小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法和塑料桶培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法和塑料桶培養(yǎng)方式。關(guān)于培養(yǎng)液的配制，傳統(tǒng)做法是現(xiàn)用現(xiàn)配，用一次配一次，用多少配多少，費(fèi)時(shí)、費(fèi)工、費(fèi)力，稱量麻煩，誤差大?，F(xiàn)在我采用濃縮液，配一次用多次，操作簡(jiǎn)單，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，適于規(guī)?；?、工業(yè)化、商品化、專業(yè)化生產(chǎn)，十分方便。而且我對(duì)傳統(tǒng)配方進(jìn)行了優(yōu)化，補(bǔ)充了NaHCO3、九二0植物生長(zhǎng)刺激素、人尿、海泥抽取液、牛糞和羊糞浸出液等，營養(yǎng)更加全面、均衡、豐富。關(guān)于培養(yǎng)方式，我采用家庭用的礦泉水桶培養(yǎng)方式代替?zhèn)鹘y(tǒng)的開放水泥池培養(yǎng)，易于操作、不易污染、易于掌控、靈活多樣、不易劃破、安全可靠，透光性好，成本低，生長(zhǎng)快，產(chǎn)量提高150％。
【專利說明】小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法和塑料桶培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于海洋微藻養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法和塑料桶培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]小新月菱形藻屬硅藻門，羽紋綱，雙菱形目，菱形藻科，菱形藻屬，細(xì)胞中央膨大成紡錘形，兩端漸尖，似月牙形。細(xì)胞長(zhǎng)12-23 μ m，寬2-3 μ m，中央有一細(xì)胞核。色素體黃褐色，兩片，位于核兩側(cè)。分布于世界海水、半咸和淡水水域，我國各海區(qū)均有出現(xiàn)。最適鹽度范圍為25-32%，適溫15-20°C，水溫超過28°C，停止生長(zhǎng)；最適光照強(qiáng)度3000-8000Ix，培養(yǎng)時(shí)忌直射陽光；適宜PH7-10，最適7.5-8.5。小新月菱形藻俗稱“小硅藻”，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物及多種不飽和脂肪酸，是水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物大菱鲆、中國對(duì)蝦、櫛孔扇貝、鮑魚、馬糞海膽和海參等的良好餌料，能促進(jìn)幼體和親體生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)幼苗抵抗力，有重要培養(yǎng)價(jià)值。
[0003]海水中無機(jī)碳的存在形式以HC03_為主(占90% )，而游離的CO2不足I %。過去人們一直認(rèn)為，水體中游離CO2是藻類利用外源無機(jī)碳的唯一形式。張學(xué)成的工作表明，螺旋藻培養(yǎng)基中添加50-100mmol/LNaHC03，不僅可以滿足螺旋藻生長(zhǎng)的需要，而且有助于保持藻體生長(zhǎng)的PH值。林惠民認(rèn)為，NaHCO3可作為藻類生長(zhǎng)的碳源。我的研究表明小新月菱形硅藻可以利用HC03_作為碳源。
[0004]溫度、光照、鹽度、營養(yǎng)鹽等對(duì)小新月菱形硅藻生長(zhǎng)都有重要影響。氮在細(xì)胞代謝中是形成氨基酸、嘌呤、嘧啶、葉啉、氨基糖和胺化合物等的基本元素，因而氮是小新月菱形硅藻生長(zhǎng)最重要的營養(yǎng)元素。我的研究顯示NH4NO3用作氮源無論對(duì)細(xì)胞密度的增加、不飽和脂肪酸的合成、蝦青素的積累等方面的效果均優(yōu)于NaNO3和NH4Cl。人尿中95%是水，5%是可溶性無機(jī)鹽，其中約2%是尿素。在藻細(xì)胞的氮代謝中，氮必須以NH4+的形式與細(xì)胞內(nèi)的碳水化合物衍生的酮酸作用生成氨基酸，再合成蛋白質(zhì)。已經(jīng)證實(shí)許多藻含有尿素酶，在它的催化作用下，尿素分解出氨被微藻利`用，酶功能的差異是造成各種微藻利用尿素能力差異的主要原因。孫凌毅指出微藻對(duì)銨鹽和尿素的利用強(qiáng)于硝酸鹽。張貴杰等研究指出培養(yǎng)牟氏角毛藻以尿素效果最好，硝酸鈉次之，氯化銨最差。張青田等認(rèn)為尿素為氮源培養(yǎng)隱藻效果強(qiáng)于氯化銨。本人研究證實(shí)每升培養(yǎng)液中添加2-5mL的尿液對(duì)小新月菱形硅藻生長(zhǎng)有較好促進(jìn)作用。
[0005]目前，小新月菱形硅藻規(guī)?；囵B(yǎng)存在的主要問題是藻細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢、倍增時(shí)間長(zhǎng)、易污染。合適的培養(yǎng)基是實(shí)現(xiàn)小新月菱形硅藻高密度培養(yǎng)的基礎(chǔ)。小新月菱形硅藻的培養(yǎng)傳統(tǒng)上使用m培養(yǎng)基，其中不含碳酸氫鈉和九二 ο植物生長(zhǎng)刺激素，但我的實(shí)驗(yàn)表明，小新月菱形硅藻除了能利用空氣中游離的CO2，還能有效地利用培養(yǎng)液中的hco3_作為碳源。我的實(shí)驗(yàn)和研究表明，添加適量的NaHCO3、九二 O植物生長(zhǎng)刺激素、海泥抽取液、牛糞浸出液、羊糞浸出液、土壤抽出液及復(fù)合維生素等不僅縮短了小新月菱形硅藻倍增時(shí)間，而且延長(zhǎng)了生長(zhǎng)時(shí)間，大大提高生長(zhǎng)速度，小新月菱形硅藻產(chǎn)量能提高150%。
[0006]關(guān)于小新月菱形硅藻培養(yǎng)液的配制，傳統(tǒng)做法是現(xiàn)用現(xiàn)配，用一次配一次，用多少配多少，費(fèi)時(shí)、費(fèi)工、費(fèi)力，操作麻煩，而且每一種營養(yǎng)鹽用量極少，稱量麻煩，誤差大，很不方便?，F(xiàn)在我采用濃縮液，配一次用多次，用時(shí)只需要在消毒海水中按濃縮培養(yǎng)液體積:普通消毒海水體積=1: 100比例加入濃縮液，攪拌均勻即可接種，操作簡(jiǎn)單，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，適于規(guī)模化、工業(yè)化、商品化、專業(yè)化和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，十分方便。而且我對(duì)傳統(tǒng)配方進(jìn)行了優(yōu)化，補(bǔ)充了 NaHCO3、九二 O植物生長(zhǎng)刺激素、f/2維生素、f/2微量元素、人尿、海泥抽取液等，營養(yǎng)更加全面、均衡、豐富，非常有利于小新月菱形硅藻的生長(zhǎng)。關(guān)于小新月菱形硅藻培養(yǎng)方式，傳統(tǒng)的開放水泥池培養(yǎng)，培養(yǎng)規(guī)模大，總產(chǎn)量高，但缺點(diǎn)也十分明顯:易污染，占地面積大，受天氣影響大，不易掌控，一次性投資大，單產(chǎn)低，見效慢，經(jīng)濟(jì)效益低，不適用于擴(kuò)種階段。我采用家庭用的礦泉水桶培養(yǎng)方法培養(yǎng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的開放水泥池培養(yǎng)，易于操作，不易污染，易于掌控，規(guī)?？纱罂尚。`活多樣，塑料桶不易劃破，安全可靠，透光性好，可重復(fù)使用，一年四季均可生產(chǎn)，成本低，生長(zhǎng)快，尤其適用于擴(kuò)種階段，產(chǎn)量提高150%。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液配方:NH4N035 克，CaCO3L 4 克，K2HP044 克，Na2SiO3.9Η200.5 克，MgSO4 *7H2025g, NaHC034 克，九二 O植物生長(zhǎng)刺激素400國際單位,f/2維生素溶液100毫升,f/2微量元素溶液100毫升,人尿100毫升，海泥抽取液150毫升，牛糞浸出液25毫升，羊糞浸出液15毫升，土壤抽出液30毫升，消毒海水1000毫升。其中f/2微量元素溶液配方=ZnSO4.4H2023毫克，MnCl2.4H20178毫克，CuSO4.5H2010 毫克，F(xiàn)eC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35克，純水1000毫升；f/2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5毫克，純水1000毫升。
[0008]小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法，方法如下:取NH4N035克，CaCO3L 4克，K2HP044 克，Na2SiO3.9H200.5 克，MgSO4.7H2025g, NaHC034 克，f/2 微量元素溶液 100 毫升，人尿100毫升，海泥抽取液150毫升，牛糞浸出液25毫升，羊糞浸出液15毫升，土壤抽出液30毫升，按順序加入到裝有1000毫升海水的三角燒瓶中，煮沸10分鐘，冷卻；然后加入九二 O植物生長(zhǎng)刺激素400國際單位，f/2維生素溶液100毫升，充分搖勻，保鮮膜封口，置于4°C冰箱保存，備用。
[0009]一種小新月菱形硅藻塑料桶培養(yǎng)方式，其特征在于包括如下步驟:
[0010]培養(yǎng)容器為家庭用的礦泉水桶，容積約20升，無色透明或帶淺天藍(lán)色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，用漏斗裝入普通消毒海水11.5升(消毒海水制備方法:每I立方米海水中加入漂白液200-300毫升，使海水中有效氯含量達(dá)到10-20mg/L，空氣壓縮機(jī)充氣8-12小時(shí)后，用硫代硫酸鈉中和余氯。硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止)，后加入濃縮培養(yǎng)液115毫升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的小新月菱形硅藻藻液進(jìn)行接種，接種密度10X 104-15X 104cell/mL，瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，插入較深，離瓶底約6厘米，用以充氣；另一根較短，約15厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣。兩根玻璃管同樣粗細(xì)，直徑6毫米。最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定。長(zhǎng)的玻璃管上端露出瓶口 7-10厘米，用乳膠管或塑膠料管與空氣 壓縮機(jī)或氣泵相連，充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可。室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，最佳溫度27±2°C，日光燈照射，光照強(qiáng)度10000-120001x，光/暗周期為16L/8D，即光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)。培養(yǎng)至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入2升新鮮培養(yǎng)基，膠帶重新封口，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，密度增加至400X 104-500X 104Cell/mL，即可停止培養(yǎng)，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)。
[0011]所述中藥消毒液:由以下重量比的物質(zhì)組成:黃芩7~10份、黃秋葵粉3~5份、魚腥草3~5份、大黃5~10份、甘草5~10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3~5倍體積的純凈水，煮沸后持續(xù)煮30~50分鐘，后過濾，沉淀I~2小時(shí)，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得。
[0012]有益效果:關(guān)于小新月菱形硅藻培養(yǎng)液的配制，傳統(tǒng)做法是現(xiàn)用現(xiàn)配，用一次配一次，用多少配多少，費(fèi)時(shí)、費(fèi)工、費(fèi)力，操作麻煩，而且由于每一種營養(yǎng)鹽用量極少，稱量麻煩，誤差大，很不方便。現(xiàn)在我采用濃縮液，配一次可多次使用，用時(shí)只需要在消毒后的海水中按濃縮培養(yǎng)液體積:普通消毒海水體積=1: 100比例加入濃縮液，攪拌均勻即可接種，操作方便，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，便于規(guī)?；?、工業(yè)化、商品化、專業(yè)化和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，十分方便。而且我對(duì)傳統(tǒng)配方進(jìn)行了優(yōu)化，補(bǔ)充了 NaHCO3、九二 O植物生長(zhǎng)刺激素、f/2維生素、f/2微量元素、人尿、海泥抽取液、牛糞浸出液，羊糞浸出液、土壤抽出液等，營養(yǎng)更加全面、均衡、豐富，非常有利于小新月菱形硅藻生長(zhǎng)。關(guān)于小新月菱形硅藻培養(yǎng)方式，傳統(tǒng)的開放水泥池培養(yǎng)，培養(yǎng)規(guī)模大，總產(chǎn)量高，但缺點(diǎn)也十分明顯:易污染，占地面積大，受天氣影響大，不易掌控，一次性投資大，單產(chǎn)低，見效慢，經(jīng)濟(jì)效益低，不適用于擴(kuò)種階段。我采用家庭用的礦泉水桶培養(yǎng)方法培養(yǎng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的開放水泥池培養(yǎng)，易于操作，不易污染，易于掌控，規(guī)?？纱罂尚?，靈活多樣，塑料桶不易劃破，安全可靠，透光性好，可重復(fù)使用，一年四季均可生產(chǎn)，成本低，生長(zhǎng)快，尤其適用于擴(kuò)種階段，產(chǎn)量能提高150%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖為小新月菱形硅 藻塑料桶培養(yǎng)方式圖。其中附圖標(biāo)記為:1礦泉水桶；2充氣管；3排氣管。
【具體實(shí)施方式】
[0014]濃縮培養(yǎng)液制備方法
[0015]I)取 NH4N035 克，CaCO3L 4 克，K2HP044 克，Na2SiO3.9Η200.5 克，MgSO4.7H2025g,NaHC034克，f/2微量兀素溶液100毫升，人尿100毫升，海泥抽取液150毫升，牛糞浸出液10毫升，羊糞浸出液15毫升，按順序加入到1000毫升海水的三角燒瓶中，煮沸10分鐘，冷卻；然后加入九二 O植物生長(zhǎng)刺激素400國際單位，f/2維生素溶液100毫升，充分搖勻，保鮮膜封口，置于4冰箱保存?zhèn)溆?。注意，九?O植物生長(zhǎng)刺激素和f/2維生素溶液不可一起煮沸消毒，因二者為生物活性物質(zhì)，遇高溫易分解變性；
[0016]2)因濃縮培養(yǎng)液濃度很高，使用時(shí)按濃縮培養(yǎng)液體積:普通消毒海水體積=1: 100稀釋后使用。即每1000毫升消毒海水中，加入濃縮液10毫升，攪拌均勻后即可接種；
[0017]3)九二 O植物生長(zhǎng)刺激素為白色結(jié)晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小時(shí)以上)，再按所需濃度兌水稀釋；
[0018]4)海泥浸出液制備方法:取海灘上沙質(zhì)較少、有機(jī)質(zhì)較多而又不過分於黑的上層軟泥，清除其中的小樹枝和小石塊等雜物，以容量計(jì)算一份泥加兩份水，充分?jǐn)嚢杈鶆?，靜置3-4分鐘，待粗砂、小石下沉后，把上層泥漿倒入鋁鍋中，棄去底部粗砂、小石等雜物，按每1000毫升泥漿加入I克的量加入NaOH，煮沸20-30分鐘，煮時(shí)需不斷攪拌，煮后靜置24小時(shí)，吸取上清液，裝入棕色試劑瓶，密封，置于4°C冰箱，備用；
[0019]5)因檸檬酸鐵(FeC6H5O7.5H20)較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C，并不斷攪拌至全部融化；
[0020]6)人尿制備方法:取人尿1000毫升，燒瓶煮沸15分鐘后，冷卻24小時(shí)，裝入白色
透明磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱保存，備用；
[0021]7)羊糞浸出液制備方法:取新鮮羊糞10公斤，加入麩皮I公斤，玉米面0.5公斤，自來水I升，充分?jǐn)嚢?，裝入塑料袋發(fā)酵10天，后取2公斤放入盆中，加入6升蒸餾水，充分?jǐn)嚢?5分鐘，靜置，36小時(shí)后500目篩絹過濾，取濾液加熱煮沸30分鐘，以殺死其中的微生物，冷卻，靜置72小時(shí)，取上清液，即為羊糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰禮，備用;
[0022]8)牛糞浸出液制備方法:取牛糞50公斤，加入麩皮3公斤，玉米面I公斤，自來水4升，充分?jǐn)嚢?，堆成圓錐狀，自然發(fā)酵15天，后攤成薄層，陽光下暴曬3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸餾水，充分?jǐn)噭颍o置，48小時(shí)后400目篩絹過濾，取濾液加熱，煮沸45分鐘，殺死其中的細(xì)菌、霉菌、病毒等，冷卻，沉淀48小時(shí)，取上清液，即得牛糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱保存，備用；
[0023]9) 土壤抽出液制備方法:取土壤I公斤，加蒸餾水1000毫升，再加入Na0H2_3克，煮沸120分鐘，冷卻后過濾，將清液置`于暗處靜置48小時(shí)，取上清液裝入棕色試劑瓶，密封，置于4°C冰箱，備用；
[0024]10)所有藥品純度均需化學(xué)純級(jí)別；濃縮液平時(shí)置于4°C冰箱保存，使用前需充分搖勻；如無冰箱，濃縮液最好背光、通風(fēng)、陰暗保存，應(yīng)避免直射光特別是強(qiáng)烈陽光直射；該濃縮液產(chǎn)品在_5°C至5°C且黑暗、通風(fēng)條件下，保質(zhì)期為24個(gè)月；
[0025]11)此濃縮培養(yǎng)液對(duì)小新月菱形硅藻擴(kuò)種和大規(guī)模培養(yǎng)等各階段都適用。
[0026]小新月菱形硅藻塑料桶培養(yǎng)方式，參見附圖:
[0027]培養(yǎng)容器為家庭用的礦泉水桶，容積約20升，無色透明或帶淺天藍(lán)色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，用漏斗裝入普通消毒海水11.5升(消毒海水制備方法:每I立方米海水中加入漂白液200-300毫升，使海水中有效氯含量達(dá)到10-20mg/L，空氣壓縮機(jī)充氣8_12小時(shí)后，用硫代硫酸鈉中和余氯。硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止)，后加入濃縮培養(yǎng)液115毫升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的藻液進(jìn)行接種，接種密度10 X 104-15 X 104cell/mL,瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，插入較深，離瓶底約6厘米，用以充氣；另一根較短，約15厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣。兩根玻璃管同樣粗細(xì)，直徑6毫米。最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定。長(zhǎng)的玻璃管上端露出瓶口 7-10厘米，用乳膠管或塑膠料管與空氣壓縮機(jī)或氣泵相連，充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可。室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，最佳溫度27±2°C，日光燈照射，光照強(qiáng)度10000-120001x，光/暗周期為16L/8D，即光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)。培養(yǎng)至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入2升新鮮培養(yǎng)基，膠帶重新封口，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，密度增加至400 X 104-500 X 104cell/mL,即可停止培養(yǎng)，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)。
[0028]所述中藥消毒液:由以下重量比的物質(zhì)組成:黃芩7~10份、黃秋葵粉3~5份、魚腥草3~5份、大黃5~10份、甘草5~10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3~5倍體積的純凈水，煮沸后持續(xù)煮30~50分鐘，后過濾，沉淀I~2小時(shí)，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得。
[0029]最后應(yīng)說明的是:以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍 。
【權(quán)利要求】
1.一種小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液，其特征在于配方如下:NH4N035克，CaCO3L 4克，K2HP044 克，Na2SiO3.9H200.5 克，MgSO4.7H2025g，NaHC034 克，九二 O 植物生長(zhǎng)刺激素 400 國際單位，f/2維生素溶液100毫升，f/2微量兀素溶液100毫升，人尿100毫升，海泥抽取液150毫升，牛糞浸出液25毫升，羊糞浸出液15毫升，土壤抽出液30毫升，消毒海水1000毫升；其中f/2微量元素溶液配方=ZnSO4.4H2023毫克，MnCl2.4H20178毫克，CuSO4.5H2010毫克，F(xiàn)eC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35 克，純水1000毫升；f/2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5暈克，純水1000毫升。
2.如權(quán)利要求1所述的小新月菱形硅藻濃縮培養(yǎng)液制備方法，其特征在于步驟如下:取 NH4N035 克，CaCO3L 4 克，K2HP044 克，Na2SiO3.9H200.5 克，MgSO4.7H2025g, NaHC034 克，f/2微量元素溶液100毫升，人尿100毫升，海泥抽取液150毫升，牛糞浸出液25毫升，羊糞浸出液15毫升，土壤抽出液30毫升，按順序加入到裝有1000毫升海水的三角燒瓶中，煮沸10分鐘，冷卻；然后加入九二 O植物生長(zhǎng)刺激素400國際單位，f/2維生素溶液100毫升，充分搖勻，保鮮膜封口，置于4°C冰箱保存，備用即可。
3.一種小新月菱形硅藻塑料桶培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟: 培養(yǎng)容器為家庭用的礦泉水桶，容積約20升，無色透明或帶淺天藍(lán)色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤(rùn)洗3遍，用漏斗裝入普通消毒海水11.5升，所述消毒海水制備方法:每I立方米海水中加入漂白液200-300毫升，使海水中有效氯含量達(dá)到10-20mg/L，空氣壓縮機(jī)充氣8_12小時(shí)后，用硫代硫酸鈉中和余氯；硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止； 然后加入濃縮培養(yǎng)液115毫升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的小新月菱形硅藻藻液進(jìn)行接種 ，接種密度10X 104-15X 104Cell/mL，瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長(zhǎng)，插入較深，離瓶底約6厘米，用以充氣；另一根較短，約15厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細(xì)，直徑6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定；長(zhǎng)的玻璃管上端露出瓶口 7-10厘米，用乳膠管或塑膠料管與空氣壓縮機(jī)或氣泵相連，充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室內(nèi)培養(yǎng)，空調(diào)控溫，最佳溫度27±2°C，日光燈照射，光照強(qiáng)度10000-120001x，光/暗周期為16L/8D，即光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)；培養(yǎng)至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入2升新鮮培養(yǎng)基，膠帶重新封口，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，密度增加至400 X 104-500 X IO4Cell/mL，即可停止培養(yǎng)，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)。 所述中藥消毒液:由以下重量比的物質(zhì)組成:黃芩7~10份、黃秋葵粉3~5份、魚腥草3~5份、大黃5~10份、甘草5~10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3~5倍體積的純凈水，煮沸后持續(xù)煮30~50分鐘，后過濾，沉淀I~2小時(shí)，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得。
【文檔編號(hào)】C12N1/12GK103834568SQ201410073491
【公開日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2014年3月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月3日
【發(fā)明者】王培磊 申請(qǐng)人:臨沂大學(xué)