抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法
【專利摘要】本發(fā)明提供抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法、抗壞血酸氧化酶的保存方法及抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物。一種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法和抗壞血酸氧化酶的保存方法,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存;一種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法、抗壞血酸氧化酶的保存方法和抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物對臨床診斷等有用。
【專利說明】抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法、抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 日常地進行如下的臨床檢查:使用氧化酶使血清等生物試樣中的測定對象成分生 成過氧化氫,并測定生成的過氧化氫,由此對測定對象成分進行測定。在基于該過氧化氫測 定的、生物試樣中的測定對象成分的測定方法中,生物試樣中含有的抗壞血酸、膽紅素等妨 礙物質(zhì)的影響常常成為問題。特別是,抗壞血酸的還原作用非常強,為了避免其影響,在臨 床檢查中經(jīng)常使用利用抗壞血酸氧化酶將抗壞血酸轉(zhuǎn)變成脫氫抗壞血酸來抑制抗壞血酸 的影響的方法。
[0003] 抗壞血酸氧化酶為分子量約14萬的藍銅蛋白,其將抗壞血酸轉(zhuǎn)變成脫氫抗壞血 酸。為了抑制抗壞血酸的影響,在用于測定生物試樣中的測定對象成分的試劑中常常含有 抗壞血酸氧化酶。但是,抗壞血酸氧化酶不穩(wěn)定,存在在試劑保存中失活而導致試劑的性能 變差的問題。
[0004] 針對該問題,已知如下方法:通過在含有抗壞血酸氧化酶的溶液中添加由金屬或 陽性的堿性基團和陰性的酸性基團構(gòu)成的化合物、或者組合添加該化合物與過氧化氫酶和 /或過氧化物酶、氧化性色素偶合劑而使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻1); 通過將抗壞血酸氧化酶在N-取代?;撬犷惥彌_劑的存在下冷凍干燥后保持而使抗壞血酸 氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻2);通過使抗壞血酸氧化酶中含有選自脫脂奶粉、乳 糖、蔗糖和可溶性淀粉中的一種以上而使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻 3);通過使選自牛血清白蛋白、葡聚糖或聚乙二醇中的水溶性載體與抗壞血酸氧化酶進行 化學結(jié)合而使溶液狀態(tài)下的抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻4);通過配合一 種或兩種以上的丙酮酸(鹽)而使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻5);通 過在含有抗壞血酸氧化酶的溶液中添加糖醇而使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專 利文獻6);通過使選自2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮、 1,2-苯并異噻唑啉-3-酮和它們的鹽中的物質(zhì)與抗壞血酸氧化酶共存而使抗壞血酸氧化 酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻7);通過使抗壞血酸氧化酶與蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物共存而使干 燥狀態(tài)的抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻8);通過添加氨基酸、氨基酸鹽和/ 或寡肽而使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的方法(參照專利文獻9)等。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻 [0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1:日本特公平8-015430號公報
[0008] 專利文獻2:日本特開平4-066087號公報
[0009] 專利文獻3:日本特開平5-244948號公報
[0010] 專利文獻4 :日本特開平6-062846號公報
[0011] 專利文獻5 :日本特開2002-233363號公報
[0012] 專利文獻6 :日本特開2003-116539號公報
[0013] 專利文獻7:日本特開2004-105025號公報
[0014] 專利文獻8:日本特開2005-114368號公報
[0015] 專利文獻9:日本特開2007-228842號公報
【發(fā)明內(nèi)容】
[0016]發(fā)明所要解決的問題
[0017] 本發(fā)明的目的在于提供適于長期保存的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法、抗壞血酸 氧化酶的保存方法及抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物。
[0018] 用于解決問題的手段
[0019] 本發(fā)明人為了解決該問題反復進行了深入研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了通過使亞硝酸或其鹽 或者亞硝酸酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存而使抗壞血酸氧化酶保持穩(wěn)定的見解, 從而完成了本發(fā)明。即,本發(fā)明涉及以下的[1]?[3]。
[0020] [1] 一種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸 酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
[0021] [2] -種抗壞血酸氧化酶的保存方法,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯 與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
[0022] [3] -種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝 酸酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
[0023] 發(fā)明效果
[0024] 根據(jù)本發(fā)明,提供適于長期保存的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法、抗壞血酸氧化 酶的保存方法及抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物。
【具體實施方式】
[0025] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法是特征在于使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸 酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存的方法。
[0026] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法是特征在于使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯 與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存的方法。
[0027] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物是特征在于使亞硝酸或其鹽或者亞硝 酸酯與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存的組合物。
[0028] 本發(fā)明中,"穩(wěn)定"是指即使將抗壞血酸氧化酶長時間保存也可維持抗壞血酸氧化 酶的酶活性,具體而言是指,將抗壞血酸氧化酶的水溶液在30°C下保存10天,在30°C下保 存10天后的抗壞血酸氧化酶活性為抗壞血酸氧化酶水溶液剛制備后的抗壞血酸氧化酶活 性的60%以上。抗壞血酸氧化酶活性例如可以通過以下的方法來測定。
[0029] 制備作為抗壞血酸氧化酶的底物的抗壞血酸的水溶液(底物液)。將含有抗壞血 酸氧化酶的樣本(xii L)添加到預先在37°C下加熱5分鐘后的緩沖液(yii L)中,接著,添加 底物液(z U L)。測定添加底物液2分鐘后的反應液在292nm下的吸光度(El)和添加底物 液3分鐘后的反應液在292nm下的吸光度(E2),通過以下的式(I)算出樣本中的抗壞血酸 氧化酶活性。
[0030]抗壞血酸氧化酶活性(U/mL) = (El_E2)/2. 2X (x+y+z)/x (I)
[0031] 抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化例如可以通過以下的方法來評價。作為含有抗壞血酸氧 化酶的樣本,對于在含有牛血清白蛋白(BSA)的緩沖液中添加抗壞血酸氧化酶和亞硝酸或 其鹽或者亞硝酸酯而制備的樣本A而言,制備剛制備后的樣本和將樣本 在30°C下保存10天后的樣本。另外,對于在含有牛血清白蛋白(BSA)的緩沖液中 僅添加抗壞血酸氧化酶而制備的、不含亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯的樣本a而言,制備剛 制備后的樣本a 和將樣本a在30 C下保存10天后的樣本a后>。
[0032] 使用樣本& __^作為樣本,通過上述的抗壞血酸氧化酶活性測定方法,算出樣 本A(剛制備后)中的抗壞血酸氧化酶活性Va(剛制備后)。同樣地,使用樣本A(保存后)、樣本a(剛制備后) 和樣本各樣本代替樣本作為樣本,算出各樣本中的抗壞血酸氧化酶活性 Va(保存后)、Va(剛制備后)和Va(保蹄)。通過以下的式(II)算出樣本A中的抗壞血酸氧化酶活性 的殘留率。
[0033]殘留率(%) =Va(保存后)/VA(剛制備后)X 100 (II)
[0034] 同樣地,通過以下的式(III)算出樣本a中的抗壞血酸氧化酶的殘留率。
[0035] 殘留率(% )=Va(保存后)/Va(剛制備后)X100 (III)
[0036] 在通過上述式(II)算出的樣本A中的抗壞血酸氧化酶的殘留率為60%以上并且 比通過上述式(III)算出的樣本a中的抗壞血酸氧化酶的殘留率高的情況下,可以評價為 通過亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化。
[0037] 本發(fā)明中的抗壞血酸氧化酶是分類為ECL 10. 3. 3的酶,是催化以下任意一種反 應的酶。
[0038] (I)L-抗壞血酸+1/202-脫氫抗壞血酸+H2O
[0039] 作為催化上述反應的抗壞血酸氧化酶,可以列舉例如來源于黃瓜、南瓜等植物的 抗壞血酸氧化酶等。
[0040] (2)L-抗壞血酸+O2-脫氫抗壞血酸+H2O2
[0041] 作為催化上述反應的抗壞血酸氧化酶,可以列舉例如來源于木霉屬(Trichoderma 屬)、被孢霉屬(Mortierella屬)、正青霉屬(Eupenicillium屬)等的微生物的抗壞血酸 氧化酶等。
[0042] 催化上述(1)的反應的抗壞血酸氧化酶例如可以從和光純藥工業(yè)公司、旭化成制 藥公司、羅氏診斷公司、東洋紡織公司等獲得。另外,作為催化上述(1)的反應的抗壞血酸 氧化酶,也可以使用經(jīng)過化學修飾的抗壞血酸氧化酶,作為經(jīng)過化學修飾的抗壞血酸氧化 酶,例如可以從羅氏診斷公司等獲得。催化上述(2)的反應的抗壞血酸氧化酶例如可以從 天野酶公司等獲得。
[0043] 本發(fā)明中,作為水性介質(zhì),只要是能夠使抗壞血酸氧化酶保持穩(wěn)定的水性介質(zhì),則 沒有特別限制,可以列舉例如去離子水、蒸餾水、緩沖液等,優(yōu)選緩沖液。本發(fā)明中的抗壞血 酸氧化酶在水性介質(zhì)中的濃度通常為〇. 1?l〇〇U/mL。作為緩沖液,優(yōu)選在能夠使抗壞血 酸氧化酶保持穩(wěn)定的PH范圍內(nèi)具有緩沖能力的緩沖劑,可以列舉例如:磷酸緩沖液、硼酸 緩沖液、Good' s緩沖液等。作為Good' s緩沖液中使用的Good' s緩沖劑,可以列舉例如: 2-嗎啉代乙烷磺酸(MES)、三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)、雙(2-羥乙基)亞氨基三(羥 甲基)甲烷(Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸(ADA)、哌嗪-N,N' -雙(2-乙烷磺 酸)(PIPES)、N-(2-乙酰胺)-2-氨基乙烷磺酸(ACES)、N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙烷 磺酸(BES)、3_嗎啉代丙烷磺酸(MOPS)、N-[三(羥甲基)甲基]-2-氨基乙烷磺酸(TES)、 2-[4-(2_羥乙基)-1_哌嗪基]乙烷磺酸(HEPES)、哌嗪-N,N' -雙(2-羥基丙烷磺酸) (POPSO)、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N,N-雙(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine)、 N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙烷磺酸(CHES)、N-環(huán) 己基-3-氨基丙烷磺酸(CAPS)等。
[0044] 本發(fā)明中,抗壞血酸氧化酶通常在pH為5?9的水性介質(zhì)中保存,優(yōu)選在pH為 6?8的水性介質(zhì)中保存。
[0045] 本發(fā)明中的亞硝酸或其鹽只要是使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的亞硝酸或其鹽,則沒 有特別限制。作為亞硝酸鹽中的鹽,可以列舉例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽等。
[0046] 本發(fā)明中的亞硝酸酯只要是使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定化的亞硝酸酯,則沒有特別限 制。作為亞硝酸酯,可以列舉例如亞硝酸烷基酯等。作為亞硝酸烷基酯,可以列舉例如亞硝 酸甲酯、亞硝酸乙酯、亞硝酸丙酯、亞硝酸丁酯、亞硝酸戊酯、亞硝酸異戊酯等。
[0047] 本發(fā)明中的亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯在水性介質(zhì)中的濃度只要是使抗壞血酸 氧化酶穩(wěn)定化的濃度,則沒有特別限制,通常為〇. 01?100mm〇l/L,優(yōu)選為0. 05?50mmol/ L〇
[0048] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法是使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯與抗壞血 酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存來保存的方法。本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法中使用的 抗壞血酸氧化酶及其濃度、以及亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯及其濃度可以列舉與上述抗壞 血酸氧化酶穩(wěn)定化方法同樣的物質(zhì)及其濃度。本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法中的保 存期間只要是使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定保存的期間,則沒有特別限制,通常為1?2年。另 夕卜,本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法中的保存溫度只要是使抗壞血酸氧化酶穩(wěn)定保存 的溫度,則沒有特別限制,通常為-5?45°C,優(yōu)選為0?30°C,特別優(yōu)選為2?KTC。 [0049] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的保存方法中,除了亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯以外, 還可以使表面活性劑、防腐劑、蛋白質(zhì)等與抗壞血酸氧化酶共存。作為表面活性劑,可以列 舉例如非離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、兩性表面活性劑等。作 為防腐劑,可以列舉例如疊氮化物、螯合劑等。作為疊氮化物,可以列舉例如疊氮化鈉等。作 為螯合劑,可以列舉例如乙二胺四乙酸(EDTA)或其鹽等。作為鹽,可以列舉例如鈉鹽、鉀鹽 等。作為蛋白質(zhì),可以列舉例如白蛋白等,作為白蛋白,可以列舉例如BSA等。
[0050] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物中,除了抗壞血酸氧化酶和亞硝酸或其 鹽或者亞硝酸酯以外,還可以含有基于過氧化氫測定系統(tǒng)的測定對象成分的測定方法中使 用的試劑和試劑盒中通常含有的構(gòu)成要素。作為測定對象成分,可以列舉總膽固醇(TC)、高 密度脂蛋白中的膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白中的膽固醇(LDL-C)、超低密度脂蛋白中的 膽固醇(VLDL-C)、殘粒樣脂蛋白中的膽固醇(RLP-C)、游離型膽固醇(FC)、甘油三酯、尿酸、 憐脂質(zhì)、糖化蛋白等。
[0051] 例如,膽固醇(TC、HDL-C、LDL-C、VLDL-C、RLP-C)的測定方法中使用的試劑和試 劑盒中,除了抗壞血酸氧化酶和亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯以外,還含有膽固醇酯酶、膽固 醇氧化酶、過氧化物酶、氧化顯色型色原體等,甘油三酯的測定方法中使用的試劑和試劑盒 中,除了抗壞血酸氧化酶以外,還含有脂肪酶、甘油激酶、ATP、甘油3-磷酸氧化酶、過氧化 物酶、氧化顯色型色原體等。
[0052] 作為氧化顯色型色原體,可以列舉無色型色原體、氧化偶合型色原體等。
[0053] 無色型色原體具有在過氧化物酶的存在下與過氧化氫反應而單獨生成色素的 功能。作為無色型色原體,可以列舉例如:四甲基聯(lián)苯胺、鄰苯二胺、10-N-羧甲基氨甲 ?;?3,7-雙(二甲氨基)-10H-吩噻嗪(CCAP)UO-N-甲基氨甲?;?3,7-雙(二甲 氨基)-10H-吩噻嗪(MCDP)、N-(羧甲基氨基羰基)-4, 4' -雙(二甲氨基)二苯胺鈉鹽 (DA-64)、10-N-羧甲基氨甲?;?3, 7-雙(二甲氨基)-10H-吩噻嗪鈉鹽(DA-67)、4, 4'-雙 (二甲氨基)二苯胺、雙[3-雙(4-氯苯基)甲基-4-二甲氨基苯基]胺(BCMA)等。
[0054] 氧化偶合顯色型色原體具有在過氧化物酶的存在下與過氧化氫反應而生成色素 的功能。在該生成色素的反應中,使用一對氧化偶合顯色型色原體的組合。作為一對氧化 偶合顯色型色原體的組合,可以列舉偶合劑與苯胺類的組合、偶合劑與酚類的組合。
[0055] 作為偶合劑,可以列舉例如4-氨基安替比林(4-AA)、3_甲基-2-苯并噻唑啉酮肼 (3- J 予卟-2-?' > '/ 予 了 '/ U 7 > 匕卜'' 7 '7' > )等。
[0056] 作為苯胺類,可以列舉:N- (3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙 基)-3-甲基苯胺(TOOS)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3, 5-二甲基苯胺(MAOS)、N-乙 基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3, 5-二甲氧基苯胺(DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲 基苯胺(TOPS)、N- (2-羥基-3-磺丙基)-3, 5-二甲氧基苯胺(HDAOS)、N,N-二甲基-3-甲 基苯胺、N,N-二(3-磺丙基)-3, 5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯 胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3, 5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺 丙基)-3, 5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3, 5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥 基-3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)苯胺、N-乙基-N-(3-甲 基苯基)-N' -琥珀酰乙二胺(EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N' -乙酰基乙二胺、N-乙 基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-4-氟-3, 5-二甲氧基苯胺(F-DAOS)等。
[0057] 作為酚類,可以列舉苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羥基-2, 4, 6-三碘苯甲酸 (HTIB)等。
[0058] 本發(fā)明的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物中,可以含有上述的表面活性劑、防腐 齊II、蛋白質(zhì)等。
[0059] 以下,通過實施例更詳細地對本發(fā)明進行說明,但本發(fā)明的范圍不受這些實施例 的任何限定。另外,在本實施例、比較例和試驗例中,使用下述制造商的試劑和酶。
[0060]MOPS (同仁化學研究所公司制造)、BSA(密理博公司制造)、磷酸二氫鉀(純正化 學公司制造)、乙酸鈉(關(guān)東化學公司制造)、抗壞血酸(于力5 4 T 7々公司制造)、亞硝 酸鈉(純正化學公司制造)、亞硝酸鉀(純正化學公司制造)、亞硝酸乙酯(東京化成公司 制造)、抗壞血酸氧化酶(旭化成制藥公司制造)、化學修飾抗壞血酸氧化酶(羅氏診斷公 司制造)。
[0061] 實施例1
[0062] 通過以下的方法,研究了由亞硝酸鹽和亞硝酸酯帶來的抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化 效果。
[0063] (1)樣本
[0064] 制備由以下組成構(gòu)成的樣本A(樣本AO?A4)和樣本B (樣本BO?B4)。
[0065]〈樣本A (樣本AO?A4) >
[0066] MOPS(pH7.0) 20mmol/L
[0067] BSA 4g/L
[0068] 化學修飾抗壞血酸氧化酶 4kU/L
[0069]亞硝酸鹽或亞硝酸酯(參照表I,樣本AO為無添加)
[0070]〈樣本B (樣本BO?B4) >
[0071] MOPS(pH7.0) 20mmol/L
[0072] BSA 4g/L
[0073] 抗壞血酸氧化酶 4kU/L
[0074]亞硝酸鹽或亞硝酸酯(參照表1,樣本BO為無添加)
[0075] (2)抗壞血酸氧化酶活性測定用緩沖液
[0076] 制備由以下組成構(gòu)成的抗壞血酸氧化酶活性測定用緩沖液。
[0077]磷酸二氫鉀(pH6. 0) 67mmol/L
[0078]乙酸鈉 67mmol/L
[0079] BSA lg/L
[0080] (3)抗壞血酸氧化酶底物液
[0081] 使用抗壞血酸水溶液(3g/L)作為抗壞血酸氧化酶底物液。
[0082] (4)剛制備后的樣本中的抗壞血酸氧化酶活性
[0083] 向反應皿中添加上述(2)的抗壞血酸氧化酶活性測定用試劑(3mL),在37°C下 加熱5分鐘。向其中添加樣本Al (0.04mL),接著,添加上述(3)的抗壞血酸氧化酶底物液 (0. ImL),開始反應。測定反應2分鐘后的反應液在292nm下的吸光度(El)和反應3分鐘 后的反應液在292nm下的吸光度(E2),根據(jù)上述式(I)確定樣本Al中的抗壞血酸氧化酶活 性Vai(剛制備后)。
[0084] (5)在30°C下保存10天后的樣本中的抗壞血酸氧化酶活性
[0085] 除了使用在30°C下保存10天后的樣本Al代替剛制備后的樣本Al以外,通過與上 述(4)同樣的方法,確定在30°C下保存10天后的樣本Al中的抗壞血酸氧化酶活性V Ains# 后)。
[0086](6)在30°C下保存10天后的樣本中的抗壞血酸氧化酶的殘留率
[0087] 根據(jù)上述式(II),由上述(4)中確定的Vai(剛制備;§)和(5)中確定的Vai(保存;§)確定 在30°C下保存10天后的樣本Al中的抗壞血酸氧化酶活性相對于剛制備后的樣本Al中的 抗壞血酸氧化酶活性的殘留率。將結(jié)果示于表1。
[0088] 除了使用樣本A2?A4和樣本Bl?M各樣本代替樣本Al作為樣本以外,通過與 上述(1)?(6)同樣的方法,確定在30°C下保存10天后的各樣本中的抗壞血酸氧化酶相對 于剛制備后的各樣本中的抗壞血酸氧化酶的殘留率。將結(jié)果示于表1。
[0089] 進而,除了使用樣本AO和樣本BO代替樣本A1、使用上述式(III)代替上述式(II) 以外,通過與上述(1)?(6)同樣的方法,確定在30°C下保存10天后的各樣本中的抗壞血 酸氧化酶相對于剛制備后的各樣本中的抗壞血酸氧化酶的殘留率。將結(jié)果示于表1。
[0090] [表 1]
[0091]
【權(quán)利要求】
1. 一種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化方法,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯與 抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
2. -種抗壞血酸氧化酶的保存方法,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯與抗 壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
3. -種抗壞血酸氧化酶的穩(wěn)定化組合物,其特征在于,使亞硝酸或其鹽或者亞硝酸酯 與抗壞血酸氧化酶在水性介質(zhì)中共存。
【文檔編號】C12N9/96GK104321428SQ201380026402
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2012年5月25日
【發(fā)明者】金城健太, 荒武知子 申請人:協(xié)和梅迪克斯株式會社