一種中溫酸性木聚糖酶xyn10l1及其基因和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種中溫酸性木聚糖酶XYN10L1及其基因和應(yīng)用。本發(fā)明的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2所示。本發(fā)明提供的中溫酸性木聚糖酶基因xyn10L1，編碼權(quán)利要求1所述的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1，其堿基序列如SEQ?ID?NO.4或SEQ?ID?NO.5所示。本發(fā)明還提供了包含上述中溫酸性木聚糖酶基因xyn10L1的重組載體以及包含上述中溫酸性木聚糖酶基因xyn10L1的重組菌株。本發(fā)明的木聚糖酶最適pH為4.5，在pH2.0～7.0都具有較高的酶活性，pH穩(wěn)定性好；具有良好的抵抗蛋白酶的能力；具有較好耐高溫特性，可使其在需求高溫環(huán)境的工業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】—種中溫酸性木聚糖酶XYN10L1及其基因和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種中溫酸性木聚糖酶XYN10L1及其基因和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]半纖維素和纖維素是植物細(xì)胞壁的主要組成成份，這兩種物質(zhì)是自然界中主要的可再生資源之一，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、造紙、畜牧等行業(yè)。半纖維素是由D-甘露糖、D-木糖、L-阿拉伯糖或D-乳糖以直鏈或支鏈的形式聚合而成的多聚糖，這種大分子主鏈一般由一種或幾種單糖基組成，它們的鏈短且存在側(cè)鏈，并且具有多種側(cè)鏈取代基，如乙?；?、半乳糖、阿拉伯糖或葡萄糖醛酸殘基。木聚糖是半纖維素的重要組分，它是自然界中含量?jī)H次于纖維素的第二豐富的多聚糖，幾乎占地球可更新有機(jī)碳含量的三分之一。木聚糖廣泛存在于農(nóng)業(yè)副產(chǎn)物如玉米芯、麥麩、米糠、秸桿、甘蔗渣等中，然而這些重要的可再生資源一直難以得到有效的利用；此外在造紙行業(yè)制漿過(guò)程中富含木聚糖的工業(yè)廢料往往直接排入水體，導(dǎo)致水體富營(yíng)養(yǎng)化嚴(yán)重，破壞生態(tài)環(huán)境，這些現(xiàn)象在我國(guó)尤為突出。另一方面，作為木聚糖水解產(chǎn)物主要成分的低聚木糖是一種附加值高，市場(chǎng)前景看好的功能性食品添加劑，目前已成為國(guó)內(nèi)外競(jìng)相研究開(kāi)發(fā)的功能性低聚糖之一。因此對(duì)木聚糖的有效利用和深層開(kāi)發(fā)已成為目前國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。
[0003]對(duì)木聚糖酶的研究已有半個(gè)世紀(jì)，主要研究集中在適合于飼料工業(yè)、食品工業(yè)、制漿造紙工業(yè)、 能源工業(yè)等方面的木聚糖酶，已經(jīng)從不同來(lái)源的微生物中分離到大量的不同類型不同功能的木聚糖酶，并分離出多種木聚糖酶基因，已工業(yè)化生產(chǎn)多種木聚糖酶產(chǎn)品。其中，大多數(shù)木聚糖酶的最適作用pH值在6. 0~7. O。酸性木聚糖酶已經(jīng)引起研究人員的廣泛關(guān)注，酸性木聚糖酶在飼料行業(yè)中的應(yīng)用，可以有效破壞木聚糖分子中的共價(jià)交聯(lián)，顯著降低阿拉伯木聚糖分子大小，從而降低食糜的粘度，改善飼料性能，降低因粘度增加而引起的抗?fàn)I養(yǎng)作用。在啤酒釀造行業(yè)具有潛在的應(yīng)用前景，在啤酒釀造過(guò)程中，不被降解的阿拉伯木聚糖造成啤酒過(guò)濾困難、堵塞過(guò)濾膜，增加了啤酒的生產(chǎn)成本和品質(zhì)，采用酸性木聚糖酶與葡聚糖酶協(xié)同作用，可以解決以上問(wèn)題。因此，酸性木聚糖酶的產(chǎn)生、純化、性質(zhì)、酸性特征的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)及其在飼料加工、釀酒工業(yè)、果汁加工、以及能源等領(lǐng)域的應(yīng)用正在不斷深入。
[0004]不同工業(yè)生產(chǎn)對(duì)木聚糖酶性質(zhì)需求各不相同，因此，獲得新型且具有優(yōu)良特性木聚糖酶具有重大現(xiàn)實(shí)意義，可以更好的服務(wù)飼料、釀酒、食品工業(yè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種能廣泛應(yīng)用的中溫酸性木聚糖酶。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供編碼上述中溫酸性木聚糖酶的基因。
[0007]本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組載體。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組菌株。[0009]本發(fā)明的另一目的是提供一種制備上述中溫酸性木聚糖酶的方法。
[0010]本發(fā)明的另一目的提供上述中溫酸性木聚糖酶的應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明從里氏木霉Trichoderma reesei CICC40932(購(gòu)買于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(北京市朝陽(yáng)區(qū)霄云路32號(hào)，中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院，100027)，其保藏編號(hào)為：CICC No. 40932)中分離得到一種新的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1。
[0012]本發(fā)明提供了一種中溫酸性木聚糖酶XYN10L1，其氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示：
[0013]MHVKSLTVPL LAASLPLVSG QLDTffAKKAG LKYFGSATDS PGQRERAGLE ASYPQYDAIM 60
[0014]RDTAEFGQTT PTNGMKffLFT EPEQGVFNYT EGEIVASIAR ETGDYLRCHA LVWHSQLAPff 120
[0015]VETTEffTPEE LTEVIVRHIT EVAGHWKGRC YAWDVVNEAL LDDGTffRPSV FYNVLGEDFI 180
[0016]KLAFRTMEV DPHAKLYYND YNLESPGPKV TGAQNIVKML KTAGIRIDGV GLQSHLVAES 240
[0017]HPTLDQHIDA IRSFSSLGVE VALTELDVRL TLPANATNLA EQNDAYKNIV GACVQVRGCI 300
[0018]GVTIWDFYDP FSffVPPGPKV TGAQNIVKML KTAGIRIDGV GLQSHLVAES HPTLDQHIDA 360
[0019]IRSFSSLGVE VALTELDVRL TLPANATNLA EQNDAYKNIV GACVQVRGCI GVTIWDFYDP 420
[0020]FSffVP 425
[0021]其中，該酶基因編碼425個(gè)氨基酸，N端21個(gè)氨基酸為其預(yù)測(cè)的信號(hào)肽序列“MHVKSLTVPLLAASLPLVSGQ” (SEQ ID NO. 3)。
[0022]因此，成熟的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1的理論分子量為44. 7kDa，其氨基酸序列如 SEQ ID NO. 2 所示：
[0023]LDTWAKKAGL KYPGSAIDSP GQRERAGLEA SYPQYDAIMR DTAEPGQTTP TOGMKMPIE60
[0024]PEQGVFNYTE GEIVASIARE TGDYLRCHAL VWHSQ1APW ETTEffIPEEL IEVIVRHIIE120
[0025]VAGHWKGRCY AWDWNEALL DDGTWRPSVF YNVLGEDFIK LAFRTAAEVD PHAKLYYNDY 180
[0026]NLESPGPKVT GAQNIVMl TAGIRIDGVG LQStLVAESH PTLDQHIDAI RSFSSDGVEV240
[0027]ALIELDVRLT LPANAIMAE QNDAYKNIVG ACVQVR3CIG VTIWDFYDPF SWVPPGPKVT300
[0028]GAQNIVMl TAGIRIDGVG LQStLVAESH PTLDQHIDAI RSFSSDGVEV ALIELDVRLT360
[0029]LPANATNLAE QNDAYKNIVG ACVQVRGCIG VTIWDFYDPF
[0030]SffVP404
[0031]本發(fā)明的木聚糖酶XYN10L1具有較好的熱穩(wěn)定性，且在酸性和中性的范圍內(nèi)均具有高活性，對(duì)蛋白酶具有較好的抵抗能力。本發(fā)明篩選到Trichoderma reesei CICC40932所產(chǎn)生的木聚糖酶，其最適pH值為4. 5，在pH2. 0~7. 0的范圍內(nèi)維持80%以上的酶活性；適用溫度30~60°C，最適溫度為45°C，在70°C處理120分鐘仍具有80%左右的酶活力；用胃蛋白酶和胰蛋白酶處理120分鐘，酶活性提高了 10%以上。
[0032]本發(fā)明提供了編碼上述中溫酸性木聚糖酶的基因xynlOLl。具體地，該基因的基因組序列如SEQ ID NO. 4所示：
[0033]atgcatgtga aaagcctgac cgtgccgctg ctggcggcga gcctgccgct ggtgagcggc 60
[0034]cagctggata cctgggcgaa aaaagcgggc ctgaaatatt ttggcagcgc gaccgatagc 120
[0035]ccgggcc agc gcgaacgcgc gggcctggaa gcgagctatc cgcagtatga tgcgattatg 180
[0036]cgcgataccg cggaatttgg ccagaccacc ccgaccaacg gcatgaaatg gctgtttacc 240
[0037]gaaccggaac agggcgtgtt taactatacc gaaggcgaaa ttgtggcgag cattgcgcgc 300[0038]gaaaccggcg attatctgcg ctgccatgcg ctggtgtggcatagccagct ggcgccgtgg360
[0039]gtggaaacca ccgaatggac cccggaagaa ctgaccgaagtgattgtgcg ccatattacc420
[0040]gaagtggcgg gccattggaa aggccgctgc tatgcgtgggatgtggtgaa cgaagcgctg480
[0041]ctggatgatg gcacctggcg cccgagcgtg ttttataacgtgctgggcga agattttatt540
[0042]aaactggcgt ttcgcaccgc ggcggaagtg gatccgcatgcgaaactgta ttataacgat600
[0043]tataacctgg aaagcccggg cccgaaagtg accggcgcgcagaacattgt gaaaatgctg660
[0044]aaaaccgcgg gcattcgcat tgatggcgtg ggcctgcagagccatctggt ggcggaaagc720
[0045]catccgaccc tggatcagca tattgatgcg attcgcagctttagcagcct gggcgtggaa780
[0046]gtggcgctga ccgaactgga tgtgcgcctg accctgccggcgaacgcgac caacctggcg840 [0047]gaacagaacg atgcgtataa aaacattgtg ggcgcgtgcgtgcaggtgcg cggctgcatt900
[0048]ggcgtgacca tttgggattt ttatgatccg tttagctgggtgccgccggg cccgaaagtg960
[0049]accggcgcgc agaacattgt gaaaatgctg aaaaccgcgggcattcgcat tgatggcgtg1020
[0050]ggcctgcaga gccatctggt ggcggaaagc catccgaccctggatcagca tattgatgcg1080
[0051]attcgcagct ttagcagcct gggcgtggaa gtggcgctgaccgaactgga tgtgcgcctg1140
[0052]accctgccgg cgaacgcgac caacctggcg gaacagaacgatgcgtataa aaacattgtg1200
[0053]ggcgcgtgcg tgcaggtgcg cggctgcatt ggcgtgaccatttgggattt ttatgatccg1260
[0054]tttagctggg tgccg1275
[0055]本發(fā)明通過(guò)PCR的方法分離克隆了木聚糖酶基因xynlOLl，DNA全序列分析結(jié)果表明，木聚糖酶XYN10L1結(jié)構(gòu)基因xynlOLl全長(zhǎng)1275bp。其中，信號(hào)肽的堿基序列為：atgcatgtgaaaagcctgaccgtgccgctgctggcggcgagcctgccgctggtgagcggccag(SEQ ID NO. 6)。XYN10L1的基因序列如SEQ ID NO. 5所不：
[0056]ctggatacct gggcgaaaaa agcgggcctg aaatattttggcagcgcgac cgatagcccg60
[0057]ggccagcgcg aacgcgcggg cctggaagcg agctatccgcagtatgatgc gattatgcgc120
[0058]gataccgcgg aatttggcca gaccaccccg accaacggcatgaaatggct gtttaccgaa180
[0059]ccggaacagg gcgtgtttaa ctataccgaa ggcgaaattgtggcgagcat tgcgcgcgaa240
[0060]accggcgatt atctgcgctg ccatgcgctg gtgtggcatagccagctggc gccgtgggtg300
[0061]gaaaccaccg aatggacccc ggaagaactg accgaagtgattgtgcgcca tattaccgaa360
[0062]gtggcgggcc attggaaagg ccgctgctat gcgtgggatgtggtgaacga agcgctgctg420
[0063]gatgatggca cctggcgccc gagcgtgttt tataacgtgctgggcgaaga ttttattaaa480
[0064]ctggcgtttc gcaccgcggc ggaagtggat ccgcatgcgaaactgtatta taacgattat540
[0065]aacctggaaa gcccgggccc gaaagtgacc ggcgcgcagaacattgtgaa aatgctgaaa600
[0066]accgcgggca ttcgcattga tggcgtgggc ctgcagagccatctggtggc ggaaagccat660
[0067]ccgaccctgg atcagcatat tgatgcgatt cgcagctttagcagcctggg cgtggaagtg720
[0068]gcgctgaccg aactggatgt gcgcctgacc ctgccggcgaacgcgaccaa cctggcggaa780
[0069]cagaacgatg cgtataaaaa cattgtgggc gcgtgcgtgcaggtgcgcgg ctgcattggc840
[0070]gtgaccattt gggattttta tgatccgttt agctgggtgccgccgggccc gaaagtgacc900
[0071]ggcgcgcaga acattgtgaa aatgctgaaa accgcgggcattcgcattga tggcgtgggc960
[0072]ctgcagagcc atctggtggc ggaaagccat ccgaccctggatcagcatat tgatgcgatt1020
[0073]cgcagcttta gcagcctggg cgtggaagtg gcgctgaccgaactggatgt gcgcctgacc1080[0074]ctgccggcga acgcgaccaa cctggcggaa cagaacgatg cgtataaaaa cattgtgggc 1140
[0075]gcgtgcgtgc aggtgcgcgg ctgcattggc gtgaccattt gggattttta tgatccgttt 1200
[0076]agctgggtgc eg1212
[0077]成熟蛋白理論分子量為44. 7kDa，將木聚糖酶基因xynlOLl序列及推導(dǎo)出的氨基酸序列在GenBank中進(jìn)行BLAST比對(duì)，該基因與來(lái)源于Thielavia terrestris NRRL8126的木聚糖酶氨基酸序列一致性為83%，說(shuō)明XYN10L1是一種新的木聚糖酶。
[0078]本發(fā)明還提供了包含上述中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl的重組載體，優(yōu)選為pPIC-xynlOLl。將本發(fā)明的木聚糖酶基因插入到表達(dá)載體合適的限制性酶切位點(diǎn)之間，使其核苷酸序列與表達(dá)調(diào)控序列相連接。作為本發(fā)明的一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案，優(yōu)選為將本發(fā)明的木聚糖酶基因插入到質(zhì)粒PPIC9上的EcoR I和Not I限制性酶切位點(diǎn)之間，使該核苷酸序列位于AOXl啟動(dòng)子的下游并受其調(diào)控，得到重組酵母表達(dá)質(zhì)粒pPIC9-xynlOLl。
[0079]本發(fā)明還提供了包含上述中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl的重組菌株，優(yōu)選所述菌株為大腸桿菌、酵母菌、芽孢桿菌或乳酸桿菌，優(yōu)選為重組菌株GS115/XynlOLl。
[0080]本發(fā)明還提供了一種制備中溫酸性木聚糖酶XYN10L1的方法，包括以下步驟：
[0081]I)用上述的重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，獲得重組菌株；
[0082]2)培養(yǎng)重組菌株，誘導(dǎo)重組木聚糖酶表達(dá)；
[0083]3)回收并純化所表達(dá)的木聚糖酶XYN10L1。
[0084]其中，優(yōu)選所述宿主細(xì)胞為畢赤酵母細(xì)胞、啤酒酵母細(xì)胞或多形漢遜酵母細(xì)胞，優(yōu)選將重組酵母表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化畢赤酵母細(xì)胞（Pichia pastoris)GS115，得到重組菌株GS115/xynlOLl。
[0085]本發(fā)明還提供了上述中溫酸性木聚糖酶XYN10L1的應(yīng)用，尤其適合在飼料、釀酒、造紙、能源工業(yè)中用于降解木聚糖、大麥葡聚糖、可溶性小麥阿拉伯木聚糖等。
[0086]本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)條件的不足，提供一種性質(zhì)優(yōu)良的，適合在飼料、釀酒、造紙、能源工業(yè)中應(yīng)用的，新穎的木聚糖酶。本發(fā)明的木聚糖酶最適pH為4. 5，在pH2. 0~7. 0都具有較高的酶活性，pH穩(wěn)定性好；具有良好的抵抗蛋白酶的能力；具有較好耐高溫特性，可使其在需求高溫環(huán)境的工業(yè)生產(chǎn)上應(yīng)用。本發(fā)明的木聚糖酶可應(yīng)用于飼料工業(yè)，有效降低飼料粘度，消除或降低因粘度增加而引起的抗?fàn)I養(yǎng)問(wèn)題。在釀酒工業(yè)中，可有效降解可溶性和不可溶性的阿拉伯木聚糖，有效降低麥芽汁的粘度，提高發(fā)酵液過(guò)濾效率，從而澄清啤酒；此外，在白酒、清酒的釀造中有助于提高發(fā)酵效率，提高淀粉利用率，增加酒精的產(chǎn)率。在造紙和能源工業(yè)中，可以將造紙工業(yè)廢料及農(nóng)業(yè)廢棄物中的木聚糖轉(zhuǎn)化為D-木糖單體，而D-木糖又可被細(xì)菌、酵母及真菌轉(zhuǎn)化成有價(jià)值的燃料，因此，本木聚糖酶在能源工業(yè)中的應(yīng)用也顯示出其巨大的潛力。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0087]圖I為本發(fā)明的重組木聚糖酶的最適pH。
[0088]圖2為本發(fā)明的重組木聚糖酶的pH穩(wěn)定性。
[0089]圖3為本發(fā)明的重組木聚糖酶的最適溫度。
[0090]圖4為本發(fā)明的重組木聚糖酶的熱穩(wěn)定性?！揪唧w實(shí)施方式】
[0091]試驗(yàn)材料和試劑
[0092]I、菌株及載體
[0093]本發(fā)明從里氏木霉Trichoderma reesei CICC40932(購(gòu)買于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(北京市朝陽(yáng)區(qū)霄云路32號(hào)，中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院，100027)，其保藏編號(hào)為：CICC No. 40932)中分離得到一種新的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1。畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9及菌株GSl 15購(gòu)自于Invitrogen公司。
[0094]2、酶類及其它生化試劑
[0095]限制性內(nèi)切酶和連接酶均購(gòu)自Fermentas公司；樺木木聚糖購(gòu)自Sigma公司；其它均為國(guó)產(chǎn)生化試劑。
[0096]3、培養(yǎng)基
[0097](I)Trichoderma reesei CICC40932培養(yǎng)基為馬鈴薯汁培養(yǎng)基：1000mL馬鈴薯汁，IOg葡萄糖，25g瓊脂，pH2. 5 ；
[0098](2)大腸桿菌培養(yǎng)基LB ：1%蛋白胨、0. 5%酵母提取物、l%NaCl，pH7. 0 ；
[0099](3) BMGY 培養(yǎng)基：1% 酵母提取物,2% 蛋白胨，I. 34%YNB,0. 00004%Biotin, 1% 甘油(V/V)；
[0100](4) BMMY培養(yǎng)基：除以0. 5%甲醇代替甘油，其余成份均與BMGY相同，pH4. O。
[0101]說(shuō)明：以下實(shí)施例中未作具體說(shuō)明的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，均參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》（第三版）J.薩姆布魯克一書(shū)中所列的具體方法進(jìn)行，或者按照試劑盒和產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
[0102]實(shí)施例I里氏木霉Trichoderma reesei CICC40932木聚糖酶編碼基因xynlOLl的克隆
[0103]提取里氏木霉Trichoderma reesei CICC40932 基因組 DNA ：
[0104]將液體培養(yǎng)3天的菌絲體用無(wú)菌濾紙過(guò)濾放入研缽中，加入2mL提取液，研磨5min,然后將研磨液置于50mL離心管中，65°C水浴鍋裂解20min,每隔IOmin混勻一次,在4°C下1000Orpm離心5min。取上清于酚/氯仿中抽提除去雜蛋白，再取上清加入等體積異丙醇，于室溫靜置5min后，4°C下1000Orpm離心lOmin。棄上清,沉淀用70%的乙醇洗漆兩次，真空干燥，加入適量TE溶解，置于-20°C備用。
[0105]根據(jù)第十家族木聚糖酶基因的保守（WDVVNE和NDY (F)NL (I) EY)序列設(shè)計(jì)合成了簡(jiǎn)并引物P1，P2
[0106]Pl:5' -TGGGAYGTNGTNAAYGARGC-3'；
[0107]P2:5’-TAYTCTATRTTRWARTCRTT-3’。
[0108]以 里氏木霉Trichoderma reesei CICC40932總DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)參數(shù)為：94°C變性5min ;然后94°C變性30sec，45°C退火30sec，72°C延伸lmin，30個(gè)循環(huán)后72°C保溫lOmin。獲得一條約165bp片段，將該片段回收后與pEASY_T3載體連接轉(zhuǎn)化后送北京睿博興科生物技術(shù)有限公司測(cè)序。
[0109]根據(jù)測(cè)序得到的核苷酸序列，設(shè)計(jì)上游和下游各三條TAIL-PCR特異性引物：設(shè)計(jì)方向?yàn)樾枰獢U(kuò)增的未知區(qū)域方向，sp2的位置設(shè)計(jì)在spI的內(nèi)側(cè)，sp3位于sp2的內(nèi)側(cè)。每?jī)蓚€(gè)引物之間的距離沒(méi)有嚴(yán)格規(guī)定，引物長(zhǎng)度一般22~30nt，退火溫度在60~65°C。并將它們分別命名為uspl, usp2, usp3(上游特異性引物)，dspl, dsp2, dsp3 (下游特異性引物）見(jiàn)表1。
[0110]表1.木聚糖酶XYN10L1TAIL-PCR特異性引物
[0111]
【權(quán)利要求】
1.一種中溫酸性木聚糖酶XYN10L1，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO. I或SEQID NO. 2 所示。
2.一種中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl，其特征在于，編碼權(quán)利要求1所述的中溫酸性木聚糖酶XYN10L1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl，其特征在于，其堿基序列如SEQ ID NO. 4 或 SEQ ID NO. 5 所示。
4.包含權(quán)利要求2或3所述中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl的重組載體。
5.包含權(quán)利要求2或3所述中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl的重組載體pPIC-xynlOLlo
6.包含權(quán)利要求2或3所述中溫酸性木聚糖酶基因xynlOLl的重組菌株。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組菌株，其特征在于，所述重組菌株為畢赤酵母菌。
8.一種制備中溫酸性木聚糖酶XYN10L1的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1)用權(quán)利要求4的重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得重組菌株； 2)培養(yǎng)重組菌株，誘導(dǎo)重組木聚糖酶表達(dá)； 3)回收并純化所表達(dá)的木聚糖酶XYN10L1。
9.權(quán)利要求1所述中溫酸性木聚糖酶XYN10L1的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12P19/14GK103695397SQ201310745422
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】吳培均, 李富偉, 羅建杰, 李兆勇 申請(qǐng)人:北京科為博生物科技有限公司