基于dna條形碼的鰻魚物種鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法，更具體涉及一種基于DNA條形碼的日本鰻、美洲鰻和歐洲鰻的物種鑒別方法。該方法通過鰻魚DNA提取，然后利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，擴增出244bp的產(chǎn)物，所述DNA條形碼引物為EEL244-F：CCTGTTCCTCGTGGGGGCTTTT，EEL244-R：ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG，最后按照物種核苷酸序列特征變異位點進行物種鑒別。該方法耗時短，操作簡便，特異性強，可以鑒別經(jīng)過加工的、無法從形態(tài)學上加以識別的蒲燒鰻魚等鰻魚常見加工產(chǎn)品，為維護企業(yè)與消費者利益以及正常的市場秩序提供技術(shù)支撐。
【專利說明】基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法，更具體涉及一種基于DNA條形碼的日本獲(Anguilla、美洲獲(Anguilla rostrata)和歐洲獲(Anguillaanguilla)的物種鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]福建省是鰻魚養(yǎng)殖與加工出口大省，主要產(chǎn)品有三種鰻魚，即日本鰻(Anguilla
、美洲獲(Anguilla riosiraia)、歐洲獲(Anguilla,每年出口額達數(shù)
十億元。由于鰻魚加工如燒烤或制成其他形狀熟食后，無法從形態(tài)上辨別其種類，不同種類的鰻魚價格不同。為了防止以次充好，保護企業(yè)與消費者利益，應企業(yè)與執(zhí)法部門要求，建立鰻魚種類的生物鑒定方法。本發(fā)明是應對外經(jīng)貿(mào)與檢驗檢疫工作的需要，對作為鰻魚出口大省的福建省的對外貿(mào)易具有重要意義。
[0003]DNA條形碼(DNA barcode)是指生物體內(nèi)能夠代表該物種的，標準的、有足夠變異的、易擴增且相對較短的DNA片段。DNA條形碼已經(jīng)成為生態(tài)學研究的重要工具，不僅用于物種鑒定，同時也幫助生物學家進一步了解生態(tài)系統(tǒng)內(nèi)發(fā)生的相互作用。但是目前國內(nèi)外尚無利用DNA條形碼鑒定鰻魚物種的報道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于上述目的，本發(fā)明提供了一種基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法。
[0005]本發(fā)明首先提供了一種日本鰻、美洲鰻和歐洲鰻的DNA條形碼引物，DNA條形碼目的片段的PCR產(chǎn)物堿基數(shù)為244 bp，所述DNA條形碼引物的核苷酸序列為:
EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT ；
EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG。
[0006]本發(fā)明通過對供試的日本鰻、美洲鰻和歐洲鰻的DNA條形碼目的片段的PCR產(chǎn)物堿基序列進行比對分析，確定3種鰻魚各自的特異性DNA條形碼堿基序列，建立鰻魚物種的分子生物學鑒別方法。本發(fā)明的基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法，該方法包括以下步驟:
(1)鰻魚DNA提??；
(2)利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，擴增出244bp的產(chǎn)物，所述DNA條形碼引物為EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT，EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG ；
(3)進行物種鑒別的序列特征比對，其中，是按下表所示的核苷酸序列特征變異位點進行物種鑒別:
【權(quán)利要求】
1.一種DNA條形碼引物，其特征在于:所述DNA條形碼引物的核苷酸序列為:
EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT ；
EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG。
2.一種基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)鰻魚DNA提??； (2)利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，擴增出244bp的產(chǎn)物，所述DNA條形碼引物為EEL 244-F: CCTGTTCC TCGTGGGGGC TTTT，EEL 244-R: ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG ； (3)進行物種鑒別的序列特征比對，其中，是按下表所示的核苷酸序列特征變異位點進行物種鑒別:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的針對日本鰻、美洲鰻和歐洲鰻的物種鑒別方法，其特征在于:步驟(2)所述PCR擴增的條件為:94°C預變性3 min，94°C變性30 s，45°C退火30 s，72°C延伸60 s，5個循環(huán)；94°C變性30 s，51°C退火60 s，72°C延伸60 S，35個循環(huán)；72°C延伸10min ;反應體系為:10 X Taq buffer 2.5 μ L, Taq 酶 1.0 U，模板 DNA 200 ng, MgCl2 3.5mmol/L,dNTPs 300 μ mol/L，上游引物 0.5 μ mol/L，下游引物 0.5 μ mol/L，用 ddH20 將總體積補至25 μ L0
【文檔編號】C12N15/11GK103740855SQ201410045586
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年2月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月8日
【發(fā)明者】陳文炳, 邵碧英, 繆婷玉, 彭娟 申請人:福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心