一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法，該方法包括：金針菇固體發(fā)酵：以含有改善記憶的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種金針菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；乳酸菌液體深層發(fā)酵：以藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的γ-氨基丁酸，制備同時(shí)具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；采用發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。本發(fā)明制備的功能食品同時(shí)具有緩解壓力及改善記憶力功能，市場前景廣闊，該制備方法穩(wěn)定，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及其二步發(fā)酵制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及功能食品及其制備領(lǐng)域，具體涉及一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及采用金針菇、乳酸菌固液二步發(fā)酵制備該功能食品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的不斷加快，人們在生活、學(xué)習(xí)、工作中的競爭越來越激烈，精神壓力大、記憶力減退等亞健康問題成為困擾包括學(xué)生、白領(lǐng)在內(nèi)的腦力工作者的重大隱患，因此越來越多的人開始關(guān)注“腦健康”，緩解壓力、改善記憶的食品和保健食品越來越受青睞，目前針對腦健康的保健食品以增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、改善記憶為主，且大多為單一功能的產(chǎn)品，并無可同時(shí)緩解壓力和改善記憶力的保健食品。
[0003]金針菇被譽(yù)為“增智菇”，研究表明金針菇多糖提取物具有改善記憶的功效。目前大多金針菇保健食品以金針菇子實(shí)體為原料制備的，如專利201310071534.9《一種具有明目益智作用的保健食品》金針菇提取物、歐洲藍(lán)莓提取物、銀杏葉提取物、大豆磷脂等配伍而成，專利201010622493.4《一種用于緩解視疲勞和輔助改善記憶的組合物》由歐洲越橘提取物、金針菇提取物、牛磺酸等配伍而成，但是使用金針菇子實(shí)體為存在原料成本高、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定等問題，以金針菇菌絲體為原料則可避免這些問題，如專利93110333.9《金針菇飲料及其制備方法》主要使用金針菇菌絲體配制而成。但金針菇菌絲體都是以傳統(tǒng)固體或液體發(fā)酵制備，并無利用金針菇和具有一定功效的藥性基質(zhì)通過雙向發(fā)酵制備的報(bào)道。
[0004]莊毅等首次提出雙向發(fā)酵的概念，指出食藥用真菌與含有活性成分的中藥材進(jìn)行發(fā)酵具有雙向性，能產(chǎn)生1+1>2的生理效果，如專利201110271923.7《一種具有降血糖功效的真菌藥性菌質(zhì)及其制備方法》選用具有降血糖功效的藥性基質(zhì)和真菌菌種作為雙向發(fā)酵獲得具有明顯的降低血糖又不增加胰島素濃度的作用的藥性菌質(zhì)，專利200910058889.8《含有靈芝的發(fā)酵菌質(zhì)混合物、制備方法及其應(yīng)用》以靈芝和含有丹參的藥性基質(zhì)進(jìn)行雙向發(fā)酵，得到兼具丹參藥材和靈芝真菌功效的菌質(zhì)發(fā)酵終產(chǎn)物。選用金針菇和具有改善記憶功效的藥性基質(zhì)和進(jìn)行固體發(fā)酵，通過藥性基質(zhì)對金針菇菌絲體生長代謝過程的影響和金針菇真菌酶系對藥性基質(zhì)改造在內(nèi)的雙向性固體發(fā)酵后，得到兼具藥性基質(zhì)和金針菇改善記憶功效的藥性菌質(zhì)，可作為保健食品原料，對記憶力減退者能夠產(chǎn)生1+1>2的效果。
[0005]Y -氨基丁酸是一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明Y -氨基丁酸具有鎮(zhèn)靜神經(jīng)、緩解壓力的功效，衛(wèi)生部2009年第12號公告批準(zhǔn)乳酸菌發(fā)酵法制備的Y-氨基丁酸為新資源食品。從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中篩選的乳酸菌安全性高，可用于Y-氨基丁酸的生產(chǎn)，如專利200780006225.6《能夠生產(chǎn)Y -氨基丁酸的乳酸菌》從未精制的醬油中分離到能夠生產(chǎn)Y-氨基丁酸(GABA)的凝乳酶乳酸桿菌，專利200910183478.1《一株高效轉(zhuǎn)化L-谷氨酸為Y-氨基丁酸乳酸菌的選育》從自制酸菜中篩選出一株能利用L-谷氨酸生產(chǎn)Y-氨基丁酸的植物乳桿菌。但是乳酸菌只能利用單糖、二糖等小分子碳源，不能直接利用含淀粉以及纖維質(zhì)的天然基質(zhì)，而真菌具有降解淀粉和纖維質(zhì)的酶系，可將淀粉質(zhì)、纖維質(zhì)分解為可供乳酸菌利用的小分子碳源，將真菌發(fā)酵與乳酸菌發(fā)酵相耦合進(jìn)行分步發(fā)酵可解決這一問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對目前并無緩解壓力及改善記憶力的功能食品，本發(fā)明提供了一種緩解壓力及改善記憶的功能食品及利用金針菇、乳酸菌固液二步發(fā)酵制備該功能食品的方法。
[0007]—種緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，包括如下步驟:
[0008](I)金針菇固體發(fā)酵:以含有改善記憶功效的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種金針菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；
[0009](2)乳酸菌液體深層發(fā)酵:以步驟(I)的藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時(shí)具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；
[0010](3)采用步驟(2)的發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。
[0011]本發(fā)明第一步以含有改善記憶功效的天然組分作為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種金針菇進(jìn)行雙向固體發(fā)酵，通過藥性培養(yǎng)基質(zhì)對金針菇菌絲體生長代謝過程的影響和金針菇真菌酶系對藥性基質(zhì)改造在內(nèi)的雙向性固體發(fā)酵后，得到兼具藥性基質(zhì)和金針菇改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；第二步以金針菇降解后含有小分子碳源等營養(yǎng)物質(zhì)的藥性菌質(zhì)為原料，添加酵母粉以及谷氨酸鈉制作發(fā)酵培養(yǎng)基，接種可產(chǎn)生Y-氨基丁酸的乳酸菌進(jìn)行發(fā)酵，制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；最后，發(fā)酵液經(jīng)過過濾、濃縮、制劑等工藝制備保健食品。
[0012]步驟(I)中，所述的金針菇可采用現(xiàn)有技術(shù)，金針菇液體菌種采用現(xiàn)有的常規(guī)工藝制得，如具體可選擇金針菇ACCC50424，即中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心(ACCC)保藏的菌種。
[0013]步驟(I)中，所述的金針菇液體菌種的接種量為2%_10%，即所述的金針菇液體菌種的加入的體積量(HiL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的2%-10% (mL/g),以IOOg藥性培養(yǎng)基質(zhì)為基準(zhǔn)，加入2-10mL的金針菇液體菌種。
[0014]步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、大豆10%-20%、核桃仁1%-3%、益智仁1%_3%、銀杏葉1%_3%、石膏粉
0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，1160C _126°C滅菌
0.5h-l.5h。優(yōu)選的，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌Ih。
[0015]步驟(I)中，所述的雙向固體發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在20_25°C，發(fā)酵時(shí)間在20-30天，以該金針菇固體發(fā)酵條件為宜。
[0016]步驟(2)中，所述的乳酸菌為植物乳酸菌，優(yōu)選的為從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為=CGMCC N0.5655)，即采用中國普通微生物菌種保藏管理中心CGMCC保藏的菌種，植物乳酸菌液體菌種采用MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h獲得。
[0017]步驟(2)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。作為優(yōu)選，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)50重量份、酵母粉7.5重量份、谷氨酸鈉20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min。
[0018]步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%，即所述的乳酸菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%_5%。
[0019]步驟(2)中，所述的液體深層發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在28_32°C，發(fā)酵時(shí)間在48-72h，以該發(fā)酵條件為宜。
[0020]步驟(2)中，所述的發(fā)酵液中Y-氨基丁酸的含量為9_12g/L。
[0021]步驟(3)中，所述的發(fā)酵液通過過濾、濃縮、制劑等工藝制備成不同劑型的功能食
品O
[0022]所述的緩解壓力及改善記憶力的功能食品的劑型為口服劑型，優(yōu)選為片劑或膠囊，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、壓片后得到片劑，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、噴霧干燥、制粒、裝囊后得到膠囊。具體地，首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經(jīng)沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機(jī)以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒的重量0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒的重量0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中充分混勻5分鐘灌膠囊或壓成片劑，每粒膠囊/片劑0.35g。
[0023]通過上述二步發(fā)酵制備方法制備的緩解壓力及改善記憶力的功能食品，該功能食品同時(shí)具有緩解壓力和改善記憶力的功能。
[0024]金針菇與改善記憶的藥性培養(yǎng)基質(zhì)雙向發(fā)酵可制備改善記憶效果顯著的藥性菌質(zhì)，而藥性培養(yǎng)基質(zhì)通過金針菇的降解作用，藥性菌質(zhì)可為乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)Y -氨基丁酸提供營養(yǎng)和碳源，同時(shí)通過乳酸菌的降解和轉(zhuǎn)化，藥性菌質(zhì)更易吸收和利用。因此采用金針菇和乳酸菌二步發(fā)酵可制備可同時(shí)緩解壓力和改善記憶力的功能食品。
[0025]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
[0026](I)本發(fā)明根據(jù)金針菇具有改善記憶功效，Y-氨基丁酸具有緩解壓力功效，二者配伍具有緩解壓力及改善記憶功效，提供了一種以功能強(qiáng)化的金針菇藥性菌質(zhì)和Y-氨基丁酸配伍的功能食品制備方法，該方法將食用菌發(fā)酵與乳酸菌發(fā)酵有機(jī)結(jié)合，采用二步發(fā)酵法制備可同時(shí)緩解壓力和改善記憶的功能食品，其中第一步利用金針菇和具備改善記憶功效藥性基質(zhì)的雙向固體發(fā)酵制備兼具金針菇和藥性基質(zhì)改善記憶功效的藥性菌質(zhì)，該過程不僅能產(chǎn)生1+1 > 2的生理功效，還可將藥性基質(zhì)中的大分子碳源降解為乳酸菌易于利用的小分子碳源，為第二步乳酸菌液體深層發(fā)酵產(chǎn)生具備緩解壓力作用的Y-氨基丁酸提供必要的營養(yǎng)和碳源，同時(shí)通過乳酸菌的降解和轉(zhuǎn)化，藥性菌質(zhì)更易吸收和利用。
[0027](2)本發(fā)明制備的功能食品經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明具有緩解壓力和改善記憶功能。
[0028](3)本發(fā)明采用的生產(chǎn)方法，不僅原料成本低，整個(gè)生產(chǎn)過程都采用低溫發(fā)酵，條件溫和，沒有毒害物質(zhì)的攝入，產(chǎn)品安全性、附加值高，可實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，市場前景廣闊。
[0029](4)本發(fā)明制備的功能食品采用片劑、膠囊等劑型，方便攜帶及服用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為本發(fā)明緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法的流程圖；[0031]圖2為試驗(yàn)例2中受試者唾液皮質(zhì)醇的變化率(起始點(diǎn)100%)。
【具體實(shí)施方式】
[0032]以下按照圖1工藝流程對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。以下沒有特別說明的情況下，百分?jǐn)?shù)均是指重量百分?jǐn)?shù)。
[0033]實(shí)施例1
[0034]1、金針菇固體發(fā)酵:
[0035]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0036]配方:全粒大麥80%、大豆16.5%、核桃仁1%、益智仁1%、銀杏葉1%、石膏粉0.5% ；
[0037]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為65%，121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0038]②接種發(fā)酵
[0039]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按3%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的3% (mL/g)，20°C培養(yǎng)30天制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；
[0040]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0041]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0042]配方:藥性菌質(zhì)40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL (即IOOOg)；
[0043]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0044]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，28°C靜置培養(yǎng)72h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；
[0045]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經(jīng)沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機(jī)以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中充分混勻5分鐘，壓成片劑，每片0.35g。
[0046]實(shí)施例2
[0047]1、金針菇固體發(fā)酵:
[0048]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0049]配方:全粒大麥80%、大豆16.5%、核桃仁1%、益智仁1%、銀杏葉1%、石膏粉0.5% ；
[0050]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為60% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0051]②接種發(fā)酵
[0052]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按3%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的3% (mL/g)，20°C培養(yǎng)30天制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；
[0053]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:[0054]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0055]配方:藥性菌質(zhì)40g、酵母粉5g,谷氨酸鈉15g,自來水IL (即IOOOg)；
[0056]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0057]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，28°C靜置培養(yǎng)72h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；
[0058]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經(jīng)沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機(jī)以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中充分混勻5分鐘，用膠囊填充機(jī)灌膠囊，每粒0.35g。
[0059]實(shí)施例3
[0060]1、金針菇固體發(fā)酵:
[0061]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0062]配方:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1% ；
[0063]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為63% ;121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0064]②接種發(fā)酵
[0065]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按5%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的5% (mL/g)，25°C培養(yǎng)20天制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；
[0066]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0067]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0068]配方:藥性菌質(zhì)50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL (即IOOOg)；
[0069]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0070]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，32°C靜置培養(yǎng)48h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；
[0071]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經(jīng)沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機(jī)以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中充分混勻5分鐘，壓成片劑，每片0.35g。
[0072]實(shí)施例4
[0073]1、金針菇固體發(fā)酵:
[0074]①藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制作
[0075]配方:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1% ；[0076]配制方法:按配方比例將各組分混合、粉碎，加水至水分重量含量為62%，121°C滅菌lh，得到藥性培養(yǎng)基質(zhì)；
[0077]②接種發(fā)酵
[0078]將金針菇ACCC50424的液體菌種(常規(guī)工藝制備)按5%體積質(zhì)量比接種到①中藥性培養(yǎng)基質(zhì)，即金針菇ACCC50424液體菌種的加入的體積量(mL)為藥性培養(yǎng)基質(zhì)的質(zhì)量(g)的5% (mL/g)，25°C培養(yǎng)20天制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)；
[0079]2、乳酸菌液體深層發(fā)酵:
[0080]①發(fā)酵培養(yǎng)基制作
[0081]配方:藥性菌質(zhì)50g、酵母粉7.5g,谷氨酸鈉20g,自來水IL (即IOOOg)；
[0082]配制方法:按配方比例將藥性菌質(zhì)、酵母粉、谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成PH為5.5的緩沖液，121°C滅菌30min，得到發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0083]②將從四川泡菜中篩選的植物乳桿菌LW106 (保藏編號為:CGMCCN0.5655)液體菌種(MRS培養(yǎng)基28°C靜置培養(yǎng)48h)按1%比例接種到①中發(fā)酵培養(yǎng)基，即植物乳桿菌的加入的體積量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1%，32°C靜置培養(yǎng)48h制備具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液；
[0084]3、第2步制備的發(fā)酵液首先經(jīng)過過濾、濃縮、噴霧干燥成粉末，粉末過篩后經(jīng)沸騰制粒得干燥顆粒，顆粒用顆粒整粒機(jī)以20目篩進(jìn)行整粒，整粒所得顆粒加入相對于整粒所得顆粒重量的0.5%崩解劑羧甲淀粉鈉和相對于整粒所得顆粒重量的0.1%潤滑劑硬脂酸鎂在多維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)中充分混勻5分鐘，用膠囊填充機(jī)灌膠囊，每粒0.35g。
[0085]以下通過毒理及功能試驗(yàn)來進(jìn)一步說明本發(fā)明。由于本發(fā)明的膠囊和片劑處劑型、輔料不同外，兩者的主要原料、每日服用量、功效成分都相同，不影響產(chǎn)品的安全和功能。故以下針對膠囊進(jìn)行毒理和功能試驗(yàn)。
[0086]試驗(yàn)例I
[0087]毒理試驗(yàn):
[0088]試驗(yàn)?zāi)康?檢驗(yàn)廣品是否具有毒性
[0089]試驗(yàn)材料:實(shí)施例4制得的膠囊。
[0090]樣品:人體口服推薦攝入量為每日兩次，每次兩粒，0.35g每粒(體重按60kg計(jì))，折合劑量0.03g/kg.bw,取膠囊內(nèi)容物進(jìn)行試驗(yàn)。
[0091]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:清潔級ICR小鼠、SD大鼠及飼料。
[0092]飼養(yǎng)條件:溫度20-25°C、相對濕度40%_70%的屏障系統(tǒng)。
[0093]試驗(yàn)方法:
[0094]小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn):取實(shí)施例4制得的膠囊內(nèi)容物，用無菌水配制成0.500g/mL,按最大灌胃量20mL/kg.bw —日內(nèi)二次性灌胃給養(yǎng),受試物給予劑量為20.0g/kg.bw。
[0095]Ames試驗(yàn):取實(shí)施例4制得的膠囊內(nèi)容物，用無菌水配制成0.500g/mL,為5000ug/皿的劑量，試驗(yàn)設(shè)5個(gè)劑量，1000、200、40、8ug/皿4個(gè)劑量用無菌水按一定倍比逐級稀釋配制成10、2、0.4,0.08mg/mL，加樣量均為0.1mL/皿，加入0.1mL/皿，同時(shí)設(shè)陽性、陰性及溶劑對照，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。
[0096]小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn):以40mg/kg *bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照,無菌水為陰性對照，試驗(yàn)組3個(gè)劑量分別為10.0g/kg.bw、5.0g/kg.bw、2.5g/kg.bw,取實(shí)施例4制得的膠囊內(nèi)容物用無菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg *bw灌胃2次，采用30h給受試物法，兩次給樣間隔24h，第二次給樣6h后處死動(dòng)物，取胸骨常規(guī)制片、鏡檢、每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞，觀察含微核的嗜多染紅細(xì)胞并觀察微核發(fā)生率。
[0097]小鼠精子畸形試驗(yàn):以40mg/kg *bw劑量的環(huán)磷酰胺為陽性對照，無菌水為陰性對照，試驗(yàn)組3個(gè)劑量分別為10.0g/kg *bw、5.0g/kg *bw、2.5g/kg *bw,取實(shí)施例4制得的膠囊內(nèi)容物用無菌水配制成0.5,0.25,0.125g/mL,以20mL/kg.bw灌胃，每天I次，連續(xù)5d。于首次給樣后的第35天處死動(dòng)物，取兩側(cè)附睪精子濾液按常規(guī)制片、鏡檢，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)完整的精子，計(jì)算精子畸形發(fā)生率。
[0098]30天喂養(yǎng)試驗(yàn):實(shí)施例4制得的膠囊人體推薦量1.4g/人/天，按人體推薦量的30、65、100 倍設(shè) 0.70g/kg.bw/d、l.52g/kg.bw/d、2.33g/kg.bw/d 設(shè)三個(gè)劑量組，另設(shè)一個(gè)空白對照組Og/kg.bw,受試樣品摻入基礎(chǔ)飼料中飼喂大鼠,連續(xù)喂養(yǎng)30天,每周稱I次體重和2次食物攝入量，計(jì)算每周及總的食物利用率，每天觀察有無中毒變現(xiàn)和死亡，試驗(yàn)結(jié)束觀察血液學(xué)、血液生化、臟器系數(shù)指標(biāo)，并進(jìn)行病理學(xué)檢查。
[0099]試驗(yàn)結(jié)果:
[0100]1、急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果:受試樣品對雌雄性小鼠急性經(jīng)口的最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg.bw,屬無毒級。
[0101]2、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果:Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。
[0102]3、30天喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物生長發(fā)育良好，各劑量組體重、食物利用率、臟器重量、臟器系數(shù)均無異常改變，血液學(xué)指標(biāo)與生化各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍，各臟器病理學(xué)檢查均未見與受試品相關(guān)的病理改變、給予人體推薦量100倍的受試物未觀察到有害作用。
[0103]試驗(yàn)例2
[0104]緩解壓力功能試驗(yàn):
[0105]試驗(yàn)?zāi)康?檢驗(yàn)產(chǎn)品對人體是否具有緩解壓力的功能
[0106]試驗(yàn)材料:實(shí)施例4制得的膠囊。
[0107]樣品:人體口服推薦量為每日2次，每次2粒，膠囊I號、2號，二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個(gè)為實(shí)施例4制得的膠囊，另一個(gè)為安慰劑。
[0108]受試者選擇:受試者為工作壓力大的科研人員，年齡在35-55歲，性別不限，凡符合上述條件而自愿參加并保證配合者均可納入試驗(yàn)。排除以下人員:對保健食品過敏者；短期內(nèi)服用與受試功能相關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷。
[0109]試驗(yàn)方法:當(dāng)人體處在壓力的狀態(tài)下，唾液中就會(huì)分泌皮質(zhì)醇，因此可以通過以唾液皮質(zhì)醇為壓力指標(biāo)評價(jià)受試物緩解壓力的作用。受試者隨機(jī)分為試食組和安慰劑對照組，每天按推薦劑量服用，連續(xù)服用4周。試驗(yàn)期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。結(jié)果如圖2所示，圖2為受試者唾液皮質(zhì)醇的變化率(起始點(diǎn)100%)。由圖2可知，與對照組相t匕，試食組受試者唾液皮質(zhì)醇增加顯著減少(P〈0.05)，說明實(shí)施例4制得的膠囊具有緩解壓力的功效。
[0110]試驗(yàn)例3
[0111]改善記憶功能試驗(yàn):[0112]試驗(yàn)?zāi)康?檢驗(yàn)產(chǎn)品對人體是否具有改善記憶的功能
[0113]試驗(yàn)材料:實(shí)施例4制得的膠囊。
[0114]樣品:人體口服推薦量為每日2次，每次2粒，膠囊I號、2號，二者的包裝、外觀基本相同，但其中一個(gè)為實(shí)施例4制得的膠囊，另一個(gè)為安慰劑。
[0115]受試者選擇:記憶力減退者，年齡25-50歲，選擇符合試驗(yàn)條件的志愿者服用受試物45天，受試者106名，隨機(jī)分為試食組、對照組各53名，試食結(jié)束時(shí)試食組I人和對照組2人未參加檢查。試食前后，受試者精神飲食、大小便狀況未見異常。
[0116]試驗(yàn)方法:根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，選擇記憶商為指標(biāo)評價(jià)受試物的改善記憶的功效。采用自身對照法及組間對照法，試驗(yàn)期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。結(jié)果如表1所示。
[0117]表1產(chǎn)品對記憶商的影響(^±?5 )
[0118]
【權(quán)利要求】
1.一種緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)金針菇固體發(fā)酵:以含有改善記憶功效的天然組分為藥性培養(yǎng)基質(zhì)，接種金針菇液體菌種進(jìn)行雙向固體發(fā)酵制備具有改善記憶功效的藥性菌質(zhì)； (2)乳酸菌液體深層發(fā)酵:以步驟(I)的藥性菌質(zhì)為原料，粉碎后添加酵母粉、谷氨酸鈉、水制成發(fā)酵培養(yǎng)基，接種乳酸菌進(jìn)行液體深層發(fā)酵生產(chǎn)緩解壓力的Y-氨基丁酸，制備同時(shí)具有緩解壓力和改善記憶功效的發(fā)酵液； (3)采用步驟(2)的發(fā)酵液，制備成不同劑型的緩解壓力及改善記憶的功能食品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的金針菇液體菌種的接種量為2%-10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥70%-80%、大豆10%-20%、核桃仁1%-3%、益智仁1%_3%、銀杏葉1%_3%、石膏粉0.5%-1.5%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，1160C _126°C滅菌0.5h_l.5h0
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的藥性培養(yǎng)基質(zhì)的制備:先稱取以下重量百分含量的原料:全粒大麥75%、大豆15%、核桃仁3%、益智仁3%、銀杏葉3%、石膏粉1%，將各組分混合、粉碎，然后加水至水分重量含量為60%-65%，121°C滅菌Ih。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(I)中，所述的雙向固體發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在20-25°C，發(fā)酵時(shí)間在20-30 天。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基采用以下重量份的原料:水1000重量份、藥性菌質(zhì)40-50重量份、酵母粉5-10重量份、谷氨酸鈉15-20重量份，將藥性菌質(zhì)、酵母粉和谷氨酸鈉溶于水，添加醋酸和醋酸鈉配制成pH為5-6的緩沖液，1160C _126°C滅菌20min-40min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的乳酸菌的接種量為1%_5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的液體深層發(fā)酵的條件為:發(fā)酵溫度在28-32°C，發(fā)酵時(shí)間在48-72h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩解壓力及改善記憶的功能食品的二步發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的緩解壓力及改善記憶力的功能食品的劑型為片劑或膠囊。
10.根據(jù)權(quán)利要求1?9任一項(xiàng)所述的制備方法制備的緩解壓力及改善記憶的功能食品ο
【文檔編號】A23L1/28GK103932181SQ201410136197
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】吳學(xué)謙, 徐娟, 熊科輝, 黨亞麗, 俞盈, 許海順, 李青青 申請人:浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院