用假單胞菌屬和源于其的物質(zhì)和組合物防治植物致病微生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供化合物和組合物，所述化合物和組合物源于假單胞菌屬，尤其是熒光假單胞菌或保護假單胞菌，且更尤其是具有假單胞菌ATCC 55799的識別特征且具有抗微生物特性，尤其是具有抗細菌特性的菌株。ATCC 557991996.07.10
【專利說明】用假單胞菌屬和源于其的物質(zhì)和組合物防治植物致病微生 物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 提供用于防治植物致病微生物，尤其細菌和真菌的源于假單胞菌屬，尤其保護假 單胞菌（Pseudomonas protegens)的組合物和方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 植物病原體造成農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的顯著損失。植物疾病可由細菌、真菌或病毒引起。
[0003] 大多數(shù)細菌性植物疾病可用宿主抗性、培養(yǎng)技術(shù)、化學和生物防治的組合來防治。
[0004] 若干假單胞菌菌株先前已證實生物防治特性（參看例如道林（Dowling)和歐咖拉 ((V Gara)，1994,針對抗真菌和抗細菌特性的討論；凱爾（Keel)等人，1992年，針對抗細 菌特性的討論；美國專利第5, 622, 846號、第5, 552, 315號；拉米特（Ramette)等人，2011 年）。然而，關(guān)于病原體防治的機制，尚無清楚了解。一些理論包括在宿主植物中誘導系統(tǒng) 性抗性，與植物病原體競爭，或針對植物病原體產(chǎn)生拮抗化合物。
[0005] 假單胞菌菌株CL145A已從水樣品中分離且經(jīng)證實具有防治軟體動物的能力（參 看例如，參看莫洛伊D.P. (Molloy，D.P.)美國專利第6, 194, 194號，2001年2月27日頒布， 和美國專利申請公開案第20100266717號）。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 提供源于假單胞菌屬且尤其源于具有抗微生物特性且尤其具有抗細菌特性和抗 真菌特性的假單胞菌物種菌株的分離的化合物和組合物。
[0007] 在一個特定實施例中，源于假單胞菌物種的所述化合物具有以下特征：
[0008] (a)可從假單胞菌物種，尤其產(chǎn)生至少一種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和金色貽貝的 化合物的假單胞菌物種獲得；
[0009] (b)調(diào)節(jié)植物致病微生物的一或多個物種，和
[0010] (c)具有選自由以下組成的群組的分子量和HPLC保留時間：
[0011] (i)如由液相色譜/質(zhì)譜法（LC/MS)所測定，約300-380且更特定說來約324 的分子量，在反相C-18HPLC(菲羅門公司，Luna5yC18(2)100A，100X4. 60mm)柱上使用 水：乙腈（CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)（0-20min ;90-0% CH3CN 水溶液，20-24min ;100% CH3CN， 24-27min ;0-90% CH3CN 水溶液，27-30min ;90% CH3CN 水溶液）在(λ 5mL/min 流速和 210nm 的UV檢測下，具有約12-22分鐘，更特定說來約17分鐘且甚至更特定說來約17. 50分鐘的 HPLC保留時間；且在214、252、312nm下具有UV吸收；
[0012] (ii)如由LC/MS所測定，約300-360且更特定說來約314的分子量；使用梯度溶 劑系統(tǒng)（0_20min ;90-0% CH3CN 水溶液，20-24min ;100% CH3CN，24-27min ;0-90% CH3CN 水 溶液，27-30min ;90% CH3CN水溶液）在0. 5mL/min流速下，具有約10-20分鐘，更特定說來 約15分鐘且甚至更特定說來約15. 23min的HPLC保留時間；且在299、311、325nm下具有UV 吸收；
[0013] (iii)如由LC/MS所測定，約580-680且更特定說來約627的分子量；具有約8-20 分鐘，更特定說來約14分鐘且甚至更特定說來約14-24min的HPLC保留時間，且在299、 311、325nm下具有UV吸收。
[0014] (iv)如由LC/MS所測定，約350-425且更特定說來約386的分子量；在反相 C-18HPLC(菲羅門公司，Luna5uC18(2)100A，100X4. 60mm)柱上使用水：乙腈（CH3CN) 梯度溶劑系統(tǒng)（0_20min ;90-0% CH3CN 水溶液，20-24min ;100% CH3CN，24-27min ;0-90% CH3CN水溶液，27-30min ;90% CH3CN水溶液）在0. 5mL/min流速和210nm的UV檢測下，具 有約6-16分鐘，更特定說來約9分鐘且甚至更特定說來約9. 06min的HPLC保留時間；且在 221、267、361nm 下具有 UV 吸收。
[0015] 在一個更特定實施例中，植物致病微生物為植物致病細菌或植物致病真 菌。在一個甚至更特定實施例中，植物致病細菌為以下至少一者的成員：芽孢桿菌 屬（例如枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilus)、錯樣芽胞桿菌（Bacillus cereus))、 黃單抱菌屬(Xanthomonas acernea、白紋黃單抱菌（Xanthomonas albilineans)、苜 猜黃單抱菌jlfalfa亞種（Xanthomonas alfalfae ssp. jlfalfa)、苜猜黃單抱菌柑 桔亞種(Xanthomonas alfalfae ssp. citrumelonis)、葡萄黃單抱菌(Xanthomonas ampelina)、樹生黃單胞菌棒子致病變種（Xanthomonas arboricola pv.corylina)、樹 生黃單胞菌核桃致病變種（Xanthomonas arboricola pv.juglandis)、樹生黃單胞菌 桃李致病變種（Xanthomonas arboricola pv.pruni)、地毯草黃單胞菌（Xanthomonas axonopodis)、地毯草黃單胞菌苜猜致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. alfalfa)、 地毯草黃單胞菌洋蔥致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. aliii)、地毯草黃 單胞菌漆樹致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. anacardii)、地毯草黃單胞 菌秋海棠致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. begonia)、地毯草黃單胞菌柑 桔致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. citri)、地毯草黃單胞菌柑桔致病變 種（Xanthomonas axonopodis pv. citrumelo)、地毯草黃單胞菌花葉萬年青致病變 種（Xanthomonas axonopodis pv.dieffenbachiae)、地毯草黃單胞菌大豆致病變種 (Xanthomonas axonopodis pv. glycines)、地毯草黃單胞菌錦葵致病變種（Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum)、地毯草黃單胞菌木薯致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.manihotis)、地毯草黃單胞菌菜豆致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.phaseoli)、 地毯草黃單胞菌一品紅致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.poinsettiicola)、地毯草 黃單胞菌甘鹿致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.vasculorum)、地毯草黃單胞菌辣 椒致病變種（Xanthomonas axonopodis pv.vesicatoria)、地毯草黃單胞菌萵苣致病變種 (Xanthomonas axonopodis pv. vitians)、秋海棠黃單胞菌（Xanthomonas begoniae)、野 油菜黃單胞菌（Xanthomonas campestris)、野油菜黃單胞菌苜猜致病變種（Xanthomonas campestris pv. alfalfa)、野油菜黃單胞菌苜猜致病變種、野油菜黃單胞菌假辣根致 病變種（Xanthomonas campestris pv.armoraciae)、野油菜黃單胞菌秋海棠致病變種 (Xanthomonas campestris pv. Begonia)、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種（Xanthomonas campestris pv. campestris)、野油菜黃單胞菌胡蘿卜致病變種（Xanthomonas campestris pv. Carotae)、野油菜黃單胞菌芫荽致病變種（Xanthomonas campestris pv. coriandri)、 野油菜黃單胞菌榛子致病變種（Xanthomonas campestris pv.Corylina)、野油菜黃單胞菌 黃瓜致病變種（Xanthomonas campestris pv. cucurbitae)、野油菜黃單胞菌花葉萬年青致 病變種（Xanthomonas campestris pv:dieffenbachiae)、野油菜黃單胞菌常春藤致病變種 (Xanthomonas campestris pv. hederae)、野油菜黃單胞菌風信子致病變種（Xanthomonas campestris pv.hyacinthi)、野油菜黃單胞菌紫羅蘭致病變種（Xanthomonas campestris pv. incanae)、野油菜黃單胞菌核桃致病變種（Xanthomonas campestris pv. juglandis)、 野油菜黃單胞菌錦葵致病變種（Xanthomonas campestris pv. malvacearum)、野油 菜黃單胞菌芒果致病變種（Xanthomonas campestris pv. Mangiferaeindicae)、野 油菜黃單胞菌香蕉致病變種（Xanthomonas campestris pv. musacearum)、野油菜黃 單胞菌水稻致病變種（Xanthomonas campestris pv.Oryzae)、野油菜黃單胞菌棲稻 致病變種（Xanthomonas campestris pv. Oryzicola)、野油菜黃單胞菌S粟致病變 種（Xanthomonas campestris pv.Papavericola)、野油菜黃單胞菌天竺葵致病變種 (Xanthomonas campestris pv.pelargonii)、野油菜黃單胞菌菜豆致病變種（Xanthomonas campestris pv.Phaseoli)、野油菜黃單胞菌一品紅致病變種（Xanthomonas campestris pv. poinsettiicola)、野油菜黃單胞菌桃李致病變種（Xanthomonas campestris pv.Pruni)、野油菜黃單胞菌萊藤子致病變種（Xanthomonas campestris pv.raphani)、 野油菜黃單胞菌小麥致病變種（Xanthomonas campestris pv.Translucens)、野油菜黃 單胞菌甘鹿致病變種（Xanthomonas campestris pv.vasculorum)、野油菜黃單胞菌辣椒 致病變種（Xanthomonas campestris pv.Vesicatoria)、野油菜黃單胞菌萵苣致病變種 (Xanthomonas campestris pv.vitians)、野油菜黃單胞菌百日菊致病變種（Xanthomonas campestris pv. Zinnia)、柑桔黃單胞菌（Xanthomonas citri)、柑桔黃單胞菌柑桔亞種 (Xanthomonas citri ssp.citri)、柑桔黃單胞菌錦葵亞種（Xanthomonas citri ssp. malvacearum)、瓜類黃單胞菌（Xanthomonas cucurbitae)、番煎黃單胞菌（Xanthomonas euvesicatoria)、草莓黃單胞菌（Xanthomonas fragariae)、褐色黃單胞菌褐色亞種 (Xanthomonas fuscans ssp. fuscans)、力口德納黃單胞菌（Xanthomonas gardneri)、花草黃 單胞菌（Xanthomonas hortorum)、花草黃單胞菌胡蘿卜致病變種（Xanthomonas hortorum pv.carotae)、花草黃單胞菌常春藤致病變種（Xanthomonas hortorum pv. hederae)、 花草黃單胞菌天竺葵致病變種（Xanthomonas hortorum pv.Pelargonii)、風信子黃單 胞菌（Xanthomonas hyacinthi)、嗜麥芽黃單胞菌（Xanthomonas maltophilia)、木薯 黃單胞菌（Xanthomonas manihotis)、水稻黃單胞菌（Xanthomonas oryzae)、水稻黃 單胞菌水稻致病變種（Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、水稻黃單胞菌棲稻致病變種 (Xanthomonas oryzae pv. oryzicola)、穿孑L黃單胞菌（Xanthomonas perforans)、楊屬黃 單胞菌（Xanthomonas populi)、小麥黃單胞菌禾草致病變種（Xanthomonas translucens pv. cerealis)、小麥黃單胞菌禾草致病變種（Xanthomonas translucens pv. graminis)、 小麥黃單胞菌黑麥致病變種（Xanthomonas translucens pv.secalis)、小麥黃單胞 菌小麥致病變種（Xanthomonas translucens pv. translucens)、小麥黃單胞菌波形 致病變種（Xanthomonas translucens pv. undulosa)、甘鹿黃單胞菌（Xanthomonas vasculorum)、維管束黃單胞菌高梁致病變種（Xanthomonas vasicola pv.holcicola)、 辣椒斑點病黃單胞菌（Xanthomonas vesicatoria)、辣椒斑點病黃單胞菌辣椒致病變種 (Xanthomonas vesicatoria pv. vesicatoria))、鏈霉菌（例如瘡痂鏈霉菌（Streptomyces scabie)、酸性瘡痂鏈霉菌（Streptomyces acidiscabies)、腫痂鏈霉菌（Streptomyces turgidiscabies)、番薯鏈霉菌（Streptomyces ipomoeae)、喊性瘡痂鏈霉菌（Streptomyces alkaliscabies))、歐文氏菌（例如胡蘿卜軟腐歐文氏菌（Erwinia carotovora)、解淀粉 歐文氏菌（Erwinia amylovora)、菠蘿歐文氏菌（Erwinia ananas)、菊歐文氏菌（Erwinia chrysanthemi)、白菜軟腐歐文氏菌（Erwinia aroideae)、Erwinia carneigieana、 蘭花歐文氏菌（Erwinia cypripedi)、草生歐文氏菌（Erwinia herbicola)、Erwinia nimmipressuralis、Envinia pyrifoliae、大黃歐文氏菌（Erwinia rhapontici)、生紅 歐文氏菌（Erwinia rubrifaciens)、柳歐文氏菌（Erwinia salicis)、嗜管歐文氏菌 (Erwinia tracheiphila))或葡萄抱菌屬（例如灰葡萄抱菌（Botrytis cinerea)、Botrytis acalda、洋蔥葡萄孢菌（Botrytis allii)[葡萄孢腐爛病]、菌絲性葡萄孢菌（Botrytis byssoidea)[菌絲性腐敗病]、Botrytis convolute、Botrytis alliptica、牡丹葡萄抱 菌（Botrytis paeoniae)、大蒜盲種葡萄抱菌（Botrytis porri) > Botrytis squamosal、 郁金香葡萄孢菌（Botrytis tulipae))。在一個特定實施例中，植物致病真菌包括（但不 限于）單絲殼屬（紫云英單絲殼（Sphaerotheca delphinii)、蒼耳單絲殼（Sphaerotheca fuliginea)、掠絲單絲殼（Sphaerotheca fusca)、斑點單絲殼（Sphaerotheca macularis)、 醋栗單絲殼（Sphaerotheca mors-uvae)、薔薇單絲殼（Sphaerotheca pannosa)、薔薇單絲 殼玫瑰變種（Sphaerotheca pannosa var.rosae)、Sphaerotheca phytoptophila)。
[0016] 還提供包含這些化合物的組合物，且進一步提供用于獲得這些化合物的方法。在 一個特定實施例中，這些化合物可通過（a)在一定條件下培養(yǎng)防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和 金色貽貝的假單胞菌物種的培養(yǎng)物和（b)從（a)的所培養(yǎng)的培養(yǎng)物分離所述化合物來獲 得，所述條件足以在所述所培養(yǎng)的培養(yǎng)物中產(chǎn)生上文所陳述的化合物。
[0017] 進一步提供一種用一定量的細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液調(diào)節(jié)一個位置中植物致 病微生物的至少一個物種的方法，所述細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液包含源于假單胞菌物 種的細胞（其中所述假單胞菌物種產(chǎn)生一或多種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和金色貽貝的物 質(zhì)）或源于所述細胞的上清液、濾液、細胞餾分、一或多種代謝物、一或多種化合物和/或萃 取物，所述量有效調(diào)節(jié)所述植物致病微生物。還提供一定量的細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液 的用途，所述細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液包含源于假單胞菌物種的細胞（其中所述假單胞 菌物種產(chǎn)生一或多種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和金色貽貝的物質(zhì)）或源于所述細胞的上清 液、濾液、細胞餾分、一或多種代謝物、一或多種化合物和/或萃取物，所述細胞懸浮液或全 細胞培養(yǎng)液用于調(diào)配用于調(diào)節(jié)一或多種植物致病微生物的組合物。
[0018] 在一個特定實施例中，所述化合物或代謝物可包括（但不限于）：
[0019] ⑴上文所陳述的化合物；
[0020] (II)如下化合物：⑴如液相色譜/質(zhì)譜法（LC/MS)所測定，其具有約1280-1310 的分子量；（ii)具有 δ 9. 25,8. 36,8. 06, 7. 82, 7. 71，7. 52, 7. 45,6. 82,6. 36,6. 08, 5. 42， 5. 39,5. 30,5. 14, 4. 68,4. 42, 4. 31，4. 16,4. 11，4. 07,3. 95-3. 86,3. 83, 3. 72,3. 66,3. 53， 3. 48,3. 37, 3. 17,3. 06,2. 56,2. 53,2. 45,2. 32,2. 21，2. 02,1. 96,1. 84,1. 72,1. 65,1. 61， 1. 51，1. 48-1. 37,1. 32,1. 12,0· 94,0· 91，0· 68 的 1Η NMR 值；和（c)在反相 C-18HPLC 柱上 使用水：乙腈梯度溶劑系統(tǒng)（〇-l〇min ;30-40% CH3CN水溶液，10-20min ;40-60% CH3CN水 溶液，20-60min ;60-80% CH3CN水溶液，60-65min ;80-100% CH3CN 水溶液）在 2. 5mL/min 流 速和210nm的UV檢測下，具有約50-55min的（高壓液相色譜）（HPLC)保留時間；
[0021] (III)如下化合物：⑴如LC/MS所測定，其具有約1310-1335的分子量；（ii)在反 相C-18HPLC柱上使用水：乙腈梯度溶劑系統(tǒng)（0-10min ;30-40% CH3CN水溶液，10-20min ; 40-60% CH3CN水溶液，20-60min ;60-80% CH3CN水溶液，60-65min ;80-100% CH3CN水溶液） 在2. 5mL/min流速和210nm的UV檢測下，具有約55-60min的HPLC保留時間；
[0022] (IV)如下化合物：⑴如LC/MS所測定，其具有約540-550的分子量；（ii)在 反相C-18HPLC柱上使用水：乙腈溶劑系統(tǒng)（0-10min ;35-45% CH3CN水溶液，10-20min ; 45-60% CH3CN 水溶液，20-50min ;60-85% CH3CN 水溶液，50-60min ;85-100% CH3CN 水溶液， 60-70min ;100% CH3CN)在 10mL/min 流速和 210nm 的 UV 檢測下，具有約 50-55min 的 HPLC 保留時間；
[0023] (V)如下化合物：其為內(nèi)酯且具有包含至少一個內(nèi)酯部分、至少一個不飽和部分 和至少一個醇基的羥基化不飽和脂肪酸內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，所述內(nèi)酯部分為5元γ -內(nèi)酯；在核心結(jié) 構(gòu)中具有285到約310的分子量；具有至少15個碳和至少3個氧；
[0024] (VI)具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
[0025]

【權(quán)利要求】
1. 一種分離的化合物，其具有以下特征：(a)可從產(chǎn)生至少一種防治斑馬貽貝、斑驢貽 貝和金色貽貝的化合物的假單胞菌物種獲得；(b)調(diào)節(jié)一個位置中一或多個植物致病微生 物物種的侵染；和（c)具有選自由以下各項組成的群組的分子量和HPLC保留時間： ⑴如由液相色譜/質(zhì)譜法LC/MS所測定，約300到380的分子量，和在反相 C-18HPLC(菲羅門公司，Luna5yC18(2)100A, 100X4. 60mm)柱上使用水：乙腈（CH3CN)梯 度溶劑系統(tǒng)（0 到 20min ;90%到 0% CH3CN 水溶液，20 到 24min ;100% CH3CN，24 到 27min ; 0 到 90% CH3CN 水溶液，27 到 30min ;90% CH3CN 水溶液）在 0. 5mL/min 流速和 210nm 的 UV 檢測下，約12到22分鐘的HPLC保留時間；且在212、252、312nm下具有UV吸收； (ii) 如由LC/MS所測定，約300到360的分子量；和在反相C-18HPLC(菲羅門公司， Luna5y C18(2) 100A，100X4. 60mm)柱上使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)（0 到 20min ; 90 % 到 0 % CH3CN 水溶液，20 到 24min ; 100 % CH3CN，24 到 27min ;0 到 90 % CH3CN 水溶液，27 到30min ;90% CH3CN水溶液）在0. 5mL/min流速下，約10到20分鐘的HPLC保留時間；且 在299、311、325nm下具有UV吸收； (iii) 如由LC/MS所測定，約580到680的分子量；和在反相C-18HPLC(菲羅門公司， Luna5y C18(2) 100A，100X4. 60mm)柱上使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)（0 到 20min ; 90 % 到 0 % CH3CN 水溶液，20 到 24min ;100 % CH3CN，24 到 27min ;0 到 90 % CH3CN 水溶液， 27到30min ;90% CH3CN水溶液）在0. 5mL/min流速下，8到20分鐘的HPLC保留時間；且 在299、311、325nm下具有UV吸收； (iv) 如由LC/MS所測定，約350到425的分子量；和在反相C-18HPLC(菲羅門公司， Luna5y C18(2) 100A，100X4. 60mm)柱上使用水：乙腈（CH3CN)梯度溶劑系統(tǒng)（0 到 20min ; 90 % 到 0 % CH3CN 水溶液，20 到 24min ; 100 % CH3CN，24 到 27min ;0 到 90 % CH3CN 水溶液，27 至lj 30min ;90% CH3CN水溶液）在0. 5mL/min流速和210nm的UV檢測下，約6到16分鐘的 HPLC保留時間；且在221、267、361nm下具有UV吸收。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物可從保護假單胞菌獲得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物可從具有假單胞菌ATCC 55799的識 別特征的假單胞菌菌株獲得。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物調(diào)節(jié)植物致病微生物的一或多個物 種，其中所述植物致病微生物為植物致病細菌或植物致病真菌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物調(diào)節(jié)植物致病微生物的一或多個物 種，所述植物致病微生物為芽孢桿菌屬、歐文氏菌屬、鏈霉菌屬、葡萄孢菌屬或黃單胞菌屬 中至少一者的成員。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物調(diào)節(jié)植物致病微生物的一或多個物 種，所述植物致病微生物選自由枯草芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌、野油菜黃單胞菌、樹生黃單 胞菌、辣椒斑點病黃單胞菌、阿氟曼鏈霉菌、灰葡萄孢菌和胡蘿卜軟腐歐文氏菌、蒼耳單絲 殼組成的群組。
7. -種組合物，其包含一或多種根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物和載劑。
8. -種產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其包含 (a)培養(yǎng)假單胞菌物種的培養(yǎng)物，其中所述假單胞菌物種在足以產(chǎn)生根據(jù)權(quán)利要求1 所述的化合物的條件下在所述所培養(yǎng)的培養(yǎng)物中產(chǎn)生至少一種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和 金色貽貝的化合物；以及 (b)從（a)的所述所培養(yǎng)的培養(yǎng)物中分離所述化合物。
9. 一種調(diào)節(jié)需要調(diào)節(jié)的位置中的一或多種植物致病微生物的方法，其包含在所述位置 中引入一定量的細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液，所述細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液包含源于假 單胞菌物種的細胞（其中所述假單胞菌物種產(chǎn)生一或多種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和金色 貽貝的物質(zhì)）或源于所述細胞的上清液、濾液、細胞餾分、一或多種代謝物、一或多種化合 物和/或萃取物，所述量有效調(diào)節(jié)所述植物致病微生物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述細胞懸浮液包含保護假單胞菌或熒光假單 胞菌或其具有保護假單胞菌或熒光假單胞菌的識別特征的突變型菌株的細胞。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述物質(zhì)源于具有假單胞菌ATCC 55799的識別 特征的假單胞菌物種菌株。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述化合物選自由以下各項組成的群組： (a) 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物； (b) 如下化合物：⑴如液相色譜/質(zhì)譜法LC/MS所測定，其具有約1280到1310的分 子量；（ii)具有 δ 9· 25、8· 36、8· 06、7· 82、7· 71、7· 52、7· 45、6· 82、6· 36、6· 08、5· 42、5· 39、 5· 30、5· 14、4· 68、4· 42、4· 31、4· 16、4· 11、4· 07、3· 95 到 3· 86、3· 83、3· 72、3· 66、3· 53、3· 48、 3· 37、3· 17、3· 06、2· 56、2· 53、2· 45、2· 32、2· 21、2· 02、1· 96、1· 84、1· 72、1· 65、1· 61、1· 51、 1. 48 到 1. 37、1· 32、1· 12、0· 94、0· 91、0· 68 的 1Η NMR 值；和（c)在反相 C-18HPLC 柱上使用 水：乙腈梯度溶劑系統(tǒng)（0到lOmin ;30到40% CH3CN水溶液，10到20min ;40到60% CH3CN 水溶液，20到60min ;60到80 % CH3CN水溶液，60到65min ;80到100 % CH3CN水溶液）在 2. 5mL/min流速和210nm的UV檢測下，具有約50到55min的（高壓液相色譜）HPLC保留時 間； (c) 如下化合物：（i)如LC/MS所測定，其具有約540到550的分子量；（ii)在反相 C-18HPLC柱上使用水：乙腈溶劑系統(tǒng)（0到lOmin ;35到45% CH3CN水溶液，10到20min ; 45 到 60 % CH3CN 水溶液，20 到 50min ;60 到 85 % CH3CN 水溶液，50 到 60min ;85 到 100 % CH3CN水溶液，60到70min ;100% CH3CN)在10mL/min流速和210nm的UV檢測下，具有約50 到55min的HPLC保留時間； (d) 如下化合物：其為內(nèi)酯且具有包含至少一個內(nèi)酯部分、至少一個不飽和部分和至 少一個醇基的羥基化不飽和脂肪酸內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，所述內(nèi)酯部分為5元γ-內(nèi)酯；在核心結(jié)構(gòu)中 具有285到約310的分子量；具有至少15個碳和至少3個氧； (e) 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
其中：X各自獨立地為一0、一NRi或一S，其中札為一H或Q-C；烷基；η = 0到15 ;R2 到&各自獨立地為一Η、烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取 代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取代雜環(huán)、環(huán)烷基、經(jīng)取代環(huán)烷基、烷氧基、經(jīng)取代 烷氧基、硫烷基、經(jīng)取代硫烷基、羥基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、一C(0)H、?；⒀貂；?、氨 基甲酸酯基、磺?；?、磺酰胺或硫?；?m =雙鍵或三鍵； (f) 如下化合物：其具有包含至少一個羧酸部分、至少一個不飽和部分和至少一個醇 基的羥基化不飽和脂肪酸結(jié)構(gòu)；在核心結(jié)構(gòu)中具有285到約310的分子量；具有至少15個 碳和至少3個氧； (g) 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
其中：X各自獨立地為一Ol-NRi或一S，其中札為一H或烷基；η = 0到15 ;R2 到&各自獨立地為一Η、烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取 代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取代雜環(huán)、環(huán)烷基、經(jīng)取代環(huán)烷基、烷氧基、經(jīng)取代 烷氧基、硫烷基、經(jīng)取代硫烷基、羥基、齒素、氨基、酰胺基、羧基、一C(0)H、?；?、氧酰基、氨 基甲酸酯基、磺?；?、磺酰胺或硫?；?m =雙鍵、三鍵； (h) 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
或其可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其中：X各自獨立地為--01-4?或一S，其中&為一H 或烷基；η = 0到15 ;R2、R3各自獨立地為一H、烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、 炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取代雜環(huán)、環(huán)烷基、 經(jīng)取代環(huán)烷基、烷氧基、經(jīng)取代烷氧基、硫烷基、經(jīng)取代硫烷基、羥基、齒素、氨基、酰胺基、羧 基、一C(0)H、?；⒀貂；?、氨基甲酸酯基、磺酰基、磺酰胺或硫?；?m =雙鍵、三鍵； Q)具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
或其可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其中：X各自獨立地為--01-4?或一S，其中&為一H 或烷基；η = 0到15 ;R2、R3各自獨立地為一H、烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、 炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取代雜環(huán)、環(huán)烷基、 經(jīng)取代環(huán)烷基、烷氧基、經(jīng)取代烷氧基、硫烷基、經(jīng)取代硫烷基、羥基、齒素、氨基、酰胺基、羧 基、一C(0)H、?；?、氧酰基、氨基甲酸酯基、磺?；?、磺酰胺或硫酰基;m = 0到15 ; (j) 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
或其可接受的鹽或立體異構(gòu)體，其中：X各自獨立地為--01-4?或一S，其中&為一H 或烷基；η = 0到15 ;R2到R4各自獨立地為一H、烷基、經(jīng)取代烷基、烯基、經(jīng)取代烯基、 炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取代雜環(huán)、環(huán)烷基、經(jīng) 取代環(huán)燒基、燒氧基、經(jīng)取代燒氧基、硫燒基、經(jīng)取代硫燒基、輕基、齒素、氣基、醜胺基、竣 基、一C(0)H、?；?、氧?；被姿狨セ?、磺?；?、磺酰胺或硫酰基；m =雙鍵、三鍵； (k) 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物
其中烷基；n = 0到15 ;RjljR4各自獨立地為一Η、烷基、經(jīng)取代烷基、 烯基、經(jīng)取代烯基、炔基、經(jīng)取代炔基、芳基、經(jīng)取代芳基、雜芳基、經(jīng)取代雜芳基、雜環(huán)、經(jīng)取 代雜環(huán)、環(huán)燒基、經(jīng)取代環(huán)燒基、燒氧基、經(jīng)取代燒氧基、硫燒基、經(jīng)取代硫燒基、輕基、齒素、 氨基、酰胺基、羧基、一C(0)H、酰基、氧?；被姿狨セ?、磺?；?、磺酰胺或硫?；?m = 0 到15 ; (l) 選自由十二內(nèi)酯、十三內(nèi)酯、比利佛丁內(nèi)酯A和α-庚基-Y-丁內(nèi)酯組成 的群組的內(nèi)酯；以及 (m) 選自由Ν-環(huán)戊基癸酰胺、Ν-(癸?；┻量┩椤ⅵ?(癸?；┻哙?、Ν-(癸酰基）六 亞甲基亞胺、N-環(huán)戊基癸烯酰胺、（N-(癸烯?；┻量┩椤-(癸烯?；┻哙ぁ-(癸烯 ?；┝鶃喖谆鶃啺泛蚇-(癸烯?；┻哙そM成的群組的假筠亭堿類似物； (η) 11-羥基-12-烯-十八烷酸； (〇)9-十六烯酸；和 (Ρ)菌麻油酸。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中將所述物質(zhì)施用于植物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述方法進一步包含施用另一抗微生物劑。
16. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述植物致病微生物為芽孢桿菌屬、歐文氏菌 屬、鏈霉菌屬、葡萄孢菌屬或黃單胞菌屬中至少一者的成員。
17. -種細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液的用途，所述細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液包含源 于假單胞菌物種的細胞（其中所述假單胞菌物種產(chǎn)生一或多種防治斑馬貽貝、斑驢貽貝和 金色貽貝的物質(zhì)）或源于所述細胞的上清液、濾液、細胞餾分、一或多種代謝物、一或多種 化合物和/或萃取物，所述細胞懸浮液或全細胞培養(yǎng)液用于調(diào)配用于調(diào)節(jié)植物致病微生物 的組合物。
【文檔編號】C12R1/38GK104254611SQ201380011032
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月28日
【發(fā)明者】瑞那卡·阿索卡, 安娜·盧西亞·科多娃-克雷羅斯, 卡爾利·托德 申請人:馬羅內(nèi)生物創(chuàng)新公司