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一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法

文檔序號(hào):524089閱讀:419來(lái)源:國(guó)知局
一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法
【專利摘要】本發(fā)明公布了一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法,包括以下步驟:(1)采集待鑒別的羅非魚(yú)樣品,提取基因組DNA;(2)用步驟(1)獲得的基因組DNA為模板,選用9對(duì)微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增;(3)對(duì)步驟(2)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè);(4)將電泳結(jié)果進(jìn)行數(shù)字化處理,用遺傳分析軟件進(jìn)行分析,獲得每個(gè)個(gè)體之間的遺傳距離,進(jìn)行聚類分析,根據(jù)個(gè)體聚類結(jié)果,進(jìn)行親子關(guān)系鑒定。本發(fā)明可以快速準(zhǔn)確地對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行親子鑒定,區(qū)分不同家系,在羅非魚(yú)家系選育中有很大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】—種羅非魚(yú)親子鑒定的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于魚(yú)類分子標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】,涉及一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羅非魚(yú)(Tilapia)原產(chǎn)于非洲,該魚(yú)上世紀(jì)50年代引入我國(guó),得到了較快發(fā)展,現(xiàn)在我國(guó)已是世界上最大的羅非魚(yú)生產(chǎn)國(guó)和出口國(guó)。目前,家系選育是廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)育種中的一個(gè)方法。選一對(duì)親本配組繁殖,得到的后代就是一個(gè)家系,用這種方法構(gòu)建多個(gè)家系,再通過(guò)養(yǎng)殖對(duì)比試驗(yàn),分析各家系的生長(zhǎng)、性別比例、抗逆等性狀。由于羅非魚(yú)性腺發(fā)育不同步,一對(duì)一配組繁殖獲得家系成功率較低,因此常用多尾親本如I雄多雌或多雄I雌的方法來(lái)提高構(gòu)建家系的成功率,這就需要對(duì)后代進(jìn)行親子鑒定來(lái)確定它們的父本和母本。另外,在養(yǎng)殖對(duì)比試驗(yàn)中,為減少環(huán)境的影響,常常將不同家系的魚(yú)放在同一池塘中養(yǎng)殖,這樣也需要進(jìn)行親子鑒定來(lái)區(qū)別不同的家系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法,有助于快速、準(zhǔn)確對(duì)羅非魚(yú)進(jìn)行親子鑒定和家系區(qū)分。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0005]一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法,包括以下步驟:
[0006](I)采集待鑒別的羅非魚(yú)的血液、鰭條或其他組織樣品,采用DNA提取法提取基因組 DNA ;
[0007](2)用步驟(1)獲得的基因組DNA為模板,選用9個(gè)微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR
[0008]擴(kuò)增,這9對(duì)特異微衛(wèi)星引物名稱和序列列表如下;
【權(quán)利要求】
1.一種羅非魚(yú)親子鑒定的方法,其特征在于包括以下步驟: (1)采集待鑒別的羅非魚(yú)樣品的血樣或鰭條,提取基因組DNA; (2)用步驟(1)獲得的基因組DNA為模板,選用9個(gè)微衛(wèi)星引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,這9對(duì)特異微衛(wèi)星引物名稱和序列列表如下:正向引物DNA序列~反向引物DNA序列~退火溫
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述步驟(2)中,在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),PCR反應(yīng)總體積為10 μ L,其中含IOX反應(yīng)緩沖液1.0μ L,Mg2+2mmol/L,dNTP200ymol/L,上下游引物各0.2 μ mol/L, Taq酶0.3U, DNA50ng~80ng,用滅菌雙蒸懼水補(bǔ)足體積。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,PCR反應(yīng)條件為:94°C3min ;94°C 20s,退火 20s,72°C 20s, 25 ~30 個(gè)循環(huán);72°C延伸 5min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(4)中,使用的遺傳分析軟件為populations 軟件和 MEGA3.1 軟件。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103555847SQ201310549480
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】李建林, 俞菊華, 唐永凱, 李紅霞, 徐跑 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
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