一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，包括培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋，培養(yǎng)皿主體包括皿底面和自皿底面邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，皿底面可置放培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)裝置還包括玻璃紙覆蓋裝置，所述玻璃紙覆蓋裝置包括與皿底面尺寸相適配的覆蓋面和自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐結(jié)構(gòu)，所述覆蓋面為空心環(huán)，覆蓋面在覆蓋上玻璃紙后與皿底面置放的培養(yǎng)基相貼合，所述支撐結(jié)構(gòu)與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。本實用新型簡單易行地保證玻璃紙在微生物分離純化操作中的使用，將菌絲及分生孢子與培養(yǎng)基分離，能夠很好地避免從培養(yǎng)基揭開玻璃紙時操作工具直接接觸玻璃紙或培養(yǎng)基、將生長的菌絲或分生孢子污染或破壞的情況，操作方便、安全。
【專利說明】—種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及微生物培養(yǎng)裝置，更具體地，涉及一種適用于微生物的分離純化的培養(yǎng)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學(xué)的研究及應(yīng)用中，不僅需要通過分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。
[0003]單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞生長群體，稱為菌落。當(dāng)固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，可以成為對該微生物進行分類、鑒定的重要依據(jù)。大多數(shù)細菌、酵母菌、以及許多真菌和單細胞藻類能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分離法得到純培養(yǎng)。平板是指固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，冷卻凝固后，盛固體培養(yǎng)基的平皿。固體培養(yǎng)基用瓊脂或其它凝膠物質(zhì)固化的培養(yǎng)基，每個孤立的活微生物體生長、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分離、培養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基平板。這種由Kock建立的采用平板分離微生物純培養(yǎng)的技術(shù)簡便易行，100多年來一直是各種菌種分離的最常用手段。
[0004]平板分離法包括稀釋倒平板法、涂布平板法、平板劃線法或稀釋搖管法，但無論是哪一種分離法都需要進行進行單菌落的挑取和移植，單菌落的挑取和移植過程操作工作繁瑣，容易對單菌落造成污染和破壞。
[0005]尤其是需要大量從培養(yǎng)基上收集分離菌絲和分生孢子時，操作非常困難，很難方便快捷地將菌絲及分生孢子與培養(yǎng)基分離，而且易混雜別的雜菌，造成污染。
[0006]目前缺乏一種簡易、安全、高效、成本較低的分離純化裝置來適應(yīng)實際應(yīng)用的需求。
實用新型內(nèi)容
[0007]本實用新型要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有微生物分離純化培養(yǎng)裝置的技術(shù)不足，提供一種結(jié)構(gòu)簡單、使用方便的微生物分離純化用裝置。
[0008]本實用新型的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn):
[0009]提供一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置,包括培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋,培養(yǎng)皿主體包括皿底面和自皿底面邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，皿底面可置放平板培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)裝置還包括玻璃紙覆蓋裝置；所述玻璃紙覆蓋裝置包括與皿底面尺寸相適配的覆蓋面和自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐結(jié)構(gòu)，所述覆蓋面為空心環(huán)，在覆蓋上玻璃紙后與皿底面置放的平板培養(yǎng)基相貼合，所述支撐結(jié)構(gòu)與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。[0010]作為一種可選的方案，所述支撐結(jié)構(gòu)為一條或一條以上的自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐腳，支撐腳與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。
[0011]作為一種優(yōu)選的方案，所述支撐腳至少為兩條，支撐腳的上端之間設(shè)有連接件。通過連接件的設(shè)置可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。
[0012]作為另一種優(yōu)選的方案，所述支撐腳的上端設(shè)有倒鉤，通過倒鉤的設(shè)置可以將玻璃紙覆蓋裝置通過懸掛于培養(yǎng)皿側(cè)壁頂端，使用時可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。制備支撐腳的材料可以選用鐵絲等可彎折的韌性材料，根據(jù)培養(yǎng)皿側(cè)壁的高度以及皿底面置放的平板培養(yǎng)基的高度調(diào)節(jié)支撐腳貼合側(cè)壁部分的長度并根據(jù)該長度需要將剩余的支撐腳部分彎折成為倒鉤使用。
[0013]作為另一種可選的方案，所述支撐結(jié)構(gòu)為自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的筒體，筒體的外表面與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。
[0014]作為優(yōu)選的方案，所述筒體的上端設(shè)置有連接件。通過連接件的設(shè)置可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。
[0015]所述玻璃紙可采用賽璐玢材料，是一種用纖維制成的透明薄膜，大小與玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面大小相適配，滅菌后使用。
[0016]使用本實用新型進行微生物的分離純化操作時，首先將固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿主體內(nèi)，將白僵菌的孢子液均勻涂布于培養(yǎng)基上，待培養(yǎng)基凝固后，將無菌玻璃紙覆蓋在玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面上，將玻璃紙覆蓋裝置置入培養(yǎng)皿主體內(nèi)使覆蓋面與固體培養(yǎng)基貼合，培養(yǎng)至待菌絲長滿，將玻璃紙覆蓋裝置取出，玻璃紙揭下，即可得到分離純化的菌絲和分生孢子。
[0017]本實用新型具有以下有益效果:
[0018]本實用新型提供了一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)皿裝置，巧妙地將玻璃紙覆蓋裝置應(yīng)用于微生物分離純化操作中，玻璃紙與培養(yǎng)基貼合，玻璃紙是一種再生纖維素，作為半透膜，它的分子間隙存在透氣性，白僵菌能從培養(yǎng)基吸取生長所需的營養(yǎng)，正常生長，待菌絲和分生孢子長到所需程度就可將玻璃紙揭下。采用本實用新型的玻璃紙覆蓋裝置，不僅保證了玻璃紙在微生物分離純化操作中的使用，將菌絲及分生孢子與培養(yǎng)基分離，而且，本實用新型裝置能夠很好地避免了從培養(yǎng)基揭開玻璃紙時，操作工具直接接觸玻璃紙或培養(yǎng)基，將生長的菌絲或分生孢子污染或破壞的情況，并且操作方便、安全。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1本實用新型結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020]圖2本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0021]圖3本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0022]圖4本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0023]圖5本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0024]圖6本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0025]圖7本實用新型所述玻璃紙覆蓋裝置結(jié)構(gòu)構(gòu)示意圖。
[0026]其中，I為培養(yǎng)皿皿體側(cè)壁，2為培養(yǎng)皿皿底面，3為玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面，4為玻璃紙覆蓋裝置的支撐結(jié)構(gòu)，5為連接件，6為倒鉤。
【具體實施方式】
[0027]下面結(jié)合附圖和具體實施例進一步闡述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明采用的方法和設(shè)備為本領(lǐng)域常規(guī)方法和設(shè)備，采用的試劑除非特別說明，為本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)的試劑。
[0028]實施例1
[0029]本實施例提供一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，如附圖1所示，包括培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋，培養(yǎng)皿蓋為常規(guī)結(jié)構(gòu)，圖中未給出，培養(yǎng)皿主體包括皿底面2和自皿底面邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁1，皿底面2的內(nèi)表面置放培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)裝置還包括玻璃紙覆蓋裝置；所述玻璃紙覆蓋裝置包括與皿底面2尺寸相適配的覆蓋面3和自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐結(jié)構(gòu)4，所述覆蓋面3為空心環(huán)，空心環(huán)一面覆蓋上玻璃紙后與皿底面置放的培養(yǎng)基相貼合，所述支撐結(jié)構(gòu)4與培養(yǎng)皿側(cè)壁I的內(nèi)表面相貼。
[0030]由附圖2可見，本實用新型玻璃紙覆蓋裝置的支撐結(jié)構(gòu)為I條自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐腳4，支撐腳4與培養(yǎng)皿側(cè)壁I的內(nèi)表面相貼?；蛘?，由附圖3可見，所述支撐腳4至少為兩條。
[0031]由附圖4可見，支撐腳4的上端之間可以設(shè)有連接件5。通過連接件5的設(shè)置可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。
[0032]由附圖5可見，所述支撐腳4的上端設(shè)有倒鉤6，通過倒鉤6的設(shè)置可以將玻璃紙覆蓋裝置懸掛于培養(yǎng)皿側(cè)壁I頂端，使用時可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。制備支撐腳的材料可以選用鐵絲等可彎折的韌性材料，根據(jù)培養(yǎng)皿側(cè)壁I的高度以及皿底面2置放的培養(yǎng)基的高度調(diào)節(jié)支撐腳4貼合側(cè)壁部分的長度并根據(jù)該長度需要將剩余的支撐腳部分彎折成為倒鉤6使用。
[0033]所述玻璃紙可采用賽璐玢材料，是一種用纖維制成的透明薄膜，大小與玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面大小相適配，滅菌后使用。
[0034]使用本實用新型進行微生物的分離純化操作時，首先將固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿主體內(nèi)，將白僵菌的孢子液均勻涂布于培養(yǎng)基上，待培養(yǎng)基凝固后，將無菌玻璃紙覆蓋在玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面上，將玻璃紙覆蓋裝置置入培養(yǎng)皿主體內(nèi)使覆蓋面與固體培養(yǎng)基貼合，培養(yǎng)至待菌絲長滿，將玻璃紙覆蓋裝置取出，玻璃紙揭下，即可得到分離純化的菌絲和分生孢子。
[0035]實施例2
[0036]本實施例提供一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，如附圖1所示，包括培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋，培養(yǎng)皿蓋為常規(guī)結(jié)構(gòu)，圖中未給出，培養(yǎng)皿主體包括皿底面2和自皿底面邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁1，皿底面2的內(nèi)表面置放培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)裝置還包括玻璃紙覆蓋裝置；所述玻璃紙覆蓋裝置包括與皿底面2尺寸相適配的覆蓋面3和自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐結(jié)構(gòu)4，所述覆蓋面3為空心環(huán)，空心環(huán)一面覆蓋上玻璃紙后與皿底面置放的培養(yǎng)基相貼合，所述支撐結(jié)構(gòu)4與培養(yǎng)皿側(cè)壁I的內(nèi)表面相貼。
[0037]由附圖6可見，所述支撐結(jié)構(gòu)為自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的筒體4，筒體4的外表面與培養(yǎng)皿側(cè)壁I的內(nèi)表面相貼。
[0038]由附圖7可見，所述筒體4的上端還可以設(shè)置有連接件5。通過連接件5的設(shè)置可以很方便地將玻璃紙覆蓋裝置放入培養(yǎng)皿主體內(nèi)或從培養(yǎng)皿主體內(nèi)取出。
[0039]所述玻璃紙可采用賽璐玢材料，是一種用纖維制成的透明薄膜，大小與玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面大小相適配，滅菌后使用。
[0040]使用本實用新型進行微生物的分離純化操作時，首先將固體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿主體內(nèi)，將白僵菌的孢子液均勻涂布于培養(yǎng)基上，待培養(yǎng)基凝固后，將無菌玻璃紙覆蓋在玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面上，將玻璃紙覆蓋裝置置入培養(yǎng)皿主體內(nèi)使覆蓋面與固體培養(yǎng)基貼合，培養(yǎng)至待菌絲長滿，將玻璃紙覆蓋裝置取出，玻璃紙揭下，即可得到分離純化的菌絲和分生孢子。
[0041]實施例3本實用新型的應(yīng)用
[0042]白僵菌iBeauveria bassiana )現(xiàn)在歸為蟲草科(Cordycipi taceae ),蟲草屬{Cor dycep s')的重要真菌,早在1816年意大利的科學(xué)家Bassi (1835)從白僵蠶中分離出來。
[0043]白僵菌可侵入15個目149個科521個屬的700多種昆蟲及螨類。由于白僵菌具有符合生物制劑的一些基本要求、即對溫血動物和植物無害、容易培養(yǎng)、致病力強、防治害蟲效果好和廣譜等優(yōu)點，寄主廣泛，高度致病性與適應(yīng)性，使得其菌種在農(nóng)、林害蟲的生物防治中得到廣泛運用，同時也是經(jīng)濟昆蟲家蠶等的重要病原菌之一，一直影響著蠶桑生產(chǎn)的健康穩(wěn)定發(fā)展。此外，白僵蠶作為我國傳統(tǒng)的中藥，在臨床上的應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。因此建立分離純化白僵菌方法尤為重要。
[0044]但是大量從培養(yǎng)基上收集分離菌絲和分生孢子時，操作非常困難，很難方便快捷地將菌絲及分生孢子與培養(yǎng)基分離，而且易混雜別的雜菌，造成污染。
[0045]本實施例將實施例1或2中提供的任一種玻璃紙覆蓋裝置應(yīng)用于白僵菌的分離純化。
[0046]操作步驟如下:
[0047]S1.對采集的病原進行處理:將自然感染的白僵蠶(也可以采用常規(guī)手段人工感染的白僵蠶)用75 % (v/v)乙醇棉球進行蠶體表面消毒，然后將它放入無菌培養(yǎng)皿中，皿中放一團用無菌水浸濕的棉球，置于26°C培養(yǎng)3?5天(d)，待蠶體表面長出白色絨毛菌絲和分生孢子后再進行菌種分離；
[0048]S2.制備孢子液:用無菌接種環(huán)從蠶體表面挑取2?3環(huán)分生孢子粉于盛有50 mL無菌水的三角瓶中(內(nèi)含無菌玻璃珠)，用漩渦振蕩5 min，使孢子充分散開；
[0049]S3.制備平板:
[0050]S31.準(zhǔn)備以下試劑:硫酸鏈霉素濃度為1000U/mL (用無菌水配制，無需高壓滅菌，臨用前加入);去氧膽酸鈉質(zhì)量百分比濃度為2%，，孟加拉紅質(zhì)量百分比濃度為0.1%，高壓滅囷備用；
[0051]S32.將200g馬鈴薯去皮，切成小塊，加入1000 mL水煮爛(煮沸20?30 min，能用玻璃棒戳破即可)，用4層紗布過濾，加入20 g瓊脂和20 g葡萄糖后，再補足水分至1000mL，使用IM NaOH或IM HCL將培養(yǎng)基pH調(diào)至6.0，121°C下滅菌20 min。
[0052]將滅菌處理的PDA培養(yǎng)基放涼至50?60°C，加入2 %去氧膽酸鈉20 ml/L ； 0.1%孟加拉紅3.3 mL/L ;硫酸鏈霉素溶液(1000 U/mL) 3.3 mL/L ；
[0053]S4.涂布孢子液:取200 uL孢子液于平板上用無菌涂布棒涂布均勻，使孢子液分散于整個平板表面，然后再用該涂布棒，連續(xù)涂布第2個第3個平板；將平板倒置于26°C，濕度為95 %培養(yǎng)3?7d ;
[0054]S5.挑選菌絲生長旺盛、孢子多的典型菌落入1.5 mL內(nèi)有Iml無菌加有0.1 %吐溫-80的昆蟲生理鹽水和適量玻璃珠的離心管中，振蕩均勻；
[0055]S6.另取S3制備好的培養(yǎng)基倒入本實用新型裝置的培養(yǎng)皿主體內(nèi)；待培養(yǎng)基凝固后，將無菌玻璃紙覆蓋在玻璃紙覆蓋裝置的覆蓋面上，將玻璃紙覆蓋裝置置入培養(yǎng)皿主體內(nèi)使覆蓋面與固體培養(yǎng)基貼合；取S5制備得到的菌液200 μ L涂布在貼有玻璃紙上，將培養(yǎng)皿蓋上蓋，倒置于26°C、濕度為95 %環(huán)境中培養(yǎng)3?7d ;待菌絲長滿，將玻璃紙覆蓋裝置取出，玻璃紙揭下，即可得到分離純化的菌絲和分生孢子。
[0056]經(jīng)檢測，所得白僵菌菌絲和分生孢子中未出現(xiàn)霉菌和細菌，菌落呈淡粉色，易于分辯。白僵菌菌絲茂密和分生孢子呈球狀或卵圓形，個別出現(xiàn)健康的芽體。應(yīng)用本實用新型從培養(yǎng)基上收集分離菌絲和分生孢子非常方便快捷。
【權(quán)利要求】
1.一種適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，包括培養(yǎng)皿主體和培養(yǎng)皿蓋，培養(yǎng)皿主體包括皿底面和自皿底面邊緣向上延伸圍成一圈的側(cè)壁，皿底面可置放培養(yǎng)基；其特征在于，所述培養(yǎng)裝置還包括玻璃紙覆蓋裝置，所述玻璃紙覆蓋裝置包括與皿底面尺寸相適配的覆蓋面和自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐結(jié)構(gòu)，所述覆蓋面為空心環(huán)，覆蓋面在覆蓋上玻璃紙后與皿底面置放的培養(yǎng)基相貼合，所述支撐結(jié)構(gòu)與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述支撐結(jié)構(gòu)為一條或一條以上的自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的支撐腳，支撐腳與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述支撐腳的上端設(shè)有倒鉤，倒鉤懸掛于培養(yǎng)皿側(cè)壁頂端。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述支撐腳至少為兩條，支撐腳的上端之間設(shè)有連接件。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述支撐結(jié)構(gòu)為自覆蓋面邊緣向上設(shè)置的筒體，筒體的外表面與培養(yǎng)皿側(cè)壁的內(nèi)表面相貼。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述適用于微生物分離純化的培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述筒體的上端設(shè)置有連接件。
【文檔編號】C12M1/00GK203613177SQ201320717411
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2013年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月13日
【發(fā)明者】劉吉平, 李香霖 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)