一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的塔賓曲霉及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的塔賓曲霉及其在白酒釀造中的應(yīng)用，所述塔賓曲霉(Aspergillus?tubingensis)已于2014年3月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號是CGMCC?No.8899。所述菌株能夠同時高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，屬于微生物和發(fā)酵工程領(lǐng)域。兩株曲霉經(jīng)固態(tài)制曲，可以高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，使用該霉菌可以提高白酒的出酒率并保持較好的風(fēng)味。
【專利說明】一種高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的塔賓曲霉及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種塔賓曲霉及其應(yīng)用，特別是一種利用塔賓曲霉在提高釀酒過程中酒精產(chǎn)率工藝中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]細菌、酵母和霉菌是中國白酒釀造過程中的三大類微生物，其中霉菌能夠分泌多種酶類并降解淀粉、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，為細菌和酵母的生長和發(fā)酵提供物質(zhì)基礎(chǔ)。霉菌同時也能夠分泌一些酯化酶和代謝產(chǎn)物，對中國白酒的風(fēng)味也有一定的影響。中國白酒傳統(tǒng)釀造過程中是開放式生產(chǎn)，過程中涉及到復(fù)雜的霉菌群落；復(fù)雜的霉菌群落既能產(chǎn)生了豐富的酶系，對白酒釀造有著正面貢獻，但一些環(huán)境中有害的霉菌也可能被涉及，給白酒產(chǎn)品的質(zhì)量帶來了潛在的風(fēng)險。
[0003]純種霉菌的篩選和使用已經(jīng)是行業(yè)的一種趨勢，純種霉菌麩曲能夠代替部分大曲，提高白酒生產(chǎn)的出酒率，控制有害微生物的潛在危險。目前白酒生產(chǎn)中常用的霉菌有河內(nèi)白曲霉(Aspergillus kawachii)、米曲霉(Aspergillus oryzae)等，這些篩選的霉菌具有較高的糖化力，提高了出酒率。但是傳統(tǒng)篩選麩曲霉菌只以糖化酶為指標，所得菌株酶系較為單一，生產(chǎn)的麩曲白酒的酒質(zhì)比大曲酒差，通常只能用于生產(chǎn)中低端白酒。
[0004]糖化酶、α -淀粉酶都能夠降解淀粉，他們的含量和比例會控制發(fā)酵進程的速度，控制發(fā)酵溫度過快上升，使得整個微生物群落正常演變，保證白酒發(fā)酵的正常進行。白酒釀造的主要原料高粱的成分除了淀粉之外，蛋白質(zhì)也是一個重要的成分(8% -10% )，是酵母細菌生長的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，也是形成風(fēng)味物質(zhì)的重要前體。同時，中國白酒發(fā)酵體系是一個偏酸的環(huán)境，在發(fā)酵結(jié)束的時候PH最低能夠達到3.5，因此酸性蛋白酶也在白酒發(fā)酵過程中起到了重要的作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的塔賓曲霉及其在釀造白酒中的應(yīng)用，以適應(yīng)白酒發(fā)酵的過程，提高酒精的產(chǎn)率。
[0006]塔賓曲霉(Aspergillus tubingensis),于2014年3月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為CGMCC N0.8899。
[0007]本發(fā)明所得塔賓曲霉的ITS rDNA序列，在GenBank中進行Blast對比確定其種屬，與其同源序列最高的菌株為Aspergillus tubingensis,相似度為97%。
[0008]所述塔賓曲霉在PDA培養(yǎng)基上生長，菌落開始為白色，圓形，向四周擴散，然后從菌落中間開始產(chǎn)生白色孢子，最后整個菌落全部變成白色略帶紅色。菌絲細密。本菌株適應(yīng)性很強，孢子在PDA培養(yǎng)及平板上30°C萌發(fā)，培養(yǎng)3d，菌落直徑為4.2-6.5cm。
[0009]本發(fā)明菌株高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶，其發(fā)酵工藝為:
[0010]種子(PDA)培養(yǎng)基:馬鈴薯先洗凈去皮，再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛(煮沸20-30min)用八層紗布過濾，加20g瓊脂，葡萄糖20g，再補足水分至1000毫升，121 °C滅菌20min冷卻后貯存?zhèn)溆茫?br> [0011]發(fā)酵培養(yǎng)基:稱取新鮮麩皮(或者其他粉碎原料)并加水，使水分含量約為50%，121°C 滅菌 20min ；
[0012]種子培養(yǎng)方法:挑取一環(huán)塔賓曲霉的孢子，接種于種子培養(yǎng)基斜面，30°C培養(yǎng)3d-7d ；
[0013]發(fā)酵培養(yǎng)方法:250ml錐形瓶裝培養(yǎng)基20g，將活化的孢子懸浮液接入滅過菌的發(fā)酵培養(yǎng)基并使最終濃度為5 X 16個/g麩皮，30°C靜止培養(yǎng)48h-72h。
[0014]測定酶活如下:
[0015]

【權(quán)利要求】
1.一株高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的塔賓曲霉(Aspergillustubingensis)，于2014年3月7日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.8899。
2.權(quán)利要求1所述塔賓曲霉(Aspergillustubingensis)在白酒釀造中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述塔賓曲霉高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，能增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，改善出酒率。
4.如權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于將活化的塔賓曲霉孢子懸浮液接種至固體培養(yǎng)基，接種濃度為1-5% w/w，在25-35°C環(huán)境中固態(tài)發(fā)酵32-72h，制成固態(tài)菌制劑，再將固態(tài)菌制劑作為種子接種到曲池中進行擴大培養(yǎng)24-72h，二級種子按照5-20% w/w接種量加入白酒生產(chǎn)中。
5.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于可以將活化的塔賓曲霉孢子懸浮液接種于滅菌的液態(tài)培養(yǎng)基，接種濃度為1-5% w/w，25-35°C培養(yǎng)24h_72h，制成液態(tài)菌制劑，再將液態(tài)菌制劑作為種子接種到曲池中進行擴大培養(yǎng)24-72h，二級種子按照5-20% w/w接種量加入白酒生產(chǎn)中。
6.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，固態(tài)原料培養(yǎng)基，原料包括高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
7.權(quán)利要求5所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，液態(tài)培養(yǎng)基為原料提取物，原料包括:高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
8.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述塔賓曲霉以固態(tài)接種或者液態(tài)接種的形式加入。
9.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述塔賓曲霉可以將白酒出酒率從20-28%提高到25-33%，淀粉利用率提高3% _5%，并保持酒的風(fēng)味。
【文檔編號】C12N1/14GK104046569SQ201410185333
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年5月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月5日
【發(fā)明者】徐巖, 吳群 申請人:江南大學(xué)