一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法。該方法應(yīng)用絲狀聚合材料作為載體，將捕獲目標(biāo)病原菌的抗體包被在絲狀載體上，經(jīng)過(guò)緩沖液洗滌，將包被好抗體的絲狀載體放入樣品抽提緩沖液中進(jìn)行捕獲反應(yīng)，捕獲反應(yīng)完成后，用無(wú)菌水洗滌絲狀載體，之后將絲狀載體放置于培養(yǎng)基上，根據(jù)捕獲目標(biāo)病原菌的生長(zhǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)-72小時(shí)后觀察到絲狀載體邊緣有菌落生長(zhǎng)，根據(jù)目標(biāo)病原菌菌落特征進(jìn)行分離純化。本方法靈敏、高效、操作簡(jiǎn)便、成本低，在植物樣品材料、食品材料、環(huán)境體系中細(xì)菌的分離應(yīng)用中，尤其在植物檢疫領(lǐng)域有很大的利用空間，該方法作為核心技術(shù)還能夠開發(fā)相關(guān)的細(xì)菌分離純化試劑盒，因此具有推廣應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物病原細(xì)菌檢疫、食品和環(huán)境微生物檢測(cè)方法，尤其涉及一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]以目前植物病原細(xì)菌檢疫工作為例。植物病原細(xì)菌的檢疫工作有三個(gè)步驟:1、樣品的癥狀觀察；2、植物病原細(xì)菌的分離；3、病原菌鑒定。其中，第二個(gè)步驟即病菌的分離是工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)，是植物病原細(xì)菌檢疫工作的關(guān)鍵。只有拿到分離純化的病原菌，這樣才能進(jìn)行之后的鑒定工作。目前對(duì)植物病原細(xì)菌樣品進(jìn)行初篩通常采取一些分子檢測(cè)方法(如常規(guī)PCR、熒光PCR、ELISA、基因芯片、液相芯片等)，這些方法只用于樣品的初篩，即初步判定樣品是否攜帶某些病原細(xì)菌，但不作為結(jié)果判定的最終依據(jù)。所以，分離獲得目標(biāo)病原菌是檢驗(yàn)結(jié)果的證據(jù)，也是植物病原細(xì)菌檢疫工作的關(guān)鍵。
[0003]目前雖然病原菌分離的方法較多，通過(guò)分析，均不適應(yīng)當(dāng)前植物檢疫工作需要具有快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。若干不同分離方法的比較見表1。目前來(lái)看，基于免疫吸附技術(shù)的分離方法是植物病原細(xì)菌檢疫中的最有效手段。雖然免疫磁珠法具有自動(dòng)化程度高，分離效果較好的優(yōu)點(diǎn)，但是方法中采用的設(shè)備成本高。因此探尋一種新的分離方法，以適應(yīng)當(dāng)前植物檢疫工作需要快速、準(zhǔn)確的要求勢(shì)在必行。
[0004]表1
【權(quán)利要求】
1.一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法，其特征在于，該方法應(yīng)用絲狀聚合材料作為載體，將捕獲目標(biāo)病原菌的抗體包被在絲狀載體上，經(jīng)過(guò)包被緩沖液洗滌，將包被好抗體的絲狀載體放入樣品抽提緩沖液中進(jìn)行捕獲反應(yīng)，捕獲反應(yīng)完成后，用無(wú)菌水洗滌絲狀載體，之后將絲狀載體放置于培養(yǎng)基上，根據(jù)捕獲目標(biāo)病原菌的生長(zhǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)-72小時(shí)后觀察到絲狀載體邊緣有菌落生長(zhǎng)，根據(jù)目標(biāo)病原菌菌落特征進(jìn)行分離純化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用絲狀免疫捕獲載體分離純化細(xì)菌的方法，其特征在于，該方法應(yīng)用釣魚線作為絲狀載體`。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK103740620SQ201410004439
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月6日
【發(fā)明者】劉鵬, 牛春敬, 郭京澤, 張瑩, 馮潔, 林宇, 羅加鳳, 廖芳 申請(qǐng)人:天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心