抗siglec-15抗體的制作方法
【專利摘要】在此描述了特異性地結(jié)合Siglec-15的抗體和抗原結(jié)合片段。這些抗體或抗原結(jié)合片段可具有抑制破骨細(xì)胞分化的能力和/或抑制破骨細(xì)胞骨再吸收活性的能力。還特此披露了組合物和表達(dá)抗Siglec-15抗體或抗原結(jié)合片段的細(xì)胞。抗Siglec-15抗體還可有用于治療骨丟失或骨疾病。還描述了用于檢測(cè)或診斷骨丟失或骨相關(guān)疾病的方法。
【專利說明】抗SIGLEC-15抗體 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及特異性結(jié)合Siglec-15的抗體及其抗原結(jié)合片段。本發(fā)明具體地涉及 適用于向人給藥的抗Siglec-15抗體和/或包含人IgGl恒定區(qū)的氨基酸的抗Siglec-15 抗體。本發(fā)明還涉及抗Siglec-15抗體用于治療和/或診斷疾病或病狀的用途。
[0002] 本發(fā)明的這些抗體可例如用來抑制Siglec-15的活性或功能或?qū)⒅委焺┻f送至 表達(dá)該蛋白質(zhì)的細(xì)胞。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 骨是一種動(dòng)態(tài)結(jié)締組織，該動(dòng)態(tài)結(jié)締組織是由支持骨的結(jié)構(gòu)、機(jī)械和生物化學(xué)完 整性和人體礦物質(zhì)體內(nèi)平衡所需要的功能相異細(xì)胞群體構(gòu)成。所涉及的主要細(xì)胞類型包括 負(fù)責(zé)骨形成和維持骨質(zhì)量的成骨細(xì)胞和負(fù)責(zé)骨再吸收的破骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞在 稱為骨重建的動(dòng)態(tài)過程中起作用。這些細(xì)胞從它們祖先的發(fā)育和增殖是由在骨微環(huán)境中產(chǎn) 生的生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)以及由全身性激素來管控。骨重建貫穿個(gè)體一生來進(jìn)行并 且是維持健康骨組織和礦物質(zhì)體內(nèi)平衡所必需的。該過程在很大程度上保持平衡并且通過 全身性激素、肽和下游信號(hào)傳導(dǎo)途徑蛋白、局部轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子以及基質(zhì)重 建基因的復(fù)雜相互作用來管控。
[0005] 在骨重建過程中出現(xiàn)的干擾或不平衡可以產(chǎn)生骨骼疾病，其中最常見骨骼病癥的 特征在于骨質(zhì)量的凈減少。此骨質(zhì)量減少的主要原因是破骨細(xì)胞數(shù)量和/或活性增加。最 常見的此種疾?。ú⑶乙苍S是最著名的）是特別地在開始絕經(jīng)后的婦女中發(fā)生的骨質(zhì)疏松 癥。事實(shí)上，骨質(zhì)疏松癥是中年后期和老年婦女中骨骼骨折的最重要根本原因。雖然雌激 素缺乏被強(qiáng)烈地提示是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的一個(gè)因素，但是存在長(zhǎng)期的證據(jù)證明重建是發(fā) 生在整個(gè)骨骼的不連續(xù)塊中的局部控制過程，如由Frost(弗若斯特）四十多年前首次描述 (弗若斯特H.M. 1%4)。
[0006] 因?yàn)楣侵亟òl(fā)生在不連續(xù)塊中，對(duì)骨再吸收和正常重建過程的起始而言局部產(chǎn)生 的激素和酶可比全身性激素更為重要。此種局部控制是由其中它們運(yùn)行的微環(huán)境中的成 骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞來介導(dǎo)。例如，破骨細(xì)胞附著至骨基質(zhì)并且在自身與骨表面之間形成一 個(gè)單獨(dú)的區(qū)室，該區(qū)室是由環(huán)繞皺褶緣的肌動(dòng)蛋白環(huán)形成的一個(gè)縫合區(qū)來界定的。多個(gè)小 囊泡將酶朝向該骨基質(zhì)輸送并且使部分消化的骨基質(zhì)內(nèi)化。該縫合區(qū)內(nèi)的微環(huán)境富含溶酶 體酶的存在并且與身體的正常生理pH相比是高度酸性的。皺褶緣膜還表達(dá)RANKL的受體 RANK和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF)受體，這兩種受體均負(fù)責(zé)破骨細(xì)胞分化；以及能夠 使該破骨細(xì)胞快速滅活的降鈣素受體（Baron，R.(巴雄，R) 2003)。
[0007] 在抑制和刺激的一種復(fù)雜模式下，生長(zhǎng)激素、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、性類固醇、甲 狀腺激素、趨興激素（calciotrophichormone)如PTH和前列腺素E2、不同細(xì)胞因子，如 白細(xì)胞介素-1 0、白細(xì)胞介素-6和腫瘤壞死因子-a以及1，25-二羥基維生素D(骨化 三醇）共同在該骨重建過程中起作用（Jilka(吉卡）等人1992;Poli(波利）等人1994 ; Srivastava(斯里蘭卡）等人 1998;deVemejoul(德唯米焦）1996)。
[0008] 因此，毫無疑問由這些特化細(xì)胞形成的獨(dú)特局部環(huán)境是由于不在其他組織中表達(dá) 的獨(dú)特基因序列和/或在其他組織中表達(dá)的多核苷酸和多肽的剪接變體的表達(dá)。對(duì)破骨細(xì) 胞活性有特異性的多核苷酸、多肽以及它們的變體和衍生物的分離和鑒定可容許更清楚地 理解該重建過程并且為治療與骨重建相關(guān)的疾病狀態(tài)提供組織特異性治療靶標(biāo)。
[0009] 對(duì)與骨重建相關(guān)的許多疾病是理解甚少的、通常不可治療的或僅可治療到有限的 程度。例如，骨關(guān)節(jié)炎難以治療，因?yàn)椴淮嬖诩杏跍p輕疼痛并且預(yù)防受傷關(guān)節(jié)變形的治愈 和治療方法。非類固醇抗炎藥（NSAID)通常被用來減輕疼痛。
[0010] 另一個(gè)實(shí)例是骨質(zhì)疏松癥，其中目前僅有的被FDA批準(zhǔn)在美國(guó)使用的藥劑是預(yù)防 骨損壞的抗再吸收劑。雌激素替代療法是抗再吸收劑的一個(gè)實(shí)例。其他實(shí)例包括阿侖膦酸 鹽（alendronate)(福善美（Fosamax)-二膦酸鹽抗再吸收劑）、利塞膦酸鹽（risedronate) (安妥良（Actonel)-雙膦酸鹽抗再吸收劑）、雷洛昔芬（raloxifene)(易維特（Evista)-選 擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERM))、降鈣素（鮭魚降鈣素（Calcimar)-激素）以及甲狀旁腺激 素/特立帕肽（teriparatide)(骨穩(wěn)（Forteo)-人激素甲狀旁腺激素的合成版，該激素幫 助調(diào)節(jié)鈣代謝）。
[0011] 雙膦酸鹽如阿侖膦酸鹽和利塞膦酸鹽永久結(jié)合骨的表面并且干擾破骨細(xì)胞活性。 這允許這些成骨細(xì)胞超過再吸收的速率。最常見的副作用是惡心、腹痛和松散的腸運(yùn)動(dòng)。 然而，據(jù)報(bào)道阿侖膦酸鹽還引起食道刺激和炎癥，并且在一些情況下引起食道潰瘍。利塞膦 酸鹽與阿侖膦酸鹽在化學(xué)上不同并且具有較小的引起食道刺激的可能性。然而，某些食物、 鈣、鐵補(bǔ)充劑、維生素和礦物質(zhì)或含鈣、鎂或鋁的抗酸劑可減少利塞膦酸鹽的吸收，從而導(dǎo) 致失去有效性。
[0012] 雷洛昔芬和其他SERMS(如他莫昔芬（Tamoxifen))的最常見副作用是熱潮紅。然 而，已顯示雷洛昔芬和其他激素替代療法可增加血凝塊的風(fēng)險(xiǎn)，包括深靜脈血栓形成和肺 栓塞、心血管疾病和癌癥。
[0013] 降鈣素在增加骨密度和加強(qiáng)骨方面不如雌激素和其他抗再吸收劑有效。注射型或 鼻用噴霧降鈣素的常見副作用是惡心和面紅。患者可以發(fā)展鼻腔刺激、流鼻涕或鼻出血?？?注射降鈣素可以引起注射部位處局部皮膚發(fā)紅、皮疹和面紅。
[0014] 展示涉及骨重建的若干病癥或疾病狀態(tài)之間聯(lián)系的情況是使用FDA首次批準(zhǔn)治 療佩吉特氏?。≒aget'sdisease)的依替膦酸鹽（乙哚乙酸二鈉（Didronel))。佩吉特 氏病是特征在于無序且加速的重建骨從而導(dǎo)致骨虛弱和疼痛的一種骨疾病。乙哚乙酸二 鈉已按'超說明書用藥（off-label)'使用并且在一些研究中顯示可增加患有已建立的骨 質(zhì)疏松癥的絕經(jīng)后婦女的骨密度。還發(fā)現(xiàn)它有效于預(yù)防需要長(zhǎng)期類固醇藥劑（如潑尼松 (Prednisone)或可的松（Cortisone))的患者中的骨丟失。然而，高劑量乙哚乙酸二鈉或連 續(xù)使用乙哚乙酸二鈉可以引起稱為骨軟化癥的另一種骨疾病。像骨質(zhì)疏松癥一樣，骨軟化 癥可以導(dǎo)致弱骨，骨折的風(fēng)險(xiǎn)增加。因?yàn)楣擒浕Y問題和尚且缺乏關(guān)于減小骨骨折速率的 足夠研究，美國(guó)FDA尚沒有批準(zhǔn)將乙哚乙酸二鈉用于治療骨質(zhì)疏松癥。
[0015] 骨質(zhì)疏松癥療法主要集中于減小骨丟失速率的抗再吸收藥物，但新興療法在增加 骨礦物質(zhì)密度而不是僅維持它或減緩它的惡化方面顯示出前景。骨質(zhì)疏松癥的早期管道主 要由新治療類別中的候選藥物組成，具體是組織蛋白酶K抑制劑、骨保護(hù)素和鈣阻滯劑以 及新型雙膦酸鹽。這些藥物中的一些是其中基于更深刻地理解骨生物學(xué)來開發(fā)利用基因組 程序的新型藥物并且從長(zhǎng)期來看具有改變骨病癥治療面貌的潛力的實(shí)例。
[0016] 本發(fā)明具體地涉及適用于向人給藥的抗Siglec-15抗體。本發(fā)明還具體地涉及包 含人IgGl恒定區(qū)的氨基酸的抗Siglec-15抗體（例如，包括人源化抗體、嵌合抗體或非人 源化抗體）。在一些情況下，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段可以結(jié)合對(duì)人Siglec-15蛋白獨(dú) 特并且不存在于其他物種的相應(yīng)Siglec-15蛋白中（例如，不存在于Siglec-15直向同源 物或假定直向同源物中）的一個(gè)表位。在其他情況下，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段可以 結(jié)合對(duì)人Siglec-15蛋白和小鼠Siglec-15蛋白共同的一個(gè)表位。而在其他情況下，本發(fā) 明的抗體和抗原結(jié)合片段可以結(jié)合對(duì)人Siglec-15和其他直向同源物或假定直向同源物 共同的一個(gè)表位（參見例如，Angata(安格塔）等人，2007)。
[0017] 本發(fā)明描述了特異于Siglec-15的抗體用于診斷、預(yù)后和治療（包括預(yù)防）癌癥 或骨丟失（例如，與骨相關(guān)疾病相關(guān)聯(lián)或與破骨細(xì)胞分化或活性增加相關(guān)聯(lián)的嚴(yán)重或過度 骨丟失）的用途。具體地說，本發(fā)明涉及抗Siglec-15抗體用于抑制破骨細(xì)胞的分化和/ 或用于抑制骨再吸收的用途。本發(fā)明還涉及這些抗體用于診斷、預(yù)防和治療其中破骨細(xì)胞 活性增加的其他不同類型疾病的用途。
[0018] 唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集素（Siglec)是具有與唾液酸相互作用能力的免疫 球蛋白（Ig)超家族的成員（McMillan(麥克米倫）和Crocker(克洛克爾），2008;克洛克 爾等人，2007)。有若干Siglec族成員均共享特定的結(jié)構(gòu)特征，具體地說，顯現(xiàn)出一個(gè)結(jié)合 唾液酸的氨基末端V-組Ig結(jié)構(gòu)域和一個(gè)可變數(shù)量的C2-組Ig結(jié)構(gòu)域。這些膜受體通常 以高度特異性方式表達(dá)并且許多這些家族成員在造血細(xì)胞中表達(dá)（麥克米倫和克洛克爾， 2008)。這些蛋白質(zhì)被認(rèn)為促進(jìn)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、介導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)并且通過識(shí)別聚糖來調(diào) 節(jié)免疫功能（克洛克爾等人，2007)。唾液酸是典型地位于細(xì)胞表面上的復(fù)合糖綴合物末端 處的九碳糖。它們可以附著至各種各樣的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)上（麥克米倫和克洛克爾，2008)。
[0019]Siglec-15是最近描述的與Siglec-14具有高同源性的Siglec家族成員之一（安 格塔等人，2007)。這些作者報(bào)道該Siglec-15優(yōu)先結(jié)合唾液酸Tn(sialylTn)結(jié)構(gòu)并且它 與DAP12和DAP10相互作用。這些相互作用的功能意義尚不可知，但是已提出Siglec-15 可能具有一種激活功能（安格塔等人，2007)。盡管對(duì)Siglec-15在哺乳動(dòng)物中的潛在作 用有了這些初步了解，但是當(dāng)將其序列鑒定為用于發(fā)現(xiàn)新型破骨細(xì)胞分化調(diào)節(jié)劑的篩選的 一部分時(shí)，才促成了在理解該蛋白質(zhì)的生物功能方面的重要進(jìn)展（Sooknanan(蘇庫蘭）等 人2007)。在此專利申請(qǐng)中，顯示出在破骨細(xì)胞生成的一個(gè)小鼠模型中由RNA干擾引起的 Siglec-15轉(zhuǎn)錄物削減導(dǎo)致了響應(yīng)于RANKL治療的前體分化的明顯減少。在人破骨細(xì)胞中 發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果。此外，在此披露中呈現(xiàn)的這些研究還顯示，在細(xì)胞膜處的Siglec-15定位是 它在破骨細(xì)胞分化中的功能所必需的。此外，一個(gè)最近出版物顯示在表面糖綴合物的末端 處存在唾液酸是適當(dāng)破骨細(xì)胞分化所需要的并且可能對(duì)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的融合是重要 的（Takahata(高畑）等人，2007)。這個(gè)最近的觀察結(jié)果在唾液酸結(jié)合與Siglec-15在分 化破骨細(xì)胞中的表達(dá)之間建立了一種直接的功能聯(lián)系，并且強(qiáng)烈表明Siglec-15在破骨細(xì) 胞前體的早期分化程序中起作用。
[0020] 因此，Siglec-15的表達(dá)譜、它在破骨細(xì)胞分化過程中的強(qiáng)可誘導(dǎo)性、它在膜表面 處的定位以及它的結(jié)構(gòu)特征均有助于用單克隆抗體靶向細(xì)胞表面處的這種蛋白質(zhì)的可行 性。祀向破骨細(xì)胞的基于單克隆抗體的療法的僅其他實(shí)例是地諾單抗（denosumab)，一種特 異于RANKL的人單克隆抗體（Ellis(埃利斯）等人2008)。本發(fā)明涉及抗Siglec-15抗體 或抗原結(jié)合片段作為破骨細(xì)胞分化和/或骨再吸收的阻斷劑在檢測(cè)或治療骨丟失中的用 途，尤其是在骨相關(guān)的疾病背景下或在增加的破骨細(xì)胞分化或活性的背景下。本發(fā)明還涉 及抗體或抗原結(jié)合片段在檢測(cè)或治療癌癥中的用途。
[0021] 發(fā)明概述
[0022] 本發(fā)明涉及有用于治療（包括預(yù)防）、檢測(cè)和診斷骨丟失或癌癥的抗體和抗原結(jié) 合片段以及試劑盒。具體地涵蓋人源化的抗Siglec-15抗體。
[0023] 本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可有用于治療骨丟失或骨再吸收。
[0024] 這些抗體和抗原結(jié)合片段還可具體地有用于檢測(cè)分化的破骨細(xì)胞或正經(jīng)歷分化 的破骨細(xì)胞。這些抗體和抗原結(jié)合片段可另外有用于檢測(cè)和診斷骨丟失。本發(fā)明的抗體或 抗原結(jié)合片段還可有用于治療骨丟失。
[0025] 這些抗體和抗原結(jié)合片段還可具體地有用于檢測(cè)或診斷表達(dá)Siglec-15的癌細(xì) 胞以及具體地具有Siglec-15高表達(dá)的癌癥。這些抗體和抗原結(jié)合片段可進(jìn)一步具體地有 用于檢測(cè)卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、前列腺癌、黑素瘤、乳癌、肺癌或結(jié)腸癌。本發(fā)明 的抗體或抗原結(jié)合片段可進(jìn)一步有用于治療卵巢癌、腎癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌癥、前列腺癌、 黑素瘤、乳癌、肺癌或結(jié)腸癌。
[0026] 本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可結(jié)合Siglec-15(SEQIDN0. : 2)的氨基酸20至 259或一種Siglec-15變體（例如，與SEQIDN0. : 12具有至少80%序列一致性的變體， 包括例如SEQIDN0. :4)的相應(yīng)區(qū)。更具體地說，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可結(jié)合 Siglec-15(SEQIDN0.: 2)的氨基酸 49 至 165 或一種Siglec-15 變體（例如，與SEQID NO. : 12具有至少80%序列一致性的變體，包括例如SEQIDNO. :4)的相應(yīng)區(qū)。本發(fā)明的抗 體或抗原結(jié)合片段包括可結(jié)合對(duì)人Siglec-15獨(dú)特的一個(gè)表位的那些，該表位包括例如包 含位于SEQIDN0. :2的位置99上的精氨酸（R99)的一個(gè)表位。
[0027] 該抗體或抗原結(jié)合片段可能夠抑制該多肽的破骨細(xì)胞分化活性和/或骨再吸收。
[0028] 在此應(yīng)理解，相比小鼠Siglec-15更優(yōu)選結(jié)合人Siglec-15的抗體可在抑制人破 骨細(xì)胞的分化或活性上比抑制小鼠破骨細(xì)胞更有效。結(jié)合存在于人Siglec-15中而不存在 于小鼠Siglec-15中的一個(gè)表位的抗體可抑制人破骨細(xì)胞的分化或活性而不抑制小鼠破 骨細(xì)胞的分化或活性。食蟹猴的Siglec-15蛋白與人Siglec-15氨基酸的Siglec-15蛋白 是非常類似的。因此可在猴中或使用分離自猴的細(xì)胞來測(cè)試抗Siglec-15抗體的效力。因 此，可取決于該抗體的特異性（例如，針對(duì)人、猴和/或小鼠Siglec-15)改編效力測(cè)定。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，該抗體或抗原結(jié)合片段可干擾該多肽促進(jìn)破骨細(xì)胞分 化和/或骨再吸收的能力。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，該抗體或抗原結(jié)合片段可干擾該 多肽促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的能力。
[0030] 本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可能夠干擾（抑制）破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化成分化 的破骨細(xì)胞。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明，該抗體或抗原結(jié)合片段可以是例如一種多克隆抗體、一種單克隆抗 體、一種嵌合抗體、一種人源化抗體、一種人抗體、一種雜交抗體或其一種片段。
[0032] 本發(fā)明涵蓋的抗體的具體實(shí)例包括以下這類抗體：具有包含一個(gè)人源化的可變結(jié) 構(gòu)域的至少一個(gè)免疫球蛋白鏈（輕鏈或重鏈），而其他可變結(jié)構(gòu)域可以是非人源化的（例 如，小鼠可變結(jié)構(gòu)域），從而產(chǎn)生一種雜交抗體。本發(fā)明涵蓋的抗體的其他實(shí)例包括具有包 含一個(gè)人源化的可變結(jié)構(gòu)域的重鏈和輕鏈免疫球蛋白鏈的抗體。
[0033] 本發(fā)明的其他具體實(shí)施例包括一種人源化抗體，其中已經(jīng)再引入非人氨基酸（例 如，來自小鼠抗體配對(duì)物的一種或多種氨基酸）。
[0034] 因此，本發(fā)明提供一種能夠特異性結(jié)合Siglec-15的非人親本抗體（例如，小鼠抗 體）的人源化抗體。
[0035] 在一個(gè)實(shí)施例中，雜交抗體或其片段可例如包含一種非人抗體的一個(gè)輕鏈可變區(qū) 和一種人源化抗體的一個(gè)重鏈可變區(qū)。
[0036] 在另一個(gè)實(shí)施例中，雜交抗體或其片段可例如包含一種非人抗體的一個(gè)重鏈可變 區(qū)和一種人源化抗體的一個(gè)輕鏈可變區(qū)。
[0037] 本發(fā)明的人源化抗體或雜交抗體可包含一個(gè)重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)可包括一 種天然人抗體的非人互補(bǔ)決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基；以及一個(gè)互補(bǔ)輕鏈。
[0038] 本發(fā)明的人源化抗體或雜交抗體可包含一個(gè)輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)可包括一 種天然人抗體的非人互補(bǔ)決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基；以及一個(gè)互補(bǔ)重鏈。
[0039] 術(shù)語"雜交抗體"是指包含至少一個(gè)人源化或人重鏈或輕鏈可變區(qū)（對(duì)Siglec-15 具有親和力）和至少一個(gè)非人重鏈或輕鏈可變區(qū)（例如來自小鼠、大鼠、兔）的抗體。
[0040] 被選擇用于人源化非人親本抗體的天然人抗體可包含一個(gè)可變區(qū)，該可變區(qū)具有 與該非人親本抗體的一個(gè)（建模的）可變區(qū)類似（可重疊）的三維結(jié)構(gòu)。因此，該人源化 抗體或雜交抗體在具有與該非人親本抗體類似的三維結(jié)構(gòu)方面有較大的機(jī)會(huì)。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明，該人源化抗體或雜交抗體輕鏈的這些人框架區(qū)氨基酸殘基是來自一 個(gè)天然人抗體輕鏈框架區(qū)。被選擇用于人源化目的的該天然人抗體的輕鏈框架區(qū)可例如與 該非人親本抗體的一個(gè)輕鏈框架區(qū)具有至少70%-致性。優(yōu)選地，被選擇用于人源化目的 的該天然人抗體可在它的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)中具有與該非人親本抗體的一個(gè)輕鏈互補(bǔ)決定 區(qū)相同數(shù)量或大致上相同數(shù)量的氨基酸。
[0042] 在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，該人源化抗體或雜交抗體輕鏈的這些人框架區(qū)氨基酸 殘基是來自一個(gè)天然人抗體輕鏈框架區(qū)，該天然人抗體輕鏈框架區(qū)與該非人親本抗體的該 輕鏈框架區(qū)具有至少70%、75%、80%、85%-致性（或更多）。
[0043] 還根據(jù)本發(fā)明，該人源化抗體或雜交抗體重鏈的這些人框架區(qū)氨基酸殘基是來自 一個(gè)天然人抗體重鏈框架區(qū)，該天然人抗體重鏈框架區(qū)與該非人親本抗體的一個(gè)重鏈框架 區(qū)具有至少70 %-致性。優(yōu)選地，被選擇用于人源化目的的該天然人抗體可在它的重鏈互 補(bǔ)決定區(qū)中具有與該非人親本抗體的一個(gè)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)相同數(shù)量或大致上相同數(shù)量的 氨基酸。
[0044] 在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，該人源化抗體或雜交抗體重鏈的這些人框架區(qū)氨基酸 殘基是來自一個(gè)天然人抗體重鏈框架區(qū)，該天然人抗體重鏈框架區(qū)與該非人親本抗體的該 重鏈框架區(qū)具有至少70 %、75 %、80 %、85 % -致性。
[0045] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，該人源化抗體或雜交抗體的該重鏈可變區(qū)可因此包含 至少一個(gè)非人互補(bǔ)決定區(qū)。
[0046] 可替代地，在本發(fā)明的其他實(shí)施例中，該人源化抗體或雜交抗體的該重鏈可變區(qū) 可包含至少兩個(gè)非人互補(bǔ)決定區(qū)或甚至三個(gè)非人互補(bǔ)決定區(qū)。
[0047] 在本發(fā)明的一個(gè)另外實(shí)施例中，該輕鏈可變區(qū)可包含至少一個(gè)非人互補(bǔ)決定區(qū)。
[0048] 可替代地，在本發(fā)明的又另外實(shí)施例中，該輕鏈可變區(qū)包含至少兩個(gè)非人互補(bǔ)決 定區(qū)或甚至三個(gè)非人互補(bǔ)決定區(qū)。
[0049] 因此，該人源化抗體可有利地包含該非人抗體的所有六個(gè)CDR。在二價(jià)人源化抗體 的情況下，所有十二個(gè)CDR均可來自該非人抗體。
[0050] 恒定區(qū)或其片段可來自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4并且尤其來自人IgGl、IgG2、IgG3 或IgG4。在一個(gè)更具體的實(shí)施例中，該恒定區(qū)可來自IgG2(例如，人IgG2)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí) 施例中，該恒定區(qū)可來自IgGl(例如，人IgGl)。
[0051] 該輕鏈的恒定區(qū)可以是A恒定區(qū)或k恒定區(qū)。
[0052] 可特別有用的抗原結(jié)合片段包括例如FV(scFv)、Fab、Fab'或（Fab'）2。
[0053] 該抗體或抗原結(jié)合片段可在或從一種分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞（除了雜交瘤細(xì)胞以 夕卜）中產(chǎn)生或在一種雜交瘤細(xì)胞中產(chǎn)生。分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的一個(gè)示例性實(shí)施例是人細(xì) 胞。
[0054] 在本發(fā)明的一個(gè)方面中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可干擾（抑制）人破骨細(xì) 胞前體細(xì)胞分化成分化的人破骨細(xì)胞。
[0055] 在一個(gè)示例性實(shí)施例中，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可干擾（抑制）原代人破 骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化成分化的人破骨細(xì)胞。
[0056] 本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段還可用來通常祀向表達(dá)或過度表達(dá)Siglec-15的 細(xì)胞，包括骨細(xì)胞和乳癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌和腎癌細(xì)胞以及黑素瘤細(xì)胞和中 樞神經(jīng)系統(tǒng)的癌細(xì)胞。
[0057] 更具體地說，這些抗體和抗原結(jié)合片段可用來靶向正經(jīng)歷分化的破骨細(xì)胞。
[0058] 本發(fā)明在其一個(gè)方面中提供一種可能夠特異性結(jié)合SEQIDN0:2的抗體或抗原結(jié) 合片段（例如，分離的或大致上純化的）。
[0059] 因此，本發(fā)明涵蓋對(duì)SEQIDN0:2具有特異性的診斷性和/或治療性抗體或抗原 結(jié)合片段。本發(fā)明還涵蓋與本發(fā)明的抗體具有相同表位特異性的抗體或抗原結(jié)合片段。一 種候選抗體可通過確定它是否將結(jié)合在此描述的這些抗體所結(jié)合的表位和/或通過執(zhí)行 與已知結(jié)合該表位的抗體或抗原結(jié)合片段的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定來進(jìn)行鑒定。
[0060] 因此，在另一方面本發(fā)明提供一種能夠與在此描述的該抗體或抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng) 的分離的抗體或抗原結(jié)合片段。
[0061] 在另外方面中，本發(fā)明提供使用本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段治療的方法和檢測(cè) 的方法。
[0062] 術(shù)語"抗體"指完整抗體、單克隆抗體或多克隆抗體。術(shù)語"抗體"還涵蓋多特異 性抗體如雙特異性抗體。人抗體通常由各自包含可變區(qū)和恒定區(qū)的兩條輕鏈和兩條重鏈構(gòu) 成。該輕鏈可變區(qū)包含3個(gè)⑶R，它們?cè)诖髓b定為由框架區(qū)側(cè)接的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3。 該重鏈可變區(qū)包含3個(gè)⑶R，它們?cè)诖髓b定為由框架區(qū)側(cè)接的⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3。
[0063] 如在此所用，術(shù)語"抗原結(jié)合片段"是指保留結(jié)合抗原（例如，SEQIDN0:2或其變 體）的能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。已顯示抗體的抗原結(jié)合功能可以由完整抗體的片段 執(zhí)行。涵蓋于術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合片段"內(nèi)的結(jié)合片段的實(shí)例包括（i)Fab片段，一種由 \、VH、和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；（ii)F(ab'）2片段，一種包含由二硫橋聯(lián)在鉸鏈區(qū)連接 的兩個(gè)Fab片段的雙價(jià)片段；（iii)由V#PCH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；（iv)由抗體單臂的 和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(v)由VH結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段（Ward(沃德）等人，（1989)Nature(自然）341:544-546);以及（vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，例如VHCDR3。另外，雖 然Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域 '和V獨(dú)立基因編碼，但是使用重組方法，可以將它們通過能夠 使這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域形成為單條多肽鏈的合成性接頭連接，在該單條多肽鏈中 '區(qū)和VH區(qū)配 對(duì)以形成單價(jià)分子（稱作單鏈Fv(scFv);參見例如Bird(布德）等人（1988)Science(科 學(xué)）242:423-426 ;和Huston(休斯頓）等人（1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA(美國(guó)科學(xué)院 院報(bào)）85:5879-5883)。這類單鏈抗體也意在涵蓋于術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合片段"內(nèi)。此外， 這些抗原結(jié)合片段包括結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白，這些蛋白包括：（i)融合至免疫 球蛋白鉸鏈區(qū)多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽（如重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)、或經(jīng)過接頭肽融合至 輕鏈可變區(qū)的重鏈可變區(qū)融合至鉸鏈區(qū)的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)、以及（iii) 融合至CH2恒定區(qū)的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)?？赏ㄟ^用絲氨酸殘基替代一個(gè)或多個(gè)半 胱氨酸殘基來修飾該鉸鏈區(qū)，以便防止二聚化。這類結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白進(jìn)一 步披露于US2003/0118592和US2003/0133939中。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù) 獲得這些抗體片段，并且以與完整抗體相同的方式針對(duì)有用性來篩選這些片段。
[0064] 典型的抗原結(jié)合位點(diǎn)由可變區(qū)組成，這些可變區(qū)是由一個(gè)輕鏈免疫球蛋白和一個(gè) 重鏈免疫球蛋白的配對(duì)形成。這些抗體可變區(qū)的結(jié)構(gòu)是非常一致的并且顯示非常相似的結(jié) 構(gòu)。這些可變區(qū)典型地由相對(duì)同源的以稱作互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的3個(gè)高變區(qū)間插的框架區(qū) (FR)組成?？乖Y(jié)合片段的總體結(jié)合活性經(jīng)常由⑶R的序列決定。這些FR經(jīng)常在⑶R的 三個(gè)維度的正確定位和對(duì)齊方面起作用以獲得最佳抗原結(jié)合。
[0065] 本發(fā)明的抗體和/或抗原結(jié)合片段可源自例如小鼠、大鼠或任何其他哺乳動(dòng)物或 源自其他來源，如通過重組DNA技術(shù)。
[0066] 這些抗體或抗原結(jié)合片段可在骨丟失治療上具有治療用途。
[0067]激素消融療法（用停止特定激素產(chǎn)生的藥物治療）由于骨丟失而增加骨折的風(fēng) 險(xiǎn)。用于患有乳癌的婦女的輔助激素療法涉及抗雌激素藥（例如，他莫昔芬）和芳香酶抑 制劑，已顯示這些抗雌激素藥和芳香酶抑制劑由于雌激素壓制而加速骨丟失并且增加骨折 風(fēng)險(xiǎn)。另外，許多患前列腺癌的男性在他們的癌癥進(jìn)展時(shí)使用雄激素剝奪療法（ADT)(例 如，促性腺激素釋放激素[GnRH]激動(dòng)劑）進(jìn)行治療。GnRH激動(dòng)劑抑制睪酮產(chǎn)生，所述睪酮 充當(dāng)前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)因子。然而，這種治療也導(dǎo)致骨質(zhì)量減小，從而由于骨質(zhì)疏松癥而 增加骨折的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可在與癌癥治療相關(guān)聯(lián)的骨丟失的 治療上具有治療用途。
[0068] 這些抗體或抗原結(jié)合片段還可在癌癥治療上具有治療用途。在一個(gè)示例性實(shí)施例 中，這些抗體或片段可在癌癥治療誘導(dǎo)的骨丟失上具有治療用途。在另一個(gè)示例性實(shí)施例 中，這些抗體或片段可在與骨疾病相關(guān)聯(lián)的骨丟失上具有治療用途，這些骨疾病例如為其 中存在破骨細(xì)胞的骨降解活性增加的病狀。在某些情況下，這些抗體或抗原結(jié)合片段可與 表達(dá)SEQIDN0:2的細(xì)胞相互作用并且通過介導(dǎo)ADCC誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。在其他情況下，這些 抗體和片段可阻斷SEQIDN0:2與它天然配體的相互相用。在又其他情況下，這些抗體和 片段可誘導(dǎo)該蛋白質(zhì)的內(nèi)化和/或該蛋白質(zhì)的降解。
[0069] 本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可與另一種藥物一起（例如，同時(shí)、依次）給藥，該 另一種藥物有用于治療骨丟失、骨再吸收或有用于治療與骨丟失或骨再吸收相關(guān)聯(lián)的疾 病。
[0070] 能夠抑制骨丟失的抗體和抗原結(jié)合片段已描述于在2011年4月14日的TO 2011/041894下公開的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/CA2010/001586和在2007年2月13日的TO 2007/093042下公開的PCT/CA2007/000210,這些專利的全部?jī)?nèi)容通過引用結(jié)合在此。
[0071] 抗體綴合物
[0072] 雖然并不總是必需的，但是出于檢測(cè)或治療目的，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段 可與一個(gè)可檢測(cè)部分（即出于檢測(cè)或診斷目的）或與一個(gè)治療性部分（出于治療目的）綴 合。
[0073] 出于檢測(cè)目的，一個(gè)未綴合的抗體（初級(jí)抗體）可用于結(jié)合抗原并且可添加帶有 一個(gè)可檢測(cè)部分并能夠結(jié)合該初級(jí)抗體的二級(jí)抗體。然而，如上所指示，該抗SIGLEC15抗 體可與一個(gè)可檢測(cè)標(biāo)記綴合并且因此二級(jí)抗體可以不是必需的。
[0074] "可檢測(cè)部分"是通過光譜的、光化學(xué)的、生物化學(xué)的、免疫化學(xué)的、化學(xué)的和/或 其他物理學(xué)手段可檢測(cè)的部分?？蓹z測(cè)部分可使用本領(lǐng)域中眾所周知的方法與本發(fā)明的抗 體及其抗原結(jié)合片段直接和/或間接（例如經(jīng)過鍵聯(lián)，如不限于D0TA或NHS鍵聯(lián)）偶聯(lián)。 可使用各種各樣的可檢測(cè)部分，其中該選擇取決于所需要的靈敏度、綴合簡(jiǎn)易性、穩(wěn)定性需 求以及可獲得的儀器。適合的可檢測(cè)部分包括但不限于熒光標(biāo)記、放射性標(biāo)記（例如不限 于 1251、In111、Tc99、I131以及包括用于PET掃描儀的正電子發(fā)射同位素等）、核磁共振活性標(biāo) 記、發(fā)光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、發(fā)色團(tuán)標(biāo)記、酶標(biāo)記（例如并且不限于辣根過氧化物酶、堿性 磷酸酶等）、量子點(diǎn)和/或納米顆粒?？蓹z測(cè)部分可引起和/或產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)，從而允許 檢測(cè)到來自該可檢測(cè)部分的信號(hào)。
[0075] 在本發(fā)明的另一個(gè)示例性實(shí)施例中，該抗體或其抗原結(jié)合片段可與一個(gè)治療性部 分（例如藥物、細(xì)胞毒性部分）偶聯(lián)（修飾）。
[0076] 在一些情況下，出于治療目的，一個(gè)未綴合的抗體可本身能夠螯合抗原，可阻斷該 抗原與另一個(gè)結(jié)合配偶體之間的重要相互作用，可募集效應(yīng)子細(xì)胞等。然而，如上所指示， 該抗體可與一個(gè)治療性部分綴合。
[0077] 在一個(gè)示例性實(shí)施例中，這些抗體和抗原結(jié)合片段可包含一種化學(xué)治療劑或細(xì)胞 毒性劑。例如，這些抗體和抗原結(jié)合片段可綴合至該化學(xué)治療劑或細(xì)胞毒性劑。此類化 學(xué)治療劑或細(xì)胞毒性劑包括但不限于釔-90、鈧-47、錸-186、碘-131、碘-125以及本領(lǐng) 域技術(shù)人員所認(rèn)可的許多其他化學(xué)治療劑或細(xì)胞毒性劑（例如镥（例如Lu177)、鉍（例如 Bi213)、銅（例如Cu67))。在其他情況下，該化學(xué)治療劑或細(xì)胞毒性劑可包含特別是本領(lǐng)域技 術(shù)人員所已知的5-氟尿啼陡、阿霉素（adriamycin)、伊立替康（irinotecan)、奧利他汀類 (auristatins)、紫杉燒類（taxanes)、假單胞菌內(nèi)毒素（pseudomonasendotoxin)、菌麻毒 素（ricin)、卡奇霉素（calicheamicin)以及其他毒素。示例性細(xì)胞毒性劑可具體包含能夠 殺死非增殖細(xì)胞的一種藥劑（agent)。
[0078] 本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可尤其與靶向DNA的藥劑綴合。靶向DNA的藥劑 的示例性實(shí)施例包括例如燒化劑如多卡米星（duocarmycin)和多卡米星衍生物，如阿多來 新（adozelesin)、比折來新（bizelesin)、卡折來新（carzelesin)等。革巴向DNA的藥劑的 其他示例性實(shí)施例包括例如卡奇霉素、埃斯波霉素（esperamicin)和衍生物（參見例如 披露于美國(guó)專利號(hào) 5, 264, 586、5, 108, 192、4, 970, 198、5, 037, 651、5, 079, 233、4, 675, 187、 4, 539, 203、4, 554, 162、4, 837, 206和US2007213511中的化合物，每個(gè)文件的全部?jī)?nèi)容通 過引用結(jié)合在此）。
[0079] 本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施例包括例如與多卡米星綴合的在此披露的抗體或抗原結(jié) 合片段。本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施例包括例如與卡奇霉素綴合的在此披露的抗體或抗原結(jié) 合片段。
[0080] 可替代地，為了進(jìn)行本發(fā)明的方法，并且如在本領(lǐng)域中所知，可將本發(fā)明的抗體或 抗原結(jié)合片段（綴合的或未綴合的）與一種第二分子（例如，二級(jí)抗體等）組合使用，該第 二分子能夠特異性地結(jié)合本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段并且可帶有一個(gè)所希望的可檢測(cè) 的、診斷性或治療性的部分。
[0081] 抗體的藥物鉬合物及其用涂
[0082] 本發(fā)明還涵蓋這些抗體（綴合的或未綴合的）的藥物組合物。該藥物組合物可包 含一種抗體或一種抗原結(jié)合片段并且還可含有一種藥學(xué)上可接受的載體。
[0083] 本發(fā)明的其他方面涉及一種組合物，該組合物可包含在此描述的該抗體或抗原結(jié) 合片段以及一種載體。
[0084] 本發(fā)明的又其他方面涉及在此描述的該分離的抗體或抗原結(jié)合片段在治療或診 斷骨疾病或癌癥中的用途。
[0085] 除了活性成分之外，藥物組合物可含有藥學(xué)上可接受的載體（這些載體包括水、 PBS、鹽溶液、明膠、油、醇類）以及促進(jìn)活性化合物加工成藥學(xué)上可使用的制劑的其他賦形 劑和助劑。在其他情況下，此類制劑可以是滅菌的。
[0086] 如在此所使用，"藥物組合物"通常包含治療有效量的藥劑連同藥學(xué)上可接受的 稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。如在此所使用的"治療有效量"是指對(duì) 于給定病狀和給藥方案而言提供治療效果的量。此類組合物是液體或凍干的或以另外的 方式干燥的配制品并且包含：具有不同緩沖內(nèi)容物（例如，Tris-HCl、乙酸鹽、磷酸鹽）、 pH和離子強(qiáng)度的稀釋劑；預(yù)防吸附至表面的添加劑，如白蛋白或明膠；洗滌劑（例如，吐溫 〇^?^11)20、吐溫80、普朗尼克（?1111'〇111(3)?68、膽汁酸鹽）。增溶劑（例如甘油、聚乙二醇）、 抗氧化劑（例如，抗壞血酸、焦亞硫酸鈉）、防腐劑（例如硫柳汞、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸 酯）、増量物質(zhì)或張度調(diào)節(jié)劑（例如乳糖、甘露醇）、聚合物（例如聚乙二醇）與蛋白質(zhì)的共 價(jià)附接、與金屬離子的絡(luò)合、或材料的結(jié)合，所述材料的結(jié)合為：該材料結(jié)合在聚合化合物 如聚乳酸、聚乙醇酸、水溶膠等的微粒制劑中或微粒制劑上或結(jié)合在脂質(zhì)體、微乳液、膠束、 單層或多層囊泡、紅細(xì)胞血影或原生質(zhì)球上。此類組合物可影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、 體內(nèi)釋放速率以及體內(nèi)清除速率。控制釋放或持續(xù)釋放組合物包括在親脂性儲(chǔ)庫（例如， 脂肪酸、蠟、油）中的配制品。本發(fā)明還涵蓋用聚合物（例如，泊洛沙姆（poloxamer)或泊洛 沙胺（poloxamine))包被的微粒組合物。本發(fā)明的組合物的其他實(shí)施例結(jié)合微粒形式、保 護(hù)性包衣、蛋白酶抑制劑或滲透促進(jìn)劑以用于不同的給藥途徑，包括經(jīng)腸胃外、肺、鼻、口、 陰道、直腸的途徑。在一個(gè)實(shí)施例中，該藥物組合物是經(jīng)腸胃外、癌旁、經(jīng)粘膜、透皮、肌內(nèi)、 靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)以及瘤內(nèi)給藥的。
[0087] 此外，如在此所使用的"藥學(xué)上可接受的載體"或"藥用載體"是本領(lǐng)域中已知的， 并且包括但不限于0. 01-0. 1M或0. 05M磷酸鹽緩沖液或0. 8%鹽水。另外，此類藥學(xué)上可接 受的載體可以是水溶液或非水溶液、混懸液和乳液。非水溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、 植物油類如橄欖油以及可注射有機(jī)酯類如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳液或 混懸液，包括鹽水和緩沖的介質(zhì)。腸胃外媒介物包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和 氯化鈉、乳酸化林格氏液或不揮發(fā)性油。靜脈內(nèi)媒介物包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物、電解質(zhì)補(bǔ)充 物，如基于林格氏右旋糖的那些等。也可存在防腐劑和其他添加劑，例如像抗微生物劑、抗 氧化劑、整理劑（collatingagent)、惰性氣體等。
[0088] 對(duì)于任何化合物，可在細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定中或在動(dòng)物模型如小鼠、大鼠、兔、狗或豬中 初步估算治療有效劑量。還可使用動(dòng)物模型來確定濃度范圍和給藥途徑。然后可使用此種 信息來確定針對(duì)在人類中給藥的有用劑量和途徑。這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知 的，并且治療有效劑量是指改善癥狀或病狀的活性成分的量。治療功效和毒性可通過標(biāo)準(zhǔn) 藥物程序在細(xì)胞培養(yǎng)物中或用實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物，如通過計(jì)算并對(duì)比ED5(I(在50%群體中治療有 效的劑量）和LD5(I(對(duì)50%群體具致死性的劑量）統(tǒng)計(jì)來測(cè)定?？蓪⒁陨纤龅娜魏沃委?組合物應(yīng)用至對(duì)此種治療有需要的任何受試者，包括但不限于哺乳動(dòng)物，如狗、貓、牛、馬、 兔、猴以及人。
[0089] 可通過任何數(shù)目的途徑給予在本發(fā)明中利用的藥物組合物，這些途徑包括但不限 于經(jīng)口、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、透皮、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸內(nèi)、局部、舌 下或直腸的方式。
[0090] 本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包含例如選自下組的至少一個(gè)藥物成員，該組 由以下各項(xiàng)組成：雙膦酸鹽、活性維生素D3、降鈣素及其衍生物、激素制劑如雌二醇、 SERM(選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑）、依普黃酮（ipriflavone)、維生素K2(四烯甲萘醌 (menatetrenone))丐制劑、PTH(甲狀旁腺激素）制齊[|、非類固醇抗炎劑、可溶性TNF受體制 齊IJ、抗TNF-a抗體或這些抗體的功能片段、抗PTHrP(甲狀旁腺激素相關(guān)的蛋白質(zhì)）抗體或 這些抗體的功能片段、IL-1受體拮抗劑、抗IL-6受體抗體或這些抗體的功能片段、抗RANKL 抗體或這些抗體的功能片段以及0CIF(破骨細(xì)胞發(fā)生抑制因子）。
[0091] 出于本披露的目的，術(shù)語"治療"是指治療性治療和防治性或預(yù)防性措施兩者，其 中目的是為了預(yù)防或減緩（減輕）靶向的病理性病狀或病癥。有治療需要的那些包括已經(jīng) 患有該病癥的那些以及傾向于患有該病癥的那些或有待預(yù)防該病癥的那些。
[0092] 這些抗體或抗原結(jié)合片段可在不同骨丟失或癌癥的治療上具有治療用途。在一個(gè) 示例性實(shí)施例中，這些抗體或片段可在與骨疾病相關(guān)聯(lián)的骨丟失上具有治療用途，這些骨 疾病例如為其中存在破骨細(xì)胞的骨降解活性增加的病狀。
[0093] 在某些情況下，這些抗Siglec-15抗體和片段可與表達(dá)Siglec-15的細(xì)胞相互作 用，這些細(xì)胞如破骨細(xì)胞或破骨細(xì)胞前體。在某些情況下，這些抗體或抗原結(jié)合片段可與表 達(dá)SEQIDN0:2的細(xì)胞相互作用并且通過介導(dǎo)ADCC誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。在其他情況下，這些抗 體和片段可阻斷SEQIDN0:2與它天然配體的相互相用。
[0094] 這些抗Siglec-15抗體或抗原結(jié)合片段可在不同骨相關(guān)疾病背景下的骨丟失治 療上具有治療用途，這些疾病包括但不限于：骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、骨軟化癥、甲狀旁腺功 能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)、性腺功能減退癥、甲狀腺毒癥、全身性肥大細(xì)胞 增多癥、成人型低磷酸酯酶癥、腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、成骨不全、佩吉特氏病、庫興氏病/綜 合征、特納氏綜合征、戈謝病、埃-當(dāng)二氏綜合征、馬方氏綜合征、門克斯綜合征、范科尼氏 綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、高鈣血癥、低鈣血癥、關(guān)節(jié)炎、牙周病、軟骨病（包括維生素D依賴性 I型和II型以及X連鎖低血磷佝僂?。⒐浅衫w維發(fā)生不全、骨硬化病癥如致密性成骨不全 癥和由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性過程引起的損害。在優(yōu)選的實(shí)施例中，這些抗體和片段在其中 普遍存在嚴(yán)重骨丟失的病狀、特別是向骨的轉(zhuǎn)移性癌癥中具有治療用途。
[0095] 這些抗Siglec-15抗體及其抗原結(jié)合片段可在由不同骨重建病癥引起的或與不 同骨重建病癥相關(guān)聯(lián)的癌癥或骨丟失的治療上具有治療用途。具體地說，這些抗Siglec-15 抗體和其中的免疫功能片段在其中破骨細(xì)胞是活動(dòng)過強(qiáng)并且促使骨表面降解的病狀中具 有治療用途。在某些情況下，這些抗Siglec-15抗體及其抗原結(jié)合片段可與針對(duì)相同病狀 給定的其他治療組合而同時(shí)給予。因此，可與本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的抗再吸收劑（例如，雙 膦酸鹽）一起給予這些抗體。另外，可與以下各項(xiàng)一起給予這些抗體：抗有絲分裂劑（例如 紫杉烷類）、基于鉬的藥劑（例如順鉬）、DNA損傷劑（例如多柔比星（Doxorubicin))以及 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他細(xì)胞毒性療法。在其他情況下，這些抗Siglec-15抗體和其中 的免疫功能片段可與其他治療性抗體一起給予。這些包括但不限于靶向RANKL、EGFR、⑶-20 和Her2的抗體。
[0096] 通過下文給出的非限制性詳細(xì)說明，本發(fā)明的另外范圍、適用性和優(yōu)點(diǎn)將變得清 楚。然而，應(yīng)該理解，同時(shí)指示本發(fā)明的示例性實(shí)施例的此詳細(xì)說明僅通過參考附圖以舉例 的方式給出。
[0097] 附圖簡(jiǎn)要說明
[0098] 圖1A.鼠25D8可變結(jié)構(gòu)域的分子模型。用箭頭將⑶R環(huán)指示為輕鏈中的L1、L2 和L3以及重鏈中的H1、H2和H3。
[0099] 圖1B.鼠25E9可變結(jié)構(gòu)域的分子模型。用箭頭將⑶R環(huán)指示為輕鏈中的LI、L2 和L3以及重鏈中的H1、H2和H3。
[0100] 圖2A. 25D8抗體的可變輕鏈（VL)結(jié)構(gòu)域的小鼠、人源化和選擇的人框架序列的序 列比對(duì)。這些⑶R用淺灰色高亮顯示并且對(duì)應(yīng)于SEQIDN0. 53、54和55。
[0101] 圖2B. 25D8抗體的可變重鏈（VH)結(jié)構(gòu)域的小鼠、人源化和選擇的人框架序列的序 列比對(duì)。這些CDR用淺灰色高亮顯示并且對(duì)應(yīng)于SEQIDN0. 56、57和58。
[0102] 圖3A. 25E9抗體的可變輕鏈（VL)結(jié)構(gòu)域的小鼠、人源化和選擇的人框架序列的序 列比對(duì)。這些⑶R用淺灰色高亮顯示并且對(duì)應(yīng)于SEQIDN0. 47、48和49。
[0103] 圖3B. 25E9抗體的可變重鏈（VH)結(jié)構(gòu)域的小鼠、人源化和選擇的人框架序列的序 列比對(duì)。這些⑶R用淺灰色高亮顯示并且對(duì)應(yīng)于SEQIDN0. 50、51和52。
[0104] 圖 4A?人源化全長(zhǎng)IgG22?8(SEQIDN0. :23 和 27)和嵌合全長(zhǎng)IgG2(SEQID NO. : 21和25) 25D8抗體的組裝序列。
[0105] 圖 4B?人源化全長(zhǎng)IgG225E9(SEQIDN0. :7 和 29)和嵌合全長(zhǎng)IgG225E9(SEQID NO. :5和30)抗體的組裝序列。
[0106] 圖5A.小鼠和人源化2?8IgG2抗體的SPR色譜圖。
[0107] 圖5B.小鼠和人源化25E9IgG2抗體的SPR色譜圖。
[0108] 圖6A示出25E9小鼠輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與25E9人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域變體1之間 的比對(duì)。通過使用ClustalW2程序進(jìn)行比對(duì)；其中意指該列中的殘基在比對(duì)的所有 序列中是一致的，"："意指已觀察到保守取代并且"意指觀察到半保守取代。（Larkin M.A.(拉金M.A.)等人，（2007)ClustalW和ClustalX第 2 版本，生物信息學(xué)（Bioinformat ics) 200723 (21): 2947-2948)。這些比對(duì)用來產(chǎn)生列于SEQIDNO. :33、34和35中的共有序 列。
[0109] 圖6B示出25E9小鼠重鏈可變結(jié)構(gòu)域與25E9人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域變體1之間 的比對(duì)。通過使用ClustalW2程序完成比對(duì)；其中意指該列中的殘基在比對(duì)的所有 序列中是一致的，"："意指已觀察到保守取代并且"意指觀察到半保守取代。（Larkin M.A.(拉金M.A.)等人，（2007)ClustalW和ClustalX第 2 版本，生物信息學(xué)（Bioinformat ics) 200723 (21): 2947-2948)。這些比對(duì)用來產(chǎn)生列于SEQIDNO. :36、37和38中的共有序 列。
[0110] 圖7A示出25D8小鼠輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與25D8人源化輕鏈可變結(jié)構(gòu)域之間的比 對(duì)。通過使用ClustalW2程序完成比對(duì)；其中意指該列中的殘基在比對(duì)的所有序 列中是一致的，"："意指已觀察到保守取代并且"意指觀察到半保守取代。（Larkin M.A.(拉金M.A.)等人，（2007)ClustalW和ClustalX第 2 版本，生物信息學(xué)（Bioinformat ics) 200723 (21): 2947-2948)。這些比對(duì)用來產(chǎn)生列于SEQIDNO. :39、40和41中的共有序 列。
[0111] 圖7B示出25D8小鼠重鏈可變結(jié)構(gòu)域與25D8人源化重鏈可變結(jié)構(gòu)域之間的比 對(duì)。通過使用ClustalW2程序完成比對(duì)；其中意指該列中的殘基在比對(duì)的所有序列中 是一致的，"："意指已觀察到保守取代并且"意指觀察到半保守取代。（LarkinM.A.(拉 金M.A.)等人，（2007)ClustalW和ClustalX第 2 版本.生物信息學(xué)（Bioinformati cs) 200723 (21): 2947-2948)。這些比對(duì)用來產(chǎn)生列于SEQIDNO. : 42、43和44中的共有序 列。
[0112] 圖8.指示25E9以濃度依賴性方式特異性結(jié)合在細(xì)胞表面上表達(dá)的人Siglec-15 的流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)結(jié)果。
[0113] 圖9.示出25E9能夠抑制人破骨細(xì)胞的分化和再吸收活性的圖像。
[0114] 圖10A.示出在抗Siglec-15抗體存在下內(nèi)化生物素化的Siglec-15的蛋白質(zhì)印 跡。
[0115] 圖10B.通過共聚焦顯微鏡進(jìn)行的Siglec-15內(nèi)吞作用的表征。
[0116] 圖10C.示出Siglec-15蛋白水平的蛋白質(zhì)印跡
[0117] 圖10D.示出在存在或不存在抗Siglec-15抗體情況下RANK1刺激之后在 RAW264. 7中的Siglec-15蛋白表達(dá)的蛋白質(zhì)印跡。
[0118] 圖11.由Siglec-15群集誘導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)分析。在4C下，用初級(jí)抗體（抗 Siglec-15或?qū)φ杖薎gG)處理對(duì)照（C)或分化的（A)RAW264. 7細(xì)胞，接著在37C下用二級(jí) 交聯(lián)抗體處理指定的時(shí)間。用指定的抗體通過蛋白質(zhì)印跡法分析總裂解液。
[0119] 圖12?示出人源化25E9LlHlIgGl(左圖）與人源化25E9LlHlIgG2(右圖）之間的 結(jié)合參數(shù)差異的SPR色譜圖。固定純化的Fc-Siglec-15(150RU)并且在指定濃度（100nM、 33. 3nM、ll.lnM、3. 70nM和1. 23nM)下注射人源化25E9。用1:1比率擬合這些曲線。
[0120] 圖13.示出與人源化25E9IgG2相比，人源化25E9LlHlIgGl用于抑制破骨細(xì)胞分 化的效力增加的代表性圖像。
[0121] 圖 14A?人源化全長(zhǎng)IgG12OT8(SEQIDN0. :23 和 46)和嵌合全長(zhǎng)IgG12OT8(SEQ IDNO. : 21和45)抗體的組裝序列。
[0122] 圖 14B?人源化全長(zhǎng)IgG125E9(SEQIDNO. :7和 13)和嵌合全長(zhǎng)IgG125E9(SEQID NO. :5和11)抗體的組裝序列。
[0123] 圖15.指示25E9-ADC以與未綴合抗體非常類似的方式特異性結(jié)合在細(xì)胞表面上 表達(dá)的人Siglec-15的流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)結(jié)果。
[0124] 圖16.示出25E9-ADC對(duì)成熟多核破骨細(xì)胞的存活曲線。與未綴合的25E9非常不 同，該反應(yīng)強(qiáng)烈抑制破骨細(xì)胞活性而不影響它們的存活。
[0125] 圖17示出TRAP染色的破骨細(xì)胞的圖像，說明25E9-ADC對(duì)成熟多核破骨細(xì)胞的細(xì) 胞毒性作用。與未綴合的25E9非常不同，該反應(yīng)強(qiáng)烈抑制破骨細(xì)胞活性而不影響它們的存 活。對(duì)照ADC對(duì)破骨細(xì)胞沒有作用。
[0126] 發(fā)明詳細(xì)說明
[0127] 由本發(fā)明所涵蓋的變體抗體或抗原結(jié)合片段是可包含一種插入、一種缺失或一種 氨基酸取代（保守性或非保守性）的那些。這些變體可去除它的氨基酸序列中的至少一個(gè) 氨基酸殘基并且在該氨基酸殘基的位置中插入一個(gè)不同的殘基。
[0128] 用于取代誘變的感興趣的位點(diǎn)包括高變區(qū)（CDR)，但也涵蓋了在框架區(qū)中或甚至 在恒定區(qū)中的修飾。可以通過將來自以下列出的組（1到6組）中之一的（⑶R、可變鏈、抗 體等的）氨基酸用相同組的另一個(gè)氨基酸交換而產(chǎn)生保守性取代。
[0129] 通常，與框架區(qū)中的突變相比而言這些⑶R中的突變可對(duì)抗體或抗原結(jié)合片段的 抗原結(jié)合活性具有更大的影響?？蛇M(jìn)行框架區(qū)中的突變以增加抗體的"人性"。由本發(fā)明 所涵蓋的變體抗體或抗原結(jié)合片段是具有與在此提出的那些大致上一致的抗原結(jié)合能力 (包括類似、一致或稍微小于）或具有比在此提出的那些抗原結(jié)合能力更好的那些。
[0130] 保守性取代的其他示例性實(shí)施例示于表1A中"優(yōu)選的取代"標(biāo)題之下。如果這樣 的取代導(dǎo)致所不希望的特性，則可引入在表1A中命名為"示例性取代"的、或如下進(jìn)一步參 考氨基酸類別所述的更多實(shí)質(zhì)性改變，并且篩選產(chǎn)物。
[0131] 本領(lǐng)域中已知的是變體可通過取代誘變來產(chǎn)生，并且保留本發(fā)明的多肽的生物活 性。這些變體去除它的氨基酸序列中的至少一個(gè)氨基酸殘基并且在該氨基酸殘基的位置中 插入一個(gè)不同的殘基。例如，用于取代誘變的感興趣的一個(gè)位點(diǎn)可包括這樣一個(gè)位點(diǎn)：在該 位點(diǎn)中從不同物種獲得的特定殘基是一致的。鑒定為"保守性取代"的取代的實(shí)例示于表 1A中。如果這樣的取代導(dǎo)致所不希望的改變，則可引入在表1A中命名為"示例性取代"的、 或如下進(jìn)一步參考氨基酸類別所述的其他類型的取代，并且篩選產(chǎn)物。
[0132] 通過選擇取代來完成在功能或免疫身份方面的實(shí)質(zhì)性修飾，這些取代在它們對(duì)維 持以下各項(xiàng)的作用方面明顯不同：(a)在取代區(qū)域中的多肽主鏈的結(jié)構(gòu)，例如，如片層或螺 旋構(gòu)象。（b)分子在靶位點(diǎn)處的電荷或疏水性，或（c)側(cè)鏈的體積。基于共同的側(cè)鏈特性將 天然存在的殘基分組：
[0133] (第1組）疏水性：正亮氨酸、甲硫氨酸（Met)、丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨 酸（Leu)、異亮氨酸（lie)
[0134] (第2組）中性親水性：半胱氨酸（Cys)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)
[0135] (第3組）酸性：天冬氨酸（Asp)、谷氨酸（Glu)
[0136] (第4組）堿性：天冬酰胺（Asn)、谷氨酰胺（Gin)、組氨酸（His)、賴氨酸（Lys)、 精氨酸（Arg)
[0137] (第5組）影響鏈取向的殘基：甘氨酸（Gly)、脯氨酸（Pro);以及
[0138] (第6組）芳香族：色氨酸（Trp)、酪氨酸（Tyr)、苯丙氨酸（Phe)
[0139] 非保守性取代將需要將這些類別之一的一個(gè)成員用另一個(gè)交換。
[0140] 表1A.氨基酸取代
[0141]
【權(quán)利要求】
1. 一種抗體或其抗原結(jié)合片段，能夠特異性地結(jié)合Siglec-15并且選自下組，該組由 以下各項(xiàng)組成： a. -種抗體或其抗原結(jié)合片段，具有與SEQ ID NO. :6至少80%-致的一個(gè)輕鏈可變 區(qū)和/或與SEQ ID NO. : 12至少80%-致的一個(gè)重鏈可變區(qū)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合 片段包含與SEQ ID NO. :6或SEQ ID NO. : 12相比的至少一個(gè)氨基酸取代并且其中所述氨 基酸取代是在一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的外面以及； b. -種抗體或其抗原結(jié)合片段，具有與SEQ ID NO. : 22至少80 %-致的一個(gè)輕鏈可變 區(qū)和/或與SEQ ID NO. :26至少80%-致的一個(gè)重鏈可變區(qū)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合 片段包含與SEQ ID NO. : 22或SEQ ID NO. : 26相比的至少一個(gè)氨基酸取代并且其中所述氨 基酸取代是在一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的外面。
2. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該至少一個(gè)氨基酸取代是在該輕鏈 可變區(qū)中。
3. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含至 少三個(gè)氨基酸取代。
4. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段在該輕 鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)中包含從一至二十五個(gè)氨基酸取代。
5. 如權(quán)利要求4所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該氨基酸取代是在該輕鏈可變區(qū) 中。
6. 如權(quán)利要求4所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該氨基酸取代是在該重鏈可變區(qū) 中。
7. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述氨基酸取代是保 守性的。
8. 如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 33的至少90個(gè)氨基酸。
9. 如權(quán)利要求8所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :34 的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
10. 如權(quán)利要求9所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 35 的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
11. 如權(quán)利要求10所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :8 或10的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
12. 如權(quán)利要求11所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. : 8或在SEQ ID NO. : 10中所列出。
13. 如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含 SEQ ID NO. : 36的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
14. 如權(quán)利要求13所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :37的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
15. 如權(quán)利要求14所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :38的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
16. 如權(quán)利要求15所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 14、SEQ ID NO. : 16、SEQ ID NO. : 18 或 SEQ ID NO. :20 的至少 90 個(gè)連續(xù)氨基酸。
17. 如權(quán)利要求15所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. : 14、SEQ ID NO. : 16、SEQ ID NO. :18 或在 SEQ ID NO. :20 中所列出。
18. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :33 的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :36的至少90個(gè)連續(xù)氨基 酸。
19. 如權(quán)利要求18所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :34的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :37的至少90個(gè)連 續(xù)氨基酸。
20. 如權(quán)利要求19所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含氨基酸SEQ ID NO. :35的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :38的至少90個(gè)連 續(xù)氨基酸。
21. 如權(quán)利要求20所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 8 或SEQ ID NO. :10的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :14、SEQ ID NO. : 16、SEQ ID NO. : 18 或 SEQ ID NO. :20 的至少 90 個(gè)連續(xù)氨基酸。
22. 如權(quán)利要求21所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. :8或SEQ ID NO. :10中所列出并且其中該重鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. : 14、SEQ ID NO. :16、SEQ ID NO. :18 或 SEQ ID NO. :20 中所列出。
23. 如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含 SEQ ID NO. : 39的至少90個(gè)氨基酸。
24. 如權(quán)利要求23所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :40的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
25. 如權(quán)利要求24所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :41的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
26. 如權(quán)利要求25所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :24的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
27. 如權(quán)利要求26所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. : 24中所列出。
28. 如權(quán)利要求1至7或23至27中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可 變區(qū)包含SEQ ID NO. : 42的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
29. 如權(quán)利要求28所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :43的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
30. 如權(quán)利要求29所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :44的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
31. 如權(quán)利要求30所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :26的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸。
32. 如權(quán)利要求31所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該重鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. : 26中所列出。
33. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 39 的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :42的至少90個(gè)連續(xù)氨基 酸。
34. 如權(quán)利要求33所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :40的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :43的至少90個(gè)連 續(xù)氨基酸。
35. 如權(quán)利要求34所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. : 41的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :44的至少90個(gè)連 續(xù)氨基酸。
36. 如權(quán)利要求35所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :24的至少90個(gè)連續(xù)氨基酸并且其中該重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO. :26的至少90個(gè)連 續(xù)氨基酸。
37. 如權(quán)利要求36所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該輕鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. :24中所列出并且其中該重鏈可變區(qū)是如在SEQ ID NO. :26中所列出。
38. 如權(quán)利要求1至37中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包含一個(gè) 恒定區(qū)的氨基酸。
39. 如權(quán)利要求38所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該恒定區(qū)的這些氨基酸是來自一 種人抗體。
40. 如權(quán)利要求1至40中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，包含一個(gè)人IgGl恒定 區(qū)。
41. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. : 23中 所列出的一個(gè)輕鏈。
42. 如權(quán)利要求1或41所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. :27中所列出的一個(gè)重鏈。
43. 如權(quán)利要求1或41所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. : 46中所列出的一個(gè)重鏈。
44. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. :7中 所列出的一個(gè)輕鏈。
45. 如權(quán)利要求1或44所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. : 29中所列出的一個(gè)重鏈。
46. 如權(quán)利要求45所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體包含如在SEQ ID NO. : 13 中所列出的一個(gè)重鏈。
47. 如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體是選自下組，該組由以下 各項(xiàng)組成： a. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 13中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； b. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 15中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； c. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 17中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； d. 包含如在SEQ ID NO. :7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. :19中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； e. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 29中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； f. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 59中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； g. 包含如在SEQ ID NO. : 7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 60中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； h. 包含如在SEQ ID NO. :7中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. :61中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； i. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 13中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； j. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 15中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； k. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 17中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； l. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 19中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； m. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 29中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； n. 包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 59中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； 〇.包含如在SEQ ID NO. : 9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID NO. : 60中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； P.包含如在SEQ ID N0. :9中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID N0. :61中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段； q. 包含如在SEQ ID N0. : 23中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID N0. : 27中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段以及； r. 包含如在SEQ ID N0. : 23中所列出的一個(gè)輕鏈和如在SEQ ID N0. : 46中所列出的一 個(gè)重鏈的一種抗體或其抗原結(jié)合片段。
48. 如權(quán)利要求1至47中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗原結(jié)合片段是 一種 scFv、Fab、Fab' 或（Fab，）2。
49. 如權(quán)利要求1至48中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，與一個(gè)細(xì)胞毒性部分綴 合。
50. 如權(quán)利要求1至48中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，與一個(gè)可檢測(cè)部分綴合。
51. 如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段，用于在治療骨丟失中使 用。
52. -種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，能夠與如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體 或抗原結(jié)合片段競(jìng)爭(zhēng)。
53. -種核酸，編碼如權(quán)利要求1至48中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段的一個(gè)輕 鏈可變結(jié)構(gòu)域和/或一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域。
54. -種載體，包含如權(quán)利要求53所述的核酸。
55. 如權(quán)利要求54所述的載體，其中所述載體是一種表達(dá)載體。
56. -種分離的細(xì)胞，包含如權(quán)利要求53所述的核酸。
57. 如權(quán)利要求56所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含編碼一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的 一種核酸和編碼一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一種核酸。
58. 如權(quán)利要求57所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠表達(dá)、組裝和/或分泌一種抗 體或其抗原結(jié)合片段。
59. -種分離的細(xì)胞，包含或表達(dá)如權(quán)利要求1至48中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合 片段。
60. 如權(quán)利要求59所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞包含編碼一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的 一種核酸和編碼一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一種核酸。
61. 如權(quán)利要求60所述的分離的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞能夠表達(dá)、組裝和/或分泌一種抗 體或其抗原結(jié)合片段。
62. -種藥物組合物，包含如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段以 及一種藥學(xué)上可接受的載體。
63. -種組合物，包含如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段以及一 種載體。
64. -種治療骨丟失的方法，該方法包括向有需要的受試者給予如權(quán)利要求1至49中 任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。
65. 如權(quán)利要求64所述的方法，其中骨丟失是與以下各項(xiàng)相關(guān)聯(lián)：癌癥、癌癥治療、骨 質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、骨軟化癥、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)、性 腺功能減退癥、甲狀腺毒癥、全身性肥大細(xì)胞增多癥、成人型低磷酸酯酶癥、腎上腺皮質(zhì)功 能亢進(jìn)、成骨不全、佩吉特氏病、庫興氏病/綜合征、特納氏綜合征、戈謝病、埃-當(dāng)二氏綜合 征、馬方氏綜合征、門克斯綜合征、范科尼氏綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、高鈣血癥、低鈣血癥、關(guān) 節(jié)炎、牙周病、軟骨?。òňS生素 D依賴性I型和II型以及x連鎖低血磷佝僂?。?、骨成 纖維發(fā)生不全、骨硬化病癥如致密性成骨不全癥或由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性過程骨引起的損 害。
66. -種試劑盒，包括如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段。
67. 如權(quán)利要求1至50中任一項(xiàng)所述的抗體或抗原結(jié)合片段在制造用于治療骨丟失的 藥劑中的用途。
68. 如權(quán)利要求67中所定義的用途，其中骨丟失是與以下各項(xiàng)相關(guān)聯(lián)：癌癥、癌癥治 療、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)減少、骨軟化癥、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢 進(jìn)、性腺功能減退癥、甲狀腺毒癥、全身性肥大細(xì)胞增多癥、成人型低磷酸酯酶癥、腎上腺皮 質(zhì)功能允進(jìn)、成骨不全、佩吉特氏病、庫興氏病/綜合征、特納氏綜合征、戈謝病、埃-當(dāng)二氏 綜合征、馬方氏綜合征、門克斯綜合征、范科尼氏綜合征、多發(fā)性骨髓瘤、高鈣血癥、低鈣血 癥、關(guān)節(jié)炎、牙周病、軟骨?。òňS生素 D依賴性I型和II型以及x連鎖低血磷佝僂?。?、 骨成纖維發(fā)生不全、骨硬化病癥如致密性成骨不全癥或由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性過程引起的 損害。
【文檔編號(hào)】C12N5/10GK104507969SQ201380037901
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2013年7月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月19日
【發(fā)明者】M·施圖伊伯勒, G·B·特倫布萊, T·蘇萊亞, A·N·莫雷蒂斯, M·菲利翁 申請(qǐng)人:阿萊斯亞生物療法股份有限公司