一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法。步驟如下：首先準(zhǔn)備好目標(biāo)DNA，以及ＤＮＡ連接酶，將其膠回收后充分混勻；２１攝氏度條件下反應(yīng)１２小時；在操作臺中，將全部能量轉(zhuǎn)化至大腸感覺的感受態(tài)細(xì)胞中；所述大腸感覺感受細(xì)胞態(tài)需要事先經(jīng)過氯化鈣溶液沖洗；冷浴３－５分鐘；每隔１０分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復(fù)十次；用移液槍懸浮細(xì)胞，涂抹在瓊脂平板上；1個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養(yǎng)15小時，即得；用移液槍懸浮細(xì)胞之前需要保留上清液；最后可以用滅過菌的竹棒挑取目標(biāo)質(zhì)粒。本發(fā)明的有益效果是，成本較低、重復(fù)性好，轉(zhuǎn)化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【專利說明】一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生化實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)方法，具體來說一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒(Plasmid)是附加到細(xì)胞中的非細(xì)胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復(fù)制的較小的DNA分子(即細(xì)胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構(gòu)形，然而目前也發(fā)現(xiàn)有少數(shù)的質(zhì)粒屬于線性構(gòu)形，它存在于許多細(xì)菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的線粒體等胞器中。天然質(zhì)粒的DNA長度從數(shù)千堿基對至數(shù)十萬堿基對都有。質(zhì)粒天然存在于這些生物里面，有時候一個細(xì)胞里面可以同時有一種乃至于數(shù)種的質(zhì)粒同時存在。質(zhì)粒的套數(shù)(copy number)在細(xì)胞里從單一到數(shù)千都有可能。有時有些質(zhì)粒含有某種抗藥基因(如大腸桿菌中就有含有抗四環(huán)素基因的質(zhì)粒)。有一些質(zhì)粒攜帶的基因則可以賦予細(xì)胞額外的生理代謝能力，乃至于在一些細(xì)菌中提高它的致病力。一般來說，質(zhì)粒的存在與否對宿主細(xì)胞生存沒有決定性的作用。它是基因工程最常見的運(yùn)載體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法，步驟如下:首先準(zhǔn)備好目標(biāo)DNA，以及D N A連接酶，將其膠回收后充分混勻；2 I攝氏度條件下反應(yīng)I 2小時；在操作臺中，將全部能量轉(zhuǎn)化至大腸感覺的感受態(tài)細(xì)胞中；所述大腸感覺感受細(xì)胞態(tài)需要事先經(jīng)過氯化鈣溶液沖洗；冷浴3 - 5分鐘；每隔I O分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復(fù)十次；用移液槍懸浮細(xì)胞，涂抹在瓊脂平板上；1個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養(yǎng)15小時，即得。
[0004]本發(fā)明中，用移液槍懸浮`細(xì)胞之前需要保留上清液。
[0005]本發(fā)明中，最后可以用滅過菌的竹棒挑取目標(biāo)質(zhì)粒。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，成本較低、重復(fù)性好，轉(zhuǎn)化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【具體實(shí)施方式】
[0007]—種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法，步驟如下:首先準(zhǔn)備好目標(biāo)DNA，以及D N A連接酶，將其膠回收后充分混勻；2 I攝氏度條件下反應(yīng)I 2小時；在操作臺中，將全部能量轉(zhuǎn)化至大腸感覺的感受態(tài)細(xì)胞中；所述大腸感覺感受細(xì)胞態(tài)需要事先經(jīng)過氯化鈣溶液沖洗；冷浴3分鐘；每隔I O分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復(fù)十次；用移液槍懸浮細(xì)胞，涂抹在瓊脂平板上；I個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養(yǎng)15小時，即得。用移液槍懸浮細(xì)胞之前需要保留上清液。最后用滅過菌的竹棒挑取目標(biāo)質(zhì)粒。。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換 或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法，其特征在于，步驟如下:首先準(zhǔn)備好目標(biāo)DNA，以及D N A連接酶，將其膠回收后充分混勻；2 1攝氏度條件下反應(yīng)1 2小時；在操作臺中，將全部能量轉(zhuǎn)化至大腸感覺的感受態(tài)細(xì)胞中；所述大腸感覺感受細(xì)胞態(tài)需要事先經(jīng)過氯化鈣溶液沖洗；冷浴3 - 5分鐘；每隔1 O分鐘混合、振蕩、分離、懸置；上述行為反復(fù)十次；用移液槍懸浮細(xì)胞，涂抹在瓊脂平板上；1個小時后，倒置平板，在37攝氏度的條件下培養(yǎng)15小時，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的一種促使質(zhì)粒發(fā)生連接反應(yīng)的方法，其特征在于，用移液槍懸浮細(xì)胞之前需要保留上清液。
3.如權(quán)利要求1所述的一種將質(zhì)粒片段膠回收的方法，其特征在于，最后可以用滅過菌的竹棒挑取目標(biāo)質(zhì)粒。
【文檔編號】C12N15/66GK103757040SQ201310536243
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】劉軍 申請人:劉軍