一株羊肚菌菌株及其培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一株羊肚菌菌株及其培養(yǎng)方法。該羊肚菌（Mochella?esculenta）M-02#菌株CGMCC?No.7058的培養(yǎng)方法是將其菌絲體接種到盛有改良PDA培養(yǎng)基的試管培養(yǎng)基斜面上，于18-24℃下培養(yǎng)5-7d，獲得試管菌種，接種到盛有液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于20-26℃下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120-160r/min，培養(yǎng)時間5-7d，獲得一級液體菌種，再接種到發(fā)酵罐中，通氣培養(yǎng)72-96h，即獲得所述菌株的液體菌種。該菌株的菌絲體生物量高可達(dá)25g/kg、菌核生成能力強(qiáng)、抗污染、培養(yǎng)污染率低≤2%、液體發(fā)酵時間短72-96h，為羊肚菌野生資源保護(hù)促繁提供了優(yōu)良菌種。
【專利說明】一株羊肚菌菌株及其培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種新的羊肚菌菌株及其培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肚菌屬(Morchella)真菌，是世界著名的名貴野生食用菌，羊肚菌(M.esuclenta(L.)Pers.)是云南產(chǎn)羊肚菌屬真菌的主要種類之一,分布較為廣泛,在金沙江流域大量發(fā)生。目前羊肚菌屬真菌的人工栽培由于產(chǎn)量不穩(wěn)定，尚不能形成商業(yè)化和規(guī)模化，市場上的羊肚菌大多來自野生。近年來受氣候條件惡化和過度采集等不良因素的影響，野生羊肚菌自然產(chǎn)量大幅下降。研究表明，在羊肚菌原生境，采用人工菌種和配套的技術(shù)措施，能夠有效地提高單位面積內(nèi)羊肚菌的產(chǎn)量。[0003]在羊肚菌原生境促繁技術(shù)中，優(yōu)良菌種的獲得是關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。目前國內(nèi)大多采用固體制種技術(shù)，而很少使用液體發(fā)酵。對于固體制種技術(shù)而言，液體發(fā)酵技術(shù)具有具有菌絲生長良好、菌球均勻、較少污染、培養(yǎng)基利用充分的優(yōu)點。本專利采用液體發(fā)酵技術(shù)制作優(yōu)良的液體菌種，對后期仿生學(xué)促繁和人工栽培提供保障。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)羊肚菌的菌絲體生物量較低、菌核生成能力較弱、菌絲生長不均勻、污染率高、培養(yǎng)基利用不充分等不足。其目的是提供一種具有產(chǎn)量高、菌核生成能力強(qiáng)、抗污染的新的優(yōu)良羊肚菌菌株及其培養(yǎng)方法，為羊肚菌野生資源保護(hù)促繁提供優(yōu)良菌種。
[0005]為解決上述技術(shù)問題和達(dá)到本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]1.一株羊肚菌(Mochella esculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058。
[0007]2.羊肚菌(Mochella esculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 液體菌種的培養(yǎng)方法，其步驟如下:
[0008](I)將羊肚菌(Mochella esculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于18_24°C下培養(yǎng)5-7d，獲得試管菌種，所述的試管瓊脂培養(yǎng)基為改良PDA培養(yǎng)基，其配方為馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO40.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)；
[0009](2)將試管菌種接種到盛有200mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于20_26°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120-160r/min，培養(yǎng)時間5_7d，獲得一級液體菌種，所述的液體培養(yǎng)基配方為:5-10%麩皮、0.5-1%黃豆粉、0.5-1%麥芽糖、1-2%可溶性淀粉，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)；
[0010](3)將獲得的一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣比為1:0.8，攪拌轉(zhuǎn)速為120-160r/min,接種量為5-10%質(zhì)量分?jǐn)?shù)，罐壓:0.04Mpa ；pH為7.2-7.5 ；溫度為22-26°C ;通氣培養(yǎng)72-96h，即獲得羊肚菌(Mochella esculenta) M_02#菌株CGMCCN0.7058液體菌種。[0011 ] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:一是菌絲體生物量高，可達(dá)25g/kg，而固體菌包菌絲體生物量大約在5-12g/kg ;二是菌核生成能力強(qiáng)，在直徑IOcm的平板上金黃色菌核顆粒多或覆蓋面積大，菌核顆?？蛇_(dá)50粒，單顆粒直徑可達(dá)Icm ;三是抗污染、培養(yǎng)污染率低，(2%。同時采用液體發(fā)酵法時間短，大約72-96h，而普通的固體包培養(yǎng)需要15d以上。
[0012]本發(fā)明利用云南原產(chǎn)地羊肚菌子實體篩選出優(yōu)良菌株，為羊肚菌野生資源保護(hù)促繁提供了優(yōu)良菌種。
[0013]本發(fā)明所提供的羊肚菌(Mochella esculenta) M_02#菌株CGMCC N0.705保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號；保藏日期:2013年01月11日；保藏號:CGMCC N0.7058。
[0014]序列表中SEQ ID NO:1所示的是實施例1中⑶ITS序列分析時對菌株進(jìn)行ITS序列擴(kuò)增所用的ITS4引物的堿基序列。
[0015]序列表中SEQ ID NO:2所示的是實施例1中⑶ITS序列分析時對菌株進(jìn)行ITS序列擴(kuò)增所用的ITS5引物的堿基序列。
【具體實施方式】
[0016]下述實施例 中使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0017]下述實施例中所用的材料、試劑等，均可從商業(yè)途徑得到。
[0018]以下實施例野生羊肚菌在云南省昭通市巧家縣蒙菇鄉(xiāng)新塘村甘蔗地內(nèi)采集(也是原始來源地)、其遺傳資源取自微生物；采集方法為徒手采集(自行采集)，采集時候注意保持子實體完整、無霉變、無病蟲害，采集時間:2012年11月(也是原始采集時間)。
[0019]實施例1
[0020]本發(fā)明所提供的一株羊肚菌(Mochellaesculenta)M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 的
獲得、鑒定和培養(yǎng)方法。
[0021]1.1 羊肚菌(Mochellaesculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 的獲得
[0022]⑴將采集的野生羊肚菌子實體內(nèi)壁組織塊接種到菌種分離純化培養(yǎng)基斜面上，于18°C下培養(yǎng)10d，對分離培養(yǎng)的試管每天觀察記錄，及時剔除已污染的試管，參見實施例4所述的方法通過菌絲體產(chǎn)量、菌核生成能力、抗污染力等性狀比對，挑選出菌絲體產(chǎn)量高、菌核生成能力強(qiáng)、抗污染、長勢良好的菌株即為獲得的羊肚菌分離試管種；所述的菌種分離純化培養(yǎng)基的配方為:馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO40.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)；
[0023]⑵將羊肚菌分離試管種菌絲塊接種到瓊脂培養(yǎng)基的平板培養(yǎng)皿上進(jìn)行菌種純化，培養(yǎng)條件為18-24°C避光，2d后取尖端菌絲塊接種在培養(yǎng)基斜面上，于18°C下培養(yǎng)7d，獲得羊肚菌純化試管種即為本發(fā)明所述的羊肚菌(Mochella esculenta) M_02#菌株CGMCCN0.7058 ;所述的平板培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基和所述的培養(yǎng)基斜面中的培養(yǎng)基配方法均為:馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO40.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0024]1.2鑒定及其特征、命名、保藏
[0025]⑴子實體特征
[0026]羊肚菌(Mochellaesculenta)M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 分離用子實體特征為:高6~14.5cm。菌蓋長4~6cm,寬4~6cm,不規(guī)則圓形、橢圓形,表面有許多凹坑，似羊肚狀，淡黃褐色或淺黃色。菌柄長5~7cm，粗2~2.5cm,白色,有淺縱溝，基部稍膨大。子囊(200~300) UmX (18~22) ;子囊孢子8個，單行排列，寬橢圓形，(20~24)UmX (12~15) Pm。側(cè)絲頂部膨大，有時有隔。形態(tài)鑒定參考《中國大型真菌》(卯曉嵐.鄭州:河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000.)和《中國大型真菌原色圖鑒》(黃年來.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1998.)。
[0027]⑵羊肚菌(Mochellaesculenta) M-O2#菌株純化試管種特征
[0028]接種后，在培養(yǎng)溫度為22°C的條件下，8h就開始萌發(fā)，生長初期菌絲緊貼培養(yǎng)基，無色，有光澤，一般為較粗的不分支或分支較少的菌絲；第一天長速最快為1.3cm,最慢為0.8cm，而后隨菌落的增大，有叉狀或樹枝狀分支，一般較細(xì)，前兩天無菌核與色素產(chǎn)生，第三天生長最快，平均長速為1.65cm/d,并開始有色素產(chǎn)生，第四天到第五天長滿整個培養(yǎng)皿，第六天開始有菌核形成，隨著色素的產(chǎn)生，菌絲開始老化、衰弱，顏色開始變深。
[0029]菌核在第五天開始形成，分布在接種圈的周圍，較少，直徑平均為0.5~1.0mm，色淺。有些種為條狀，堅硬，有些光滑，有些粗糙。挑取，置于載玻片上，敲擊壓碎，鏡下觀察，可見菌核是由多條菌絲扭曲纏繞在一起而形成的；到第八天整個菌落上菌核均勻分布，直徑0.8~3.2mm之間，色深。挑取，于載玻片上壓碎著色，鏡下觀察，已分不清菌絲間的交織，可見到外壁加厚，為一層殼狀物質(zhì)， 中間為可被深染的有濃厚的營養(yǎng)物質(zhì)的紡錘形細(xì)胞。避光條件下易形成菌核，且密度大。
[0030](3) ITS序列分析
[0031]采用供試野生羊肚菌子實體與實施例1獲得的對應(yīng)的羊肚菌純化試管種菌絲，分別按CTAB法提取總DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增及ITS序列測定，通過Blast對比樣品的ITS序列與NCBI 中的羊肚菌(M.esculenta) Identities=I 114/1138 (97.89%), Gaps=24/1138 (2.10%)，分析確定實施例1分離得到的羊肚菌純化試管種即新的羊肚菌菌株為羊肚菌菌絲體。其具體方法如下:
[0032]改良CTAB法流程
[0033]i稱取0.12g左右的干燥樣品，加入液氮并迅速研磨至粉狀后，迅速加A -CTAB500 u I, (6-巰基乙醇20 U 1，再加+CTAB (65°C預(yù)熱)700 U 1，混勻后置65°C水浴振蕩抽提60min ；
[0034]ii冷卻，12000r離心IOmin,取上清液,加入700 U I等體積的苯酹/氯仿(1:1),混勻后12000r離心IOmin ；
[0035]iii取上清，加入700 u I氯仿/異戊醇，混勻，12000r離心IOmin ；
[0036]iv取上清，先加入80 u 110%CTAB+4%NaCl溶液(65°C預(yù)熱)，再加入700 U I氯仿/異戍醇，混勻，12000r離心IOmin ；
[0037]V取上清,加入600 U I異丙醇，_18°C下放置過夜；
[0038]vi取出，12000r離心IOmin,棄上清液,沉淀依次用600 ii 176%乙醇、0.2mol/L乙酸鈉及300 u 170%乙醇進(jìn)行洗滌；
[0039]vii 8000r離心5min,用濾紙濾干離心管,45°C下真空干燥5min,加入100 ii I TE緩沖液溶解，4°C冰箱保存。
[0040]DNA純度及濃度檢測[0041]取2 ill DNA樣品，用TE緩沖液定容至50 iil，用紫外分光光度計測定波長在230nm、260nm、280nm 處的 OD 值，根據(jù) 260nm 處的 OD 值計算 DNA 濃度，根據(jù) 260/280、260/230值確定DNA的純度。
[0042]DNA分子量檢測
[0043]取DNA樣品5iU，上樣緩沖液(含0.25%溴酚藍(lán)，40%蔗糖)2iU，混勻，點入含0.75 u I核酸染料的0.8%瓊脂糖凝膠中，同時點入\ -Lambda mix marker作為標(biāo)記,用IXTAE緩沖液，在80V電壓下電泳80min，最后在凝膠成像儀下觀察并照相。
[0044]ITS-PCR 擴(kuò)增
[0045]ITS序列擴(kuò)增引物
[0046]采用White設(shè)計的ITS通用引物ITS4/ITS5對供試材料的rDNA ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其ITS引物如下:
[0047]ITS4:5’ 一TCCTCCGCTTAITGATATGC— 3’(即序列表中 SEQ ID NO:1 所示的堿基序列)
[0048]ITS5:5’ 一GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG— 3’(即序列表中 SEQ ID NO:2 所示的堿基序列)
[0049]ITS-PCR 擴(kuò)增體系
[0050]ITS-PCR 擴(kuò)增體系為 50 ii L，含 rTaq (5U/ U L)0.5u L, IOX PCR Buffer6.25 U L,Mgcl2 (25mmol/L) 5.0 u L, dNTP 混合物(各 2.5mmol/L)0.75 u L, ITS4/ITS5 引物(lOumol/L)各 2.5 ii L，模板 DNA (50ng/ u L)2.5u L, ddH20 補(bǔ)足至總體積 50 u L。
[0051]PCR擴(kuò)增在GE9700PCR儀上進(jìn)行。反應(yīng)程序為:94°C預(yù)變性5min ;94°C變性40s ；52°C退火45s ;72°C延伸Imin ;共40個循環(huán)；最后于72°C補(bǔ)平lOmin，終止溫度為4°C。采用1.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測ITS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄電泳譜帶。
[0052]ITS擴(kuò)增產(chǎn)物的序列測定
[0053]PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后，用膠回收試劑盒進(jìn)行回收和純化，樣品送測序公司測序。
[0054]ITS序列分析
[0055]將擴(kuò)增得到的各試驗樣品的ITS序列，采用ContigExpress軟件進(jìn)行正反鏈序列拼接，將拼接好的序列保存為FASTA格式，然后在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行序列同源性比較。將拼接好的ITS序列采用ClustalXl.83軟件和BioEdit軟件進(jìn)行序列比對。比對結(jié)果采用Mega3.0軟件進(jìn)行序列組成分析，采用非加權(quán)配對算數(shù)平均法(UPGMA)構(gòu)建系統(tǒng)樹，并用BootstraplOOO次檢驗分子系統(tǒng)樹各分支的置信度。
[0056](4)保藏
[0057]保藏:本發(fā)明所述的羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號；保藏日期:2013年01月11日；保藏登記入冊的編號(保藏號)=CGMCC N0.7058。
[0058]1.3培養(yǎng)方法
[0059]⑴將羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于18°C下培養(yǎng)6d，獲得試管菌種，所述的試管瓊脂培養(yǎng)基的配方為改良PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO40.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0060]⑵將試管菌種接種到盛有200mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于20°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120r/min，培養(yǎng)時間7d，獲得一級液體菌種，所述的液體培養(yǎng)基配方為:6%麩皮、0.5%黃豆粉、0.5%麥芽糖、1%可溶性淀粉，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0061]⑶將獲得的一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣比為1:
0.8，攪拌轉(zhuǎn)速為120r/min，接種量為5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)，罐壓:0.04Mpa, pH為7.2，溫度為22。。，通氣培養(yǎng)72h，即獲得所述的羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058液體菌種。
[0062]實施例2
[0063]實施例2 是對羊肚菌(Mochella esculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 的培養(yǎng)方法，其培養(yǎng)方法除以下措施不同外，其余措施與實施例1中1.3培養(yǎng)方法相同，其羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的獲得、鑒定、保藏方法與實施例1等同。
[0064]2.1培養(yǎng)方法
[0065]⑴將羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于20°C下培養(yǎng)7d，獲得試管菌種。
[0066]⑵將試管菌種接種到盛有200mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于20°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為130r/ min，培養(yǎng)時間9d，獲得一級液體菌種，所述的液體培養(yǎng)基配方為:7%麩皮、
0.5%黃豆粉、0.5%麥芽糖、1%可溶性淀粉，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0067]⑶將獲得一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣比為1:0.8，攪拌轉(zhuǎn)速為140r/min，接種量為7% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))，罐壓:0.04Mpa，pH為7.4，溫度為24°C，通氣培養(yǎng)84h，即獲得所述的羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058液體菌種。
[0068]實施例3
[0069]實施例3 是對羊肚菌(Mochella esculenta) M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 的培養(yǎng)方法，其培養(yǎng)方法除以下措施不同外，其余措施與實施例1中1.3培養(yǎng)方法相同，其羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的獲得、鑒定、保藏方法與實施例1等同。
[0070]3.1培養(yǎng)方法
[0071]⑴將羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于24°C下培養(yǎng)5d，獲得試管菌種。
[0072]⑵將試管菌種接種到盛有200mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于22°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為160r/min，培養(yǎng)時間7d，獲得一級液體菌種，所述的液體培養(yǎng)基配方為:10%麩皮、1%黃豆粉、1%麥芽糖、2%可溶性淀粉，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0073]⑶將獲得一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣比為1:0.8，攪拌轉(zhuǎn)速為160r/min，接種量為10% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))，罐壓:0.04Mpa, pH為7.5，溫度為26。。，通氣培養(yǎng)96h，即獲得所述的羊肚菌(Mochella esculenta)M_02#菌株CGMCC N0.7058液體菌種。
[0074]實施例4性狀對比試驗
[0075]使用本發(fā)明羊肚菌(Mochellaesculenta)M_02# 菌株 CGMCC N0.7058 與原有 3 個菌株M-16#、M0710\ M-501#, (3個菌株M_16#、M0710#, M_501#可通過微生物保藏機(jī)構(gòu)購買)所有供試菌株品種均為羊肚菌(M.esculenta)。
[0076]4.1菌絲體生長情況及污染情況對比
[0077]⑴試驗方法
[0078]將4個羊肚菌菌株接種于18mmX 18mm平板上，每個菌株重復(fù)10次，平板培養(yǎng)基為改良PDA:馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO40.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)，接種后放在20°C的培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。
[0079]每8h進(jìn)行觀察記錄。
[0080]⑵結(jié)果分析(詳見表1)
[0081]表1羊肚菌各菌株在改良PDA培養(yǎng)基上的生長情況
【權(quán)利要求】
1.一株羊肚菌(#ocAe77aM_02# 菌株 CGMCC N0.7058。
2.羊肚菌(#ocAe#a菌株CGMCC N0.7058液體菌種的培養(yǎng)方法，其步驟如下: (1)將羊肚菌(#ocAe77aesculenta) M_02#菌株CGMCC N0.7058的菌絲體接種到試管瓊脂培養(yǎng)基斜面上，于18_24°C下培養(yǎng)5-7d，獲得試管菌種，所述的試管瓊脂培養(yǎng)基為改良PDA培養(yǎng)基，其配方為馬鈴薯30%，葡萄糖2%，K2HPO4 0.5%，瓊脂2%，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)； (2)將試管菌種接種到盛有200mL液體培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于20_26°C下?lián)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速為120-160r/min，培養(yǎng)時間5_7d，獲得一級液體菌種，所述的液體培養(yǎng)基配方為:5-10%麩皮、0.5-1%黃豆粉、0.5-1%麥芽糖、1-2%可溶性淀粉，余量為水，所述的百分?jǐn)?shù)是質(zhì)量分?jǐn)?shù)； (3)將獲得的一級液體菌種接種到25L自動發(fā)酵生產(chǎn)線的發(fā)酵罐中，通氣比為1:0.8，攪拌轉(zhuǎn)速為120-160r/min，接種量為5-10%質(zhì)量分?jǐn)?shù)，罐壓:0.04Mpa ； pH為7.2-7.5 ;溫度為 22-26°C ;通氣培養(yǎng) 72-96h，即獲得羊肚菌esculenta) M-02# 菌株 CGMCCN0.7058液體菌種。·
【文檔編號】C12N1/14GK103710271SQ201310730625
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月26日
【發(fā)明者】桂明英, 劉蓓, 郭相, 馬明, 邰麗梅, 吳素蕊 申請人:中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所, 云南省供銷合作社科學(xué)研究所, 云南云菌科技（集團(tuán)）有限公司