干酪乳桿菌grx12在制備治療慢性酒精性肝損傷產(chǎn)品中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一株人源干酪乳桿菌grx12在慢性酒精性肝損傷方面的應用。本發(fā)明的干酪乳桿菌grx12菌株是從江蘇如皋長壽村人群腸道中分離獲得的具有顯著體外抗氧化能力的益生菌菌株，該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心，保藏號：CGMCC?No.7696。本發(fā)明的干酪乳桿菌grx12能顯著降低酒精性肝損傷大鼠血脂、血清內(nèi)毒素水平；降低肝臟炎性因子的表達，緩解肝臟炎癥反應，對慢性酒精性肝損傷表現(xiàn)出明顯的保護作用。
【專利說明】干酪乳桿菌grxl 2在制備治療慢性酒精性肝損傷產(chǎn)品中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物【技術領域】，特別涉及一株對慢性酒精性肝損傷有保護作用的人源干酪乳桿菌grX12在發(fā)酵乳制品、功能食品及藥品方面的應用。
技術背景
[0002]由于長期大量飲酒所致的慢性肝臟疾病是造成人類肝臟損傷的重要原因之一，而在我國，隨著人民生活水平的提高，酗酒者增多，長期酗酒也成為繼病毒性肝炎后導致肝損傷的第二大病因。酒精性肝損傷初期通常表現(xiàn)為脂肪肝，進而可發(fā)展成酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化。因此探尋酒精性肝病的發(fā)病機制和防治干預措施具有十分重要的意義。
[0003]酒精性損傷的發(fā)病機制較為復雜，其主要原因是乙醇在肝細胞內(nèi)代謝產(chǎn)生的毒性代謝產(chǎn)物以及由此引起的代謝紊亂，也與內(nèi)毒素、活性氧自由基、炎性因子等的損傷作用有關。具體為:(I)乙醛的毒性作用。乙醇在肝細胞中代謝成乙醛時形成的乙醛蛋白加合物不但會改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，影響其功能，也會引起自身免疫反應。(2)內(nèi)毒素。長期大量攝入酒精會導致腸道菌群失調(diào)，腸道通透性增加，使內(nèi)毒素大量進入血液，并可激活Kupffer細胞產(chǎn)生炎性因子，導致肝 臟炎癥反應。(3)活性氧自由基的損傷。乙醇代謝生成大量活性氧自由基，損害細胞DNA、蛋白質(zhì)和磷脂，加劇肝損傷。(4)炎性因子的損傷。炎性因子誘發(fā)的炎癥反應在酒精性肝損傷的發(fā)展中發(fā)揮了十分重要的作用。
[0004]目前，對酒精性肝損傷的防治措施也多基于其發(fā)病機制，如戒酒、營養(yǎng)治療、抗氧化劑、抗內(nèi)毒素制劑等。藥物治療也多基于抗氧化作用從而改善酒精所致的氧化應激，但藥物的攝入可能進一步加重肝臟負擔，并且存在一定的不良反應和毒副作用。尋找更為安全有效的干預措施就尤為迫切。
[0005]益生菌具有廣泛的生理活性，如益生菌可調(diào)節(jié)腸道菌群，降低內(nèi)毒素含量；可有效清除自由基，增強機體的抗氧化能力；可增強機體免疫力。益生菌的這些生理活性提示人們其對酒精性肝損傷的緩解可能有一定作用。而且，應用于人類的益生菌一般來自于健康人體本身，安全性極高。但目前有關益生菌緩解酒精性肝損傷的研究報道相對較少，而市場上相關的保健食品更是鮮見。因此，利用益生菌及其產(chǎn)品來緩解酒精性肝損傷具有重要的研究意義和廣闊的市場如景。
[0006]本發(fā)明從江蘇如皋長壽村人群腸道中分離獲得具有顯著體外抗氧化活性的專利益生菌——干酪乳桿菌grxl2 ;該菌株在申請?zhí)?013103127847的中國申請專利中已公開，但未揭示在慢性酒精性肝損傷方面的保護作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供干酪乳桿菌在grxl2酒精性肝損傷方面的應用，特別是在長期大量攝入酒精所致的慢性酒精性肝損傷治療與康復中的應用。[0008]本發(fā)明所述的干酪乳桿菌是，該菌株已于2013年6月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心(地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，分類命名為發(fā)酵乳桿菌Lactobacillus casei,保藏號:CGMCCN0.7696。
[0009]本發(fā)明公開了干酪乳桿菌grxl2在制備治療慢性酒精性肝損傷藥物中的應用。
[0010]本發(fā)明進一步提供了干酪乳桿菌grxl2在制備具有緩解酒精性肝損傷功能的發(fā)酵乳制品及功能食品中的應用。
[0011]本發(fā)明的干酪乳桿菌grxl2能顯著降低酒精性肝損傷大鼠血脂、血清內(nèi)毒素水平；降低肝臟炎性因子的表達，緩解肝臟炎癥反應，對慢性酒精性肝損傷表現(xiàn)出明顯的保護作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為干酪乳桿菌grxl2對大鼠血清ALT、AST含量的影響。注:a、b為同一指標不同處理組分別為與空白組、模型組相比，P〈0.05。
[0013]圖2為干酪乳桿菌grxl2對大鼠血清TC、TG含量的影響；注:a、b為同一指標不同處理組分別為與空白組、模型組相比，p〈0.05
[0014]圖3為干酪乳桿菌grxl2對大鼠血清SOD活性的影響；注:a、b為同一指標不同處理組分別為與空白組、模型組相比，p〈0.05。
[0015]圖4為干酪乳桿菌grxl2對大鼠血清內(nèi)毒素含量的影響；注:a、b為同一指標不同處理組分別為與空白組、模型組相比，p〈0.05。
【具體實施方式】
[0016]1.干酪乳桿菌grxl2的培養(yǎng)
[0017]將干酪乳桿菌grxl2在MRS液體培養(yǎng)基中活化3代后的菌液于6000r/min離心IOmin收集菌體，并用滅菌生理鹽水清洗菌體2次，在菌體沉淀中加入10%的滅菌脫脂乳作為凍存保護劑，調(diào)整其菌數(shù)為1.0X IO9IIiL-1,混勻后用MRS固體培養(yǎng)基確認活菌數(shù)。按每日需要量分裝，于_80°C保存。使用前37°C水浴30min。
[0018]2.動物分組與慢性酒精性肝損傷模型的建立
[0019]Wistar大鼠，40只，雄性140~160g,由揚州大學比較醫(yī)學中心提供。許可證:SCXK (蘇)2007-00010采用標準配方桿狀飼料飼養(yǎng)大鼠于揚州大學標準化動物房內(nèi)，濕度40%~50%，室溫23±2°C，自然光照，自由采食和飲水。
[0020]大鼠適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為4組，每組10只，分別為:空白組，模型組，藥物組，干酪乳桿菌grxl2組。采取一天兩次的灌胃方式:上午灌胃酒精，下午灌胃益生菌液或藥物，兩次灌胃間隔8h。
[0021]慢性酒精性肝損傷模型的建立:酒精灌胃按酒精濃度遞增法，濃度按30%~35%~40%~45%逐漸增加，在2周內(nèi)增至40%，持續(xù)灌胃6周，之后增至45%直至實驗結(jié)束。藥物組采用東 寶甘泰(含東寶甘泰0.06g/mL)。所有樣品均按0.lmL/10g.d劑量灌胃，實驗時間為10周。
[0022]具體分組及處理見表1。[0023]表1動物分組及處理
【權(quán)利要求】
1.干酪乳桿菌grX12在制備治療慢性酒精性肝損傷藥物中的應用。
2.干酪 乳桿菌grxl2在制備具有緩解酒精性肝損傷功能的發(fā)酵乳制品及功能食品中的應用。
【文檔編號】A23G9/40GK103893215SQ201410156238
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月17日
【發(fā)明者】顧瑞霞, 劉 東, 黃玉軍, 陳霞, 陳大衛(wèi), 郭飛翔, 趙堂彥, 蔣欣榮 申請人:揚州大學