利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法；包括如下步驟：制備特定形狀的硅膠吸附材料，滅菌、備用；在細胞培養(yǎng)過程中使硅膠吸附材料和植物細胞培養(yǎng)物充分接觸，硅膠吸附材料吸附醌類物質(zhì)后轉(zhuǎn)變?yōu)榧t褐色；當(dāng)吸附達到飽和或者培養(yǎng)結(jié)束后，取出硅膠吸附材料。本發(fā)明選用硅膠作為細胞褐化相關(guān)醌類物質(zhì)的吸附劑，既能避免吸附培養(yǎng)液中的細胞營養(yǎng)成分，又降低了細胞微環(huán)境中醌類物質(zhì)的含量，避免植物(紅豆杉)細胞褐化死亡，有利于提高植物(紅豆杉)細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性和細胞活性；由于褐化往往導(dǎo)致細胞代謝水平下降，因此采用硅膠吸附避免褐化可提高細胞中具有藥物活性的次生代謝物，如紅豆杉細胞中抗癌藥物紫杉醇的產(chǎn)量。
【專利說明】利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物細胞的生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物次生代謝物大多具有細胞生理調(diào)節(jié)能力，是重要的藥物或者藥物前體，比如紅豆杉中的抗癌藥物紫杉醇等。但由于紅豆杉資源稀少，屬于國家保護植物，禁止砍伐天然林木。在天然或者人工種植的紅豆杉植株中，紫杉醇含量非常低，在萬分之一以下，因此分離紅豆杉細胞，在人工條件下進行細胞培養(yǎng)，可精確調(diào)控細胞微環(huán)境，便于脅迫誘導(dǎo)，紫杉醇生產(chǎn)能力遠高于紅豆杉種植，已經(jīng)成為一種高效、環(huán)境友好、可持續(xù)的紫杉醇商業(yè)化生產(chǎn)方式。
[0003]但和其他植物細胞培養(yǎng)一樣，紅豆杉細胞在培養(yǎng)過程中經(jīng)常發(fā)生褐化。褐化是植物細胞在特定環(huán)境下，激活酚類物質(zhì)合成，并進一步將其氧化為具有細胞毒性的紅褐色的醌類物質(zhì)，從而殺滅已感染的自身細胞和外來微生物的一種保護機制。但在細胞培養(yǎng)過程中，輕微的褐化會引起細胞代謝活力、生長速度和紫杉醇等藥用成分生產(chǎn)能力的下降，頻繁而嚴(yán)重的褐化甚至造成細胞壞死，導(dǎo)致紅豆杉細胞培養(yǎng)失敗。紅豆杉細胞酚類物質(zhì)含量高，在人工培養(yǎng)過程中更容易發(fā)生褐化，特別是在低密度接種、培養(yǎng)初期以及培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成發(fā)生調(diào)整改變時。因此如何抑制或者避免褐化，提高細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性和保證其生產(chǎn)的高效性，成為紅豆杉細胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇成功的關(guān)鍵技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對褐化引起的植物細胞(尤其是紅豆杉細胞)培養(yǎng)體系不穩(wěn)定和生產(chǎn)能力下降問題，提供一種利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0006]本發(fā)明涉及一種利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，所述方法包括如下步驟:
[0007]步驟1，制備特定形狀的硅膠吸附材料，滅菌、備用；
[0008]步驟2，在細胞培養(yǎng)過程中使所述硅膠吸附材料和植物細胞培養(yǎng)物充分接觸，硅膠吸附材料吸附醌類物質(zhì)后轉(zhuǎn)變?yōu)榧t褐色；
[0009]步驟3，當(dāng)吸附達到飽和(硅膠吸附材料的紅褐色不再加深)或者培養(yǎng)結(jié)束后，取出硅膠吸附材料。
[0010] 優(yōu)選地，所述植物細胞為紅豆杉細胞。這是由于紅豆杉細胞酚類物質(zhì)含量高，在人工培養(yǎng)過程中更容易發(fā)生褐化。所述硅膠材料吸附醌類物質(zhì)的條件為在整個培養(yǎng)過程中保持硅膠吸附材料和紅豆杉培養(yǎng)體系的充分接觸，使得醌類物質(zhì)從紅豆杉細胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移吸附到硅膠材料上。硅膠材料由于吸附大量的醌類物質(zhì)而變成紅褐色。醌類物質(zhì)從發(fā)酵液到硅膠材料的轉(zhuǎn)移吸附降低了紅豆杉細胞微環(huán)境中醌類物質(zhì)的含量，避免了紅豆杉細胞代謝能力以及細胞活力的下降，保證了紅豆杉細胞的正常生長和生產(chǎn)。
[0011]優(yōu)選地，步驟I中，所述硅膠吸附材料為醫(yī)用或者食品級硅膠。以避免具有細胞毒性雜質(zhì)的混入。
[0012]優(yōu)選地，所述硅膠吸附材料的特定形狀為棒狀、管狀、顆粒狀、多孔海綿狀或細胞培養(yǎng)所用的發(fā)酵罐罐體形狀。特定形狀的選擇依據(jù)在于:提高吸附效率，并方便和培養(yǎng)物分離。
[0013]優(yōu)選地，步驟3中，所述硅膠吸附材料能夠與植物細胞培養(yǎng)物分離。吸附飽和后的硅膠吸附材料可以和植物(紅豆杉)培養(yǎng)主體方便地分離，便于回收。對于顆粒狀硅膠吸附材料，可以通過過濾、離心的方式利用硅膠材料和植物(紅豆杉)細胞間大小或者密度的差別進行分離。對于棒狀、管狀、多孔海綿狀以及直接用硅膠材料制作細胞培養(yǎng)培養(yǎng)所用的發(fā)酵罐罐體形式的硅膠吸附材料，可以采用直接取出硅膠吸附材料或者傾倒出細胞培養(yǎng)物的方式方便分離硅膠吸附材料和植物(紅豆杉)培養(yǎng)物。[0014]優(yōu)選地，所述方法還包括如下步驟:采用醇類溶劑洗脫再生所述步驟3的硅膠吸附材料。洗脫后硅膠吸附材料紅褐化消失，恢復(fù)到原來的顏色，實現(xiàn)硅膠吸附材料再生。
[0015]優(yōu)選地，所述醇類溶劑為乙醇。將吸附飽和后的硅膠吸附材料浸泡在乙醇中半小時以上，所吸附的醌類物質(zhì)脫附溶解到乙醇中，乙醇呈現(xiàn)紅褐色，而硅膠吸附材料恢復(fù)到原來的顏色。如果吸附的醌類物質(zhì)過多，可以采用反復(fù)多次乙醇洗脫的方式再生硅膠材料。
[0016]優(yōu)選地，所述方法可與銀離子誘導(dǎo)法聯(lián)合使用，用以提高紫杉醇產(chǎn)量。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:
[0018](I)本發(fā)明所述方法實施成本低。和添加抗氧化劑相比較，硅膠材料價格更低，且可以再生和重復(fù)利用。
[0019](2)本發(fā)明所用材料更安全。所用硅膠材料為醫(yī)用或者食品級硅膠，不含細胞毒性物質(zhì)，細胞相容性好，既不會影響紅豆杉細胞正常生長和生產(chǎn)，也不會給最終的紫杉醇藥品中帶入有害雜質(zhì)。
[0020](3)本發(fā)明吸附目標(biāo)特異性更高。和采用反相樹脂等填料吸附醌類物質(zhì)的方法相t匕，硅膠填料只對酚類物質(zhì)和醌類物質(zhì)產(chǎn)生明顯吸附，而對培養(yǎng)液中的疏水性營養(yǎng)成分無吸附，對細胞培養(yǎng)體系的影響更小。
[0021](4)本發(fā)明可以更靈活的和其他促進紫杉醇合成的方法同時采用。銀離子誘導(dǎo)可以有效提高紅豆杉細胞生產(chǎn)紫杉醇的能力，但銀離子和維生素C等抗氧化劑同時存在會產(chǎn)生沉淀而喪失誘導(dǎo)效果。而采用硅膠吸附的防褐化技術(shù)可以和銀誘導(dǎo)等提高紫杉醇產(chǎn)量的技術(shù)同時采用，共同提高紅豆杉細胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇的穩(wěn)定性和效率。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將會變得更明顯:
[0023]圖1為實施例1中塊狀硅膠海綿吸附和紅豆杉細胞培養(yǎng)體系充分接觸吸附醌類示意圖；
[0024]圖2為實施例3在反應(yīng)器紅豆杉細胞培養(yǎng)中應(yīng)用棒狀硅膠吸附醌類示意圖；
[0025]圖3為實施例4在氣升反應(yīng)器紅豆杉細胞培養(yǎng)中應(yīng)用構(gòu)成反應(yīng)器壁的硅膠吸附醌類示意圖。
【具體實施方式】
[0026]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進。這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0027]實施例1
[0028]本實施例涉及一種利用海綿狀硅膠吸附醌類物質(zhì)抑制紅豆杉細胞褐化的方法。包括如下步驟:
[0029](I)海綿狀硅膠塊制備:取食品級海綿硅膠板，切割成I厘米見方的小塊，用超純水清洗后，高溫121度 ，20分鐘滅菌后備用。
[0030](2)紅豆杉培養(yǎng)體系建立:取用250毫升三角瓶，內(nèi)置75毫升B5培養(yǎng)基，添加蔗糖25g/L，植物激素萘乙酸到4mg/L，6芐基芐氨基腺嘌呤到0.15mg/L，調(diào)整pH到5.8，用透氣無菌膜封口。滅菌備用。降低到室溫后接種紅豆杉細胞，接種量為12g/L(按照細胞鮮重計算)。實驗共設(shè)20組，其中10瓶為實驗組，在接種后每瓶加入一塊無菌的海綿狀硅膠塊(如圖1所示，圖1為塊狀硅膠海綿吸附和紅豆杉細胞培養(yǎng)體系充分接觸吸附醌類示意圖；其中漂浮在培養(yǎng)物液面上的方塊代表塊狀硅膠吸附材料，刺球代表紅豆杉細胞團)；另外10組不添加硅膠作為對照組。所有實驗組接種后封口，放到25攝氏度的控溫搖床上進行振蕩培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為120RPM。培養(yǎng)周期為10天。
[0031](3)培養(yǎng)過程中觀察發(fā)現(xiàn):對照組中有6瓶發(fā)生明顯褐化，其中三瓶褐化嚴(yán)重，培養(yǎng)物呈現(xiàn)深紅褐色。褐化率為60%。硅膠吸附組只有I瓶輕微褐化，硅膠塊顯淺紅色，褐化率只有10%。
[0032](4)培養(yǎng)結(jié)束后取樣測量細胞密度和紫杉醇含量，發(fā)現(xiàn)對照組細胞密度為20±2.lg/L，而硅膠吸附組細胞密度為28±1.8g/L，細胞平均生長速率達到對照組的2倍。對照組紫杉醇含量為10±0.8mg/L，硅膠吸附組紫杉醇含量為13±0.6mg/L,比對照組提高了 30%左右。
[0033](5)培養(yǎng)結(jié)束后用鑷子取出海綿狀硅膠塊，用100毫升乙醇浸泡過夜，所有硅膠塊都恢復(fù)到無色透明，而乙醇呈現(xiàn)顯淺紅色。
[0034]本實施例方法中硅膠吸附組褐化率降低到對照組的六分之一，由于褐化率的顯著降低，紅豆杉細胞生長速率和紫杉醇含量對比對照組明顯提高。
[0035]實施例2
[0036]本實施例采用實施例1中用過的硅膠塊再生后作為吸附劑，考察洗脫再生后硅膠塊吸附醌類物質(zhì)抑制紅豆杉細胞褐化的效果。
[0037]將再生后的硅膠塊用超純水清洗干凈后，滅菌備用。除所用硅膠塊為洗脫再生外，所有實施步驟和實施例1完全相同。
[0038]培養(yǎng)過程中觀察發(fā)現(xiàn):對照組中有5瓶發(fā)生明顯褐化，其中三瓶褐化嚴(yán)重，培養(yǎng)物呈現(xiàn)深紅褐色。褐化率為50%。硅膠吸附組全部正常，無褐化。
[0039]培養(yǎng)結(jié)束后取樣測量細胞密度和紫杉醇含量，發(fā)現(xiàn)對照組細胞密度為22±1.9g/L，而硅膠吸附組細胞密度為29±1.7g/L，細胞平均生長速率達到對照組的1.7倍。對照組紫杉醇含量為11±0.7mg/L，硅膠吸附組紫杉醇含量為14±0.7mg/L,比對照組提高了 28%左右。
[0040] 本實施例方法中洗脫再生后重復(fù)利用的硅膠吸附組無褐化，而對照組褐化率為50%,說明洗脫再生后重復(fù)利用的硅膠和新硅膠一樣，也能顯著抑制紅豆杉細胞褐化，并伴隨紅豆杉細胞生長速率和紫杉醇含量對比對照組對應(yīng)提高。
[0041]實施例3
[0042]本實施例是在細胞反應(yīng)器采用棒狀硅膠吸附醌類物質(zhì)從而抑制紅豆杉細胞褐化的方法。
[0043](1)棒狀硅膠制備:取一厘米直徑的醫(yī)用級硅膠棒，切斷成20厘米長度，用超純水清洗干凈后按照電極安裝方法安裝到2升NBS細胞培養(yǎng)反應(yīng)器上(如圖2所示，圖2為在反應(yīng)器紅豆杉細胞培養(yǎng)中應(yīng)用棒狀硅膠吸附醌類示意圖；其中右側(cè)下端伸入紅豆杉培養(yǎng)物的粗棒代表棒狀硅膠吸附材料，刺球代表紅豆杉細胞團)。
[0044](2)紅豆杉培養(yǎng)體系建立:配置B5培養(yǎng)基I升，其中含植物激素萘乙酸4mg/L，6芐基芐氨基腺嘌呤0.15mg/L，蔗糖25g/L，調(diào)整pH到5.8。罐裝培養(yǎng)基到反應(yīng)器中，保證硅膠棒下端有5厘米以上接觸培養(yǎng)基。反應(yīng)器系統(tǒng)采用121度，20分鐘高溫濕熱滅菌后冷卻到室溫備用。紅豆杉細胞接種量為12g/L(按照細胞鮮重計算)。攪拌轉(zhuǎn)速為100RPM，25攝氏度避光培養(yǎng)，通氣量為0.2v/v。培養(yǎng)周期為15天。
[0045](3)培養(yǎng)過程中觀察發(fā)現(xiàn)，細胞生長正常，無褐化，硅膠塊顯微紅色。培養(yǎng)結(jié)束后取樣測量細胞密度和紫杉醇含量，發(fā)現(xiàn)細胞密度為42g/L，紫杉醇含量為21.6mg/L。
[0046](4)培養(yǎng)結(jié)束后拔出硅膠幫，用500毫升乙醇浸泡過夜，硅膠棒恢復(fù)到無色透明，而乙醇呈現(xiàn)顯微紅色。
[0047]本實施例重復(fù)進行5次紅豆杉細胞培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)細胞褐化現(xiàn)象，細胞生長完全正常，紅豆杉細胞生長速率和紫杉醇含量保持穩(wěn)定。
[0048]實施例4
[0049]本實施例是采用大直徑硅膠管作為細胞反應(yīng)器進行紅豆杉細胞培養(yǎng)，采用硅膠吸附醌類物質(zhì)從而抑制紅豆杉細胞褐化的方法。
[0050](1)硅膠反應(yīng)器的制備:取內(nèi)徑10厘米直徑的食品級硅膠管，切斷成40厘米長度，上下端封閉，形成封閉植物細胞反應(yīng)器。采用下端通入空氣的方法進行氣升培養(yǎng)(如圖3所示，圖3為在氣升反應(yīng)器紅豆杉細胞培養(yǎng)中應(yīng)用構(gòu)成反應(yīng)器壁的硅膠吸附醌類示意圖，位于中間用深色代表的反應(yīng)器壁為硅膠材料，刺球代表紅豆杉細胞團，圓代表上升的氣泡)。
[0051](2)紅豆杉培養(yǎng)體系建立:配置B5培養(yǎng)基1.5升，其中含植物激素萘乙酸4mg/L，6芐基芐氨基腺嘌呤0.15mg/L，蔗糖25g/L，調(diào)整pH到5.8。反應(yīng)器系統(tǒng)采用121度，20分鐘高溫濕熱滅菌后冷卻到室溫備用。紅豆杉細胞接種量為12g/L (按照細胞鮮重計算)。攪拌轉(zhuǎn)速為100RPM，25攝氏度避光培養(yǎng)，通氣量為0.2v/v。培養(yǎng)周期為15天。
[0052](3)培養(yǎng)過程中觀察發(fā)現(xiàn)，細胞生長正常，無褐化，作為反應(yīng)器的硅膠管顯微紅色。培養(yǎng)結(jié)束后取樣測量細胞密度和紫杉醇含量，發(fā)現(xiàn)細胞密度為38g/L，紫杉醇含量為27.8mg/L。[0053](4)培養(yǎng)結(jié)束后加500毫升乙醇到硅膠反應(yīng)器中，并過夜。硅膠反應(yīng)器恢復(fù)到無色透明，而乙醇呈現(xiàn)顯微紅色。
[0054]本實施例中硅膠反應(yīng)器可以有效吸附醌類物質(zhì)，未發(fā)現(xiàn)細胞褐化現(xiàn)象，細胞生長完全正常。
[0055]對比例1
[0056]本對比例是實施例3的對照，除不采用棒狀硅膠外，其他設(shè)計完全相同。
[0057]本實施例重復(fù)進行5次紅豆杉細胞培養(yǎng)，其中有兩批次出現(xiàn)細胞褐化，褐化率為40%。
[0058]綜上所述，本發(fā)明提供了一種采用硅膠材料吸附細胞培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的酚類和醌類物質(zhì)，從而避免培養(yǎng)過程中植物細胞褐化的方法；由于紅豆杉細胞酚類物質(zhì)含量高，在人工培養(yǎng)過程中更容易發(fā)生褐化，因此，該植物細胞優(yōu)選紅豆杉細胞。所述方法包括以下步驟:步驟1，硅膠材料被制備形成棒狀、管狀、顆粒狀以及發(fā)酵罐壁等各種形狀；步驟2，在無菌環(huán)境中進行紅豆杉細胞培養(yǎng)，使得紅豆杉細胞和硅膠材料充分接觸硅膠材料吸附紅豆杉細胞代謝產(chǎn)生的酚類物質(zhì)以及進一步氧化產(chǎn)生的醌類物質(zhì)，硅膠材料轉(zhuǎn)變?yōu)榧t褐色。硅膠吸附降低了細胞微環(huán)境中酚類和醌類物質(zhì)的濃度，避免由于醌類物質(zhì)的的過度積累導(dǎo)致紅豆杉細胞褐化；步驟3，吸附飽和或者培養(yǎng)結(jié)束后可以方便地取出硅膠吸附材料；步驟4，用乙醇等醇類有機溶劑浸泡洗脫硅膠材料吸附的酚和醌，硅膠材料從紅褐色恢復(fù)原狀，實現(xiàn)硅膠材料再生。
[0059]本發(fā)明選用硅膠作為細胞褐化相關(guān)醌類物質(zhì)的吸附劑，既避免吸附培養(yǎng)液中的細胞營養(yǎng)成分，又降低了細胞微環(huán)境中醌類物質(zhì)的含量，避免紅豆杉細胞褐化死亡，有利于提高紅豆杉細胞培養(yǎng)的穩(wěn)定性和細胞活性。本方法可以方便地運用到其他細胞培養(yǎng)體系中，減緩其褐化，提高細胞培養(yǎng)過程的穩(wěn)定性和細胞活力。由于褐化往往導(dǎo)致細胞代謝水平的下降，因此采用硅膠吸附避免褐化可望提高細胞中具有藥物活性的次生代謝物，如紅豆杉細胞中抗癌藥物紫杉醇的產(chǎn)量。
[0060]以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容。
【權(quán)利要求】
1.一種利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: 步驟1，制備特定形狀的硅膠吸附材料，滅菌、備用； 步驟2，在細胞培養(yǎng)過程中使所述硅膠吸附材料和植物細胞培養(yǎng)物充分接觸，硅膠吸附材料吸附醌類物質(zhì)后轉(zhuǎn)變?yōu)榧t褐色； 步驟3，當(dāng)吸附達到飽和或者培養(yǎng)結(jié)束后，取出硅膠吸附材料。
2.如權(quán)利要求1所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述植物細胞為紅豆杉細胞。
3.如權(quán)利要求1所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，步驟I中，所述硅膠吸附材料為醫(yī)用或者食品級硅膠。
4.如權(quán)利要求3所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述硅膠吸附材料的特定形狀為棒狀、管狀、顆粒狀、多孔海綿狀或細胞培養(yǎng)所用的發(fā)酵罐罐體形狀。
5.如權(quán)利要求1所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，步驟3中，所述硅膠吸附材料能夠與植物細胞培養(yǎng)物分離。
6.如權(quán)利要求1所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟:步驟3獲得的吸附飽和的硅膠吸附材料可以采用醇類溶劑洗脫實現(xiàn)再生。
7.如權(quán)利要求6所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述醇類溶劑為乙醇。
8.如權(quán)利要求1所述的利用硅膠吸附醌類物質(zhì)降低植物細胞褐化風(fēng)險的方法，其特征在于，所述方法可與銀離子誘導(dǎo)法聯(lián)合使用，用以提高紫杉醇產(chǎn)量。
【文檔編號】C12N5/04GK103923873SQ201410100844
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年3月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月18日
【發(fā)明者】苗辰飛, 朱閃爍, 苗志奇 申請人:上海交通大學(xué)