一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板的制作方法
【專利摘要】一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板，包括上板和下板，上板上設(shè)有密封條，上板和下板之間通過密封條相連形成具有開口的用于容納聚合酶鏈反應(yīng)試劑的空腔，且該原位聚合酶鏈反應(yīng)板還設(shè)有用以密封空腔的密封蓋。在進(jìn)行原位聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，將原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑填充進(jìn)該空腔中并使用密封蓋進(jìn)行密封，保證了原位聚合酶鏈反應(yīng)過程中密封的有效性。原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑不蒸發(fā)，反應(yīng)完全，且實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物不會(huì)污染環(huán)境，提升了實(shí)驗(yàn)的成功率，從而使得特定基因及病原體的診斷得到保證、原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)得以可靠應(yīng)用和推廣。
【專利說明】一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及聚合酶鏈反應(yīng)用裝置，特別是涉及一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板。
【背景技術(shù)】
[0002]原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)成功的將聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)和原位雜交技術(shù)結(jié)合起來，保持了兩項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)又彌補(bǔ)了各自的不足。原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)的待檢標(biāo)本一般為載玻片上的組織切片或細(xì)胞，組織切片或細(xì)胞什么東西先經(jīng)過化學(xué)固定，以保持組織細(xì)胞的良好狀態(tài)。細(xì)胞膜和核膜均具有一定的通透性。當(dāng)進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增時(shí)，各種成份(如引物、DNA聚合酶、核苷酸等)均可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞核內(nèi)，以固定在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)的RNA或DNA為模板，在原位進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增的產(chǎn)物一般分子較大，不易穿過細(xì)胞膜，從而被保留在原位。這樣原有的細(xì)胞內(nèi)單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列在原位被大量擴(kuò)增，擴(kuò)增的產(chǎn)物就很容易被原位雜交技術(shù)檢測(cè)出來。因此，原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)可以反映出被測(cè)DNA或RNA的種類、亞種、數(shù)量，同時(shí)也反映其所在細(xì)胞的種類，從而進(jìn)行準(zhǔn)確的分析或診斷。
[0003]原位基因擴(kuò)增技術(shù)是一種有效的檢測(cè)手段，早已得到廣泛的應(yīng)用，但是對(duì)其操作技術(shù)要求高。但實(shí)踐中由于在載玻片上進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增，密封用的是傳統(tǒng)的蓋玻片，不僅操作很不方便，而且會(huì)產(chǎn)生漏氣、蒸干、干擾應(yīng)用、反應(yīng)條件不好尋找等問題，從而造成實(shí)驗(yàn)成功率低，結(jié)果非常不穩(wěn)定，嚴(yán)重制約了原位檢測(cè)技術(shù)的可靠性。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0004]基于此，有必要針對(duì)上述問題，提供一種在進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)具有低蒸發(fā)率、高成功率的原位聚合酶鏈反應(yīng)板。
[0005]一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板，包括上板和下板，所述上板一個(gè)表面上設(shè)有密封條，所述上板與所述下板通過所述密封條相連形成具有開口的用于容納聚合酶鏈反應(yīng)試劑的空腔，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板還包括用以密封所述空腔的密封蓋。
[0006]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述下板的與所述上板相對(duì)的表面上設(shè)有采用膠粘技術(shù)和蛋白質(zhì)交聯(lián)技術(shù)形成的具有網(wǎng)狀分布的分隔膜層。
[0007]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述上板采用透明材料制成。
[0008]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述密封蓋由密度小于水的液體材料形成。
[0009]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述液體材料是油或者液體石蠟。
[0010]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述密封條是由彈性密封材料制成的。
[0011 ] 在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板放置使用時(shí)與水平線形成夾角，所述夾角在O度到180度之間。
[0012]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述下板由玻璃或聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯制成。
[0013]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板上還具有導(dǎo)流機(jī)構(gòu),所述導(dǎo)流機(jī)構(gòu)是由所述下板在所述空腔的開口方向上進(jìn)行延伸構(gòu)成的。[0014]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述密封條連接上板和下板時(shí)呈U型、V型或C型。
[0015]上述原位聚合酶鏈反應(yīng)板包括上板和下板，上板上設(shè)有密封條，上板和下板之間通過密封條相連形成具有開口的用于容納聚合酶鏈反應(yīng)試劑的空腔，且該原位聚合酶鏈反應(yīng)板還設(shè)有用以密封空腔的密封蓋。在進(jìn)行原位聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，將原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑填充進(jìn)該空腔中并使用密封蓋進(jìn)行密封，保證了原位聚合酶鏈反應(yīng)過程中密封的有效性。原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑不蒸發(fā)，反應(yīng)完全，且實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物不會(huì)污染環(huán)境，提升了實(shí)驗(yàn)的成功率，從而使得特定基因及病原體的診斷得到保證、原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)得以可靠應(yīng)用和推廣。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為原位聚合酶鏈反應(yīng)板俯視圖；
[0017]圖2為原位聚合酶鏈反應(yīng)板Y處的剖視圖；
[0018]圖3為原位聚合酶鏈反應(yīng)板的內(nèi)部結(jié)構(gòu)圖；
[0019]圖4為下板示意圖；
[0020]圖5為上板示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)闡述，以使本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和特征能更易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，從而對(duì)本實(shí)用新型的保護(hù)范圍做出更為清楚明確的界定。
[0022]請(qǐng)參照?qǐng)D1、圖2、圖3和圖5，本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施方式提供一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板100。該原位聚合酶鏈反應(yīng)板100包括上板110、下板120，該上板110上設(shè)有密封條130。在進(jìn)行原位聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)需先對(duì)下板120進(jìn)行預(yù)處理，再將上板110與經(jīng)過預(yù)處理后的下板120通過密封條130相連，并形成具有開口的用于容納原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的空腔140。該密封條130設(shè)置于上板110的一個(gè)表面上且呈U型，在其他實(shí)施方式中，還可以是V型、C型等形狀，只要可以滿足容納原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的要求即可，此處不做具體限定。該密封條130可以是半封閉密封圈，也可以是密封膠，密封條130采用彈性密封材料制成，在本實(shí)施方式中，采用硅橡膠制成密封條130，在其他實(shí)施方式中，還可以采用乳膠等其他彈性密封材料來制成密封條130，此處不做具體限定。
[0023]上板110 —般采用玻璃或聚碳酸酯(PC)或聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)材料制成，在其他實(shí)施方式中還可以采用其它材料，只要該材料具有良好的透光性即可，此處不做具體限定。下板120 —般采用透明材料制成，例如玻璃，但在其他實(shí)施方式中也不局限于透明材料，只要能夠完成其對(duì)應(yīng)的功能即可，此處不做具體限定。
[0024]請(qǐng)參照?qǐng)D3，該原位聚合酶鏈反應(yīng)板100上還設(shè)有導(dǎo)流機(jī)構(gòu)。上板110和下板120相連形成的空腔140的開口方向上下板120長于上板110，形成導(dǎo)流機(jī)構(gòu)，達(dá)到在加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150時(shí)方便引流和準(zhǔn)確向空腔140中加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的效果。在其他實(shí)施方式中，該導(dǎo)流機(jī)構(gòu)還可以設(shè)置為其他的形式，例如在加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150時(shí)使用漏斗構(gòu)成導(dǎo)流機(jī)構(gòu)，只要能夠達(dá)到引流和準(zhǔn)確向空腔140中加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的效果即可，此處不做具體限定。[0025]請(qǐng)參照?qǐng)D4，在實(shí)驗(yàn)前需要進(jìn)行預(yù)處理工作。在下板120上與上板110相對(duì)的表面上進(jìn)行預(yù)處理工作，將被測(cè)細(xì)胞及樣品置于該下板120表面上進(jìn)行蛋白質(zhì)膠粘、交聯(lián)和網(wǎng)孔化處理，最終形成具有一定網(wǎng)孔直徑的網(wǎng)狀分布的分隔膜層121。在進(jìn)行人工加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150時(shí)，使得原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150完全浸沒該分隔膜層121，使得被測(cè)細(xì)胞核酸物質(zhì)與原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150充分接觸，以利于原位聚合酶鏈反應(yīng)的進(jìn)行。
[0026]該原位聚合酶鏈反應(yīng)板100上還設(shè)有用于密封空腔140的密封蓋141。該密封蓋141可以是由蓋板形成的，也可以是一層柔性密封蓋。該柔性密封蓋即在向空腔140內(nèi)加注完原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150后再接著向空腔140中加注輕質(zhì)油形成的一層油膜。由于油的比重輕，因此輕質(zhì)油實(shí)質(zhì)上是漂浮在原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的上方，從而將原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150完全封閉，保證了原位聚合酶鏈反應(yīng)過程中密封的有效性。且由于密封蓋141的密封作用，在實(shí)驗(yàn)時(shí)原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150不會(huì)蒸發(fā)，反應(yīng)完全，實(shí)驗(yàn)增產(chǎn)物不會(huì)污染到環(huán)境，提升了實(shí)驗(yàn)的成功率。在其他實(shí)施方式中，還可以使用其他液體材料來構(gòu)成密封蓋141，例如液體石蠟等，但需要該液體材料的密度小于水的密度，此處不做具體限定。當(dāng)密封條130的兩端延伸至上板110的邊緣處時(shí)，由于下板110在該開口方向上比上板120長，所以可以直接在上板120的邊緣處設(shè)置一層玻璃蓋板形成密封蓋141 ;當(dāng)密封條130的兩端沒有延伸至上板110的邊緣處時(shí)，可以在密封條130的兩端上設(shè)置一層玻璃蓋板形成密封蓋141。在其他實(shí)施方式中,還可以使用其他蓋板形成密封蓋141。即當(dāng)使用蓋板形成密封蓋141時(shí)，該密封蓋141設(shè)置的位置需根據(jù)密封條130的兩端的位置來確定。
[0027]請(qǐng)參照?qǐng)D3，在使用該原位聚合酶鏈反應(yīng)板100進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，將其放置在工作臺(tái)上，原位聚合酶鏈反應(yīng)板100與水平線X形成角度α，以使實(shí)驗(yàn)過程中可能產(chǎn)生的氣泡僅出現(xiàn)在上側(cè)。該角度α的形成可以是使用具有角度α的支撐體，也可以是原位聚合酶鏈反應(yīng)板100自身形成的，可以利用具有角度α的原位基因擴(kuò)增儀專用模塊形成。該角度α可以是45°或90°，也可以是非水平的其他任意角度。
[0028]上述原位聚合酶鏈反應(yīng)板100具有一個(gè)容納原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150的空腔140，在該空腔140內(nèi)加注原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150直至浸沒分隔膜層121，然后接著加注輕質(zhì)油形成密封蓋141漂浮在原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150上方，從而將原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑完全封閉。這樣的原位聚合酶鏈反應(yīng)板100使用時(shí)操作簡單，且其良好的密封性保證了原位聚合酶鏈反應(yīng)試劑150反應(yīng)充分，從而使得實(shí)驗(yàn)具有良好的擴(kuò)增性，實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增產(chǎn)物不會(huì)蒸發(fā)、不會(huì)污染環(huán)境，從而提升了實(shí)驗(yàn)的成功率，使得特定基因及病原體的診斷得到保證，使得原位聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)得以可靠應(yīng)用和推廣。
[0029]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本實(shí)用新型的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本實(shí)用新型專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實(shí)用新型構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本實(shí)用新型的保護(hù)范圍。因此，本實(shí)用新型專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，包括上板和下板，所述上板一個(gè)表面上設(shè)有密封條，所述上板與所述下板通過所述密封條相連形成具有開口的用于容納聚合酶鏈反應(yīng)試劑的空腔，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板還包括用以密封所述空腔的密封蓋。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述下板的與所述上板相對(duì)的表面上設(shè)有采用膠粘技術(shù)和蛋白質(zhì)交聯(lián)技術(shù)形成的具有網(wǎng)狀分布的分隔膜層。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述上板采用透明材料制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述密封蓋由密度小于水的液體材料形成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述液體材料是油或者液體石蠟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述密封條是由彈性密封材料制成的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板放置使用時(shí)與水平線形成夾角，所述夾角在O度到180度之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述下板由玻璃或聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯制成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述原位聚合酶鏈反應(yīng)板上還具有導(dǎo)流機(jī)構(gòu)，所述導(dǎo)流機(jī)構(gòu)是由所述下板在所述空腔的開口方向上進(jìn)行延伸構(gòu)成的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1?9中任一項(xiàng)所述的原位聚合酶鏈反應(yīng)板，其特征在于，所述密封條連接上板和下板時(shí)呈U型、V型或C型。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK203613182SQ201320816101
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】劉志華, 聶尚海, 申躍華 申請(qǐng)人:蘇州東勝興業(yè)科學(xué)儀器有限公司