狹顱田鼠dna序列的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了狹顱田鼠DNA序列。本發(fā)明為了提供一種快速鑒定狹顱田鼠的方法，通過(guò)形態(tài)特征的鑒定方法對(duì)該鼠種進(jìn)行了鑒定，并獲取了該種的COI基因序列。本發(fā)明還提供一種用于檢測(cè)狹顱田鼠的DNA標(biāo)準(zhǔn)基因、其引物及其試劑盒。本發(fā)明采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定與分子分類方法相結(jié)合，對(duì)所述狹顱田鼠進(jìn)行鑒定，可確保物種鑒定的準(zhǔn)確性和可靠性。
【專利說(shuō)明】狹顱田鼠DNA序列
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及狹顱田鼠種類分子鑒定，具體涉及狹顱田鼠DNA序列。
【背景技術(shù)】
[0002]狹盧頁(yè)田鼠(Microtus gregalis)隸屬于倉(cāng)鼠科(Cricetidae),田鼠屬(Microtus)。狹顱田鼠多數(shù)為小型鼠類，棲息于草原地區(qū)，群居；國(guó)外分布于俄羅斯、蒙古；國(guó)內(nèi)分布于新疆、內(nèi)蒙古、河北、山西等地。狹顱田鼠數(shù)量多時(shí)可危害草原，降低草地產(chǎn)量。狹顱田鼠可傳播鼠疫、土拉倫斯病及蜱性斑疹傷寒等疾病。
[0003]長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)鼠類的鑒定主要依靠形態(tài)學(xué)特征來(lái)實(shí)現(xiàn)，但近幾年，隨著DNA測(cè)序等技術(shù)的進(jìn)步，人們陸續(xù)采用分子生物學(xué)方法對(duì)鼠類的DNA進(jìn)行研究，以期建立新的分類方法，與傳統(tǒng)分類方法相互作證。
[0004]線粒體COI基因是鼠類鑒定研究中應(yīng)用最為廣泛的分子標(biāo)記，就目前而言，鼠類分子鑒定研究在國(guó)內(nèi)研究較少，本發(fā)明意在提供一種快速鑒定狹顱田鼠的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供狹顱田鼠的DNA序列。狹顱田鼠DNA序列的獲得，可為該種的快速鑒定提供科學(xué)依據(jù)。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0007]通過(guò)試劑盒提取滿洲里地區(qū)的狹顱田鼠的DNA序列，然后由合成的引物擴(kuò)增該狹顱田鼠的COI基因，PCR產(chǎn)物序列送由專業(yè)生物公司測(cè)定。測(cè)序結(jié)果通過(guò)手工校對(duì)，并用Mega4.0軟件進(jìn)行相似性分析，確保所得序列為目標(biāo)序列。所述狹顱田鼠的COI基因序列如SEQ ID No:1 所示。
[0008]本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)狹顱田鼠的DNA標(biāo)準(zhǔn)基因，其特征在于該基因?yàn)镃OI基因，具有如SEQ ID NO:1所不的基因序列。
[0009]本發(fā)明還提供一種檢測(cè)狹顱田鼠的DNA標(biāo)準(zhǔn)基因的引物，其特征在于該引物序列為:
[0010]正向引物5 ’ ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3 ’ ；
[0011]反向引物5 ’ CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3 ’。
[0012]本發(fā)明還提供一種用于檢測(cè)狹顱田鼠的試劑盒，其特征在于包括上述的引物。
[0013]本發(fā)明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，包括:
[0014]1)從待測(cè)的鼠類肝臟中分離提取DNA ；
[0015]2)以該DNA為模板，采用上述引物進(jìn)行擴(kuò)增；
[0016]3)鑒定擴(kuò)增所得序列，如果該序列與SEQ ID NO:1的同源性在98%以上，即可判斷所測(cè)田鼠為狹顱田鼠。
[0017]本發(fā)明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中步驟2)中:
[0018]采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增模板。[0019]本發(fā)明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中步驟3)中:
[0020]所述鑒定包括取適量步驟2)擴(kuò)增出的產(chǎn)物用瓊脂糖電泳分離，經(jīng)染色劑Goldview染色后于凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小判定結(jié)果，如果能特異性擴(kuò)增出720bp左右的條帶，則進(jìn)行測(cè)序分析。
[0021]本發(fā)明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中擴(kuò)增體系為:
[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)狹顱田鼠的DNA標(biāo)準(zhǔn)基因，其特征在于該基因?yàn)镃OI基因，具有如SEQID NO:1所不的基因序列。
2.一種檢測(cè)權(quán)利要求1所述基因的引物，其特征在于該引物序列為: 正向引物 5’ ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’ ； 反向引物 5’ CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3’。
3.一種用于檢測(cè)狹顱田鼠的試劑盒，其特征在于包括權(quán)利要求2所述的引物。
4.狹顱田鼠的分子鑒定方法，包括: O從待測(cè)的鼠類肝臟中分離提取DNA ； 2)以該DNA為模板，采用權(quán)利要求2所述引物進(jìn)行擴(kuò)增； 3)鑒定擴(kuò)增所得序列，如果該序列與SEQID NO:1的同源性在98%以上，即可判斷所測(cè)田鼠為狹頡田鼠。
5.權(quán)利要求4所述的分子鑒定方法，其中步驟2)中: 采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增模板。
6.權(quán)利要求4或5所述的分子鑒定方法，其中步驟3)中: 所述鑒定包括取適量步驟2)擴(kuò)增出的產(chǎn)物用瓊脂糖電泳分離，經(jīng)染色劑Goldview染色后于凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)，根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小判定結(jié)果，如果能特異性擴(kuò)增出720bp左右的條帶，則進(jìn)行測(cè)序分析。
7.權(quán)利要求4或5所述的分子鑒定方法，其中擴(kuò)增體系為:
模板3-4,uL
正向引物 2pL
反向引物 2pL
Premix25μΙ.ddH O17-18μ[。
8.權(quán)利要求4或5所述的分子鑒定方法，其中擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)? 預(yù)變性94°C 5min，35個(gè)循環(huán)，其中變性94°C 30s、退火55°C 40s、延伸72°C 60s，最后延伸 72°C IOmin0
9.權(quán)利要求6所述的分子鑒定方法，其中: 取5μ L PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用1%瓊脂糖凝膠電泳，130V電壓，電泳35min，染色劑Goldview染色，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)。
10.一種快速鑒定狹顱田鼠的方法，其特征在于: 采用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定與權(quán)利要求4-9任一項(xiàng)所述的分子鑒定方法相結(jié)合。
【文檔編號(hào)】C12N15/11GK103695546SQ201310701606
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】張曉龍, 姚李四, 慈穎, 喬舜, 王海玲, 房健慧, 田麗, 魏懷波 申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院