原位雜交方法
【專利摘要】本發(fā)明提供原位雜交方法，包括以下步驟：(a)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動泵從原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒；(b)主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動；(c)主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制蠕動泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中；以及(d)主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制雜交盒中的溫度。本發(fā)明的原位雜交方法可以自動實現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實現(xiàn)原位雜交實驗的標準化、可重復性和高通量。
【專利說明】原位雜交方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種雜交方法，尤其是一種原位雜交方法。

【背景技術】
[0002]斑馬魚、爪蟾和小鼠等模式生物的使用正逐漸拓展并深入到生命科學的各個領域，例如:發(fā)育生物學(包括神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、器官發(fā)育等)、細胞生物學、遺傳學、免疫學、分子生物學等生物技術的開發(fā)，以及與人類生命息息相關的疾病(包括神經(jīng)退行性疾病、遺傳性心血管疾病、糖尿病等)模型、疾病機理的研究和治療。這些模式生物已廣泛應用于小分子化合物的大規(guī)模新藥篩選，為生命科學的進步與人類健康和持續(xù)發(fā)展奠定基礎。
[0003]原位雜交技術從RNA水平檢測基因的表達水平和表達部位，免疫組化和蛋白印跡雜交等基本實驗準則來檢測蛋白水平變化，這些都是生命科學實驗中檢測基因及其產(chǎn)物時空表達特異性的基本技術和有力手段。這些基本實驗技術已廣泛應用于發(fā)育生物學、解剖學、細胞生物學、遺傳學、進化生物學、分子生物學、生物技術開發(fā)、免疫學以及癌癥和干細胞等的研究，并為這些領域的發(fā)展與進步提供了巨大的幫助。
[0004]雖然原位雜交技術是一種常用的基本實驗技術，但是該技術步驟冗長而復雜，耗時耗力，每一次實驗往往需要幾天的時間，其中包括很多簡單但又重復的清洗和孵育過程。而且傳統(tǒng)的人工操作模式又存在枯燥繁瑣、耗時耗力等缺點。因此，上述傳統(tǒng)的手工操作模式很難保證全部試驗過程的一致性，往往會影響實驗結果的準確度和可信度。此外，現(xiàn)有的一些原位雜交方法，主要針對切片或膜雜交進行實驗，無法應用在整體胚胎上。
[0005]綜上所述，現(xiàn)有的原位雜交技術具有以下缺點:(1)核酸原位雜交的步驟多、時間長、容易出錯、實驗結果不穩(wěn)定；(2)在整體胚胎的實驗過程中，重復勞動多，胚胎易破碎；
(3)雜交需要配備專用雜交爐，占用空間大，控制條件復雜；(4)很難實現(xiàn)高通量；以及(5)現(xiàn)有自動化儀器無法實現(xiàn)自動換液。


【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明旨在解決上面描述的問題。本發(fā)明的一個目的是提供一種解決以上問題中的任何一個的原位雜交方法。具體地，本發(fā)明提供一種原位雜交方法，以自動實現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實現(xiàn)原位雜交實驗的標準化、可重復性和高通量。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種原位雜交方法，所述方法包括以下步驟:(a)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動泵從所述原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒；(b)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動；(C)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述蠕動泵將所述雜交盒中的廢液泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中；以及(d)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述雜交盒中的溫度。
[0008]此外，所述方法在所述步驟(a)之前還包括:所述主控板通過其上的通信接口模塊將所述原位雜交實驗程序下載到所述主控板上。
[0009]此外，所述方法重復執(zhí)行所述步驟(a) - (C)，直至所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序完成對胚胎的所有清洗操作。
[0010]此外，所述方法在所述步驟(a)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制插入在所述清洗液體罐中的導管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。
[0011]此外，所述方法在所述步驟(b)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過所述原位雜交系統(tǒng)中搖床裝置控制所述雜交盒的搖動。
[0012]此外，所述方法在步驟(C)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制插入在所述廢液罐中的導管上的閥門的開啟與閉合來將所述雜交盒中的廢液泵入所述廢液te中。
[0013]此外，所述方法在步驟(d)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制所述原位雜交系統(tǒng)中的溫控裝置來控制所述雜交盒中的溫度。
[0014]此外，所述主控板控制所述溫控裝置通過所述原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置進行熱傳導來控制所述雜交盒中的溫度。
[0015]此外，所述方法還包括:操作者通過所述主控板調整所述原位雜交實驗程序。
[0016]此外，所述方法還包括:所述主控板顯示原位雜交實驗的當前狀態(tài)。
[0017]采用本發(fā)明的自動核酸原位雜交方法，通過主控板對清洗液體導管上的閥門以及廢液導管上的閥門的控制，自動實現(xiàn)不同清洗液體的選擇以及廢液的排出；通過主控板對蠕動泵的控制，可以精密控制各種清洗液體的精確用量；通過主控板對搖床裝置的控制，可以使清洗液體與胚胎充分接觸，實現(xiàn)徹底地清洗；以及通過主控板對溫控裝置的控制，可以自動設定精確的反應溫度。
[0018]因此，采用本發(fā)明的技術方案，可以自動實現(xiàn)整體胚胎雜交過程，并且實現(xiàn)原位雜交實驗的標準化、可重復性和高通量。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]并入到說明書中并且構成說明書的一部分的附圖示出了本發(fā)明的實施例，并且與描述一起用于解釋本發(fā)明的原理。在這些附圖中，類似的附圖標記用于表示類似的要素。下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實施例，而不是全部實施例。對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0020]圖1是根據(jù)本發(fā)明的自動核酸原位雜交方法的流程圖。

【具體實施方式】
[0021]為使本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚明白，下文中將結合附圖對本發(fā)明的實施例進行詳細說明。需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互任意組合。
[0022]根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法，原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)其中存儲的原位雜交實驗程序，控制原位雜交系統(tǒng)中的蠕動泵從原位雜交系統(tǒng)的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒中；接著主控板控制雜交盒進行搖動；然后主控板控制蠕動泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)的廢液罐中；主控板還控制雜交盒中的溫度。
[0023]下面詳細描述根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法。
[0024]參照圖1所示，在步驟11，原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)其中存儲的原位雜交實驗程序，控制原位雜交系統(tǒng)中的蠕動泵從原位雜交系統(tǒng)的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒中。在步驟12，主控板控制雜交盒進行搖動。在步驟13，主控板控制蠕動泵將雜交盒中的廢液泵入原位雜交系統(tǒng)的廢液罐中。在步驟14，主控板還控制雜交盒中的溫度。
[0025]具體地，在步驟11中，主控板根據(jù)原位雜交實驗程序中各種清洗液體的用量要求控制蠕動泵在泵取每種液體時的次數(shù)和速度。例如在核酸原位雜交實驗中，有10種清洗液體，主控板控制蠕動泵在不同的階段以需要的次數(shù)和速度分別泵取這10種清洗液體，對胚胎進行清洗操作。
[0026]在清洗液體注入雜交盒后，為了實現(xiàn)更好的清洗效果，在步驟12中，主控板控制雜交盒進行搖動。這可以通過主控板控制原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置搖動來實現(xiàn)。在原位雜交系統(tǒng)中，雜交盒被置于搖床裝置上，當主控板控制搖床裝置搖動時，雜交盒也隨之搖動，以使胚胎與清洗液體充分接觸，實現(xiàn)更好的清洗效果。主控板根據(jù)原位雜交實驗程序，可以通過控制搖床裝置搖動的幅度和頻率來使得雜交盒搖動。
[0027]胚胎在雜交盒中被清洗之后，在步驟13中，主控板控制蠕動泵將雜交盒中的廢液排出到廢液罐中。當完成所有的清洗操作后，在步驟14中，主控板根據(jù)原位雜交實驗程序通過控制原位雜交系統(tǒng)中溫控裝置的操作來控制雜交盒中的溫度，給胚胎提供合適的孵育條件。在原位雜交系統(tǒng)中，溫控裝置緊貼搖床裝置的底部放置，通過搖床裝置控制雜交盒內的溫度。因此，搖床裝置采用可傳遞熱量的材料制成，如鋁合金。這樣，當溫控裝置需要使雜交盒增加或降低溫度時，直接通過搖床裝置進行熱傳導就可以實現(xiàn)。這樣，主控板控制溫控裝置通過搖床裝置進行熱傳導來控制雜交盒的溫度。
[0028]根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法在步驟11之前還可以包括通過主控板上的通信接口模塊將實驗所用的原位雜交實驗程序下載到主控板上，從而主控板可以根據(jù)其上存儲的原位雜交實驗程序控制蠕動泵的泵取、搖床裝置的搖動以及溫控裝置的操作。
[0029]此外，為了實現(xiàn)更好的清洗效果，往往在原位雜交實驗中，需要使用多種清洗液體對胚胎進行多次清洗。這樣，就需要重復上述步驟11、12、13，直至使用多種清洗液體對胚胎完成所有清洗操作為止。例如，在核酸原位雜交實驗中，需要使用10中清洗液體分別對胚胎進行清洗，這樣，就需要重復10次步驟11-13。
[0030]此外，在步驟11中，為了使得清洗液體在蠕動泵的作用下按需要進入雜交盒，主控板還需要根據(jù)原位雜交實驗程序來控制插入在所述清洗液體罐中的導管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。當主控板根據(jù)雜交實驗程序判斷需要選取一種清洗液體清洗胚胎時，就控制連接所需清洗液體的導管上的閥門開啟，連接其他清洗液體的導管上的閥門以及連接廢液槽的導管上的閥門閉合。這樣所選取的清洗液體就可以通過開啟的閥門在蠕動泵的作用下進入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中。當然，根據(jù)雜交試驗程序的需要,主控板也可以控制連接多種清洗液體的導管上的多個閥門同時開啟，以同時將該多種清洗液體注入原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中。
[0031]并且，在步驟13中，當主控板根據(jù)雜交實驗的程序判斷需要從原位雜交系統(tǒng)的雜交盒的換液槽中排出廢液時，就控制連接廢液槽的導管上的閥門開啟，連接所有清洗液體的導管上的閥門都閉合。這樣換液槽中的廢液就在蠕動泵的作用下通過那個開啟的閥門進入廢液槽。
[0032]此外，在根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法中，操作者可以通過鍵盤和與該鍵盤進行通信的主控板上的鍵盤接口模塊，來調整主控板上的原位雜交實驗程序，從而使得原位雜交實驗能夠按照操作者的需要進行。需要說明的是，操作者對原位雜交實驗程序的調整可以在上述步驟11-14中的任何一個步驟之前或之中進行。
[0033]此外，根據(jù)本發(fā)明的原位雜交方法還包括在主控板上顯示原位雜交實驗的當前狀態(tài)。其中主控板包括LCD顯示模塊，主控板根據(jù)原位雜交實驗程序以及其對原位雜交實驗進程的控制，在LCD顯示模塊上顯示原位雜交實現(xiàn)的當前狀態(tài)，例如當前的閥門開啟和閉合狀態(tài)、當前蠕動泵工作狀態(tài)、當前搖床裝置工作狀態(tài)，以及當前的實驗溫度。
[0034]需要說明是，上述原位雜交方法中的步驟的具體操作可以均包括在原位雜交方法中，以構成一個整體的方法進行原位雜交實驗。
[0035]采用本發(fā)明的自動核酸原位雜交方法，通過主控板對清洗液體導管上的閥門以及廢液導管上的閥門的控制，自動實現(xiàn)不同清洗液體的選擇；通過主控板對蠕動泵的控制，可以精密控制各種清洗液體的精確用量；通過主控板對溫控裝置的控制，可以自動設定精確的反應溫度；以及通過主控板對搖床裝置的控制，可以使清洗液體與胚胎充分接觸，實現(xiàn)徹底地清洗。
[0036]以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案而非限制，僅僅參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本發(fā)明的權利要求范圍當中。
【權利要求】
1.一種原位雜交方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (^)原位雜交系統(tǒng)中的主控板根據(jù)原位雜交實驗程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的蠕動泵從所述原位雜交系統(tǒng)中的清洗液體罐中將選取的清洗液體泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒； (^)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述原位雜交系統(tǒng)中的雜交盒的搖動； (0)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述蠕動泵將所述雜交盒中的廢液泵入所述原位雜交系統(tǒng)中的廢液罐中； ((1)所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序控制所述雜交盒中的溫度。
2.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟仏)之前還包括: 所述主控板通過其上的通信接口模塊將所述原位雜交實驗程序下載到所述主控板上。
3.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法重復執(zhí)行所述步驟-((:),直至所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序完成對胚胎的所有清洗操作。
4.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟仏)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制插入在所述清洗液體罐中的導管上的閥門的開啟與閉合來將選取的清洗液體泵入所述雜交盒中。
5.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在所述步驟$)中包括: 所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過所述原位雜交系統(tǒng)中搖床裝置控制所述雜交盒的搖動。
6.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在步驟化)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制插入在所述廢液罐中的導管上的閥門的開啟與閉合來將所述雜交盒中的廢液泵入所述廢液罐中。
7.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法在步驟((1)中包括:所述主控板根據(jù)所述原位雜交實驗程序通過控制所述原位雜交系統(tǒng)中的溫控裝置來控制所述雜交盒中的溫度。
8.如權利要求7所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述主控板控制所述溫控裝置通過所述原位雜交系統(tǒng)中的搖床裝置進行熱傳導來控制所述雜交盒中的溫度。
9.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法還包括:操作者通過所述主控板調整所述原位雜交實驗程序。
10.如權利要求1所述的系統(tǒng)，其特征在于，所述方法還包括:所述主控板顯示原位雜交實驗的當前狀態(tài)。
【文檔編號】C12Q1/68GK104450873SQ201310549114
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年11月8日 優(yōu)先權日:2013年11月8日
【發(fā)明者】劉劍勤 申請人:直方隆生物科技(北京)有限公司