可進(jìn)行染色驗(yàn)鏡；其中所述質(zhì)粒需要轉(zhuǎn)入到萊茵衣藻硝酸還原酶缺陷型突變物種中；所述振蕩，時(shí)間為7分鐘，需要瞬間剪切。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變`，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法，其特征在于，步驟如下:首先，將目的衣藻培養(yǎng)至其對數(shù)生長期；然后取3-5好身體更的培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)處理，即首先將其進(jìn)行離心處理，用0.5毫升的轉(zhuǎn)化也對其進(jìn)行懸空處理；然后加入烤箱中烘干，高溫殺菌；加入l_2ug的質(zhì)粒；充分振蕩、搖勻；暗處培養(yǎng)至少24小時(shí)；即可進(jìn)行染色驗(yàn)鏡。
2.如權(quán)利要求1所述的一種采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法，其特征在于，其中所述質(zhì)粒需要轉(zhuǎn)入到萊茵衣藻硝酸還原酶缺陷型突變物種中。
3.如權(quán)利要求1所述的一種 采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化衣藻的實(shí)驗(yàn)方法，其特征在于，所述振蕩，時(shí)間不能超過5分鐘，需要瞬間剪切。
【文檔編號】C12N15/79GK103757044SQ201310535542
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】劉軍 申請人:劉軍