一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝，步驟如下：取新生牛血清，4000r/min離心10min，取上清，加入上清液質(zhì)量0.2%的活性炭進(jìn)行吸附，吸附30min；吸附后，4000r/min離心20min，取上清，依次用0.8μm濾膜、0.65μm濾膜、0.45μm濾膜、0.22μm濾膜、0.1μm濾膜過濾，即得到去除了內(nèi)毒素的新生牛血清。本發(fā)明采用活性炭吸附及逐級(jí)過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產(chǎn)過程中作為廢棄物的高內(nèi)毒素含量牛血清中內(nèi)毒素的含量，增加新生牛血清生產(chǎn)的效率和附加值。
【專利說明】一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質(zhì)的總稱，是多種革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分，由菌體裂解后釋出，又稱之為“熱原”。其化學(xué)成分有磷脂多糖-蛋白質(zhì)復(fù)合物，其毒性成分主要為類脂質(zhì)A。內(nèi)毒素位于細(xì)胞壁的最外層、覆蓋于細(xì)胞壁的黏肽上。各種細(xì)菌的內(nèi)毒素大都具有一定的毒性，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。因此，含有內(nèi)毒素的血清不能用于疫苗的生產(chǎn)，只有去除內(nèi)毒素、保留血清中的營(yíng)養(yǎng)成分，才可以使這類血清用于疫苗生產(chǎn)，從而變廢為寶，得到充分利用。
[0003]在現(xiàn)有新生牛血清生產(chǎn)過程中，由于采血、存放等諸多原因造成細(xì)菌污染，會(huì)產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素超標(biāo)的血清，因此，為了充分利用生物資源、減少資源浪費(fèi)，設(shè)計(jì)一種高效去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝是亟需解決的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝，本發(fā)明采用活性炭吸附及逐級(jí)過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產(chǎn)過程中作為廢棄物的高內(nèi)毒素含量牛血清中內(nèi)毒素的含量，增加新生牛血清生產(chǎn)的效率和附加值。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝，步驟如下:取新生牛血清，4000r/min離心IOmin,取上清，加入上清液質(zhì)量0.2%的活性炭進(jìn)行吸附，吸附30min ;吸附后，4000r/min離心20min,取上清，依次用0.8 μ m濾膜、0.65 μ m濾膜、0.45 μ m濾膜、0.22 μ m濾膜、0.1 μ m
濾膜過濾，即得到去除了內(nèi)毒素的新生牛血清。
[0007]本發(fā)明采用活性炭吸附及逐級(jí)過濾的方法，可顯著降低以往在新生牛血清生產(chǎn)過程中作為廢棄物的高內(nèi)毒素含量牛血清中內(nèi)毒素的含量，增加新生牛血清生產(chǎn)的效率和附加值。本發(fā)明的活性炭的加入量，以及過濾膜的選擇，均是特定的，是通過優(yōu)化實(shí)驗(yàn)得到的最佳方案，該最佳方案，可以去掉新生牛血清中的內(nèi)毒素，且對(duì)血清的增殖效果、血清蛋白濃度的影響最低。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0009]實(shí)施例去除新生牛血清內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)
[0010](I)原料新生牛血清的準(zhǔn)備
[0011]采用新生牛血清生產(chǎn)過程中內(nèi)毒素含量較高的新生牛血清作為本發(fā)明的原料牛血清。
[0012]血清內(nèi)毒素含量`的檢測(cè)使用湛江博康海洋生物有限公司鱟試劑內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒。
[0013](2)去除牛血清中內(nèi)毒素的工藝
[0014]將稱量的不同投加量活性炭(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、1%、2%、5%)緩慢撒進(jìn)血清并柔和攪拌至均勻，持續(xù)柔和攪拌30min后，經(jīng)逐級(jí)過濾去除活性炭并獲得新生牛血清。過濾后的血清經(jīng)無菌試驗(yàn)驗(yàn)證，達(dá)到無菌要求。
[0015](3)內(nèi)毒素含量的檢測(cè)
[0016]將鱟試劑用無內(nèi)毒素蒸餾水100 μ L溶解，然后分別加入稀釋40倍的原料血清留樣100 μ L與鱟試劑混合，同時(shí)設(shè)有陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，37°C孵育Ih后通過觀察凝集情況判斷標(biāo)本中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量范圍。
[0017]活性炭處理含內(nèi)毒素新生牛血清的結(jié)果見表1，試驗(yàn)中> 0.5%活性炭投加量的血清標(biāo)本均未發(fā)生凝集，表明血清中的細(xì)菌內(nèi)毒素低于0.125EU/mL (試劑盒檢測(cè)限量為0.125EU/mL),而0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的活性炭投加量的血清內(nèi)毒素含量也都符合國(guó)標(biāo)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)(中國(guó)藥典2010版要求≤10EU/mL)。
[0018]表1活性炭處理血清內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果
[0019]
【權(quán)利要求】
1.一種去除新生牛血清內(nèi)毒素的工藝，其特征在于:步驟如下:取新生牛血清，40001./min離心IOmin,取上清,加入上清液質(zhì)量0.2%的活性炭進(jìn)行吸附，吸附30min ;吸附后，4000r/min離心20min,取上清，依次用0.8 μ m濾膜、0.65 μ m濾膜、0.45 μ m濾膜、0.22 μ m濾膜、0.1 μ m濾膜過濾，`即得到去除了內(nèi)毒素的新生牛血清。
【文檔編號(hào)】C12N5/073GK103725645SQ201410007483
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月7日
【發(fā)明者】張子毅 申請(qǐng)人:濟(jì)南勁牛生物科技有限公司