一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法及裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種能獲取癌癥患者外周血中循環(huán)腫瘤微栓的方法及裝置。該方法采用以下步驟：a.采集外周血；b.將外周血經(jīng)過濾器過濾；所述過濾膜上均勻布滿直徑為10-25微米的微孔；c．過濾完成后，進(jìn)行染色，沖洗，在顯微鏡下觀察有無循環(huán)腫瘤微栓。本發(fā)明的有益效果是：分離技術(shù)簡(jiǎn)單，且不改變其形態(tài)學(xué)及免疫學(xué)特征，通用性強(qiáng)；本方法設(shè)備、技術(shù)要求不高，易于掌握，價(jià)格便宜。
【專利說明】一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法及裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種獲取腫瘤微栓的方法及裝置，尤其是能獲取癌癥患者外周血中循環(huán)腫瘤微栓的方法及裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating tumor cell, CTC)是從實(shí)體腫瘤脫落而進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞，它存在于多種惡性腫瘤中，對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤微轉(zhuǎn)移、評(píng)估預(yù)后以及選擇合適的個(gè)體化治療具有重要的臨床意義。最近研究證實(shí)，由若干個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞聚集而形成的循環(huán)腫瘤微栓(Circulating tumor microemboli, CTM),較循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有更高的侵襲力，更能反映腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移。而目前包括CellSearch系統(tǒng)、免疫磁性細(xì)胞分選儀(MACS)系統(tǒng)、AdnaTest癌細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)、萊爾系統(tǒng)等在內(nèi)的大多數(shù)循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)無法檢測(cè)循環(huán)腫瘤微栓(CTM)，是因?yàn)檫@些檢測(cè)技術(shù)在樣本處理過程中破壞或改變了循環(huán)腫瘤微栓(CTM)的形態(tài)學(xué)或免疫學(xué)特征。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服循環(huán)腫瘤微栓(CTM)被破壞的不足，本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)易方法及裝置，能夠分離獲取外周血中存在的循環(huán)腫瘤微栓(CTM)，并通過MEG染色證實(shí)其形態(tài)學(xué)未受破壞。
[0004]本發(fā)明是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明公開了一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，其特征在于采用以下步驟:
a.采集獲取癌癥患者外周血,盛于血樣容器中；
b.血樣容器的下方連接一帶有過濾膜的過濾器，將外周血經(jīng)過濾器過濾；所述過濾膜上均勻布滿直徑為10-25微米的微孔；
c.過濾完成后，進(jìn)行瑞氏液染色，PBS緩沖液沖洗干凈，取下濾膜，在顯微鏡下觀察有無循環(huán)腫瘤微栓。
[0005]上述本發(fā)明獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，步驟b中，所述微孔直徑優(yōu)選為13-20微米；更優(yōu)選為15-18微米。
[0006]上述本發(fā)明獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，所述的濾膜為最好為疏水濾膜，所述血樣容器的體積為50-100毫升。
[0007]本發(fā)明還公開了一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的裝置，包括有用于盛血的血樣容器，血樣容器的下方連接一帶有過濾膜的過濾器，所述過濾膜上均勻布滿直徑為10-25微米的濾孔。
[0008]上述本發(fā)明的獲取循環(huán)腫瘤微栓的裝置，所述過濾膜微孔直徑優(yōu)選為13-20微米；更優(yōu)選為15-18微米。
本發(fā)明通過分離獲取癌癥患者外周血中的CTM ;采用瑞氏光學(xué)染色證實(shí)CTM的存在。CTM由三個(gè)以上的腫瘤細(xì) 胞聚集形成，細(xì)胞體積較大，直徑多在20微米以上，細(xì)胞核質(zhì)比大，而血細(xì)胞(包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞)直徑一般小于10微米，對(duì)于循環(huán)腫瘤細(xì)胞，其直徑一般為10-20微米，由于具有變形的特性，循環(huán)腫瘤細(xì)胞也能夠通過本發(fā)明的過濾膜。因此當(dāng)含有循環(huán)腫瘤微栓的外周血經(jīng)本發(fā)明的方法及裝置過濾后，循環(huán)腫瘤微栓會(huì)被截留在濾膜上，血細(xì)胞和循環(huán)腫瘤細(xì)胞能夠被濾過。
本發(fā)明的有益效果是:可以分離獲取癌癥患者外周血中的循環(huán)腫瘤微栓，且不改變其形態(tài)學(xué)及免疫學(xué)特征，便于后續(xù)的檢測(cè)和科學(xué)研究；本技術(shù)方法不依靠腫瘤特異性抗原或分子，故所有腫瘤均通用；本方法設(shè)備、技術(shù)要求不高，易于掌握，價(jià)格便宜。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明。
[0010]圖1是本發(fā)明的總體結(jié)構(gòu)示意圖。
[0011]圖2是圖1中濾器3的剖視分解示意圖。
[0012]圖3是分離出的循環(huán)腫瘤微栓形態(tài)示意圖。
[0013]圖中1.鐵架臺(tái)2.血樣容器3.濾器4.輸液器5.廢液缸6.濾器上口 7.濾膜8.濾孔9.載濾膜平臺(tái)10.濾器下口。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1:
本發(fā)明的過濾裝置如圖1-2所示，包括有鐵架臺(tái)1，鐵架臺(tái)I的上方固定有血樣容器2，血樣容器2的下方連接有濾器3，濾器3內(nèi)固定有濾膜7，濾膜7上均勻布滿直徑為13微米的濾孔8。濾器3的下方分別有輸液器4和廢`液缸5。
[0015]濾器3的具體結(jié)構(gòu)如圖2，包括有濾器上口 6，濾膜7，載濾膜平臺(tái)9，濾器下口 10。
[0016]獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，具體采用以下步驟:分離獲取癌癥患者外周血5毫升，將外周血經(jīng)過濾器過濾，過濾完成后，從過濾裝置中取下濾器，打開并移走濾器上口，將瑞氏染色液加入到濾器中，A、B染液各染色2min，PBS緩沖液沖洗干凈，用眼科鑷子取下濾膜，放置在載玻片上，直接在顯微鏡下觀察CTM形態(tài)特征，具體如圖3所示，從圖中可以看出，分離出長(zhǎng)約40微米、寬約12微米的循環(huán)腫瘤微栓。因血樣是依靠重力自然濾過，所以分離獲得的循環(huán)腫瘤微栓形態(tài)及免疫特征均不受破壞。
實(shí)施例2:
采用均勻布滿直徑為16微米的濾孔的濾膜，進(jìn)行過濾外周血，分離出長(zhǎng)約35微米、寬約20微米的循環(huán)腫瘤微栓。
[0017]其它條件與實(shí)施例1基本相同。
[0018]實(shí)施例3:
采用均勻布滿直徑為22微米的濾孔的濾膜，進(jìn)行過濾外周血，分離出長(zhǎng)約55微米、寬約25微米的循環(huán)腫瘤微栓。
[0019]其它條件與實(shí)施例1基本相同。
【權(quán)利要求】
1.一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，其特征在于采用以下步驟: a.采集癌癥患者外周血，盛于血樣容器中； b.血樣容器的下方連接一帶有過濾膜的過濾器，將外周血經(jīng)過濾器過濾；所述過濾膜上均勻布滿直徑為10-25微米的濾孔； c.過濾完成后，進(jìn)行瑞氏液染色，PBS緩沖液沖洗干凈，取下濾膜，在顯微鏡下觀察有無循環(huán)腫瘤微栓。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，其特征在于:步驟b中，所述濾孔直徑為13-20微米。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，其特征在于:步驟b中，所述濾孔直徑為15-18微米。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的獲取循環(huán)腫瘤微栓的方法，其特征在于:所述的濾膜為疏水濾膜，所述血樣容器的體積為50-100毫升。
5.一種獲取循環(huán)腫瘤微栓的裝置，其特征在于:包括有用于盛血的血樣容器，血樣容器的下方連接一帶有過濾膜的過濾器，所述過濾膜上均勻布滿直徑為10-25微米的濾孔。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的獲取循環(huán)腫瘤微栓的裝置，其特征在于:所述過濾膜的孔徑為13-20微米。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的獲取循環(huán)腫瘤微栓的裝置，其特征在于:所述過濾膜的孔徑為15-18微米。`
【文檔編號(hào)】C12N5/09GK103820390SQ201410075962
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月4日
【發(fā)明者】李勝, 王振丹, 高杰, 李龐, 崔凱, 王煥昇, 鄒本奎 申請(qǐng)人:李勝, 王振丹