一種用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基。采用的技術(shù)方案是：培養(yǎng)基由NaCl、K2HPO4、MgSO4·7H2O、Ca(NO3)2、檸檬酸、FeCl3、檸檬酸三銨、EDTANa2、Na2CO3、A5儲備液和水組成。采用本發(fā)明的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，不僅縮短培養(yǎng)時間，且培養(yǎng)過程中藻液不會變黃，所培養(yǎng)的銅綠微囊藻到達(dá)生長穩(wěn)定期時的藻細(xì)胞數(shù)可達(dá)9×106個/mL。
【專利說明】—種用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosd)的培養(yǎng)方法,包括銅綠微囊藻培養(yǎng)基改良和培養(yǎng)條件優(yōu)化。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著工業(yè)、農(nóng)業(yè)的迅速發(fā)展，向環(huán)境中排放的營養(yǎng)物質(zhì)日趨增多，水體的富營養(yǎng)化現(xiàn)象日益加劇，由此造成的有害藻類水華爆發(fā)也日趨頻繁，不僅破壞了水域生態(tài)系統(tǒng)的平衡,在水體中占主導(dǎo)地位的藻類,如微囊藻(Microcystis)等還會產(chǎn)生大量藻毒素等代謝產(chǎn)物對公眾健康、牲畜和水源供給帶來負(fù)面影響。有害藻類水華在我國及世界范圍的爆發(fā)頻率有逐年增加的趨勢。
[0003]為了探索行之有效的抑制藻類水華暴發(fā)的途徑，更好的了解藻類水華爆發(fā)的自然條件，就需要進(jìn)行大量的實驗室模擬培養(yǎng)。但是作為水華爆發(fā)的主要藻類，微囊藻的實驗室純培養(yǎng)比較困難，特別是現(xiàn)有的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件很難達(dá)到實驗室純培養(yǎng)銅綠微囊藻的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決銅綠微囊藻實驗室純培 養(yǎng)較困難的問題，本發(fā)明提供一種利于銅綠微囊藻生長的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基，其組成如下:
NaCl 1.0-1.5 g/L、K2HPO4 0.02-0.06 g/L、MgSO4.7H20 0.05-0.1 g/L、 Ca(NO3) 2 0.05-0.1 g/L、檸檬酸 0.004-0.008 g/L、FeCl3 0.004-0.008 g/L、 檸檬酸三銨 0.003-0.008 g/L、EDTANa2 0.001-0.003 g/L、Na2CO3 0.01-0.03g/L、 A5儲備液l-2mL/L、水余量。
[0006]優(yōu)選的，培養(yǎng)基的組成如下:
NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、
Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、
檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、
A5儲備液 lmL/L、水余量。
[0007]所述的A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2-3 g/L、MnSO4 1-2 g/L、ZnS04.7H20
0.1-0.3g/L,NaMoO4.2Η20 0.1-0.5 g/L,CuSO4.5Η20 0.05-0.lg/L、水余量，pH值7.2~7.4。
[0008]優(yōu)選的，A5儲備液的組成如下=H3BO3 2.86g/L、MnSO4 1.59g/L、ZnS04.7H20
0.22g/L、NaMoO4.2H20 0.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
[0009]一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法如下:將上述的培養(yǎng)基經(jīng)120-125°C滅菌20_30min，室溫冷卻后，將銅綠微囊藻按2-7%的體積比接種于培養(yǎng)基中，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖晃2-3次，設(shè)置光照培養(yǎng)箱的光照強(qiáng)度為10001x~15001x，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養(yǎng)溫度為30°C，暗室為25°C。[0010]本發(fā)明的有益效果是:采用本發(fā)明的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，不僅縮短培養(yǎng)時間，且培養(yǎng)過程中藻液不會變黃，所培養(yǎng)的銅綠微囊藻到達(dá)生長穩(wěn)定期時的藻細(xì)胞數(shù)可達(dá)9 X IO6個/ml。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1是銅綠微囊藻生長曲線。
【具體實施方式】
[0012]實施例1 一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法 (一)用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基
1.A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2.86g/L，MnSO4 1.59g/L，ZnS04.7H20 0.22g/L，NaMoO4.2H20 0.39g/L, CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
[0013]方法:按上述的配比，量取H3BO3, MnSO4, ZnS04.7H20, NaMoO4.2H20 和 CuSO4.5H20,用水定溶至I升，pH值7.2^7.4。
[0014]2.培養(yǎng)基的組成如下:
NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、
Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、
檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO3 0.02g/L、
A5儲備液 lmL/L、水余量。
[0015]方法:按上述的配比，量取NaCl、K2HP04、MgSO4.7H20、Ca(NO3) 2、檸檬酸、FeCl3、檸檬酸三銨、EDTANa2、Na2CO3和A5儲備液，用水定溶至I升。
[0016](二)銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法
將上述的培養(yǎng)基經(jīng)120-125°C滅菌20-30min，培養(yǎng)基冷卻到室溫后，將銅綠微囊藻按5%的體積比接種于裝有培養(yǎng)基的三角瓶中，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖晃2-3次。設(shè)置光照培養(yǎng)箱的光照強(qiáng)度為1000Ix~15001X，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養(yǎng)溫度為30°C，暗室為25°C。
[0017](三)培養(yǎng)結(jié)果
每天在無菌條件下，取藻液，用血球計數(shù)板在顯微鏡下觀察計數(shù)，計算藻細(xì)胞密度，繪制生長曲線，結(jié)果見圖1。
[0018]從圖1可以看出，(T3d為銅綠微囊藻生長的延滯期，3~lld為對數(shù)生長期，11~15d為穩(wěn)定期，15d之后逐漸進(jìn)入衰亡期。達(dá)到穩(wěn)定期時藻細(xì)胞數(shù)為9.03X IO6個/mL。
【權(quán)利要求】
1.一種用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組成如下: NaCl 1.0-1.5 g/L、K2HPO4 0.02-0.06 g/L, MgSO4.7H20 0.05-0.1 g/L、 Ca(NO3) 2 0.05-0.1 g/L、檸檬酸 0.004-0.008 g/L、FeCl3 0.004-0.008 g/L、 檸檬酸三銨 0.003-0.008 g/L、EDTANa2 0.001-0.003 g/L、Na2CO3 0.01-0.03g/L、 A5儲備液 l-2mL/L、水余量； 所述的 A5 儲備液的組成如下=H3BO3 2-3 g/L、MnSO4 1-2 g/L、ZnS04.7H20 0.1-0.3g/L、NaMoO4.2H20 0.1-0.5 g/L、CuSO4.5H20 0.05-0.lg/L、水余量，pH 值 7.2~?.4。
2.如權(quán)利要求1所述的用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基，其特征在于培養(yǎng)基的組成如下: NaCl1.024g/L、K2HPO4 0.04g/L、MgSO4.7H20 0.075g/L、 Ca(NO3) 2 0.077g/L、檸檬酸 0.006g/L、FeCl30.006g/L、 檸檬酸三銨 0.005g/L、EDTANa2 0.001g/L、Na2CO30.02g/L、 A5儲備液 lmL/L、水余量。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用于銅綠微囊藻的培養(yǎng)基，其特征在于:所述的A5儲備液的組成如下:H3BO3 2.86g/L、MnSO4 1.59g/L、ZnS04.7H20 0.22g/L、NaMoO4.2H20 0.39g/L、CuSO4.5H20 0.08g/L、水余量，pH 值 7.2~7.4。
4.一種銅綠微囊藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:將權(quán)利要求1、2或3所述的培養(yǎng)基經(jīng)120-125°C滅菌20-30min，室溫冷卻后，將銅綠微囊藻按2_7%的體積比接種于培養(yǎng)基中，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天搖晃2-3次，設(shè)置光照培養(yǎng)箱的光照強(qiáng)度為10001x~15001x，暖光，光暗比為14h:10h，光室培養(yǎng)溫`度為30°C，暗室為25°C。
【文檔編號】C12N1/20GK103555635SQ201310557730
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】付保榮, 張潤潔, 郭鑫, 楊玉東, 付豪, 魯男 申請人:遼寧大學(xué)