一種多重pcr同時檢測gstm1、gstt1、gstp1基因多態(tài)性的簡易方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種多重PCR同時檢測GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性的簡易方法，在GSTP1A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個多態(tài)性位點的擴增引物，配成引物混合物后一起擴增，擴增后瓊脂糖凝膠電泳即可對3個多態(tài)性位點進(jìn)行分型。本發(fā)明中的有益效果為：對GSTP1A313G多態(tài)性的分型不需要內(nèi)切酶，分型所需時間更短、成本更低，且同時對GSTM1、GSTT1缺失多態(tài)性進(jìn)行了分型，進(jìn)一步較低了成本，縮短了檢測時間，不需要昂貴的設(shè)備，可以在普通實驗室開展，具有較好的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種多重PCR同時檢測GSTM1、GSTT1、GSTP1基因多態(tài)性的
簡易方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種多重PCR同時檢測GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡易方法。
【背景技術(shù)】
[0002]GSTMl 'GSTTl缺失多態(tài)性和GSTPl A313G (Ilel05Val)多態(tài)性是3個在遺傳學(xué)上研究得比較多的多態(tài)性位點。因為都是谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的功能性多態(tài)性位點，這3個多態(tài)性通常一起被研究。目前，對GSTMl,GSTTl缺失多態(tài)性的檢測通常使用多重PCR的方法，而對GSTPl A313G多態(tài)性的檢測通常使用酶切的方法，該方法需要昂貴的內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物進(jìn)行消化，然后再電泳分型，因此成本較高。有必要建立一種能在普通實驗室開展的能同時對3個多態(tài)性位點同時進(jìn)行檢測的方法。
[0003]四引物擴增抗拒突變體系PCR (tetraprimer amplification refractorymutation system polymerase chain reaction, TP-ARMS-PCR)是在等位基因特異性擴增的基礎(chǔ)上建立的I次PCR反應(yīng)即可對SNP分型的技術(shù)。該技術(shù)用4條引物一次PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳就可以區(qū)分SNP的3種基因型，不需要內(nèi)切酶，是一種可在單管中對SNP進(jìn)行快速測定的高效廉價方法。如果在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入GSTMl、GSTTl缺失多態(tài)性的引物一起擴增，從而可以實現(xiàn)I次PCR反應(yīng)即可同時對3個多態(tài)性位點進(jìn)行分型。因為該方法對A313G多態(tài)性的分型不需要內(nèi)切酶，因此所需時間更短、成本更低，且同 時對6^#7、^777缺失多態(tài)性進(jìn)行了分型，進(jìn)一步較低了成本，縮短了檢測時間，有較好的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種多重PCR同時檢測α7￥7、α777、α7Ρ7基因多態(tài)性的簡易方法，該簡易方法可以對缺失多態(tài)性和A313G多態(tài)性進(jìn)行檢測，從而降低成本，縮短檢測時間。
[0005]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，其特征是:在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個多態(tài)性位點的擴增引物，配成引物混合物后一起擴增，擴增后瓊脂糖凝膠電泳即可對3個多態(tài)性位點進(jìn)行分型。
[0006]本發(fā)明所述3個多態(tài)性位點的擴增引物共計8條，各引物的核苷酸序列及其在反應(yīng)體系中的濃度、擴增產(chǎn)物長度見下表1:
表1 GSTPl A313G多態(tài)性和GSTMl、GSTTI缺失多態(tài)性多重PCR擴增引物
【權(quán)利要求】
1.一種多重PCR同時檢測GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡易方法，其特征是:在GSTPl A313G多態(tài)性TP-ARMS-PCR的基礎(chǔ)上，加入3個多態(tài)性位點的擴增引物，配成引物混合物后一起擴增，擴增后瓊脂糖凝膠電泳即可對3個多態(tài)性位點進(jìn)行分型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種多重PCR同時檢測GSTMl、GSTTl、GSTPl基因多態(tài)性的簡易方法，其特征在于:所述3個多態(tài)性位點的擴增引物共計8條，各引物的核苷酸序列及其在反應(yīng)體系中的濃度、擴增產(chǎn)物長度見下表:
【文檔編號】C12Q1/68GK103849685SQ201410054417
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】朱偉鋒, 鄧燕, 羅達(dá)亞, 范瑞琦, 揭克敏, 萬福生, 易敬林, 劉偉偉 申請人:南昌大學(xué)