一種長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊及其制備方法，其芯材為長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68，壁材包括變性蛋白與多糖，將芯材與滅菌后的壁材混合，采用銳孔-凝固浴與真空冷凍干燥的方法，制備得到凍干長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，微膠囊的含菌量為108-1011CFU/g。該微膠囊在室溫條件下貯藏6個(gè)月后，雙歧桿菌數(shù)量仍在108CFU/g以上；凍干微膠囊顆粒通過胃環(huán)境可以較多的活菌數(shù)到達(dá)腸道，并在腸道中將雙歧桿菌大部分釋放出來。本發(fā)明的雙歧桿菌微膠囊為凍干形式，為雙歧桿菌BBMN68提供了低溫、真空及干燥的環(huán)境，很好的解決了其不耐酸、不耐氧及不易存活等缺點(diǎn)，并具有較長(zhǎng)的保質(zhì)期，良好的貯存穩(wěn)定性和腸溶性的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】 一種長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種微膠囊產(chǎn)品，具體涉及一種長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68微膠囊及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雙歧桿菌屬于放線菌科雙歧桿菌屬，當(dāng)前人源雙歧桿菌應(yīng)用于生產(chǎn)的菌種包括兩歧雙歧桿菌(B.bifidum)、青春雙歧桿菌(B.adolescentis)、嬰兒雙歧桿菌(B.1nfantis)、長(zhǎng)雙歧桿菌(B.1ongum)和短雙歧桿菌(B.breve)。雙歧桿菌無芽胞,個(gè)體大小為0.5?1.3 μ mX 1.5?8 μ m，典型形態(tài)為末端分叉的桿狀。其菌落顏色為奶油色至白色，形狀凸圓，質(zhì)地柔軟有彈性，表面光滑，邊緣完整。雙歧桿菌專性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度37?41°C，最低生長(zhǎng)溫度25?28°C，最高生長(zhǎng)溫度43?45°C，起始生長(zhǎng)最適pH值6.5?7.0，pH值5.0以下或8.0以上不生長(zhǎng)，酸性環(huán)境(pH <5.5)對(duì)菌體存活不利。
[0003]雙歧桿菌作為一種典型的益生菌，研究已確認(rèn)對(duì)人體有多項(xiàng)生理保健功能，如改善人體腸胃、營(yíng)養(yǎng)作用、抗衰老、抗腫瘤作用及提高免疫力等。研究與實(shí)踐表明，雙歧桿菌是人和動(dòng)物腸道中對(duì)機(jī)體有益的生理性細(xì)菌，其數(shù)量隨年齡變化而呈動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，并與人的健康長(zhǎng)壽息息相關(guān)。由于環(huán)境污染、濫用抗生素、放化療等原因，使人體腸道內(nèi)雙歧桿菌的數(shù)量下降，從而導(dǎo)致人體的健康狀況下降。因此可以通過研究開發(fā)雙歧桿菌制品，外源攝入雙歧桿菌，來增加人體腸道中雙歧桿菌的數(shù)量，從而提高人體的健康水平。
[0004]目前我國(guó)對(duì)雙歧桿菌的研究還處于上升階段，產(chǎn)品開發(fā)不多，目前主要是雙歧桿菌酸奶。由于雙歧桿菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件要求較高，對(duì)氧極為敏感，對(duì)低pH值的抵抗力差，活性保持較困難等特點(diǎn)使得雙歧桿菌的實(shí)際應(yīng)用受到一定的限制。尤其是長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68其耐酸、耐氧性極差，且要對(duì)人體產(chǎn)生有益作用，必須在通過胃環(huán)境后仍有大量的存活菌到達(dá)腸道并定植于腸粘膜上。但由于胃酸的殺菌作用，活菌數(shù)在此過程中會(huì)大幅度下降，瑞士和國(guó)際乳聯(lián)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)規(guī)定產(chǎn)品中雙歧桿菌的活菌數(shù)要大于106CFU/mL或g。因此必須對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行進(jìn)一步的保護(hù)，使其能夠盡可能的存活到達(dá)腸道并發(fā)揮作用。
[0005]為此，本發(fā)明重點(diǎn)為提高雙歧桿菌在生產(chǎn)應(yīng)用及貯藏中的存活率。本發(fā)明采用微膠囊技術(shù)與冷凍干燥結(jié)合，制備了一種便于貯藏及應(yīng)用的凍干腸溶性微膠囊。
[0006]微膠囊技術(shù)是利用天然或合成的高分子物質(zhì)，將固體、液體、氣體進(jìn)行包埋的微型包裝技術(shù)。即利用性能較穩(wěn)定的天然或合成高分子物質(zhì)作為壁材，將性能不穩(wěn)定的芯材物質(zhì)包埋、封存起來，保護(hù)芯材原有的性質(zhì)，在一定條件下，壁材破裂或溶解，芯材即釋放出來并發(fā)揮功能。本發(fā)明以蛋白質(zhì)(乳清蛋白或明膠)及多糖(海藻酸鈉、殼聚糖或阿拉伯膠)為微膠囊壁材對(duì)長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68進(jìn)行包埋，并添加冷凍保護(hù)劑將菌體與外界不良環(huán)境隔開，并保證盡可能多的活菌到達(dá)腸道定植并發(fā)揮功效；通過冷凍干燥過程，微膠囊中水分快速蒸發(fā)掉使其保持較低的水分含量，便于儲(chǔ)存及應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0007]本發(fā)明的目的是提供一種凍干的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊及其制備方法。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案:
[0009]一種長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，該微膠囊的壁材包括變性蛋白與多糖，芯材為長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68 ;將芯材與滅菌后的壁材混合，采用銳孔-凝固浴與真空冷凍干燥的方法，得到長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊；其中，上述變性蛋白與多糖的質(zhì)量比為1-5:1，微膠囊的含菌量為108-10nCFU/g。
[0010]長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68分離自巴馬縣長(zhǎng)壽老人的糞便，保藏于中科院微生物所菌種保藏中心，保藏號(hào)為CGMCC2265。
[0011]一種優(yōu)選的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其壁材還包括凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑、變性蛋白與多糖的質(zhì)量比為12.5-25:1-5:1。凍干保護(hù)劑在冷凍干燥過程中可以有效的保護(hù)雙歧桿菌的活性，以達(dá)到提高雙歧桿菌活菌數(shù)量的效果。
[0012]上述變性蛋白為變性乳清蛋白或變性明膠，優(yōu)選為變性的乳清蛋白；上述多糖為海藻酸鈉、殼聚糖或阿拉伯膠，優(yōu)選為海藻酸鈉；上述凍干保護(hù)劑為甘油、海藻糖或脫脂奶粉，優(yōu)選為甘油。
[0013]上述微膠囊為球形，其直徑為0.5_5mm。
[0014]一種上述長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的制備方法，包括如下步驟:
[0015](I)培養(yǎng)活化的長(zhǎng)雙歧桿菌，將發(fā)酵液離心，并用生理鹽水洗滌菌體，得到長(zhǎng)雙歧桿菌濕菌體；
[0016](2)將蛋白溶液的pH調(diào)節(jié)至7.0-8.5，加熱使其充分變性，然后將其與多糖溶液混合，滅菌，得到蛋白-多糖混合溶液；將氯化鈣溶液的PH調(diào)節(jié)至6.0-8.5，滅菌；
[0017](3)在無菌條件下，將步驟(I)得到的濕菌體加入到步驟(2)得到的蛋白-多糖混合溶液中，混合均勻后將其滴加到氯化鈣溶液中固化，無菌過濾、洗滌，得到濕潤(rùn)的微膠囊；
[0018](4)將步驟(3)得到的濕潤(rùn)的微膠囊冷凍干燥，得到長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊。
[0019]其中:
[0020]步驟(I)中的活化是指在36.5-37.5°C下，將凍存的長(zhǎng)雙歧桿菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h，并重復(fù)傳代培養(yǎng)2-3次。其中，傳代有兩種接種方式:通過在平板上挑取形狀良好的菌落或直接吸取長(zhǎng)雙歧桿菌的培養(yǎng)液至新的液體培養(yǎng)基。然后，在36.5-37.5°C溫度下，將活化的長(zhǎng)雙歧桿菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)15h，通過離心收集菌體。
[0021 ] 上述液體培養(yǎng)基優(yōu)選為MRS液體培養(yǎng)基。
[0022]步驟(2)中先將蛋白或多糖加入到去離子水中，攪拌均勻，為了確保完全溶解水合，通常選擇在4°C靜置過夜，使蛋白或多糖完全溶解，次日平衡至室溫，得到蛋白或多糖溶液。其中，室溫一般為15-30°C，優(yōu)選為25°C ;在調(diào)節(jié)蛋白溶液的pH值時(shí)，優(yōu)選使用lmol/L的 NaOH。
[0023]步驟⑵中蛋白溶液的濃度為2.0wt % -8.0wt % ;多糖溶液的濃度為
1.0wt% -10.0wt% ;氯化I丐溶液的濃度為 1.0wt% -5.0wt%。
[0024]一種優(yōu)選的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的制備方法，步驟⑵中所述多糖溶液中還含有凍干保護(hù)劑，其中多糖與凍干保護(hù)劑的濃度分別為1.0wt % -10.0wt %和30.0wt % -50.0Wt%，該溶液通過將多糖溶解于凍干保護(hù)劑的水溶液中制備而得，如甘油溶液溶解多糖，得到最終同時(shí)含有甘油和多糖的溶液。
[0025]步驟(2)中所述加熱的溫度為60_90°C，時(shí)間為15_45min，通過熱處理使蛋白完全變性。
[0026]在步驟(2)中，將變性后的蛋白溶液與多糖溶液混合，在100°C滅菌30min。
[0027]在步驟(2)中，優(yōu)選使用lmol/L的HCl將氯化鈣溶液的pH調(diào)節(jié)至7.0-8.5，然后在 121°C 滅菌 20min。
[0028]步驟(3)中固化的時(shí)間為15_60min。
[0029]步驟(3)中使用銳孔裝置將菌體混懸液垂直滴加到氯化鈣凝固浴中制成微液滴，固化后形成雙歧桿菌微膠囊，該銳孔裝置為滴管或注射器。
[0030]步驟(3)中的洗滌為使用生理鹽水洗滌微膠囊。
[0031]上述生理鹽水的濃度為0.9wt%。
[0032]步驟(4)中冷凍干燥的時(shí)間為24_48h。
[0033]本發(fā)明的有益效果如下:與常規(guī)技術(shù)相比，本發(fā)明中以變性蛋白與多糖作為壁材，通過熱處理使蛋白變性，使其在保持原有的成膜性、乳化性和凝膠型的基礎(chǔ)上，還具有以下特性:(1)變性后蛋白的肽鏈展開，水溶性增大；(2)常溫下乳清蛋白或明膠的溶液黏度較低，而變形后蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)展開，分子內(nèi)部的活性基團(tuán)暴漏，黏度增大。(3)變性后的蛋白相互聚集但不形成凝膠，這些蛋白質(zhì)聚集物可以作為冷凝膠三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的基本單位。
[0034]本發(fā)明微膠囊所包埋的長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68對(duì)于酸和氧氣的耐受力特別低，更不易存活。本發(fā)明通過改善壁材的組成，在變性蛋白形成的結(jié)構(gòu)中，加入復(fù)配多糖，可行成一個(gè)網(wǎng)絡(luò)交聯(lián)結(jié)構(gòu)，而將活性菌種包埋于中，實(shí)現(xiàn)對(duì)活性物質(zhì)的保護(hù)及緩釋，同時(shí)采用真空冷凍干燥法，并加入凍干保護(hù)劑，提高雙歧桿菌微膠囊真空冷凍干燥后細(xì)胞的存活率及貯存穩(wěn)定性，使最終得到的凍干長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68微膠囊的保質(zhì)期變長(zhǎng)，常溫保藏期可達(dá)50天以上，甚至可達(dá)6個(gè)月以上。本發(fā)明的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊可直接食用亦可應(yīng)用在其他食品中，經(jīng)胃腸消化，微膠囊可在腸道將大部分菌體釋放，達(dá)到補(bǔ)充益生菌的功效。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1為實(shí)施例1和2中長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在酸奶中的活菌數(shù)變化曲線。
[0036]圖2為實(shí)施例1和2中長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在模擬胃液中的耐胃酸性檢測(cè)曲線。
[0037]圖3為實(shí)施例1和2中長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在模擬腸液中的吸光度-時(shí)間曲線。
[0038]圖4為實(shí)施例1和2中長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在模擬腸液中的釋放曲線。
[0039]圖5為實(shí)施例1和2中長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在室溫條件下耐貯性測(cè)試曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0040]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明，但并不因此而限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0041]下述實(shí)施例中使用的MRS液體培養(yǎng)基可以從商業(yè)途徑購(gòu)得。
[0042]下述實(shí)施例中的原料均為食品級(jí)，無毒副作用，食用具有安全性和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0043]實(shí)施例1以長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68為芯材，以海藻酸鈉和乳清蛋白為壁材
[0044](I)菌株的制備:在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將0.1ml凍存的長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68的菌液接種到IOml MRS液體培養(yǎng)基中，使用厭氧管在恒溫恒濕箱中于36.5-37.5°C溫度下培養(yǎng)12h，重復(fù)傳代2-3次，得到活化的長(zhǎng)雙歧桿菌。
[0045]將活化的長(zhǎng)雙歧桿菌按0.1 %的體積比接種到250ml MRS液體培養(yǎng)基中，置于恒溫恒濕箱中，在36.5-37.5°C溫度下培養(yǎng)15h，4500rpm離心15min收集菌體。然后用0.9%生理鹽水洗滌菌體，在4500rpm下離心15min，重復(fù)洗滌2次后，得到泥狀的長(zhǎng)雙歧桿菌濕菌體。
[0046](2)將乳清蛋白加入到去離子水中，使用磁力攪拌器，在室溫(25°C左右)下攪拌2h，然后置于4°C環(huán)境中靜置過夜，以確保乳清蛋白完全溶解水合，次日平衡至室溫，用lmol/L NaOH調(diào)節(jié)其pH至8.0，得到8wt%的乳清蛋白溶液，80°C下水浴加熱30min使其充分變性。
[0047]將海藻酸鈉加入到去離子水中，室溫下攪拌至均勻分散，于4°C環(huán)境中靜置過夜，次日平衡至室溫后，得到4wt%的海藻酸鈉溶液。
[0048]將變性的乳清 蛋白溶液和多糖溶液混合，其中乳清蛋白與海藻酸鈉的質(zhì)量比為1:1，磁力攪拌使其混合均勻，在100°c沸水浴中滅菌30min，作為壁材待用。
[0049](3)配制3wt%的氯化鈣溶液，用lmol/L HCl調(diào)節(jié)其pH值至6.0，121 °C滅菌20min，待用。
[0050](4)在超凈工作臺(tái)內(nèi)，把離心得到的菌體加入到壁材中，小心攪拌使混合均勻，避免進(jìn)入氣泡。在磁力攪拌器的作用下，用2ml無菌注射器吸取上述混合液，垂直滴入氯化鈣凝固浴中，即形成微膠囊顆粒。濕膠囊在氯化鈣溶液中固化30min，用無菌篩過濾，用0.9%無菌生理鹽水洗滌2-3次，得到濕潤(rùn)的微膠囊。
[0051](5)將濕潤(rùn)微膠囊在真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24_48h，得到凍干的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其含菌量約為101(lCFU/g。
[0052]實(shí)施例2以長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68為芯材，以海藻酸鈉、乳清蛋白和甘油為壁材
[0053]多糖溶液通過將多糖溶解在50wt%的甘油水溶液中制備而得，最終產(chǎn)品中甘油、海藻酸鈉和乳清蛋白的質(zhì)量比為12.5:1:1，其它具體制備方法同上述實(shí)施例1。
[0054]實(shí)施例3
[0055]具體制備方法同實(shí)施例2，但將海藻酸鈉溶解于5(^丨％的甘油水溶液中，其中甘油與海藻酸鈉的質(zhì)量比為25:1，將其與8wt%的乳清蛋白混合，最終產(chǎn)品中甘油、乳清蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為25:5:1。
[0056]實(shí)施例4
[0057]具體制備方法同實(shí)施例1，但將8?1:%乳清蛋白溶液的pH調(diào)節(jié)至7.0,并與3wt%的殼聚糖溶液混合得到蛋白-多糖混合溶液，其中乳清蛋白與殼聚糖的質(zhì)量比為5:1，微膠囊的含菌量約為108cfu/g。
[0058]實(shí)施例5
[0059]具體制備方法同實(shí)施例1，但將4wt%的明膠溶液的pH調(diào)節(jié)至8.5,并與5?1:%的阿拉伯膠溶液混合得到蛋白-多糖混合溶液，其中明膠與阿拉伯膠的質(zhì)量比為2:1，微膠囊的含菌量約為10ncfu/g。
[0060]此外，在其他【具體實(shí)施方式】中，壁材還可以是其他多糖(如殼聚糖、阿拉伯膠)、其他蛋白(如明膠)和其他冷凍干燥保護(hù)劑(如海藻糖、脫脂奶粉等)的復(fù)配，不局限于上述實(shí)施例中的列舉。
[0061]實(shí)施例6長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的性能評(píng)價(jià)
[0062]上述實(shí)施例制備得到的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊按照以下方法進(jìn)行評(píng)價(jià):
[0063]1.長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在酸奶中的應(yīng)用
[0064]將上述實(shí)施例1、2得到的凍干雙歧桿菌微膠囊加入酸奶中一定時(shí)間后，除去酸奶，并用0.9%生理鹽水沖洗微膠囊，將微膠囊用解囊液解囊完全，稀釋一定倍數(shù)，選擇合適稀釋度在MRS固體培養(yǎng)基中37°C培養(yǎng)48h，采用亨蓋特計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)，再與加入酸奶中凍干微膠囊質(zhì)量經(jīng)過換算得到每克酸奶中雙歧桿菌的數(shù)量，確定微膠囊在酸奶保質(zhì)期中的貯存穩(wěn)定性。其中，解囊液組成為0.lmol/L磷酸氫二鈉，0.05mol/L檸檬酸，pH7.25。
[0065]經(jīng)過測(cè)定，所述微膠囊在酸奶保質(zhì)期內(nèi)的活菌數(shù)變化曲線如圖1所示。由圖1可知，兩種微膠囊在酸奶保質(zhì)期(4°C，21天)中，活菌數(shù)均呈下降趨勢(shì)，用含有甘油的壁材所制備的產(chǎn)品，在貯存21天后的活菌數(shù)比海藻酸鈉-乳清蛋白壁材所制備的產(chǎn)品高了 0.8個(gè)數(shù)量級(jí)。而作為酸奶中具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的雙歧桿菌活性添加成分，菌落數(shù)達(dá)到IO6每克或每毫升才能發(fā)揮其功效，即以海藻酸鈉-乳清蛋白為壁材制備的雙歧桿菌微膠囊在酸奶中的貯存天數(shù)為18天，而以海藻酸鈉-乳清蛋白-甘油為壁材制備的雙歧桿菌微膠囊在酸奶中的貯存天數(shù)為21天。
[0066]2.長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的耐胃酸性檢測(cè)
[0067]取實(shí)施例1、2中得到的凍干雙歧桿菌微膠囊0.lg，加入5ml模擬胃液(pHl.2)中，置于37°C保溫，在3h內(nèi)每隔Ih取出，用滅菌生理鹽水洗滌至中性，用解囊液溶解，測(cè)定雙歧桿菌的活菌數(shù)，并與未包埋的凍干菌粉進(jìn)行比較。
[0068]經(jīng)過測(cè)定，所述微膠囊在模擬胃液中的存活情況如圖2所示。由圖2可知，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，菌體在模擬胃液中的存活數(shù)逐漸降低。經(jīng)過模擬胃液處理3h后，未包埋菌體全部死亡，而兩種凍干微膠囊活菌數(shù)量級(jí)分別為7.9和8.4，說明經(jīng)過包埋的雙歧桿菌微膠囊具有較好的耐胃酸能力，表明了對(duì)雙歧桿菌進(jìn)行微膠囊保護(hù)的必要性。
[0069]3.長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的腸溶性檢測(cè)
[0070]將實(shí)施例1、2中處理3h后的模擬胃液中滴加0.05mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為
7.4，加入5ml模擬腸液，于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中在37°C的溫度下，以150rpm的轉(zhuǎn)速震蕩溶解，在6h內(nèi)每隔Ih取Iml腸液稀釋計(jì)數(shù)并在600nm處測(cè)定腸液的吸光度。
[0071]經(jīng)過測(cè)定，所述微膠囊在模擬腸液中的溶解情況如圖3和圖4所示。由圖3可知，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，微膠囊在模擬腸液中處理I小時(shí)后，吸光值迅速上升，I?3小時(shí)略有上升，3小時(shí)后，吸光值基本穩(wěn)定。從圖4也可以看出，在模擬腸液中處理I小時(shí)后，腸液中雙歧桿菌的數(shù)量迅速增長(zhǎng)，已經(jīng)達(dá)到IO6?107CFU/g，3小時(shí)后，腸液中的雙歧桿菌數(shù)量趨于穩(wěn)定，其結(jié)果與吸光值結(jié)果對(duì)應(yīng)。說明該雙歧桿菌微膠囊有著很好的腸溶性，能在腸道中快速崩解釋放出雙歧桿菌。
[0072]4.長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的耐貯性測(cè)試
[0073]將實(shí)施例1、2中得到的凍干雙歧桿菌微膠囊貯存在室溫(25°C )條件下，定期取樣，測(cè)定活菌數(shù)，并與未包埋的凍干菌粉進(jìn)行比較。
[0074]經(jīng)過測(cè)定，所述微膠囊在室溫貯存條件下的情況如圖5所示。由圖5可知，將本發(fā)明提供的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊在室溫條件下貯藏，其中壁材中添加甘油制備的微膠囊貯存3個(gè)月后菌體存活數(shù)量級(jí)為8.8，僅下降了 1.6個(gè)數(shù)量級(jí)，可以滿足實(shí)際應(yīng)用中對(duì)雙歧桿菌活菌數(shù)的要求；以海藻酸鈉-乳清蛋白為壁材制備的微膠囊在貯存20天后活菌數(shù)量級(jí)下降到6以下；而未經(jīng)包埋的雙歧桿菌對(duì)照，存放5天后菌體活菌數(shù)量級(jí)已下降到6以下，I個(gè)月后，就檢測(cè)不到活菌。由此可知，本發(fā)明的包埋方法有效地延長(zhǎng)了本產(chǎn)品的貨架期，尤其是在壁材中添加甘油之后，不僅使凍干后初始活菌含量增加，還增加了其貯存期。
[0075]以上所述的實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行規(guī)定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其特征在于，該微膠囊的壁材包括變性蛋白與多糖，芯材為長(zhǎng)雙歧桿菌BBMN68 ;其中，所述變性蛋白與多糖的質(zhì)量比為1-5:1，微膠囊的含菌量為108-10nCFU/g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其特征在于，所述壁材還包括凍干保護(hù)齊U，凍干保護(hù)劑、變性蛋白與多糖的質(zhì)量比為12.5-25:1-5:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其特征在于，所述變性蛋白為變性乳清蛋白或變性明膠；所述多糖為海藻酸鈉、殼聚糖或阿拉伯膠；所述凍干保護(hù)劑為甘油、海藻糖或脫脂奶粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊，其特征在于，所述微膠囊為球形，其直徑為0.5_5mm。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于，具體方法包括如下步驟: (1)培養(yǎng)活化的長(zhǎng)雙歧桿菌，將發(fā)酵液離心，并用生理鹽水洗滌菌體，得到長(zhǎng)雙歧桿菌濕菌體； (2)將蛋白溶液的pH調(diào)節(jié)至7.0-8.5，加熱使其充分變性，然后將其與多糖溶液混合，滅菌，得到蛋白-多糖混合溶液；將氯化鈣溶液的PH調(diào)節(jié)至6.0-8.5，滅菌； (3)在無菌條件下，將步驟(I)得到的濕菌體加入到步驟(2)得到的蛋白-多糖混合溶液中，混合均勻后將其滴加到氯化鈣溶液中固化，無菌過濾、洗滌，得到濕潤(rùn)的微膠囊； (4)將步驟(3)得到的濕潤(rùn)的微膠囊冷凍干燥，得到長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述蛋白溶液的濃度為2.0wt% _8.0wt%，多糖溶液的濃度為1.0wt% -10.0wt%，氯化鈣溶液的濃度為1.0wt % -5.0wt % ο
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述多糖溶液中還含有凍干保護(hù)劑，其中凍干保護(hù)劑與多糖的濃度分別為1.0wt % -10.0wt %和30.0wt % -50.0wt %。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述加熱的溫度為60-90°C，時(shí)間為 15-45min。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，將變性后的蛋白溶液與多糖溶液混合后，在100°c滅菌30min。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述固化的時(shí)間為15_60mino
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK103932186SQ201410162678
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年4月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月22日
【發(fā)明者】冷小京, 劉云, 翟曉娜, 楊麗芳, 杜秉健, 劉飛, 張春月, 唐曉雙, 馬靜 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)