一種細菌培養(yǎng)檢測管的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種細菌培養(yǎng)檢測管及其使用方法。其中所述的細菌培養(yǎng)管包括：含有指示劑的變色硅橡膠、有機硫吸附劑，培養(yǎng)管和用于封閉所述培養(yǎng)管的管蓋，其中，培養(yǎng)管和管蓋形成一個封閉的腔體，在封閉的腔體內(nèi)設(shè)有所述變色硅橡膠；所述有機硫吸附劑分散于所述變色硅橡膠中和/或附著于所述變色硅橡膠表面。所述細菌的檢測方法，為先在所述細菌培養(yǎng)檢測管內(nèi)培養(yǎng)，通過硅膠顏色變化檢測待測細菌。本發(fā)明所述的細菌培養(yǎng)檢測管結(jié)構(gòu)簡單，能夠避免培養(yǎng)基中雞卵產(chǎn)生的硫化物對變色橡膠的變色干擾，只通過顏色的變化就可以準(zhǔn)確判斷是否生產(chǎn)待檢測細菌，可以方便的用于待檢測細菌的檢驗，減少臨床檢驗的工作量，提高了檢測準(zhǔn)確性。
【專利說明】一種細菌培養(yǎng)檢測管
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種細菌檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種含雞卵成分培養(yǎng)基如分枝桿菌類培
養(yǎng)檢測管。
【背景技術(shù)】
[0002]細菌培養(yǎng)(microculture)是生物培養(yǎng)中的一種，是臨床上一種檢驗細菌的常見的金標(biāo)準(zhǔn)方法，其主要依靠細菌培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)基的物理形態(tài)可以分為固相、液相及雙相(固/液)三類。
[0003]其中，分枝桿菌常用的固體培養(yǎng)基如羅氏、Ogawa等培養(yǎng)基等，以雞卵為主要營養(yǎng)成分提供細菌表面生長條件，由于表面生長能分離得到單個菌落，菌落形態(tài)可幫助鑒定細菌。
[0004]分枝桿菌常用的液體培養(yǎng)基以米氏7H9營養(yǎng)肉湯(Middlebr00k7H9)、牛血清白蛋白、觸酶、葡萄糖等提供分枝桿菌生長所需營養(yǎng)，提供分枝桿菌液體生長條件。 [0005]常用的雙相(固/液)包含固體羅氏培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基，同時提供分枝桿菌表面及液體生長條件，因不同種類的分枝桿菌需要的營養(yǎng)不同，雙相中總能找到最適合其生長的條件，故雙相培養(yǎng)基具有一定的優(yōu)勢(該內(nèi)容已有一項發(fā)明專利-雙相羅氏培養(yǎng)基)。中國專利CN100392096C中的雙相培養(yǎng)基在傳統(tǒng)的改進羅氏培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，再加入液體培養(yǎng)基而組成。
[0006]但是，國內(nèi)外對于以固體羅氏培養(yǎng)基(包括雙相)為基礎(chǔ)的檢驗絕大多數(shù)依賴手工方法判斷，即通過肉眼觀察每支檢測管識別菌落判斷實驗結(jié)果，存在肉眼判讀難、臨床檢驗工作量巨大等問題。
[0007]中國專利CN102495051公開了一種生物活性和代謝快速檢測裝置通過指示劑檢測細菌生長代謝狀況，由于絕大多數(shù)微生物(包括細菌)生長代謝過程中會釋放二氧化碳(CO2),該裝置可通過透氣材料層，尤其是二氧化碳(CO2)變色硅橡膠的顏色變化顯示、監(jiān)測、報告細菌生長代謝狀況。
[0008]其中，二氧化碳(CO2)變色硅橡膠是一種含pH顯色劑乳液并固化后的硅橡膠，它利用硅橡膠氣體高透過性、高疏水性，硫化氫(H2S)、二氧化碳(CO2)、氨(NH3)可自由進出，該硅橡膠對氣體如硫化氫、二氧化碳、氨敏感，顏色可隨氣體性質(zhì)及濃度發(fā)生變化，硅橡膠疏水性阻止水性溶液中的H+、0H—自由進出，故液體pH對其顏色無影響。
[0009]但是，由于多數(shù)培養(yǎng)基以雞卵為主要成分，雞卵中含大量巰基蛋白，生產(chǎn)加熱凝固及儲存過程中會釋放出H2S及CS2等有機硫氣體，這些氣體與CO2類似均為酸性氣體會使變色硅橡膠顏色變化，從而不能直接用于以固體羅氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的細菌檢驗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]針對上述技術(shù)問題的不足，本發(fā)明提供了一種細菌培養(yǎng)檢測管以及使用方法。
[0011]本發(fā)明的第一方面在于提供一種細菌培養(yǎng)檢測管，包括:含有指不劑的變色娃橡膠、有機硫吸附劑，培養(yǎng)管和用于封閉所述培養(yǎng)管的管蓋，其中，所述培養(yǎng)管和管蓋形成一個封閉的腔體，在封閉的腔體內(nèi)設(shè)有所述變色硅橡膠；所述有機硫吸附劑分散于所述變色硅橡膠中和/或附著于所述變色硅橡膠表面。
[0012]優(yōu)選地，所述封閉的腔體內(nèi)設(shè)有培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基與所述變色硅橡膠之間沒有物理接觸。
[0013]優(yōu)選地，所述變色硅橡膠位于所述培養(yǎng)管的底部、培養(yǎng)管的側(cè)壁或所述管蓋的內(nèi)側(cè)中的一處或幾處。
[0014]優(yōu)選地，所述變色硅橡膠同時位于所述管蓋的內(nèi)側(cè)和所述培養(yǎng)管的底部。
[0015]所述變色硅橡膠由含有指示劑的變色乳液固化后得到，所述變色乳液還包括緩沖液、乳化劑。
[0016]所述指示劑為隨CO2氣體濃度變化而發(fā)生變化的物質(zhì)，優(yōu)選為pH指示劑或氧化還原指示劑，更優(yōu)選為PH指示劑，其中，pH指示劑選自甲基紅、溴甲酚綠、百里酚藍、酚紅、亮黃、間甲酚紫、甲酚紅、中性紅、間硝基苯酚和間二硝基鄰苯甲酰亞脲。
[0017]所述緩沖液選自碳酸鹽緩沖液、磷酸緩沖液、Earle’ s平衡鹽、Hank’ s平衡鹽、HEPES緩沖液、硼酸鹽緩沖液。
[0018]所述乳化劑選自脂肪酸環(huán)氧乙烯酯、多元醇脂肪酸酯、多元醇脂肪酸酯與環(huán)氧乙烷縮合物等中的任意一種或幾種。 [0019]所述有機硫吸附劑附著于所述硅橡膠至少一個表面，并且附著有機硫吸附劑的一個表面朝向所述培養(yǎng)基。
[0020]其中，所述有機硫吸附劑選自活性炭、金屬氧化物，所述金屬氧化物選自Cu0、Zn0、Zn (OH)2, A1203、NiO、MnO, Fe203、CaO等中的一種或兩種以上的混合物，優(yōu)選地，所述有機硫吸附劑至少含有ZnO及Al2O3。
[0021]金屬氧化物與有機硫氣體的作用機理以ZnO為例:ZnO+H2S — ZnS+H20 ；2Zn0+CS2=2ZnS+C02。
[0022]所述有機硫吸附劑的粒徑優(yōu)選為0.01-15 μ m，優(yōu)選為0.01-10 μ m，更優(yōu)選為
0.01-5 μ mD
[0023]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述有機硫吸附劑與所述培養(yǎng)基的質(zhì)量比為1:(10-5000)，優(yōu)選為 I: (50-1000)。
[0024]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述有機硫吸附劑為30nm的ZnO顆粒。
[0025]所述變色硅橡膠可以為含有變色乳液和有機硫吸附劑的一層，或分別含有變色乳液和有機硫吸附劑的兩層。
[0026]其中，所述培養(yǎng)基可以是固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、固液雙相培養(yǎng)基，如羅氏固體培養(yǎng)基、羅氏液體培養(yǎng)基或羅氏固體/液體雙相培養(yǎng)基。
[0027]更優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基包括促生長組分，所述促生長組分指的是促進分枝桿菌生長的營養(yǎng)組分，如雞卵、小牛血清、酵母提取物、葡萄糖(右旋糖)、氯化鈉、硫酸鎂、氯化錳、油酸、過氧化氫酶(Catalase)等，可以是其中的任意一種或幾種的混合物。
[0028]其中，在一種優(yōu)選實施例中，所述培養(yǎng)基中至少包括雞卵。
[0029]所述培養(yǎng)基還包括抗生素，以抑制雜菌的生長，所述抗生素可以是單一抗生素或多種抗生素的混合物，如多粘菌素B、兩性菌素B、萘啶酸、甲氧芐嘧啶、氨芐西林等。[0030]其中，所述培養(yǎng)管和/或所述管蓋由透明和/或半透明等材料制成。
[0031] 其中，所述培養(yǎng)管和/或所述管蓋材質(zhì)為不透氣材料。
[0032]優(yōu)選地，用于制造所述培養(yǎng)管或管蓋的不透氣材料選自聚碳酸酯(PC)、聚丙烯(PP)、聚苯乙烯(PS)、聚乙烯(PE)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、玻璃等。
[0033]本發(fā)明的另一方面在于提供一種使用上述細菌培養(yǎng)檢測管的檢測細菌的方法，包括以下步驟:將提供的標(biāo)本放置于本發(fā)明所述細菌培養(yǎng)檢測管內(nèi)的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，通過所述變色硅橡膠顏色的變化檢測標(biāo)本上是否含有待檢測細菌。
[0034]所述細菌選自幽門螺旋菌、伯氏疏螺旋體、嗜肺軍團菌、分枝桿菌、金黃色釀膿葡萄球菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌、單核細胞增多性李斯特氏菌、釀膿鏈球菌、無乳鏈球菌、鏈球菌、糞鏈球菌、牛鏈球菌、鏈球菌具核梭桿菌、念珠棘蟲鏈桿菌、蒼白密螺旋體、雅司螺旋體、流感嗜血桿菌、鉤端螺旋體、以色列放線菌等,并優(yōu)選為分枝桿菌。
[0035]本發(fā)明所述的細菌培養(yǎng)檢測管結(jié)構(gòu)簡單，能夠避免培養(yǎng)基中雞卵產(chǎn)生的硫化物對變色橡膠的變色干擾，只通過顏色的變化就可以準(zhǔn)確判斷是否生產(chǎn)待檢測細菌，可以方便的用于待檢測細菌的檢驗，減少臨床檢驗的工作量，提高了檢測準(zhǔn)確性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0036]圖1和4是本發(fā)明所述細菌培養(yǎng)檢測管的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0037]圖2a_b是本發(fā)明所述細菌培養(yǎng)檢測管中設(shè)于所述管蓋內(nèi)側(cè)的變色硅橡膠的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0038]圖3a_b是本發(fā)明中變色硅橡膠酸色和堿色的示意圖。
【具體實施方式】
[0039]下面通過結(jié)合附圖的實施例進一步描述本發(fā)明的細菌培養(yǎng)檢測管。
[0040]實施例1
[0041]如圖1和2a所示，本實施例的細菌培養(yǎng)檢測管，由含有指示劑的變色硅橡膠4、有機硫吸附劑、培養(yǎng)基3、培養(yǎng)管I和用于封閉所述培養(yǎng)管的管蓋2構(gòu)成。
[0042]其中，培養(yǎng)管1、管蓋2由透明不透氣的玻璃制成。
[0043]變色硅橡膠4設(shè)于管蓋2的內(nèi)側(cè)，培養(yǎng)基3設(shè)于培養(yǎng)管I內(nèi)。
[0044]培養(yǎng)基3為常用的羅氏固體培養(yǎng)基，主要組分包括:雞卵液、天門冬素、丙三醇、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸鎂、孔雀綠和抗生素。
[0045]變色硅橡膠的制備為:將0.01g百里酚藍、Iml碳酸鹽緩沖液和0.1ml脂肪酸環(huán)氧乙烯酯混合得到含有指示劑的變色乳液，并與0.1g ZnO納米顆粒添加到硅橡膠中，置于管蓋2室溫下固化12h，即得變色硅橡膠層。
[0046]實施例2
[0047]如圖4和2b所示，本實施例的細菌培養(yǎng)檢測管，由含有指示劑的變色硅橡膠4、有機硫吸附劑、培養(yǎng)基3、培養(yǎng)管I和用于封閉所述培養(yǎng)管的管蓋2構(gòu)成。
[0048]其中，培養(yǎng)管1、管蓋2由透明不透氣的聚甲基丙烯酸甲酯制成。
[0049]變色硅橡膠4設(shè)于管蓋2的內(nèi)側(cè)和培養(yǎng)管底部，培養(yǎng)基3設(shè)于培養(yǎng)管I內(nèi)。
[0050]培養(yǎng)基3為常用的羅氏固體/液體雙相培養(yǎng)基，主要組分包括:雞卵液、天門冬素、丙三醇、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸鎂、孔雀綠和抗生素。
[0051]變色硅橡膠的制備為:將0.01g百里酚藍、Iml硼酸鹽緩沖液和0.1ml多元醇脂肪酸酯混合成變色乳液，并加入硅橡膠在管蓋2上固化12h，進而，再將0.1g的ZnO和Al2O3的混合物的有機硫吸附劑加入硅橡膠并放置于已固化的變色硅橡膠上固化12h，這樣就形成了上層為變色硅橡膠4’，下層為有機硫吸附劑硅橡膠5’的兩層硅橡膠。
[0052]測試例I
[0053]取一支對比培養(yǎng)檢測管，對比培養(yǎng)檢測管是含有變色乳液但不含有機硫吸附劑的硅橡膠的檢測管，檢測管內(nèi)置入羅氏固體培養(yǎng)基，在不接種時，含有變色乳液但不含有機硫吸附劑的硅橡膠逐漸由藍色變成黃色。可見，羅氏固體培養(yǎng)基可以干擾分枝桿菌的檢驗。
[0054]另取兩支實施例1中的細菌培養(yǎng)檢測管，一支接種分支桿菌，一支做對照，當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)接種分支桿菌后，由于細菌生長釋放CO2，變色乳液硅橡膠的顏色變成黃色，而對照細菌培養(yǎng)檢測管中的硅橡膠始終為藍色，其中，變色硅橡膠酸色即本例中的黃色和堿色即本例中的藍色分別如圖3a_b所示。
[0055]因此，通過觀察細菌培養(yǎng)檢測管硅橡膠的顏色，本發(fā)明細菌培養(yǎng)檢測管可以直接用于以固體羅氏培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的分枝桿菌檢驗，而不用擔(dān)心羅氏固體培養(yǎng)基的干擾。
[0056]以上對本發(fā)明的具體實施例進行了詳細描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的 范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，包括:含有指示劑的變色硅橡膠、有機硫吸附劑，培養(yǎng)管和用于封閉所述培養(yǎng)管的管蓋；其中，所述培養(yǎng)管和管蓋形成一個封閉的腔體，在封閉的腔體內(nèi)設(shè)有所述變色硅橡膠；所述有機硫吸附劑分散于所述變色硅橡膠中和/或附著于所述變色硅橡膠表面。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述封閉的腔體內(nèi)設(shè)有培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基與所述變色硅橡膠不直接接觸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述變色硅橡膠至少設(shè)于所述培養(yǎng)管的底部內(nèi)側(cè)、所述培養(yǎng)管的側(cè)壁、所述管蓋內(nèi)側(cè)的一個位置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述有機硫吸附劑至少附著于所述硅橡膠至少一個表面，并且附著有機硫吸附劑的一個表面朝向所述培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述培養(yǎng)管和/或所述管蓋材質(zhì)為透明、半透明材料中的一種或其組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述培養(yǎng)管和/或所述管蓋材質(zhì)為不透氣材料。
7.根據(jù)權(quán)利要求1細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述變色硅橡膠由含有指示劑的變色乳液固化后得到，所述變色乳液還包括緩沖液、乳化劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述有機硫吸附劑選自活性炭、CuO、ZnO、Zn (OH) 2、Al2O3、Ni O、MnO、Fe2O3、CaO 中的一種或兩種以上的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述有機硫吸附劑至少含有ZnO及Al2O30
10.根據(jù)權(quán)利要求1細菌培養(yǎng)檢測管，其特征在于，所述有機硫吸附劑的粒徑為0.01-10 μ m。
【文檔編號】C12M1/24GK103923826SQ201410182064
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】丁元生, 胡忠義, 李海松, 崔振玲, 陸俊梅, 王潔 申請人:上海市肺科醫(yī)院, 上海積彩醫(yī)療器械有限公司