帶gfp標(biāo)記pnc的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株及其應(yīng)用，及基于腫瘤侵襲性新靶標(biāo)PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過(guò)建立基于新型腫瘤轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記物PNC的藥物體外篩選模型，為抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的中藥單體的選擇性開(kāi)發(fā)提供技術(shù)平臺(tái)。帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，通過(guò)GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株構(gòu)建。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型無(wú)需其他體外標(biāo)記和特殊試劑及耗材，可直接用于抗轉(zhuǎn)移中藥單體篩選，篩選步驟簡(jiǎn)便，方法快捷，費(fèi)用低，且易于操作，穩(wěn)定性好。
【專(zhuān)利說(shuō)明】帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株及其應(yīng)用，及基于腫瘤侵襲性新靶標(biāo)PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)乳腺癌發(fā)病率逐年升高，男性乳腺癌患者比例亦不斷上升。雖然外科手術(shù)和放化療手段對(duì)原發(fā)性乳腺癌的臨床治療已初現(xiàn)成效，但晚期乳腺癌導(dǎo)致的轉(zhuǎn)移仍是危及生命的重要問(wèn)題。而目前尚無(wú)明確有效的抗轉(zhuǎn)移藥物，傳統(tǒng)化療藥物如阿霉素、柔紅霉素、絲裂霉素、氟脲嘧啶脫氧核苷酸等，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞造成嚴(yán)重傷害，具有明顯的毒副作用。因此探索腫瘤治療的新靶點(diǎn)，并開(kāi)發(fā)毒副作用較低的化療新藥，對(duì)于提高腫瘤治療的靶向性以及減少腫瘤化療的副反應(yīng)具有重要意義。
[0003]侵襲性(浸潤(rùn)-轉(zhuǎn)移)作為惡性腫瘤的重要標(biāo)志之一，是導(dǎo)致癌癥患者死亡的主要原因。而抗癌新藥，尤其是抗轉(zhuǎn)移藥物長(zhǎng)期處于市場(chǎng)需求“饑渴狀態(tài)”。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，PNC (perinucleolar compartment)是一個(gè)與腫瘤侵襲性密切相關(guān)的細(xì)胞核亞結(jié)構(gòu),其主要由MRP等非編碼RNA和PTB、CUG-BP1等RNA結(jié)合蛋白所組成。由于腫瘤細(xì)胞核中PNC比例與乳腺癌侵襲性呈正相關(guān)，并且與患者預(yù)后密切相關(guān)。因此以PNC為探針的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型的建立，對(duì)于抗轉(zhuǎn)移新藥的高通量篩選具有潛在優(yōu)勢(shì)。
[0004]我國(guó)傳統(tǒng)的中藥，例如靈芝、當(dāng)歸、黃芪、三七等，因其抗腫瘤效應(yīng)、放化療增敏作用以及在減輕放化療毒副方面獨(dú)具效果而越來(lái)越受到人們的重視。但中藥作為一個(gè)復(fù)雜組分其具體的作用機(jī)制 不明確，目前，隨著對(duì)中藥提取物，尤其是中藥單體的抗腫瘤機(jī)制研究的不斷深入，中藥單體在腫瘤治療中的前景日益受到關(guān)注。已有研究顯示中藥單體在乳腺癌治療中的作用，但面對(duì)龐大的中藥單體庫(kù)，如何簡(jiǎn)便高效地選擇出具有降低乳腺癌侵襲性潛能的中藥單體，又是一個(gè)亟待解決的重要問(wèn)題，對(duì)于藥物的選擇性開(kāi)發(fā)至關(guān)重要。因此基于新型腫瘤轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記物PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型的建立，對(duì)于從傳統(tǒng)中藥中發(fā)掘具有抗乳腺癌轉(zhuǎn)移作用的中藥單體，或以此為先導(dǎo)化合物的結(jié)構(gòu)修飾型藥物的開(kāi)發(fā)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)建立基于新型腫瘤轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記物PNC的藥物體外篩選模型，為抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的中藥單體的選擇性開(kāi)發(fā)提供技術(shù)平臺(tái)。
[0006]首先，本發(fā)明提供了一種帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株及其構(gòu)建方法。
[0007]帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，通過(guò)GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株構(gòu)建。
[0008]帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的構(gòu)建方法:包括如下步驟:
[0009]I)制備高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M ;
[0010]2)構(gòu)建帶GFP標(biāo)記的PTB表達(dá)質(zhì)粒GFP-PTB:通過(guò)高保真DNA聚合酶以PCR法擴(kuò)增人PTB cDNA序列，擴(kuò)增后的片斷在HindIII和BamHl位點(diǎn)處插入GFP表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl，獲得帶GFP標(biāo)記的PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒；
[0011]3)步驟2)的GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟I)的高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株，得到帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，并通過(guò)G418篩選獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株MDA-MB-23IM-GFP-PTBο
[0012]優(yōu)選的，所述在步驟I)為通過(guò)乳腺癌細(xì)胞株原位接種-分離淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶-體外培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株-再次原位接種，重復(fù)5次，獲得高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M。
[0013]另外，本發(fā)明還提供了帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的應(yīng)用。
[0014]帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株用于制備乳腺癌診斷試劑。
[0015]帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株用于制備乳腺癌藥物篩選模型。
[0016]本發(fā)明還提供了一種抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型及其構(gòu)建和使用方法。
[0017]一種基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型，所述篩選模型采用帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，通過(guò)中藥單體對(duì)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的PNC抑制率進(jìn)行篩選。
[0018]基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟:
[0019]I)通過(guò)腫瘤細(xì)胞株原位接種-分離淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶-體外培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株-再次原位接種，如此重復(fù)5次，獲得高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M ；
[0020]2)通過(guò)PTB抗體的免疫熒光實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)上述高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株中的PNC比例，3株細(xì)胞的PNC比例均在95%以上；
[0021]3)帶GFP標(biāo)記的PTB表達(dá)質(zhì)粒(GFP-PTB)的構(gòu)建:通過(guò)高保真DNA聚合酶以PCR法擴(kuò)增人PTB cDNA序列，擴(kuò)增后的片斷在HindIII和BamHl位點(diǎn)處插入GFP表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl，即得到帶GFP標(biāo)記的PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒；
[0022]4)上述GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)Lipofectffliine? 2000分別轉(zhuǎn)染步驟I中的3株細(xì)胞，并通過(guò)G418篩選2-3周獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞株；MDA-MB-23IM-GFP-PTB ；
[0023]5)采用熒光顯微鏡驗(yàn)證上述穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中的PNC比例，與步驟2的PTB免疫熒光檢測(cè)結(jié)果一致，即得到可用于抗轉(zhuǎn)移中藥單體篩選的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞模型。
[0024]基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型的使用方法，包括如下步驟:
[0025]I)采用CCK8法分析備選中藥單體對(duì)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制情況，計(jì)算48h時(shí)間點(diǎn)的GI50%和GI99%藥物濃度；
[0026]2)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株爬片過(guò)夜后，分別加入GI50%和GI99%濃度的中藥單體作用24小時(shí)后，用4%多聚甲醛固定，并水洗封片后于鏡下觀(guān)察；
[0027]3)采用熒光顯微鏡檢測(cè)中藥單體作用后的PNC比例，每次計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)3次后取平均值；或采用激光共聚焦顯微鏡成像后，配合Stereo Investigator軟件計(jì)數(shù)中藥單體作用后的腫瘤細(xì)胞PNC比例；
[0028] 4)計(jì)算PNC抑制率:PNC抑制率=(助溶劑DMSO組的PNC比例-中藥單體組的PNC比例)/助溶劑DMSO組的PNC比例X 100%，再行統(tǒng)計(jì)分析；
[0029]5)以中藥單體的PNC抑制率作為篩選依據(jù):在GI50%濃度時(shí)達(dá)到30%以上PNC抑制率的作為優(yōu)先選擇，以GI99%濃度達(dá)到30%以上PNC抑制率的作為第二選擇。
[0030]抗癌新藥，尤其是抗轉(zhuǎn)移藥物長(zhǎng)期處于市場(chǎng)需求“饑渴狀態(tài)”。近年來(lái)，中藥單體在乳腺癌治療中的前景日益受到關(guān)注。但如何簡(jiǎn)便高效地從龐大的中藥單體庫(kù)篩選出具有降低腫瘤侵襲性潛能的中藥單體，又是一個(gè)亟待解決的重要問(wèn)題。而乳腺癌細(xì)胞核中PNC比例與其侵襲性呈正相關(guān)，因此有望作為新型的腫瘤轉(zhuǎn)移分子標(biāo)記物而用于抗轉(zhuǎn)移新藥的篩選。因此基于PNC標(biāo)記的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型的建立，對(duì)于從傳統(tǒng)中藥中發(fā)掘具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的中藥單體具有重要意義。
[0031]另外，PTB作為PNC的主要組成蛋白之一，可明確顯示PNC在細(xì)胞核中的定位和大小，穩(wěn)轉(zhuǎn)GFP標(biāo)記PTB的腫瘤細(xì)胞可直觀(guān)反映細(xì)胞中的PNC比例，因此在高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞中導(dǎo)入GFP-PTB可作為抗轉(zhuǎn)移中藥單體的有效篩選模型。本發(fā)明所提供的基于該類(lèi)細(xì)胞的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型，對(duì)于藥物的選擇性開(kāi)發(fā)至關(guān)重要。
[0032]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0033]1、帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型無(wú)需其他體外標(biāo)記和特殊試劑及耗材，可直接用于抗轉(zhuǎn)移中藥單體篩選，篩選步驟簡(jiǎn)便，方法快捷，費(fèi)用低，且易于操作，穩(wěn)定性好；
[0034]2、中藥較之常規(guī)化療藥物具有低毒副作用的優(yōu)勢(shì)，因此基于PNC指針的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型的建立，對(duì)于具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的中藥單體的高通量篩選及選擇性開(kāi)發(fā)至關(guān)；
[0035]3、帶GFP標(biāo)記的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型亦能用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的活體成像分析，為抗轉(zhuǎn)移中藥單體的體內(nèi) 證提供良好的乳腺癌細(xì)胞模型。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0036]圖1為MDA-MB-23IM-GFP-PTB (高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株)中的PNC亞細(xì)胞定位圖；細(xì)胞核仁周邊的亮點(diǎn)，即為PNC結(jié)構(gòu)。
具體實(shí)施例
[0037]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0038]本發(fā)明實(shí)施例中所需要的材料、試劑均可市場(chǎng)購(gòu)得。
[0039]實(shí)施例1
[0040]一、MDA-MB-231細(xì)胞(購(gòu)至ATCC)，于雌性裸鼠乳腺原位接種-分離淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶-體外培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞-再次乳腺原位接種(重復(fù)5次)，獲得高侵襲性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M ；
[0041]二、采用PTB抗體(購(gòu)至Invitrogen, 1:1000稀釋)進(jìn)行免疫突光檢測(cè)，MDA-MB-231M細(xì)胞中的PNC比例為95.7% ；
[0042]三、構(gòu)建帶GFP標(biāo)記的PTB表達(dá)質(zhì)粒(GFP-PTB):通過(guò)高保真DNA聚合酶PCR擴(kuò)增人PTB cDNA序列，擴(kuò)增后的片斷在HindIII和BamHl位點(diǎn)處插入GFP表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl (購(gòu)至上海和元生物技術(shù)有限公司)，即得到帶GFP標(biāo)記的PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒；
[0043]四、上述GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)Li pofoct ami ne? 2000(購(gòu)至Invitrogen)轉(zhuǎn)染MDA-MB-231M細(xì)胞，并通過(guò)G418篩選約3周獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株MDA-MB-23IM-GFP-PTB。該細(xì)胞中的PNC比例與MDA-MB-231M細(xì)胞中的基本一致，為96.5 %。即得到可用于抗轉(zhuǎn)移中藥單體篩選的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞模型；
[0044]五、MDA-MB-23IM-GFP-PTB細(xì)胞(按5000個(gè)/孔)接種96孔板，貼壁過(guò)夜后，加入梯度濃度的中藥單體(槲皮素、異甘草素、姜黃素、白藜蘆醇、EGCG、山奈酚等，均購(gòu)至成都瑞芬思生物科技有限公司，以DMSO助溶)，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，采用CCK8法分析中藥單體對(duì)MDA-MB-23IM-GFP-PTB細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況，并采用GraphPad Prism5軟件計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制達(dá)50% (GI50% )和99% (GI99% )時(shí)的藥物濃度，見(jiàn)下表:
[0045]
【權(quán)利要求】
1.帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，其特征在于:通過(guò)GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株構(gòu)建。
2.權(quán)利要求1所述的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的構(gòu)建方法:包括如下步驟: 1)制備高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M； 2)構(gòu)建帶GFP標(biāo)記的PTB表達(dá)質(zhì)粒GFP-PTB:通過(guò)高保真DNA聚合酶以PCR法擴(kuò)增人PTB cDNA序列，擴(kuò)增后的片斷在HindIII和BamHl位點(diǎn)處插入GFP表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl，獲得帶GFP標(biāo)記的PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒； 3)步驟2)的GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟I)的高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株，得到帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，并通過(guò)G418篩選獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株MDA-MB-23IM-GFP-PTBο
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的構(gòu)建方法，其特征在于:所述在步驟I)為通過(guò)乳腺癌細(xì)胞株原位接種-分離淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶-體外培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株-再次原位接種，重復(fù)5次，獲得高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M。
4.權(quán)利要求1所述的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株用于制備乳腺癌診斷試劑。
5.權(quán)利要求1所述的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株用于制備乳腺癌藥物篩選模型。
6.一種基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型，其特征在于:所述篩選模型采用帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株，通過(guò)中藥單體對(duì)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的PNC抑制率進(jìn)行篩選。
7.權(quán)利要求6基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟: 1)通過(guò)腫瘤細(xì)胞株原位接種-分離淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶-體外培養(yǎng)得到轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株-再次原位接種，如此重復(fù)5次，獲得高轉(zhuǎn)移性的乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231M ； 2)通過(guò)PTB抗體的免疫熒光實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)上述高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株中的PNC比例，3株細(xì)胞的PNC比例均在95%以上； 3)帶GFP標(biāo)記的PTB表達(dá)質(zhì)粒(GFP-PTB)的構(gòu)建:通過(guò)高保真DNA聚合酶以PCR法擴(kuò)增人PTB cDNA序列，擴(kuò)增后的片斷在Hindi 11和BamHl位點(diǎn)處插入GFP表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-Cl，即得到帶GFP標(biāo)記的PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒； 4)上述GFP-PTB融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒通過(guò)Liporoctam丨no?2000分別轉(zhuǎn)染步驟I中的3株細(xì)胞，并通過(guò)G418篩選2-3周獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞株；MDA-MB-23IM-GFP-PTB ； 5)采用熒光顯微鏡驗(yàn)證上述穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中的PNC比例，與步驟2的PTB免疫熒光檢測(cè)結(jié)果一致，即得到可用于抗轉(zhuǎn)移中藥單體篩選的帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞模型。
8.權(quán)利要求5所述的基于PNC的抗轉(zhuǎn)移中藥單體的篩選模型的使用方法，其特征在于:包括如下步驟: 1)采用CCK8法分析備選中藥單體對(duì)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制情況，計(jì)算48h時(shí)間點(diǎn)的GI50%和GI99%藥物濃度； 2)帶GFP標(biāo)記PNC的高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞株爬片過(guò)夜后，分別加入GI50%和GI99%濃度的中藥單體作用24小時(shí)后，用4%多聚甲醛固定，并水洗封片后于鏡下觀(guān)察；3)采用熒光顯微鏡檢測(cè)中藥單體作用后的PNC比例，每次計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)3次后取平均值；或采用激光共聚焦顯微鏡成像后，配合Stereo Investigator軟件計(jì)數(shù)中藥單體作用后的腫瘤細(xì)胞PNC比例； 4)計(jì)算PNC抑制率:PNC抑制率=(助溶劑DMSO組的PNC比例-中藥單體組的PNC比例)/助溶劑DMSO組的PNC比例X 100%，再行統(tǒng)計(jì)分析； 5)以中藥單體的PNC抑制率作為篩選依據(jù):在GI50%濃度時(shí)達(dá)到30%以上PNC抑制率的作為優(yōu)先選擇，以G I99%濃度達(dá)到30%以上PNC抑制率的作為第二選擇。
【文檔編號(hào)】C12N5/10GK103981148SQ201410198230
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月12日
【發(fā)明者】劉艷寧, 陳智, 樓國(guó)華, 王靜, 吳珊珊 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)