一種從裂壺藻藻粕制備抗氧化劑的方法
【專利摘要】一種從裂壺藻藻粕制備抗氧化劑的方法，包括如下步驟：（1）加水對裂壺藻藻粕進行浸泡，得到料液；（2）將料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理；（3）將均質(zhì)處理后的料液滅菌并調(diào)節(jié)pH值至7.5－9.5，然后加入蛋白酶，水解至蛋白質(zhì)水解度為5－10％，滅酶后得到水解液；（4）將水解液進行離心分離，得到上清液A；（5）將上清液A用酒精沉淀，并離心分離，得到上清液B；（6）脫除上清液B中的酒精，得到上清液C；（7）將上清液C濃縮后，加入葡萄糖，反應得到美拉德反應產(chǎn)物；（8）將美拉德反應產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。本發(fā)明以裂壺藻藻粕為原料，生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)成本低，且制得的抗氧化劑抗氧化活性高、食用安全性高。
【專利說明】一種從裂壺藻藻粕制備抗氧化劑的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及肽的制備，具體涉及一種從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，即以裂壺藻提取油脂后剩余的藻柏為原料制備抗氧化劑的方法。
【背景技術】
[0002]對含油的食品而言，許多研究表明，所有含油食品的變質(zhì)都是從脂肪氧化開始的。脂肪氧化方式包括空氣氧化、光氧化、酶促氧化、金屬催化氧化等。氧化后的油脂具有三大害處:一是出現(xiàn)“哈喇味”等刺激性氣味，嬰幼兒奶粉出現(xiàn)這種情況時，孩子的直接表現(xiàn)就是拒食，即使勉強食用，也會出現(xiàn)嘔吐現(xiàn)象；二是營養(yǎng)價值被破壞，不飽和脂肪酸氧化后不再具有營養(yǎng)價值；三是產(chǎn)生毒性物質(zhì)，如氫過氧化物、醛類、環(huán)氧化物等，這些毒物不僅對生物膜、酶、蛋白質(zhì)造成破壞，還與人體衰老、致癌、動脈粥樣硬化等有關，嚴重危害人體健康。
[0003]對人體而言，正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)活性氧的生成與清除處于動態(tài)平衡，活性氧可維持在有益健康的極低水平。消除活性氧的抗氧化防御體系包括內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)和外源性抗氧化劑。人體內(nèi)的 天然抗氧化劑主要為還原型谷胱甘肽和肌肽，但含量很低。人體通過攝入適量的外源性抗氧化劑，能夠明顯降低體內(nèi)自由基的水平，防止脂質(zhì)過氧化，預防疾病的發(fā)生。
[0004]目前使用的外源性抗氧化劑大多為化學合成物，如丁基羥基茴香醚(BHA),2,6-二叔丁基對甲基酚(BHT)等，其抗氧化效果良好，但具有毒副作用，因此這些化學合成物在食品上的應用受到了限制。天然抗氧化劑不僅能夠防止食品中油脂體系的氧化，而且可以防止人體內(nèi)自由基的危害，延緩衰老導致的各種疾病(如癌癥、糖尿病等)，且無毒副作用，因此，α-生育酚、β-胡蘿卜素、黃酮、兒茶素、抗氧化肽等天然抗氧化劑具有良好的市場前景，其中抗氧化肽(即生物活性肽)是現(xiàn)今的研究熱點。
[0005]抗氧化肽作為一種抗氧化物質(zhì)，除了具有高的抗氧化活性之外，還具有很高的食用安全性。在食品加工中，通過添加抗氧化肽，能夠提高食品的穩(wěn)定性，延長食品的儲藏期；將抗氧化肽用在保健食品和抗氧化藥物中，能延緩機體的衰老，減少各種老年性疾病的發(fā)生；在化妝品中適量添加入抗氧化肽，既能起到有效抑制皮膚老化的作用，又能抵抗化妝品自身的氧化，保持其色澤持久。
[0006]抗氧化肽的來源包括:(I)從天然生物體提取；(2)胃腸道消化蛋白質(zhì)過程中產(chǎn)生，或體外酶解蛋白質(zhì)產(chǎn)生；(3)化學合成、酶法合成或重組DNA技術合成等。天然生物體中抗氧化肽含量很少、提取困難，因此天然生物體中提取的活性肽不能滿足人類大規(guī)模的需求。藥理級肽常用的化學合成法有副反應發(fā)生，這些副產(chǎn)物對人體有害。酶法水解生產(chǎn)抗氧化肽，因具有生產(chǎn)條件溫和、安全性高、價廉等優(yōu)點，是生產(chǎn)抗氧化肽的主流方法。
[0007]目前，酶法水解生產(chǎn)抗氧化肽，大多以植物蛋白或動物蛋白為原料，如大豆蛋白、麥胚蛋白、玉米醇溶蛋白等植物蛋白，乳蛋白、魚類蛋白、卵白蛋白、膠原蛋白等動物蛋白。組成底物蛋白的氨基酸種類、數(shù)量及序列皆與其酶解產(chǎn)物中抗氧化肽的含量、組成、活性強弱有著密切聯(lián)系。至今為止，已發(fā)現(xiàn)的抗氧化肽中，所有的氨基酸殘基均有參與，其在肽中的位置或在兩端或在中間，但不同肽的抗氧化性能不同，肽的抗氧化能力取決于肽的氨基酸組成、肽序及結(jié)構，因此，底物蛋白即蛋白原料的選擇是能否制備高活性的抗氧化肽的重要因素之一。而且，不同蛋白酶對底物蛋白水解，所得的酶解物的種類和生物活性都是不同的，因此，選用合適的蛋白酶也是能否制備高活性的抗氧化肽的重要因素之一。
[0008]抗氧化肽的生產(chǎn)過程中，面臨的問題之一是脫鹽，因為在酶解過程中需反復調(diào)節(jié)PH值，導致酶解液中鹽的含量較高。雖然酶解可使原先埋藏在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的疏水性氨基酸暴露出來，從而使蛋白酶解物從水相通過疏水作用吸附到樹脂的疏水表面，并可利用不同濃度洗脫劑的不同極性，對蛋白酶解物進行分級純化，而蛋白酶解物中的無機鹽則因不被樹脂吸附，需在水洗脫時去除。但是這些方法工藝復雜，成本很高。
[0009]抗氧化肽的生產(chǎn)過程中，面臨的另一個問題是純化。利用膜分離、凝膠層析、離子交換層析及高壓液相色譜等方法可對蛋白酶解物中的抗氧化肽進行分離純化，并利用質(zhì)譜和氨基酸分析鑒定其氨基酸序列。目前，已確知氨基酸序列的蛋白肽，按蛋白原料的來源區(qū)分，有乳清蛋白肽、酪蛋白肽、青鱈肽、魚皮肽、魷魚皮肽、貽貝肽、藍貝肽、雞精肽、大豆肽、玉米肽海參肽等；按功能區(qū)分，有嗎啡活性肽、抗高血壓肽、免疫調(diào)節(jié)肽、抗血栓肽、促進金屬離子吸收的肽、抗菌肽、促進細胞生長的肽等。這些已知序列的蛋白肽的氨基酸殘基數(shù)大多小于20，分子量均較小，且氨基酸序列間幾乎無同源性，因而增加了蛋白肽分離純化的難度，分離純化成本很高。[0010]綜上所述，現(xiàn)有的制備抗氧化肽的方法，存在生產(chǎn)工藝路線復雜、生產(chǎn)成本高的缺陷。另外，制得的抗氧化肽風味較差(尤其是苦味明顯)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，這種方法以裂壺藻提取油脂后剩余的藻柏為原料，生產(chǎn)工藝簡單，生產(chǎn)成本低，且制得的抗氧化劑抗氧化活性高、食用安全性高。采用的技術方案如下:
一種從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征在于包括如下步驟:
(1)以裂壺藻提取油脂后剩余的裂壺藻藻柏為原料，加水對裂壺藻藻柏進行浸泡，得到料液；
(2)將步驟(1)得到的料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理；
(3)將均質(zhì)處理后的料液滅菌，并調(diào)節(jié)料液的pH值至7.5 — 9.5，然后加入蛋白酶，在攪拌的情況下水解至蛋白質(zhì)水解度為5 - 10%，滅酶后得到水解液；
所加入的蛋白酶是堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜酶、Protamex復合蛋白酶和風味酶中的一種或其中兩種的組合，蛋白酶的重量是裂壺藻藻柏的2 - 8% ；
(4)將步驟(3)得到的水解液進行離心分離，去除其中不溶解的成分，得到上清液A;
(5)將上清液A用酒精沉淀，并離心分離，得到上清液B；
(6)脫除上清液B中的酒精，得到上清液C；
(7)將上清液C濃縮至固形物含量為20- 30% (重量)后，加入葡萄糖，在110 — 121 °C下反應30 - 60分鐘，得到美拉德反應產(chǎn)物；
所加入的葡萄糖的重量是濃縮后的上清液C的I 一 5% ；
(8)噴霧干燥:將美拉德反應產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。[0012]優(yōu)選步驟(1)中，所加入的水的重量是裂壺藻藻柏的8 — 12倍，浸泡時間為30 —60分鐘。
[0013]優(yōu)選步驟(2)中，均質(zhì)壓力為10 - 25MPa，均質(zhì)處理時料液溫度為30 — 70°C。
[0014]步驟(3)中，蛋白質(zhì)的水解度的測定方法為:DH = AN/TNX 100% [式中:DH為氨基酸態(tài)氮生成率(％)，即水解度；AN為氨基酸態(tài)氮含量(重量)，用甲醛電位滴定法測定；TN為總氮含量(重量)，用微量凱氏定氮法測定]。采用水解度(DH)來檢測蛋白質(zhì)酶解反應的進度。
[0015]優(yōu)選步驟(3)中，將均質(zhì)處理后的料液在85 - 95°C下滅菌15 — 30分鐘，然后冷卻至37 — 50°C，再調(diào)節(jié)料液的pH值。
[0016]優(yōu)選步驟(3)中，滅酶溫度為85 - 95°C、滅酶時間為10 — 15分鐘。
[0017]步驟(3)中水解時間通常為I — 2小時。
[0018]步驟(4)中，水解液中不溶解的成分有纖維素和大分子蛋白等。優(yōu)選步驟(4)中，以3000 - 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10 - 15分鐘。
[0019]步驟(5)中，通過酒精沉淀分離出上清液A中能沉淀的大分子蛋白，得到純度及澄清度更高的上清液B。優(yōu)選步驟(5)中，所用酒精濃度為75 - 85% (重量)，所用酒精與上清液A的體積比為1:1 一 1:2。
[0020]優(yōu)選步驟(5)中，以3000 — 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10 — 15分鐘。
[0021]優(yōu)選步驟(6)中，采用蒸餾方法脫除上清液B中的酒精。
[0022]步驟(6)得到的上清液C是氨基酸、寡肽、多肽和蛋白質(zhì)的混合物，富含抗氧化肽。
[0023]步驟(7)中通過美拉德反應，可進一步提高抗氧化肽的抗氧化活性，并可改善抗氧化肽的風味。
[0024]優(yōu)選步驟(7)中，采用真空濃縮方法對上清液C進行濃縮。
[0025]裂壺藻是用來生產(chǎn)可促進嬰幼兒腦發(fā)育和視網(wǎng)膜發(fā)育的多不飽和脂肪酸二十二碳六烯酸(DHA)油脂的主要藻類，裂壺藻提取油脂后的副產(chǎn)物即為裂壺藻藻柏。
[0026]本發(fā)明以裂壺藻提取油脂后的副產(chǎn)物藻柏為原料，通過控制酶解、離心分離、濃縮、美拉德反應、噴霧干燥等步驟，得到源自裂壺藻蛋白的抗氧化劑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相t匕，具有如下有益效果:
1.本發(fā)明以裂壺藻提取油脂后的藻柏為原料，裂壺藻藻柏中的蛋白質(zhì)含量高達40%以上(干基)，有良好的氨基酸組成，有利于獲得高活性的抗氧化肽；而且，以裂壺藻提取油脂后的藻柏為原料制備抗氧化肽，實現(xiàn)了資源的充分利用，提高經(jīng)濟效益；
2、本發(fā)明選擇堿性條件下的蛋白酶(包括堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜酶、Protamex復合蛋白酶、風味酶)，既能快速達到所需要的水解度，又能使產(chǎn)品中的鹽分降低，并使產(chǎn)品的抗氧化能力達到要求。
[0027]3、本發(fā)明通過適當調(diào)整pH值的方式和控制合適的水解度，對含鹽量進行控制，無需脫鹽，簡化了工藝，降低了生產(chǎn)成本。
[0028]4、本發(fā)明利用裂壺藻獨有的蛋白組成和結(jié)構，通過控制酶解，得到的酶解產(chǎn)物經(jīng)離心分離、酒精沉淀并再次離心分離后，與葡萄糖發(fā)生美拉德反應而得到抗氧化劑產(chǎn)品，無需純化，簡化了工藝，降低了生產(chǎn)成本。
[0029]5、利用本發(fā)明方法制備的抗氧化劑，水溶性較好，抗氧化活性高，能夠有效防止食品的氧化變質(zhì)，且食用安全性高，具有較佳的風味。
[0030]本發(fā)明制得的抗氧化劑適合于含油的液態(tài)食品、固態(tài)或半固態(tài)食品，也可用于含油或不含油的化妝品和保健品中，但不適合用于純油制品中。
【具體實施方式】
[0031]實施例1
本實施例中，從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法包括如下步驟:
(O以裂壺藻提取油脂后剩余的裂壺藻藻柏為原料，加水對裂壺藻藻柏進行浸泡，得到料液；
本驟(I)中，所加入的水的重量是裂壺藻藻柏的8倍，浸泡時間為60分鐘；
(2)將步驟(1)得到的料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理；
本步驟(2)中，均質(zhì)壓力為lOMPa，均質(zhì)處理時料液溫度為70°C ；
(3)將均質(zhì)處理后的料液滅菌(在85°C下滅菌30分鐘)，然后冷卻至37°C，并調(diào)節(jié)料液的pH值至7.5，然后加入蛋白酶，在攪拌的情況下水解至蛋白質(zhì)水解度為5 %，滅酶后得到水解液(滅酶溫度為95°C、滅酶時間為10分鐘)；
所加入的蛋白酶是胰蛋白酶，蛋白酶的重量是裂壺藻藻柏的8% ；
(4)將步驟(3)得到的水解液進行離心分離(以4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10分鐘)，去除其中不溶解的成分(如纖維素和大分子蛋白等)，得到上清液A ;
(5)將上清液A用酒精沉淀，并離心分離(以4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10分鐘)，得到上清液B ；
本步驟(5)中，所用酒精濃度為75% (重量)，所用酒精與上清液A的體積比為1:1 ;
(6)采用蒸餾方法脫除上清液B中的酒精，得到上清液C;
(7)將上清液C濃縮至固形物含量為20%(重量)后，加入葡萄糖，在121°C下反應30分鐘，得到美拉德反應產(chǎn)物；
所加入的葡萄糖的重量是濃縮后的上清液C的1% ；
本步驟(7)中，采用真空濃縮方法對上清液C進行濃縮；
(8)噴霧干燥:將美拉德反應產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。得到的抗氧化劑的蛋白質(zhì)含量約為65%。
[0032]實施例2
本實施例中，從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法包括如下步驟:
(O以裂壺藻提取油脂后剩余的裂壺藻藻柏為原料，加水對裂壺藻藻柏進行浸泡，得到料液；
本驟(I)中，所加入的水的重量是裂壺藻藻柏的12倍，浸泡時間為30分鐘；
(2)將步驟(1)得到的料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理；
本步驟(2)中，均質(zhì)壓力為25MPa，均質(zhì)處理時料液溫度為30°C ；
(3)將均質(zhì)處理后的料液滅菌(在90°C下滅菌25分鐘)，然后冷卻至50°C，并調(diào)節(jié)料液的pH值至9.5,然后加入蛋白酶,在攪拌的情況下水解至蛋白質(zhì)水解度為10%,滅酶后得到水解液(滅酶溫度為85°C、滅酶時間為15分鐘)；
所加入的蛋白酶是堿性蛋白酶和Protamex復合蛋白酶的組合(其中堿性蛋白酶與Protamex復合蛋白酶重量相等)，蛋白酶的重量是裂壺藻藻柏的2% ；
(4)將步驟(3)得到的水解液進行離心分離(以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心15分鐘)，去除其中不溶解的成分(如纖維素和大分子蛋白等)，得到上清液A ;
(5)將上清液A用酒精沉淀，并離心分離(以3000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心15分鐘)，得到上清液B ；
本步驟(5)中，所用酒精濃度為75% (重量)，所用酒精與上清液A的體積比為1:2 ；
(6)采用蒸餾方法脫除上清液B中的酒精，得到上清液C;
(7)將上清液C濃縮至固形物含量為30%(重量)后，加入葡萄糖，在110°C下反應60分鐘，得到美拉德反應產(chǎn)物；
所加入的葡萄糖的重量是濃縮后的上清液C的5% ；
本步驟(7)中，采用真空濃縮方法對上清液C進行濃縮；
(8)噴霧干燥:將美 拉德反應產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。得到的抗氧化劑的蛋白質(zhì)含量約為68%。
[0033]實施例3
本實施例中，從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法包括如下步驟:
(O以裂壺藻提取油脂后剩余的裂壺藻藻柏為原料，加水對裂壺藻藻柏進行浸泡，得到料液；
本驟(I)中，所加入的水的重量是裂壺藻藻柏的10倍，浸泡時間為45分鐘；
(2)將步驟(1)得到的料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理；
本步驟(2)中，均質(zhì)壓力為20MPa，均質(zhì)處理時料液溫度為45°C ；
(3)將均質(zhì)處理后的料液滅菌(在95°C下滅菌15分鐘)，然后冷卻至40°C，并調(diào)節(jié)料液的pH值至8.5,然后加入蛋白酶,在攪拌的情況下水解至蛋白質(zhì)水解度為9.5%,滅酶后得到水解液(滅酶溫度為85°C、滅酶時間為15分鐘)；
所加入的蛋白酶是木瓜酶和風味酶的組合(木瓜酶與風味酶重量相等)，蛋白酶的重量是裂壺藻藻柏的5% ；
(4)將步驟(3)得到的水解液進行離心分離(以3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心12分鐘)，去除其中不溶解的成分(如纖維素和大分子蛋白等)，得到上清液A ;
(5)將上清液A用酒精沉淀，并離心分離(以3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心12分鐘)，得到上清液B ；
本步驟(5)中，所用酒精濃度為80% (重量)，所用酒精與上清液A的體積比為1:1.5 ;
(6)采用蒸餾方法脫除上清液B中的酒精，得到上清液C；
(7)將上清液C濃縮至固形物含量為25%(重量)后，加入葡萄糖，在121°C下反應45分鐘，得到美拉德反應產(chǎn)物；
所加入的葡萄糖的重量是濃縮后的上清液C的2% ；
本步驟(7)中，采用真空濃縮方法對上清液C進行濃縮；
(8)噴霧干燥:將美拉德反應產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。得到的抗氧化劑的蛋白質(zhì)含量約為66%。
[0034]以上實施例1 一 3的步驟(3)中，蛋白質(zhì)的水解度的測定方法為:DH = AN/TNX 100% [式中:DH為氨基酸態(tài)氮生成率(％)，即水解度；AN為氨基酸態(tài)氮含量(重量)，用甲醛電位滴定法測定；TN為總氮含量(重量)，用微量凱氏定氮法測定]。
[0035]以下是本發(fā)明實施例1 一 3的抗氧化劑的抗氧化能力的測試:
本發(fā)明采用過氧化值和茴香胺值來評價抗氧化劑的抗氧化能力。
[0036]根據(jù)Arrhenius經(jīng)驗公式,對于正常的化學反應,反應溫度每升高10°C,反應速度升高I倍，即 Κ[Τ+10 ]/K(T) =2 (式中的K為反應速度)，而反應速度與食品貨架壽命成反比，即反應速度常數(shù)越大，貨架壽命越短，因此有Q(T)/Q(T+ltrc)=2 (式中Q為食品貨架壽命)，即有表I數(shù)據(jù):
表1
【權利要求】
1.一種從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)以裂壺藻提取油脂后剩余的裂壺藻藻柏為原料，加水對裂壺藻藻柏進行浸泡，得到料液； (2)將步驟(1)得到的料液攪拌均勻后進行均質(zhì)處理； (3)將均質(zhì)處理后的料液滅菌，并調(diào)節(jié)料液的pH值至7.5 — 9.5，然后加入蛋白酶，在攪拌的情況下水解至蛋白質(zhì)水解度為5 - 10%，滅酶后得到水解液； 所加入的蛋白酶是堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜酶、Protamex復合蛋白酶和風味酶中的一種或其中兩種的組合，蛋白酶的重量是裂壺藻藻柏的2 - 8% ； (4)將步驟(3)得到的水解液進行離心分離，去除其中不溶解的成分，得到上清液A; (5)將上清液A用酒精沉淀，并離心分離，得到上清液B； (6)脫除上清液B中的酒精，得到上清液C； (7)將上清液C濃縮至固形物含量為20- 30% (重量)后，加入葡萄糖，在110 - 121°C下反應30 - 60分鐘，得到美拉德反應產(chǎn)物； 所加入的葡萄糖的重量是濃縮后的上清液C的1 一 5% ； (8)噴霧干燥:將美拉德反應 產(chǎn)物進行噴霧干燥，得到抗氧化劑。
2.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(1)中，所加入的水的重量是裂壺藻藻柏的8 — 12倍,浸泡時間為30 — 60分鐘。
3.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(2)中，均質(zhì)壓力為10 - 25MPa，均質(zhì)處理時料液溫度為30 — 70°C。
4.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(3)中，將均質(zhì)處理后的料液在85 - 95°C下滅菌15 - 30分鐘，然后冷卻至37 — 50°C，再調(diào)節(jié)料液的PH值。
5.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(3)中，滅酶溫度為85 - 95°C、滅酶時間為10 - 15分鐘。
6.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(4)中，以3000 - 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10 - 15分鐘。
7.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(5)中，所用酒精濃度為75 - 85% (重量)，所用酒精與上清液A的體積比為1:1 一 1:2。
8.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(5)中，以3000 - 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速離心10 - 15分鐘。
9.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(6)中，采用蒸餾方法脫除上清液B中的酒精。
10.根據(jù)權利要求1所述的從裂壺藻藻柏制備抗氧化劑的方法，其特征是:步驟(7)中，采用真空濃縮方法對上清液C進行濃縮。
【文檔編號】C12P21/02GK103937858SQ201410145160
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月11日 優(yōu)先權日:2014年4月11日
【發(fā)明者】李建平, 任國譜 申請人:廣東潤科生物工程有限公司