抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體，它是由保藏號為CCTCC?NO:C2013188的雜交瘤細(xì)胞株所分泌的，本發(fā)明還公開了所述單克隆抗體的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的單克隆抗體能特異性地與洪湖碘泡蟲極絲蛋白反應(yīng)，而不與其它粘孢子蟲發(fā)生反應(yīng)，也不與洪湖碘泡蟲除極絲外的其它結(jié)構(gòu)發(fā)生反應(yīng)，可用于制備特異性檢測洪湖碘泡蟲的試劑盒，用于洪湖碘泡蟲的種類鑒定，檢測特異性高，反應(yīng)靈敏，易于觀察，適于大規(guī)模推廣。
【專利說明】抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]粘孢子蟲(myxosporea)是一類主要感染魚類的后生動物寄生蟲，能導(dǎo)致養(yǎng)殖魚類發(fā)生重大病害。異育銀鯽(Carassius auratus gibelio (Bloch))是我國重要的淡水養(yǎng)殖魚類，也是粘孢子蟲的主要宿主之一，至今已在其不同組織和器官中發(fā)現(xiàn)30多種粘孢子蟲,大部分種類對異育銀鯽并不直接造成危害,但少數(shù)種類,如洪湖碘泡蟲(Myxobolushonghuensis Liu et Gu, 2012)、吳李碘泡蟲(Myxobolus wulii )、丑陋圓形碘泡蟲(Myxobolus turpisrotundus Zhang, 2009)、武漢單極蟲(Thelohanellus wuhanensis Xiaoet Chen, 1993)、龜殼單極蟲(Thelohanellus testudineus Liu et Gu, 2012)等均能直接危害養(yǎng)殖魚類。
[0003]然而，不同種類的粘孢子蟲對魚體造成的危害是不一致的，如洪湖碘泡蟲引起的“喉孢子蟲病”導(dǎo)致魚種的死亡率超過90% ;丑陋圓形碘泡蟲成熟胞囊位于口腔、咽腔等部位，主要造成機(jī)械損傷和阻塞，導(dǎo)致魚體消瘦并影響經(jīng)濟(jì)價值；部分種類還會形成混合感染。由于不同種類粘孢子蟲的感染機(jī)制和對魚體造成的危害程度不一致，因而對其病害所采取的防控措施也是不一樣的，故對病害必須做到準(zhǔn)確診斷。
[0004]快速和準(zhǔn)確鑒定病原種類是有效開展不同粘孢子蟲病害防治的關(guān)鍵。但是，目前最廣泛應(yīng)用的物種 鑒定方法是依據(jù)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)進(jìn)行，由于粘孢子蟲形態(tài)特征相對簡單，同屬之間的種類難以區(qū)分，其準(zhǔn)確性主要取決于鏡檢設(shè)備和鏡檢人員的技術(shù)和經(jīng)驗；分子生物學(xué)敏感性高，但需獲得較多物種的分子序列進(jìn)行比較，且操作復(fù)雜、必須在專門實驗室才能完成。遺憾的是，這些條件在養(yǎng)殖現(xiàn)場或基層服務(wù)站通常得不到滿足，導(dǎo)致檢測結(jié)果可信度下降。
[0005]極絲是粘孢子蟲的重要結(jié)構(gòu)，其圈數(shù)也是粘孢子蟲形態(tài)分類的重要參數(shù)之一。研究發(fā)現(xiàn)，極絲是粘孢子蟲的遺傳物質(zhì)，種的特異性很強(qiáng)。在粘孢子蟲成熟后，極絲從成熟孢子的極孔中釋放出來，粘附于中間宿主，進(jìn)入其體內(nèi)發(fā)育成放射孢子蟲(actinosporean)。放射孢子蟲具有同樣的極絲結(jié)構(gòu)，在其感染魚類宿主時，極絲釋放出來粘附于魚體表皮組織器官(鰓、鰭條、皮膚等)，而后進(jìn)入魚體內(nèi)，經(jīng)過移行與發(fā)育形成成熟孢子。章晉勇等(2008)研究發(fā)現(xiàn)丑陋圓形碘泡蟲的極絲具有較好免疫原性，但種特異性很強(qiáng)。對于嚴(yán)重危害我國異育銀鯽的洪湖碘泡蟲，生產(chǎn)實踐中尚缺乏快速和準(zhǔn)確的物種鑒定技術(shù)，這嚴(yán)重阻礙了喉孢子蟲病防控策略的制定。因此，急需發(fā)展快速、準(zhǔn)確、靈敏的洪湖碘泡蟲的物種快速診斷技術(shù)，為“喉孢子蟲病”的早期診斷和防治提供重要依據(jù)，保障異育銀鯽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明的第一個目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體。
[0007]本發(fā)明的第二個目的是提供能分泌所述單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
[0008]本發(fā)明的第三個目的是提供所述單克隆抗體的制備方法。
[0009]本發(fā)明的第四個目的是提供所述單克隆抗體的應(yīng)用。
[0010]為了解決上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體，該單克隆抗體對洪湖碘泡蟲極絲蛋白有特異性。
[0011]本發(fā)明中所述的“特異性”是指單克隆抗體對相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力，特異性高，抗原的識別能力就強(qiáng)。因此，上述的單克隆抗體能夠特異性識別和結(jié)合洪湖碘泡蟲極絲蛋白。
[0012]所述單克隆抗體由保藏號為CCTCC N0:C2013188的雜交瘤細(xì)胞株1C7分泌。所述雜交瘤細(xì)胞株1C7已保藏在位于湖北省武漢市武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏日期:2013年11月15日，分類命名為雜交瘤細(xì)胞株1C7。
[0013]所述雜交瘤細(xì)胞株1C7是采用洪湖碘泡蟲可溶性蛋白作為抗原免疫小鼠得到的，該可溶性蛋白的SDS-PAGE分析如附圖1所示。
[0014]所述可溶性蛋白免疫小鼠，取小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能夠分泌對洪湖碘泡蟲極絲蛋白 有特異性反應(yīng)的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1C7，從所述雜交瘤細(xì)胞株1C7的培養(yǎng)上清液中或從注射所述雜交瘤細(xì)胞后的動物腹水中獲取所述單克隆抗體。
[0015]在本發(fā)明的一具體實施例中，以洪湖碘泡蟲可溶性蛋白作為抗原免疫小鼠，取小鼠的脾細(xì)胞與同系動物的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。篩選能夠產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細(xì)胞，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，并建立雜交細(xì)胞株。上述方法僅是示例性的，例如可以用同樣的方法免疫其他哺乳動物，將其脾細(xì)胞作為免疫細(xì)胞。還可以選擇適宜的骨髓瘤細(xì)胞用于融合，例如用來自大鼠、小鼠或倉鼠的骨髓瘤細(xì)胞。免疫細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合可以按照常規(guī)方法進(jìn)行。
[0016]篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行單克隆化，得到的產(chǎn)生本發(fā)明單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，可以在普通培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)或者在液氮中長時間保存。從雜交瘤細(xì)胞收集本發(fā)明的單克隆抗體時，可以從雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)上清液中獲得抗體，或者將雜交瘤細(xì)胞注入適宜的哺乳動物并從動物腹水中獲取抗體。前一種方法適于獲得高純度的抗體，后一種方法適于大量獲取抗體。通過上述方法獲得的抗體，可以用常規(guī)方法純化，例如鹽析、凝膠過濾、親和層析等方法。
[0017]在本發(fā)明的第四方面，提供了一種洪湖碘泡蟲免疫學(xué)種類的鑒定方法，所述免疫學(xué)種類的鑒定方法采用上述的抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體。
[0018]較佳地，所述免疫學(xué)種類鑒定方法是間接免疫熒光法(IFAT)。
[0019]本發(fā)明建立的IFAT檢測試劑盒，含有本發(fā)明的單克隆抗體和用于與單克隆抗體結(jié)合的標(biāo)記物(標(biāo)記物可以是放射性同位素、熒光化合物、生物素和酶等物質(zhì))，以及用于檢測的其他試劑和緩沖液。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容，利用上述單克隆抗體，制備相應(yīng)的檢測產(chǎn)品，是顯而易見的。
[0020]本發(fā)明的有益效果在于:
[0021]I)該單克隆抗體(mAblC7)可特異地與洪湖碘泡蟲反應(yīng)，而不與研究的其它粘孢子蟲發(fā)生反應(yīng)，從而可以進(jìn)行洪湖碘泡蟲的種類鑒定，彌補(bǔ)目前尚無快速、準(zhǔn)確、便捷洪湖碘泡蟲種類鑒定方法之不足，特異性高，反應(yīng)靈敏。
[0022]2)該單克隆抗體(mAblC7)僅特異地與洪湖碘泡蟲極絲蛋白反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)發(fā)生反應(yīng)。
[0023]3)本發(fā)明的免疫試劑盒可用于洪湖碘泡蟲的種類鑒定，彌補(bǔ)目前尚無良好的洪湖碘泡蟲鑒定方法之不足，特異性高，反應(yīng)靈敏，成本低，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1:抗原(洪湖碘泡蟲可溶性蛋白)的SDS-PAGE分析。M:蛋白Marker，M.honghuensis:洪湖碘泡蟲可溶性蛋白。
[0025]圖2:抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體1C7的免疫印跡分析(Western-blot)。M:蛋白Marker，mAblC7:單克隆抗體1C7識別的蛋白條帶(Mr 180000和130000處)。
[0026]圖3:抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體1C7的間接免疫熒光檢測(IFAT)(標(biāo)尺為10um)。a:洪湖碘泡蟲光學(xué)顯微鏡拍照圖；b:洪湖碘泡蟲熒光顯微鏡拍照圖。
【具體實施方式】
[0027]為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，特舉以下實施例結(jié)合附圖詳細(xì)說明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，實施例中所用到的各種常用化學(xué)試劑，均為市售產(chǎn)品。
[0028]實施例1洪湖碘泡蟲抗原的制備
[0029]1.1孢子的分離純化
[0030]用剪刀將宿主魚體鰓蓋剪開，彎頭手術(shù)鑷從咽部剝離完整孢囊；用磷酸緩沖液(PBS，pH7.0)洗滌3次，300rpm，離心5min ;孢囊重懸于少量PBS中，玻璃勻漿器手工勻漿直至漿液較均勻，1000rpm,離心20min，收集沉淀和上清；沉淀用適量PBS重懸，用蔗糖密度梯度(1:1, 1: 2,1: 3,1: 4,1: 5)離心，1000rpm, 15min分離出成熟孢子(位于1:1~1:2之間);成熟孢子用PBS洗漆兩次,3000rpm,離心10min,去上清,沉淀物即為成熟孢子。
[0031]L 2可溶性蛋白的制備
[0032]分離純化后的孢子經(jīng)PBS (pH7.0)洗滌后，用液氮進(jìn)行研磨，然后離心取上清即為孢子可溶性抗原。具體步驟如下:純化后的成熟孢子用PBS洗滌兩次，3000rpm,離心10min，去上清；沉淀用少量PBS混勻后倒入研缽，倒入液氮研磨促使殼瓣打開釋放內(nèi)含物；加少量PBS溶解，12000rpm離心，取上清；用BCA法測定抗原濃度。
[0033]1.3SDS-PAGE對洪湖碘泡蟲可溶性蛋白分析
[0034]孢子可溶蛋白加入凝膠上樣緩沖液，沸水中水浴lOmin，冰上冷卻；臨用前12000rpm, 4°C，離心5min取上清，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)(分離膠12%、濃縮膠4% )鑒定洪湖碘泡蟲可溶性蛋白(圖1)。
[0035]實施例2單克隆抗體的制備
[0036]2.1動物免疫
[0037]2.1.1動物:雌性，6~8周齡BALB/c小鼠5只(購自中國科學(xué)院武漢病毒研究所)。
[0038]2.1.2抗原:實施例1中制備的洪湖碘泡蟲可溶性抗原，50 μ g/只/次。[0039]2.1.3免疫途徑及程序:初次免疫:洪湖碘泡蟲可溶性抗原與等體積完全弗氏佐劑充分混勻，形成油包水，于鼠背部皮內(nèi)多點注射。3周后第二次免疫，洪湖碘泡蟲可溶性抗原與不完全弗氏佐劑等體積混勻，背部皮內(nèi)多點注射。之后隔3周免疫一次(腹腔內(nèi)不含佐劑)，并于免疫后第5~7天取尾血20 yL，用ELISA法測抗體效價。待抗體效價達(dá)到要求時，尾靜脈加強(qiáng)免疫(不含佐劑)，于3天后取脾，進(jìn)行細(xì)胞融合。
[0040]2.2細(xì)胞融合
[0041]2.2.1飼養(yǎng)細(xì)胞的制備:BALB/c小鼠拉頸處死，75 %酒精中浸泡消毒5min。剖開腹外皮膚，用5mL無血清1640培養(yǎng)液注入小鼠腹腔，輕輕晃動后抽出腹腔液，離心計數(shù)。用20%小牛血清1640調(diào)整細(xì)胞濃度至0.5~2X105/mL，立即種植于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，0.1mL/孔。
[0042]2.2.2脾細(xì)胞的制備:最后一次加強(qiáng)免疫后第3天，無菌取小鼠的脾臟，置于無血清的1640培養(yǎng)液中，用注射器內(nèi)栓將脾臟攆碎，通過尼龍網(wǎng)過濾，制備細(xì)胞懸液。1000rpm離心5min,棄上清后重懸于5mL無血清1640培養(yǎng)液中，計數(shù)細(xì)胞濃度。
[0043]2.2.3骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備:選用小鼠骨髓瘤株SP2/0，收集對數(shù)生長期的骨髓瘤細(xì)胞，洗滌記數(shù)，調(diào)整濃度為4~5X105/mL，懸浮于無血清1640培養(yǎng)液中備用。
[0044]2.2.4細(xì)胞融合:將脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞以10: I (細(xì)胞數(shù)比)混合，1000rpm離心5min，傾去上清，輕彈沉降下來的細(xì)胞團(tuán)塊，使之完全松散。以ImL移液管吸取0.7mL的50% PEG-4000在Imin內(nèi)邊攪拌邊加入，加完后靜置90s。之后以無血清1640培養(yǎng)液終止融合，開始時須緩慢加入(lmL/min),而后逐漸加快，邊加邊攪，共加入30mL終止液。整個融合過程須在37°C水浴下 進(jìn)行。SOOrpm離心5min，去除上清，繼續(xù)下一步操作。
[0045]2.2.5細(xì)胞培養(yǎng):將離心后的細(xì)胞團(tuán)塊輕輕彈散。待細(xì)胞完全松散后用HAT培養(yǎng)基重懸，加入到已用飼養(yǎng)細(xì)胞鋪好的96孔板中，每孔200 μ L0置于37°C, 5%(體積百分比)CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。一周后，在倒置顯微鏡下觀察克隆生長情況并記錄每孔克隆數(shù)。待細(xì)胞生長至占培養(yǎng)孔底1/3面積時即可吸取培養(yǎng)液上清進(jìn)行ELISA檢測。
[0046]2.3陽性克隆的篩選和亞克隆
[0047]2.3.1ELISA檢測:用包被液將洪湖碘泡蟲可溶性抗原(0.5mg/mL)每孔100 μ L包被酶標(biāo)板，置于4°C過夜；用洗滌液將包被好的酶標(biāo)板洗滌3次，每次3min，然后用I %BSA-PBS封閉，每孔200 μ L，室溫放置2h ;傾去封閉液，同上洗滌，每孔加入100 μ L待檢雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，于37°C孵育Ih ;傾去培養(yǎng)上清，洗滌后每孔加入1: 3000 (工作濃度)稀釋的羊抗鼠IgG-HRP (辣根過氧化物酶)結(jié)合物100μ L，于37°C孵育lh。將多余的酶結(jié)合物棄去，同上洗滌。每孔加入100 μ L的TMB底物反應(yīng)液，室溫顯色10~30min后，每孔加入50 μ L的終止液(2mol/L H2SO4)終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀450nm測吸光值，吸光值大于陰性孔2倍以上者為陽性，選擇陽性細(xì)胞孔進(jìn)行亞克隆。
[0048]2.3.2雜交瘤細(xì)胞的亞克隆(單個細(xì)胞培養(yǎng)):有限稀釋法進(jìn)行克隆化。飼養(yǎng)細(xì)胞的準(zhǔn)備同2.2.1，將ELISA檢測陽性孔中的細(xì)胞從培養(yǎng)板內(nèi)輕輕洗脫計數(shù)。用培養(yǎng)液連續(xù)稀釋細(xì)胞懸液成30個細(xì)胞/mL接種于鋪有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板內(nèi)，0.1mL/孔。培養(yǎng)10天左右，雜交瘤細(xì)胞集落長至孔底1/3面積時，開始測定上清中抗體活性。對有抗體活性的陽性細(xì)胞孔再克隆，共進(jìn)行3次。
[0049]經(jīng)上述重復(fù)進(jìn)行ELISA篩選及亞克隆，最后篩選出I株能穩(wěn)定分泌抗原的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，命名為mAb 1C7，保藏號為CCTCC N0.C2013188。
[0050]2.4單克隆抗體大量制備和初步純化
[0051]2.4.1小鼠腹水的制備及收集:將雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，選取20~22g BALB/c雌性小鼠，腹腔注射雜交瘤細(xì)胞2 X IO7/只，10~14天后待小鼠腹部明顯膨脹后，收集腹水。將收集的腹水3000rpm離心5min，取上清，-20°C儲存。
[0052]2.4.2腹水的初步純化:采用鹽析法,取腹水2mL加入潔凈的離心管中，加2mL生理鹽水混勻；逐滴加入4mL飽和硫酸銨，4°C靜置2h或過夜；5000rpm離心30min,沉淀再用50%飽和硫酸銨洗滌2次；用2mL PBS使沉淀溶解，將此蛋白質(zhì)溶液加入透析袋中，對PBS緩沖液4°C透析過夜，期間換液2~3次。
[0053]實施例3單克隆抗體的鑒定
[0054]3.1抗體亞類[0055]使用鼠單克隆抗體亞類檢測試劑盒(Sigma)測定。將羊抗鼠IgGl, IgG2a, IgG2b,IgG3，IgA和IgM分別用包被液I: 1000稀釋，10(^17孔包被，41:過夜或371:孵育211;用洗滌液PBST洗滌3次，3min/次，每孔加入100 μ L待檢測的單抗細(xì)胞培養(yǎng)上清，37°C孵育Ih;同上洗滌3次，加入I: 5000稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠多價免疫球蛋白(G、A、M)抗體，每孔100yL，37°C孵育Ih ;同上洗滌3次，每孔加入新鮮配置的TMB底物溶液100 μ L，37°C避光孵育20min ;每孔加入50 μ L2M H2SO4終止反應(yīng)。在酶標(biāo)儀上讀取OD450吸光值，以陽性反應(yīng)孔包被的亞類類別為待測上清的抗體類別。鑒定結(jié)果表明，本發(fā)明制備的抗體亞類為IgM。
[0056]3.2ffestern-Blot 檢測
[0057]孢子可溶蛋白加入凝膠上樣緩沖液，沸水中水浴lOmin，冰上冷卻；臨用前12000rpm, 4°C,離心5min取上清，用于Western-blot分析；蛋白樣品經(jīng)12%SDS_PAGE膠(Bio-Rad Min1-Protein電泳系統(tǒng))電泳分離；電泳結(jié)束后按照Mini Trans-Blot電泳轉(zhuǎn)移系統(tǒng)操作指南裝配轉(zhuǎn)膜Sandwich，安裝電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)，以80V電壓冰浴轉(zhuǎn)膜40min，將蛋白轉(zhuǎn)移至孔徑為0.45μπι的PVDF膜上；轉(zhuǎn)膜緩沖液配方:25mM Tris pH8.3，192mM甘氨酸，20%甲醇；麗春紅染色3min，標(biāo)出Marker，其余的膜用TBST溶液(25mM Tris pH7.5，150mMNaCl，0.05%Tween-20)洗膜3次，每次IOmin ；5%脫脂奶粉(溶于TBST中)室溫封閉Ih ；以1:500~1000稀釋比例(根據(jù)抗體效價調(diào)整)將抗血清稀釋于TBST (含1%脫脂奶粉和
0.l%Tween-20)中，室溫孵育Ih ；TBST洗膜3次，每次15min ;以1: 1000稀釋比例加入堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG，室溫孵育Ih ；TBST (TBS溶液中加入0.l%TWeen-20)洗膜3次，每次15min，采用ECL (化學(xué)發(fā)光法)系統(tǒng)曝光存圖。
[0058]結(jié)果如圖2所示，本發(fā)明制備的單抗腹水與洪湖碘泡蟲可溶性抗原在約Mr180000和130000處有特異性反應(yīng)條帶。
[0059]3.3間接免疫熒光(IFAT )檢測
[0060]用0.1%多聚賴氨酸處理玻片lh，PBS洗滌2-3次；將本實驗室采集的常見寄生于異育銀鯽的粘孢子蟲:洪湖碘泡蟲、丑陋圓形碘泡蟲、吳李碘泡蟲、武漢單極蟲、龜殼單極蟲均勻涂在薄片上；用10%甲醇固定，30min，0.lmol/L PBS (ρΗ8.0)洗滌3次，加入本發(fā)明制備的單抗腹水(1C7)，將多克隆抗體(PAb)、陰性小鼠血清、PBS作對照；37°C，50min孵育，PBS洗滌2次；1:50稀釋兔抗鼠IgG-FITC，37°C，40min ；PBS洗滌2~3次，甘油封片，熒光顯微鏡拍照。
[0061]圖3結(jié)果顯示，本發(fā)明制備的單抗腹水與洪湖碘泡蟲極絲特異性結(jié)合，而不能與洪湖碘泡蟲其它結(jié)構(gòu)發(fā)生反應(yīng)。
[0062]表1間接免疫熒光法洪湖碘泡蟲鑒定結(jié)果
[0063]
【權(quán)利要求】
1.一種抗洪湖碘泡蟲極絲蛋白的單克隆抗體，該單克隆抗體是由保藏號為CCTCCN0.C2013188的雜交瘤細(xì)胞株1C7所分泌的。
2.權(quán)利要求1中所述的雜交瘤細(xì)胞株1C7，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號為CCTCC N0.C2013188。
3.權(quán)利要求1所述的單克隆抗體的制備方法，其特征在于:從保藏號為CCTCCN0.C2013188的雜交瘤細(xì)胞株1C7的培養(yǎng)上清液中或從注射所述雜交瘤細(xì)胞后的動物腹水中獲取單克隆抗體。
4.權(quán)利要求1所述的單克隆抗體在制備檢測洪湖碘泡蟲的試劑盒中的應(yīng)用。
5.一種檢測洪湖碘泡蟲的試劑盒，其特征在于:該試劑盒包含權(quán)利要求1所述的單克隆抗體。`
【文檔編號】C12N5/20GK103880954SQ201410015221
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年1月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月14日
【發(fā)明者】顧澤茂, 賈洛, 柳陽, 翟艷花, 袁軍法, 秦建華, 李丹, 郭慶祥 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)