細(xì)胞分離裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種細(xì)胞分離裝置，包括浮動(dòng)式隔板，離心管及分離液組成，可用于分離淋巴細(xì)胞，白細(xì)胞，單核細(xì)胞，精子等分離試驗(yàn)，可用于細(xì)胞治療和臨床檢驗(yàn)和科研試驗(yàn)領(lǐng)域，操作簡(jiǎn)單，細(xì)胞純度高，安全性高。本發(fā)明涉及的細(xì)胞分離裝置，安全性高，成本低，適合在臨床和科研領(lǐng)域大量推廣。
【專利說明】細(xì)胞分離裝置【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種浮動(dòng)隔板式細(xì)胞分離裝置，屬于生物學(xué)領(lǐng)域，適用于淋巴細(xì)胞，白細(xì)胞，干細(xì)胞等生物細(xì)胞的分離，特別適用于細(xì)胞治療等高風(fēng)險(xiǎn)、大批量樣本處理的醫(yī)療【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞治療是近幾年興起的疾病治療新技術(shù)，是指利用某些具有特定功能的細(xì)胞的特性，采用生物工程方法獲取和/或通過體外擴(kuò)增、特殊培養(yǎng)等處理后，使這些細(xì)胞具有增強(qiáng)免疫、殺死病原體和腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)組織器官再生和機(jī)體康復(fù)等治療功效，從而達(dá)到治療疾病的目的，細(xì)胞治療技術(shù)在腫瘤治療中得到廣泛應(yīng)用，并取得了卓著的成果。隨著該技術(shù)的不斷成熟，大批量高效的淋巴細(xì)胞分離是其中的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前，普遍采用的是淋巴細(xì)胞分離液通過密度梯度法實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分離，但是分離過程中，特別是大批量樣本處理時(shí)，血液樣品加入和淋巴細(xì)胞分離液時(shí)，二者界面很容易發(fā)生混合，造成分離效果差，效率低。針對(duì)這種情況，美國(guó)的BD公司，greinerBio公司,Axis Shield公司以及深圳市達(dá)科為生物工程有限公司先后開發(fā)了淋巴細(xì)胞分離管產(chǎn)品，并申請(qǐng)了專利保護(hù)。前面三家公司是采用普通分離管，中間粘上了一層濾網(wǎng)，從而把分離管分成兩個(gè)空間，避免血樣與分離液的混合。深圳市達(dá)科為生物工程有限公司是采用一種醫(yī)用半固體組織，將普通離心管分割成3個(gè)空間，分離液，半固體組織與分離液的吸附物和上部空間，從而避免了血樣與分離液的混合。以上技術(shù)對(duì)于淋巴細(xì)胞分 離技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)，并有效提高了分離效率。但是仍有一定的局限性。
[0003]第一:國(guó)外公司采用的隔網(wǎng)式技術(shù)，要求技術(shù)含量高，成本昂貴，僅有幾家公司可以生產(chǎn)。
[0004]第二:這幾家公司采用的膠水或者半固體組織需要做到無毒，無滲出，基本沒有可能，因?yàn)樵摷夹g(shù)用于分離得到的淋巴細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)，再次輸入人體，微量的滲出物可能造成嚴(yán)重的影響或潛在的危害。
[0005]第三:長(zhǎng)時(shí)間放置后，分離液體積揮發(fā)減少，造成隔板下或半固體組織表面存在氣泡，影響分離效果。
[0006]分離后，自下而上形成了紅細(xì)胞，分離液，隔板或半固體組織，分離液，淋巴細(xì)胞，血漿幾個(gè)分層，再吸取淋巴細(xì)胞的同時(shí)，很容易把血漿和分離液一并吸出，造成分離純度和得率不高，并且后續(xù)洗滌過程中需要加入較多的清洗液，才能把分離物的密度降下來，造成工作量的增加。這也是以上幾家公司的產(chǎn)品同時(shí)存在的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決以上存在的問題和缺陷，本發(fā)明提供了一種應(yīng)用更廣泛，特別是更加安全，高效，高得率，與目前國(guó)內(nèi)外產(chǎn)品相比更加適合于細(xì)胞治療領(lǐng)域的細(xì)胞分離管。
[0008]本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:本發(fā)明的基礎(chǔ)是采用密度梯度法進(jìn)行細(xì)胞分離，分離管由以下三個(gè)部分組成:
通用離心管(15ml或50ml )，微孔板(孔徑0.2~0.8mm,厚度2mm，直徑)，細(xì)胞分離液(密度1.0774，滲透壓285)
淋巴細(xì)胞分離方法:
1.離心管中加入分離液，放入隔板；
2.將血液樣品(15ml分離管加3~8ml，50ml分離管加3(T40ml)倒入分離罐內(nèi)，旋緊蓋
子；
3.放入離心機(jī)，設(shè)置離心力為lOOOg，時(shí)間為20min，離心；
4.取出分離管，吸去最上層血清；
5.倒出淋巴細(xì)胞層；
6.清洗，離心；
7.染色，計(jì)數(shù)。
[0009]本方案操作時(shí)間最短，加血樣時(shí)，直接倒入分離管中，不用擔(dān)心二者混合，分離完成后，微孔板隨著管中密度梯度的變化上浮，接近淋巴細(xì)胞層的位置。吸去上層血清，最后倒出來的就只有淋巴細(xì)胞層，保證了細(xì)胞的回收率和純度。傳統(tǒng)的吸取方法速度慢，容易造成溶液各層的混合，影響回收率和純度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1淋巴細(xì)胞分離過程示意圖 具體是實(shí)施方式
[0011]本發(fā)明的淋巴細(xì)胞分離管包括通用離心管和微孔隔板兩部分組成，采用通用離心管是增加該技術(shù)的通用性，無需專用設(shè)備。微孔隔板的直徑比離心管的直徑小0，2 _，邊緣高度5mm，在使用時(shí)，可以預(yù)先把分離液加入分離管，離心，隔板自然漂浮于分離液液面之上，也可以在使用前加入分離液，離心，然后加入血樣。隔板不需固定在管壁上。I隔板直徑切面的對(duì)角線大于離心管直徑，保證隔板不會(huì)再分離管中翻轉(zhuǎn)；2隔板與離心管直徑間隙適中，不能太松或太緊；3在往外倒出淋巴細(xì)胞時(shí)，由于毛細(xì)作用，不會(huì)使下層的分離液和紅細(xì)胞漏出；4隔板的材料為安全無毒的塑料制品，理化穩(wěn)定性好，無滲出；5隔板的密度為1.03^1.07之間，確保比血清比重大，比分離液比重小。
[0012]按照上述方法進(jìn)行離心時(shí)，紅細(xì)胞透過隔板進(jìn)入下層，分離液被置換到中層，隔板隨著浮力作用上浮至血清層附近，分離過程見附圖1:1分離管中加入分離液和隔板；2加入血樣；3離心后，離心管的各層分布。
[0013]通過本發(fā)明的分離管進(jìn)行分離試驗(yàn)，與國(guó)內(nèi)外幾家公司的產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果證明，分離效果非常好，分層條帶清晰，其細(xì)胞得率和進(jìn)口固定隔網(wǎng)式分離管和半固體分離管產(chǎn)品相當(dāng)，在細(xì)胞純度，操作簡(jiǎn)便性方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。
[0014]表一:淋巴 細(xì)胞得率的比較(單位:106)
Iffl胞得率I普通分離法I固定隔網(wǎng)分離管 I半固體分離管I浮動(dòng)隔板分離管
15ml 規(guī)格 4.12_^80_^96_5.90_
50ml 規(guī)格 |29.30!35.86!35.48!35.81
以上四種方法米用同一個(gè)血樣，15ml規(guī)格加3ml分離液，5ml抗凝血血樣,50ml加15ml分離液，30ml抗凝血血樣。普通分離方法分離之后，用移液槍吸出淋巴細(xì)胞層，后面三種方法，吸出上層血清后，采用直接傾倒法。每個(gè)品種做3個(gè)平行，分離樣品采用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),求平均值,計(jì)算細(xì)胞總數(shù)。
[0015]以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示后面三種方法細(xì)胞得率沒有顯著差異，較普通方法得率有一定提聞。
[0016]表二:淋巴細(xì)胞純度的比較(單位％)
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)胞分離裝置，包括離心管和隔離板，其特征在于隔離板可以通過浮力作用，在分離管中發(fā)生位置移動(dòng)，可以避免樣本與分離液混合，同時(shí)可以避免分離的目標(biāo)細(xì)胞層與相鄰層的混合。
2.細(xì)胞分離裝置中隔離板，其特征在于所選用材料的密度在血清與分離液之間。
3.權(quán)利要求2中所述的隔離板，其特征在于材料為理化性能穩(wěn)定，生物兼容性好，不影響分離細(xì)胞的生理生化性能。
4.權(quán)利要求2中所述的隔離板，其特征在于隔板上均勻布滿小孔，可以使不同大小的細(xì)胞透過隔離板小孔。
【文檔編號(hào)】C12M1/12GK103952295SQ201410183838
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年5月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月4日
【發(fā)明者】李文強(qiáng) 申請(qǐng)人:李文強(qiáng)