用于合成色胺和色胺類似物的衍生物的生物催化劑和方法
【專利摘要】本公開內(nèi)容提供了用于產(chǎn)生胺的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽、編碼該工程化轉(zhuǎn)氨酶的多核苷酸、能夠表達該工程化轉(zhuǎn)氨酶的宿主細(xì)胞、以及使用該工程化轉(zhuǎn)氨酶制備在產(chǎn)生活性藥物試劑中有用的化合物的方法。本公開內(nèi)容提供了具有轉(zhuǎn)氨酶活性的工程化多肽、編碼該多肽的多核苷酸、制備該多肽的方法、和使用該多肽用于將酮底物生物催化轉(zhuǎn)化為胺產(chǎn)物的方法。本發(fā)明的酶已被工程化為具有與河流弧菌(Vibrio fluvialis)的天然存在的轉(zhuǎn)氨酶的氨基酸序列相比的一個或更多個殘基差異。特別是，本公開內(nèi)容的轉(zhuǎn)氨酶已被工程化為從其相應(yīng)的前手性酮底物有效形成手性色胺衍生物。
【專利說明】用于合成色胺和色胺類似物的衍生物的生物催化劑和方法 1.【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本公開內(nèi)容涉及轉(zhuǎn)氨酶生物催化劑以及使用該生物催化劑制備色胺和色胺類似 物的衍生物的方法。
[0002] 2.對序列表、表格或計算機程序的引用
[0003] 序列表的正式文本作為ASCII格式文本文件與說明書經(jīng)EFS-Web同時被提交，文 件名為"CX2-105USP1_ST25.txt"，創(chuàng)建日期為2012年3月23日，且大小為457, 542千字 節(jié)。經(jīng)EFS-Web提交的序列表為本說明書的一部分，并且通過引用以其整體并入本文。
[0004] 3?背景
[0005] 色胺類化合物具有核心通式
【權(quán)利要求】
1. 一種具有轉(zhuǎn)氨酶活性的工程化多肽，所述工程化多肽包括具有與SEQIDN0:4的至 少80 %同一性和與SEQIDNO: 4相比在選自以下的殘基位置上的一個或更多個殘基差異 的氨基酸序列：X14 ;X26 ;X31 ;X33 ;X41 ;X47 ;X57 ;X70 ;X86 ;X88 ;X107 ;X132 ;X148 ;X163 ; X168 ；X173 ；X203 ；X250 ；X284 ；X314 ；X315 ；X324 ；X346 ；X395 ；X398 ；X400 ；X417 ；X419 ； X423 ;X448 ;和X451，其中在殘基位置X31 ;X57 ;X86 ;X163 ;X168 ;X314 ;X324 ;X398 ;和X417 上的殘基差異選自：X31S;X57Y;X86D;X163I;X163L;X163R;X163V;X168S;X314N;X324H; X398L;X398V;X398W;和X417M。
2. 如權(quán)利要求I所述的工程化多肽，其中在殘基位置X14 ;X26 ;X33 ;X41 ;X47 ;X70 ; X88 ；X107 ；X132 ；X148 ；X173 ；X203 ；X250 ；X284 ；X315 ；X346 ；X395 ；X400 ；X419 ；X423 ； X448 ;和X451 上的殘基差異選自X14V;X26R;X33T;X41L;X47N;X70A;X88A;X88L;X107P; X132F；X148Q；X148R；X173A；X203S；X250A；X284A；X315G；X346L；X395P；X400G；X419S； X423I;X448E;和X451D。
3. 如權(quán)利要求2所述的工程化多肽，其中所述氨基酸序列還包括選自以下的一個或更 多個殘基差異：X57F;X113L;X113V;X168K;X420N;和X424V。
4. 如權(quán)利要求I所述的工程化多肽，其中所述氨基酸序列包括選自以下的至少一個 或更多個殘基差異：X14V;X26R;X31S/D;X86D;X163I/L/R/V;X284A;X315G;X398L/V/W;和 X400G〇
5. 如權(quán)利要求I所述的工程化多肽，其中所述氨基酸序列包括選自以下的殘基差異的 組合： X14V和X163I/L/R/V; X86D和X400G; X57F/Y和X163I/L/R/V; X57F/Y和X398L/V/W; X14V、X113L/V、X163I/L/R/V、X284A、和X424V; X31S、X57F/Y、X163I/L/R/V、X315G、X346L、和X398L/V/W X14V、X113L、X163L、X284A、和X424V; X14V、X26R、X163L、X284A、和X400G; X14V、X26R、X88L、和X113L; X57F、X163L、X168K、X314N、X315G、X346L、和X398V; X14V、X163L、X173A、X400G、和X420N; X14V、X113L、X163L、和X284A; X14V、X26R、X163L、X284A、和X400G;以及X14V、X33T、X57F、X113L、和X163L。
6. 如權(quán)利要求1所述的工程化多肽，其中所述轉(zhuǎn)氨酶具有與SEQIDNO:4的多肽相比 至少1.2倍增加的穩(wěn)定性，其中所述氨基酸序列包括選自以下的一個或更多個殘基差異： X14V;X26R;X31S;X33T;X41L;X70A;X86D;X88A/L;X163I/L/R/V;X284A;X324H;X419S;和 X423I。
7. 如權(quán)利要求I所述的工程化多肽，其中所述氨基酸序列包括選自以下的序列：6、8、 10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、 60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、 108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、 146、148、150、152、和154。
8. 如權(quán)利要求1所述的工程化多肽，其中所述多肽固定在固體支持物上。
9. 一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權(quán)利要求1所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽。
10. -種表達載體，所述表達載體包含權(quán)利要求9所述的多核苷酸，任選地還包含控制 序列。
11. 一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包括權(quán)利要求9所述的多核苷酸或權(quán)利要求10所述 的表達載體。
12. -種制備工程化多肽的方法，所述方法包括在適合于表達所述多肽的條件下培養(yǎng) 權(quán)利要求11所述的宿主細(xì)胞，任選地還包括分離所述工程化多肽。
13. -種用于制備式（I)的化合物的方法，
其中 R1選自由以下組成的組：氫、羧基、羧基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷基、任選 地取代的（C2-C6)烯基、任選地取代的烷氧基羰基、任選地取代的芳基羰基、任選地取代的 芳基磺?；⒑捅Ｗo基團； R2選自由以下組成的組：氫、氧代、鹵代、羥基、氨基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、 (C「C6)烷基氨基、(C「C6)二烷基氨基、(C「C6)烷基硫代、(C「C6)烷基磺?；?C「C6)烷基 亞磺?；⒑腿芜x地取代的（C1-C6)烷氧基； R4、R6和R7各自彼此獨立地選自由以下組成的組：氫、鹵代、羥基、氨基、羧基、氰基、硝 基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、羥基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、任選 地取代的（C1-C6)烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)烷基 硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基磺酰基、任選地取代的（C1-C6)烷基亞磺?；?、羧基（C1-C6) 烷基、（C1-C6)烷氧基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰基（C1-C6) 烷基、任選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地取代的雜 芳基、任選地取代的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任選地取代 的芳基磺?；?、任選地取代的芳基亞磺?；⑷芜x地取代的芳基氧基羰基、任選地取代的芳 基羰基氧基、任選地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的雜芳基硫 代、任選地取代的雜芳基磺?；⑷芜x地取代的雜芳基亞磺?；?、任選地取代的雜芳基氧基 羰基、任選地取代的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺?；–1-C6)烷基、芳基磺?；–1-C6)烷 基、和雜芳基磺?；–1-C6)烷基； R5選自由以下組成的組：氫、齒代、羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、硫代、任選地取代的 (C「C6)烷基、羥基（C「C6)烷基、任選地取代的（C「C6)烷氧基、任選地取代的（C「C6)烷基 氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)烷基硫代、任選地取代的 (c「c6)烷基磺酰基、任選地取代的（c「c6)烷基亞磺?；?、羧基（c「c6)烷基、（c「c6)烷氧 基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰基（C1-C6)烷基、任選地取代 的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地取代的雜芳基、任選地取代 的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任選地取代的芳基磺?；?、任 選地取代的芳基亞磺?；?、任選地取代的芳基氧基羰基、任選地取代的芳基羰基氧基、任選 地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的雜芳基硫代、任選地取代的 雜芳基磺?；⑷芜x地取代的雜芳基亞磺?；⑷芜x地取代的雜芳基氧基羰基、任選地取代 的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺?；–1-C6)烷基、芳基磺?；–1-C6)烷基、和雜芳基磺酰 基（C1-C6)烷基、或與R4-起形成5至8元任選地取代的環(huán)烷基或任選地取代的雜環(huán)； R8選自由以下組成的組：任選地取代的（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、任 選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、和任選地取代的雜芳基、 或與R2-起形成任選地取代的5至8元環(huán)烷基或雜環(huán)；以及 n是1或2 ; 條件是 (a) 當(dāng)R2是氫時，則以下的至少一個適用： (i)R1不是氫、甲基、4-(甲氧基）苯基羰基-、4-(三氟甲氧基）苯磺酰基_、3_溴苯基 羰基_、3_氨基丙基、或3-(甲基羰基氨基）丙基 (ii) R4和R7各自彼此獨立地不是氫或氯； (iii)R5不是氫、羥基、甲基、甲氧基、氟、氯、三氟甲基、或氰基； (iv) R6不是氫、羥基、甲氧基、氟或氯；或 (V)R8不是甲基、乙基、羥甲基、或三氟甲基以及 (b) 當(dāng)n是1，R2和R8-起形成環(huán)己基環(huán)，并且R\R4、R6、和R7是氫時，則R5不是氟； 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（II)的底物化合物與 權(quán)利要求1至8的任一項所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸，
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和n如以上所定義。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中式（I)的化合物包括在以*標(biāo)記的碳原子上具有 指定的立體化學(xué)的式（IS)的化合物，
其中， R1選自由以下組成的組：氫、羧基、羧基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷基、任選 地取代的（C2-C6)烯基、任選地取代的烷氧基羰基、任選地取代的芳基羰基、任選地取代的 芳基磺?；?、和保護基團； R2選自由以下組成的組：氫、氧代、鹵代、羥基、氨基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、 (c「c6)烷基氨基、(c「c6)二烷基氨基、(c「c6)烷基硫代、(c「c6)烷基磺?；?、(c「c6)烷基 亞磺?；⒑腿芜x地取代的（C1-C6)烷氧基； R4、R5、R6和R7各自彼此獨立地選自由以下組成的組：氫、鹵代、羥基、氨基、羧基、氰基、 硝基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、羥基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、 任選地取代的（C1-C6)烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6) 烷基硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基磺?；?、任選地取代的（C1-C6)烷基亞磺酰基、羧基 (C1-C6)烷基、（C1-C6)烷氧基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰 基（C1-C6)烷基、任選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地 取代的雜芳基、任選地取代的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任 選地取代的芳基磺酰基、任選地取代的芳基亞磺酰基、任選地取代的芳基氧基羰基、任選地 取代的芳基羰基氧基、任選地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的 雜芳基硫代、任選地取代的雜芳基磺?；⑷芜x地取代的雜芳基亞磺?；?、任選地取代的雜 芳基氧基羰基、任選地取代的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺酰基（C1-C6)烷基、芳基磺?；?(C1-C6)烷基、和雜芳基磺?；–1-C6)烷基；以及 R8選自由以下組成的組：任選地取代的（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、任 選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、和任選地取代的雜芳基； 條件是當(dāng)R2是氫時，則以下的至少一個適用： (i)R1不是氫、甲基、4-(甲氧基）苯基羰基-、4-(三氟甲氧基）苯磺?；?、3-溴苯基 羰基_、3_氨基丙基、或3-(甲基羰基氨基）丙基 (ii) R4和R7各自彼此獨立地不是氫或氯； (iii)R5不是氫、羥基、甲基、甲氧基、氟、氯、三氟甲基、或氰基； (iv) R6不是氫、羥基、甲氧基、氟或氯；或 (V)R8不是甲基、乙基、羥甲基_、或三氟甲基-; 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（IIa)的底物化合物與 權(quán)利要求1至8的任一項的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸
其中#、1?2、1?4、1?5、1? 6、1?7、和1?8如以上所定義。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中式（Ia)的化合物包括在以*標(biāo)記的碳原子上具有 指定的立體化學(xué)的式（IaS)的化合物
其中 R1選自由以下組成的組：氫和（C1-C6)烷基； R2選自由以下組成的組：氫、鹵代、和（C「C6)烷基； R4、R5、R6、和R7各自彼此獨立地選自由以下組成的組：氫、鹵代、羥基、任選地取代的 (C「C6)烷基、羥基（C「C6)烷基、(C「C6)烷基;氨基、(C「C6)烷基氨基、和（C「C6)二烷基氨 基；以及 R9選自由以下組成的組：鹵代、羥基、羥基（C1-C6)烷基、氨基、（C1-C6)烷基氨基、和 (C1-C6)二烷基氨基； 條件是當(dāng)R2是氫時，則以下的至少一個適用： (i)R1不是氫或甲基； (ii) R4和R7各自彼此獨立地不是氫或氯； (iii)R5不是氫、羥基、甲基、甲氧基、氟、氯、或三氟甲基； (iv) R6不是氫、羥基、甲氧基、氟或氯；或 (V)R9不是羥基； 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（IIal)的底物化合物 與權(quán)利要求1至8的任一項所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸
其中#、1?2、1?4、1?5、1? 6、1?7、和1?9如以上所定義。
18. -種用于制備式（Ia2)的化合物的方法
其中L是尚去基團； Rltl的每次出現(xiàn)彼此獨立地選自由以下組成的組：鹵代、羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、 硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、羥基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、任選地 取代的（C1-C6)烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)烷基硫 代、任選地取代的（C1-C6)烷基磺?；?、任選地取代的（C1-C6)烷基亞磺酰基、羧基（C1-C6)烷 基、（C1-C6)烷氧基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰基（C1-C6) 烷基、任選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地取代的雜 芳基、任選地取代的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任選地取代 的芳基磺?；?、任選地取代的芳基亞磺酰基、任選地取代的芳基氧基羰基、任選地取代的芳 基羰基氧基、任選地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的雜芳基硫 代、任選地取代的雜芳基磺?；?、任選地取代的雜芳基亞磺?；⑷芜x地取代的雜芳基氧基 羰基、任選地取代的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺?；–1-C6)烷基、芳基磺?；–1-C6)烷 基、和雜芳基磺?；–1-C6)烷基； k為從3至5的整數(shù)； n是1或2 ;以及 w是從O至4的整數(shù)； 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（IIa2)的底物化合物 與權(quán)利要求1至8的任一項所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸
其中 L、R1CI、k、n和w如以上所定義。
19. 如權(quán)利要求18所述的方法，其中L是Cl或Br且k是3。
20. -種用于制備式（Ib)的化合物的方法
其中 Z選自由以下組成的組：0、S、NH或-(CH2)ni-,其中m是0、1、2或3 ; R1選自由以下組成的組：氫、羧基、羧基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷基、任選 地取代的（C2-C6)烯基、任選地取代的烷氧基羰基、任選地取代的芳基羰基、任選地取代的 芳基磺?；?、和保護基團； R4、R5、R6和R7各自彼此獨立地選自由以下組成的組：氫、鹵代、羥基、氨基、羧基、氰基、 硝基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、羥基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、 任選地取代的（C1-C6)烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6) 烷基硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基磺?；?、任選地取代的（C1-C6)烷基亞磺?；Ⅳ然?(C1-C6)烷基、（C1-C6)烷氧基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰 基（C1-C6)烷基、任選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地 取代的雜芳基、任選地取代的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任 選地取代的芳基磺?；?、任選地取代的芳基亞磺酰基、任選地取代的芳基氧基羰基、任選地 取代的芳基羰基氧基、任選地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的 雜芳基硫代、任選地取代的雜芳基磺?；?、任選地取代的雜芳基亞磺?；?、任選地取代的雜 芳基氧基羰基、任選地取代的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺酰基（C1-C6)烷基、芳基磺酰基 (C1-C6)烷基、和雜芳基磺?；–1-C6)烷基； 條件是當(dāng)Z為-(CH2)m-,m為1，并且R1、R4、R6和R7為氫時，則R5不是氟； 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（IIb)的底物化合物與 權(quán)利要求1至8的任一項所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸
其中Z、!?1、!?4、!?5、R6、和R7如以上所定義。
21. -種用于制備式（Ibl)的化合物的方法
其中 R1選自由以下組成的組：氫、羧基（C1-C6)烷基、和（C1-C6)烷基； Rn的每次出現(xiàn)彼此獨立地選自由以下組成的組：氯、溴、碘、羥基、氨基、羧基、氰基、硝 基、硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基、羥基（C1-C6)烷基、任選地取代的（C1-C6)烷氧基、任選 地取代的（C1-C6)烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)二烷基氨基、任選地取代的（C1-C6)烷基 硫代、任選地取代的（C1-C6)烷基磺?；?、任選地取代的（C1-C6)烷基亞磺酰基、羧基（C1-C6) 烷基、（C1-C6)烷氧基羰基、（C1-C6)烷基羰基氧基、任選地取代的氨基羰基、氨基羰基（C1-C6) 烷基、任選地取代的環(huán)烷基、任選地取代的雜環(huán)烷基、任選地取代的芳基、任選地取代的雜 芳基、任選地取代的芳氧基、任選地取代的芳基氨基、任選地取代的芳基硫代、任選地取代 的芳基磺酰基、任選地取代的芳基亞磺?；⑷芜x地取代的芳基氧基羰基、任選地取代的芳 基羰基氧基、任選地取代的雜芳基氧基、任選地取代的雜芳基氨基、任選地取代的雜芳基硫 代、任選地取代的雜芳基磺?；?、任選地取代的雜芳基亞磺酰基、任選地取代的雜芳基氧基 羰基、任選地取代的雜芳基羰基氧基、烷基氨基磺?；–1-C6)烷基、芳基磺?；–1-C6)烷 基、和雜芳基磺?；–1-C6)烷基；以及 W為從O至4的整數(shù)； 所述方法包括在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件下在氨基供體的存在下，使式（IIbl)的底物化合物 與權(quán)利要求1至8的任一項所述的工程化轉(zhuǎn)氨酶多肽接觸
其中 R1、R11和w如以上戶斤述定義。
22. 如權(quán)利要求13至21的任一項所述的方法，其中所述底物化合物為以下的載量：約 0? 5 至約 200g/L、l至約 200g/L、5 至約 150g/L、約 10 至約 100g/L、或約 20 至約 100g/L。
23. 如權(quán)利要求13至21的任一項所述的方法，其中所述氨基供體為異丙胺（IPM)。
24. 如權(quán)利要求13至21的任一項所述的方法，其中所述適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括選自以下 的共溶劑：多元醇、二甲亞砜、DMS0、或低級醇。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述多元醇是聚乙二醇（PEG)，任選地PEG200。
26. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括：（a)以約5g/L至200g/ L的底物載量；(b)約0. 1至50g/L的轉(zhuǎn)氨酶多肽；（c)約0. 1至3M的異丙胺（IPM) ; (d)約 0. 1至10g/L的磷酸吡哆醛（PLP)輔因子；（e)約6至9的pH;以及（f)約30°C至60°C的 溫度。
27. 如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件包括：（a)約25至約IOOg/ L的底物載量；(b)約0. 5至10g/L的轉(zhuǎn)氨酶多肽；（c)約1至10%v/v的PEG200 ; (d)約 1至2M的異丙胺（IPM) ; (e)約0. 1至lg/L的磷酸吡哆醛（PLP)輔因子；（f)約0. 1至約 0? 5M的三乙醇胺（TEA) ; (g)約6至8的pH;以及（h)約45°C至55°C的溫度。
【文檔編號】C12N9/10GK104508126SQ201380026594
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2013年3月22日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月23日
【發(fā)明者】約瓦娜·納佐爾, 德里克·史密斯, 邁克爾·A·克羅, 宋士瑋, 史蒂文·J·科利爾 申請人:科德克希思公司