癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及科研領(lǐng)域，尤其涉及癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架。包含兩個能疊放的基板，所述基板上均有一個以上的培養(yǎng)孔，兩個基板的培養(yǎng)孔孔位對應(yīng)，所述下方的基板帶底板，所述兩個能疊放的基板還有可抽離的分隔板。所述分隔板邊側(cè)還有拉手。采用如上技術(shù)方案的本實用新型，相對于現(xiàn)有技術(shù)有如下有益效果：疊加后直接加基質(zhì)，進而保證平行試驗的基質(zhì)一致，很好為三維支架下培養(yǎng)癌細胞提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
【專利說明】癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及科研領(lǐng)域，尤其涉及癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架。
【背景技術(shù)】
[0002]傳統(tǒng)研究腫瘤發(fā)生的方法包括體外腫瘤細胞二維培養(yǎng)和建立體內(nèi)鼠腫瘤模型。但是二者均有局限性:腫瘤細胞二維培養(yǎng)不能很好的反映體內(nèi)腫瘤的微環(huán)境，而體內(nèi)試驗在控制單獨細胞信號方面功能不足。體外三維培養(yǎng)能夠克服以上不足，而三維支架是三維培
養(yǎng)的基礎(chǔ)。
[0003]目前用于癌癥研究的三維培養(yǎng)支架體系有3類:自然材料來源的支架、人工合成材料支架和腫瘤多細胞球體。癌癥研究中自然材料來源的支架包括膠原凝膠、富含層粘連蛋白的凝膠和來源于基底膜的材料已經(jīng)被廣泛用于癌癥研究。由于組織來源、交聯(lián)化學(xué)物質(zhì)和單體濃度的不同影響這些基質(zhì)支架的微觀結(jié)構(gòu)，降低了研究的可重復(fù)性和可比性。并且這些自然材料來源的支架由于空間排布和機械性能與腫瘤自身的細胞外基質(zhì)不同，在其上培養(yǎng)的腫瘤細胞的許多生物學(xué)行為也就與體內(nèi)不同。癌癥研究中合成材料支架如聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚ε己內(nèi)/β磷酸三鈣和殼聚糖-藻酸鹽三維支架等人工合成材料已經(jīng)被用于腫瘤的轉(zhuǎn)移和血管生成研究。人工合成聚合物支架最顯著的缺點是缺乏生物信號而不易被細胞識別，并且三維空間排布和機械性能也與腫瘤自身的細胞外基質(zhì)不同。腫瘤多細胞球體是腫瘤細胞體外培養(yǎng)中獲得的由多個細胞組成的球狀聚合體，在組織結(jié)構(gòu)上與實體瘤相似，是研究實體瘤的良好模型，缺點是藥物實驗中，大分子藥物不易擴散到多細胞球體中，缺乏明確的反應(yīng)終點和檢測其細胞活性的確切方法。
[0004]并且，傳統(tǒng)的科學(xué)試驗難以重現(xiàn)同樣的基質(zhì)，因此而對生物醫(yī)藥的試驗造成了一定的難度，生物實驗的重現(xiàn)性也多因為個性化操作而難以實現(xiàn)。
[0005]做實驗的時候，平行試驗很難操作并且浪費時間。
實用新型內(nèi)容
[0006]實用新型的目的:為了提供一種操作簡便、節(jié)省時間的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架。
[0007]為了達到如上目的，本實用新型采取如下技術(shù)方案:
[0008]癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，包含兩個能疊放的基板，所述基板上均有一個以上的培養(yǎng)孔，兩個基板的培養(yǎng)孔孔位對應(yīng)，所述下方的基板帶底板，所述兩個能疊放的基板還有可抽離的分隔板。
[0009]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述分隔板邊側(cè)還有拉手。
[0010]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述分隔板上包含邊框，所述基板能夠嵌套在其上，所述分隔板上還有圓形凸起，培養(yǎng)孔下端能與該凸起契合而密封。
[0011]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述兩個基板上各自的培養(yǎng)孔彼此連通，連通結(jié)構(gòu)為細管，所述細管內(nèi)置于基板壁內(nèi)。[0012]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述培養(yǎng)孔為圓柱形。
[0013]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述圓柱形直徑是7-10毫米，厚度是2毫米。
[0014]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述分隔板和底板上均有內(nèi)置的溫度傳感器，其連接CPU。
[0015]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述分隔板和底板下方均有壓力傳感器，其連接 CPU。
[0016]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述CPU連接報警裝置。
[0017]本實用新型進一步技術(shù)方案在于，所述CPU連接照相機。
[0018]采用如上技術(shù)方案的本實用新型，相對于現(xiàn)有技術(shù)有如下有益效果:疊加后直接加基質(zhì)，進而保證平行試驗的基質(zhì)一致，很好為三維支架下培養(yǎng)癌細胞提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]為了進一步說明本實用新型，下面結(jié)合附圖進一步進行說明:
[0020]圖1為實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0021]其中:1.拉手；2.培養(yǎng)孔；3.基板；4.分隔板。
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合附圖對本實用新型的實施例進行說明，實施例不構(gòu)成對本實用新型的限制:
[0023]癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，包含兩個能疊放的基板3，所述基板3上均有一個以上的培養(yǎng)孔2，兩個基板3的培養(yǎng)孔2孔位對應(yīng)，所述下方的基板3帶底板，所述兩個能疊放的基板3還有可抽離的分隔板4。本處操作的時候，將基質(zhì)在頂部直接灌輸?shù)礁鱾€培養(yǎng)孔里邊，基質(zhì)在培養(yǎng)孔內(nèi)壁從上往下滑動，進而使得兩個基板3同時獲得相同的基質(zhì)作為培養(yǎng)基礎(chǔ)。還可以進行高同步性的平行試驗。
[0024]所述分隔板4邊側(cè)還有拉手I。本結(jié)構(gòu)可以使得分隔板4的抽拉方便。
[0025]所述分隔板4上包含邊框，所述基板3能夠嵌套在其上，所述分隔板4上還有圓形凸起，培養(yǎng)孔2下端能與該凸起契合而密封。本結(jié)構(gòu)使得分隔板上方的基板3能夠進行穩(wěn)定培養(yǎng)。
[0026]所述兩個基板3上各自的培養(yǎng)孔2彼此連通，連通結(jié)構(gòu)為細管，所述細管內(nèi)置于基板3壁內(nèi)。本處的結(jié)構(gòu)所起的作用是使得多個培養(yǎng)孔2內(nèi)部的基質(zhì)形成統(tǒng)一的基本環(huán)境，培養(yǎng)條件實現(xiàn)嚴格單一。
[0027]所述培養(yǎng)孔2為圓柱形。所述圓柱形直徑是7-10毫米，厚度是2毫米。本結(jié)構(gòu)在試驗數(shù)據(jù)的顯示中能有效完成三維培養(yǎng)。
[0028]所述分隔板4和底板上均有內(nèi)置的溫度傳感器，其連接CPU。本處的結(jié)構(gòu)能起到的做用是，嚴密檢測一線的培養(yǎng)環(huán)境，因為培養(yǎng)箱是可能出現(xiàn)多個溫度點的，而內(nèi)置的溫度傳感器能夠獲取更精確的溫度，讓第一線試驗數(shù)據(jù)更精確。
[0029]所述分隔板4和底板下方均有壓力傳感器，其連接CPU。本處的結(jié)構(gòu)能夠防止外人亂動培養(yǎng)裝置，防止試驗被人影響，也可以通過電腦嚴密記錄學(xué)生做實驗的誠信程度，t匕如，什么時候查看，查看了幾次等。所述CPU連接報警裝置。比如報警燈或者蜂鳴器，要是有外人隨便觸碰，即可進行報警，試驗就會報廢，有助于嚴密的科學(xué)精神的養(yǎng)成。
[0030]本實用新型所要解決的技術(shù)問題是:針對上述目前用于癌癥研究的三維培養(yǎng)支架存在種種不足，提供一種空間排布和結(jié)構(gòu)與腫瘤自身的細胞外基質(zhì)相似的腫瘤細胞三維培養(yǎng)支架。
[0031]所述CPU連接照相機。即每碰觸一次，就會拍照，找到碰觸者。
[0032]以下為一種具體的試驗的方式:
[0033]先建立免疫缺陷鼠(SCID小鼠)皮下人肺腺癌A549系細胞種植成瘤模型，腫瘤生長4周，直徑接近lcm,取出腫瘤塊后切成厚度2mm薄片，采用Tris-Trypsin-Triton X-100混合去細胞法徹底去除細胞。其具體去細胞步驟為:厚度2mm腫瘤的腫瘤薄片浸入低滲液(IOmM Tris (pH8.0), 5mM EDTA)過夜，再浸入高滲液(50mM Tris, IM NaCl, IOmM EDTA)室溫下24小時，然后在0.025% Trypsin/0.02% EDTA中處理0.5小時，然后用0.5% TritonX-100處理48小時，最后用含DNase-1 (濃度20U/ml)及RNase-A (濃度0.2mg/ml)的磷酸鹽緩沖液37°C下處理24小時。處理各步驟間和處理后均以大量無菌磷酸鹽緩沖液沖洗。然后冷凍干燥24小時后密封，最后以25KGy劑量的伽馬射線滅菌后保存?zhèn)溆谩?br> [0034]進一步的實體腫瘤細胞種植試驗結(jié)果表明，所得去細胞腫瘤細胞外基質(zhì)支架支持實體腫瘤細胞的浸潤和生長。與二維培養(yǎng)比較，實體腫瘤細胞在去細胞腫瘤細胞外基質(zhì)支架上培養(yǎng)后，細胞增殖更快，并且細胞活性增高，不容易凋亡。
[0035]用人乳腺癌MCF-7細胞系細胞加滅菌后保存?zhèn)溆玫娜ゼ毎Ъ茉?4孔板培養(yǎng)，用腫瘤細胞二維培養(yǎng)(不加支架)作對照。具體步驟為:去細胞支架修剪成直徑7mm的圓盤狀，置于24孔板中，先與20%胎牛血清在細胞培養(yǎng)箱中(溫度37°C，5%C02，飽和濕度)孵育過夜，然后吸去培養(yǎng)皿中液體，將濃度5X 105/ml的腫瘤細胞懸液，每孔滴加1ml，然后加入含10%小牛血清，1000U/ml青霉素，100mg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液，置于37°C，5% C02培養(yǎng)箱中靜態(tài)培養(yǎng)，每2日更換培養(yǎng)液。在不同時間點(1，4，7，10和13天)對細胞活性和增殖進行評價。培養(yǎng)13天后CFDA-SE/PI細胞增殖和凋亡進行染色情況，CFDA-SE將活細胞標記為綠色，將凋亡細胞標記為紅色。乳腺癌MCF-7細胞系細胞二維培養(yǎng)13天后凋亡失活的細胞數(shù)目多，而其在去細胞支架上三維培養(yǎng)13天后凋亡失活細胞數(shù)目少，活細胞數(shù)目多。在去細胞支架上三維培養(yǎng)細胞活性增高，不容易凋亡。通過MTT法測在570nm處吸光度(0D值)，0D值越大，表示細胞增殖的數(shù)量越多。二維培養(yǎng)在10天前細胞數(shù)目增多，而10天后數(shù)目開始減少。而去細胞支架上三維培養(yǎng)10天后細胞數(shù)目仍在增加。并且從第4天開始，每個時間點的三維培養(yǎng)細胞數(shù)均較二維培養(yǎng)多。結(jié)果顯示乳腺癌MCF-7細胞系細胞在去細胞支架上三維培養(yǎng)增殖遠好于二維培養(yǎng)。
[0036]舉例二
[0037]食管鱗癌KYSE-510細胞系細胞在去細胞支架上三維培養(yǎng)，方法步驟同前，細胞增殖速度略慢，因食管癌惡性程度低，本身增殖慢所致，余同前。
[0038]以上顯示和描述了本實用新型的基本原理、主要特征和本實用新型的優(yōu)點。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該了解本實用新型不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本實用新型的原理，在不脫離本實用新型精神和范圍的前提下，本實用新型還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，包含兩個能疊放的基板(3)，所述基板(3)上均有一個以上的培養(yǎng)孔(2)，兩個基板(3)的培養(yǎng)孔(2)孔位對應(yīng)，所述下方的基板⑶帶底板，所述兩個能疊放的基板⑶還有可抽離的分隔板(4)。
2.如權(quán)利要求1所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述分隔板(4)邊側(cè)還有拉手(I)。
3.如權(quán)利要求1所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述分隔板(4)上包含邊框，所述基板(3)能夠嵌套在其上，所述分隔板(4)上還有圓形凸起，培養(yǎng)孔(2)下端能與該凸起契合而密封。
4.如權(quán)利要求1所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述兩個基板(3)上各自的培養(yǎng)孔(2)彼此連通，連通結(jié)構(gòu)為細管，所述細管內(nèi)置于基板(3)壁內(nèi)。
5.如權(quán)利要求1所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述培養(yǎng)孔(2)為圓柱形。
6.如權(quán)利要求5所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述圓柱形直徑是7-10毫米，厚度是2毫米。
7.如權(quán)利要求5所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述分隔板(4)和底板上均有內(nèi)置的溫度傳感器，其連接CPU。
8.如權(quán)利要求5所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述分隔板(4)和底板下方均有壓力傳感器，其連接CPU。
9.如權(quán)利要求7或8所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述CPU連接報警裝置。
10.如權(quán)利要求7或8所述的癌細胞培養(yǎng)均基質(zhì)平行對比三維支架，其特征在于，所述CPU連接照相機。
【文檔編號】C12M1/00GK203653565SQ201320657148
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】呂衛(wèi)東 申請人:陜西省腫瘤醫(yī)院