一種粘質(zhì)沙雷氏菌及其篩選方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種粘質(zhì)沙雷氏菌，命名為Serratia?marcescens?subsp.PGPRB，保藏號為CCTCC?No：M2013617；篩選方法由菌株分離、鑒定步驟組成，粘質(zhì)沙雷氏菌Serratia?marcescens?subsp.PGPRB用于制備靈菌紅素prodigiosin，用于制備脂肽serrawettin?W2。
【專利說明】一種粘質(zhì)沙雷氏菌及其篩選方法和應(yīng)用 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及到粘質(zhì)沙雷氏菌。 【背景技術(shù)】
[0002] 植物病害一直嚴(yán)重地威脅著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，人類防治植物病害可以追溯到幾千年前， 上世紀(jì)40年代初期，有機(jī)合成農(nóng)藥大量產(chǎn)生，有效地控制了病害，但抗藥性、環(huán)境污染和人 類健康受到威脅，即人們常說的三害。三害的出現(xiàn)引起了人們的廣泛關(guān)注，于是生物防治 的研究開發(fā)應(yīng)用被提到了議事日程上來，并得到各國政府的重視。植物根際促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)是存在于植物根際的一些對植物生長有促進(jìn)和 保護(hù)作用的微生物。其中研究較深入的是假單胞菌屬和芽孢桿菌屬，近年來沙雷氏菌屬細(xì) 菌作為生防細(xì)菌逐漸受到很多學(xué)者的重視。沙雷氏菌通?？僧a(chǎn)生多種抗生性代謝產(chǎn)物，如 靈菌紅素、環(huán)脂肽類物質(zhì)（ 8抓四冊《丨1111、12、13)、硝批咯菌素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、水解酶 (幾丁質(zhì)酶和1，3-葡聚糖酶）和嗜鐵素等抗菌物質(zhì)，對多種植物病原真菌具有抑制作用。 已報(bào)道普城沙雷氏菌（Serratia plymuthica HR0-C48、A21-4、IC14 和 IC1270)、粘質(zhì)沙雷 氏菌（S. marcenscens N4-5)可防治多種土傳、氣傳和采后病害的發(fā)生。
[0003] 靈菌紅素是一類具有甲氧基吡咯環(huán)結(jié)構(gòu)的天然色素的總稱。目前已報(bào)道的靈菌 紅素及其類似物有 prodigiosin，metacycloprodigiosin，butyl-meta-cycloheptylpro digiosin, butylcycloheptyl-prodigiosin, nonylprodigiosin 等，含甲氧基三批咯環(huán)組 成的基本骨架結(jié)構(gòu)，具有抗細(xì)菌、抗瘧疾、抗真菌、抗原生動物等生物活性。目前最另人們 感興趣的是其具有免疫抑制活性和引起腫瘤細(xì)胞凋亡作用。如靈菌紅素類似物GX15-070 (Obatoclax)，在臨床上已被用于治療多種癌癥。同時靈菌紅素及其類似物在由各種藻類引 起的海洋赤潮和淡水水華等方面具有極佳的治理效果，且不會給水體帶來二次污染；另外 靈菌紅素對天然纖維和化學(xué)纖維具有較強(qiáng)的著染力及抗菌性能，可作為生態(tài)染料。
[0004] 粘質(zhì)沙雷氏菌產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)主要有serrawettin Wl、serrawettin W2和 serrawettin W3。研究發(fā)現(xiàn)serrawettin對細(xì)菌、真菌卵菌具有抑制作用，Escobar-D/ az 等研究表明AT514 (serrawettin W1)能誘導(dǎo)人癌細(xì)胞和B-慢性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞凋 亡，目前在腫瘤治療領(lǐng)域正處于臨床開發(fā)階段。
[0005] 隨著全球高致病耐藥菌，如耐甲氧西林金葡菌（MRSA)、耐萬古霉素腸球菌（VRE) 和耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP)等的不斷出現(xiàn)，臨床上對新型抗生素的需求變得十分迫切。 玫瑰孢鏈霉菌（Streptomyces roseosporus)產(chǎn)生的環(huán)脂肽類抗生素家族的第一個產(chǎn)品一 達(dá)托霉素（Daptomycin)對以上耐藥菌均有很好的殺菌效果，且制劑用藥方便，毒副作用?。?類芽孢菌屬（Paenibacilluspolymyxa)所產(chǎn)多粘菌素（Polymyxins)已在臨床上用于治療 革蘭氏陰性菌感染。粘質(zhì)沙雷氏菌屬所產(chǎn)的多種環(huán)脂肽和靈菌紅素可作為潛在的抗生素 類藥物被開發(fā)，具有很好的應(yīng)用前景。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種能應(yīng)用于生防領(lǐng)域的粘質(zhì)沙雷氏菌。
[0007] 解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB的粘質(zhì)沙雷氏菌，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址武漢，保藏日期為2013年 11 月 28 日，保藏號為 CCTCC NO :M 2013617 ;
[0008] 粘質(zhì)沙雷氏菌 Serratia marcescens subsp. PGPRB 的 16S rDNA 核苷酸序列為：
[0009]
【權(quán)利要求】
1. 一種粘質(zhì)沙雷氏菌，命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB，保藏號為CCTCC NO ：M2013617〇
2. 一種權(quán)利要求1粘質(zhì)沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB的篩選方法，其 特征在于由下述步驟組成： (1) 菌株分離 取煙草根際土樣置于離心管中，加入10倍質(zhì)量的無菌水制成土壤懸液，置于漩渦震蕩 儀震蕩15分鐘，靜置5分鐘，吸取上清液分別加入10倍、100倍、1000倍、10000倍體積的無 菌水制成菌懸液，取不同濃度的菌懸液分別涂布于KB固體培養(yǎng)基平板上，每種濃度的菌懸 液做三個重復(fù)，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)28°C倒置培養(yǎng)24?48小時，挑取紅色菌落，重復(fù)劃線3次， 得到粘質(zhì)沙雷氏菌，命名為Serratia marcescens subsp. PGPRB，在冰箱_20°C低溫保存； 上述的KB培養(yǎng)基1L中含蛋白胨20g、MgS04. 7H201. 5g、K2HP04. 3H202g、甘油10ml、氨芐 青霉素 40mg、氯霉素 13mg、放線菌酮素 lOOmg，調(diào)pH至7· 0 ; (2) 菌株鑒定 將得到的粘質(zhì)沙雷氏菌通過形態(tài)學(xué)、分子測序、生理生化分析、脂肪酸分析進(jìn)行鑒定。
3. 權(quán)利要求1所述的粘質(zhì)沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB在制備靈菌紅 素 prodigiosin中的用途。
4. 權(quán)利要求1所述的粘質(zhì)沙雷氏菌Serratia marcescens subsp. PGPRB在制備脂肽 serrawettin W2 中的用途。
【文檔編號】C12R1/43GK104109642SQ201410140700
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年4月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月8日
【發(fā)明者】孫燕, 向照舉, 李治, 劉清梅 申請人:陜西師范大學(xué)