一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置制造方法
【專利摘要】一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，涉及一種實(shí)驗(yàn)室用器具，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設(shè)置為方形，在孔底部的外側(cè)設(shè)有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內(nèi)側(cè)貼有分隔條，粘合的材料為醫(yī)用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條的寬度為1mm，長度大于孔長度，在分隔條的一端設(shè)有拿持部。本發(fā)明通過設(shè)計(jì)為方形孔，劃痕的面積為長方形，與圓形孔相比面積計(jì)算更加精確；通過在孔內(nèi)貼有帶拉環(huán)的分隔條，可在劃痕實(shí)驗(yàn)時(shí)，揭下分隔條，即可得到大小一致規(guī)格整齊的劃痕，且方便快速；通過在孔底部設(shè)有柵格，可方便觀測統(tǒng)計(jì)細(xì)胞移動的位置，計(jì)算相對劃痕面積。
【專利說明】一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實(shí)驗(yàn)室用器具，具體地說是一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞遷移在人體的正常生理活動和疾病發(fā)生中普遍存在，例如細(xì)胞的覓食、傷口損傷愈合、胚胎發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)形成、免疫反應(yīng)、癌癥轉(zhuǎn)移等很多事件都涉及到細(xì)胞遷移。細(xì)胞遷移是當(dāng)前生命科學(xué)研究的一個(gè)重要方向和熱點(diǎn)，科學(xué)家們試圖通過對細(xì)胞遷移的研究，在血管損傷修復(fù)、阻止癌癥轉(zhuǎn)移、植皮等醫(yī)學(xué)應(yīng)用方面取得更大成果。
[0003]目前研究細(xì)胞遷移主要用劃痕實(shí)驗(yàn)。上皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞等在生理狀態(tài)下形成單層或者復(fù)層上皮，在創(chuàng)傷愈合等病理狀態(tài)下，細(xì)胞發(fā)生遷移，以側(cè)向的運(yùn)動為主。劃痕實(shí)驗(yàn)很好地模擬了這種運(yùn)動形式，并且操作方便，因此是研究細(xì)胞遷移的一個(gè)很好的模型。在現(xiàn)行的劃痕實(shí)驗(yàn)中，一般采用無菌的塑料槍頭人工手劃，如圖1所示，可見劃痕邊緣不整齊，劃痕中有PBS清洗后 殘留的細(xì)胞，不同孔中劃痕面積不同，這些都會影響實(shí)驗(yàn)效果及結(jié)果的判斷，因此此種方法具有劃痕不直、劃痕位置不準(zhǔn)確、劃痕面積不統(tǒng)一等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，可以方便快速的進(jìn)行劃痕，且劃痕整齊大小一致，板體底部有柵格刻度線，便于觀察及計(jì)算相對劃痕面積。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，其特征是，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設(shè)置為方形，在孔底部的外側(cè)設(shè)有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內(nèi)側(cè)貼有分隔條，粘合的材料為醫(yī)用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條的寬度為1_，長度大于孔長度，在分隔條的一端設(shè)有拿持部。
[0006]所述的柵格間距為0.25mm。
[0007]所述的分隔條的拿持部位于孔外且不高于板蓋，且末端設(shè)有拉環(huán)。
[0008]所述的分隔條為材質(zhì)超薄透明塑料膠條。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:通過設(shè)計(jì)為方形孔，劃痕的面積為長方形，與圓形孔相比面積計(jì)算更加精確；通過在孔內(nèi)貼有帶拉環(huán)的分隔條，可在劃痕實(shí)驗(yàn)時(shí)，揭下分隔條，即可得到大小一致規(guī)格整齊的劃痕，且方便快速；通過在孔底部設(shè)有柵格，可方便觀測統(tǒng)計(jì)細(xì)胞移動的位置，計(jì)算相對劃痕面積。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是普通實(shí)驗(yàn)中人工劃痕后的邊緣狀態(tài)示意圖，
[0011]圖2是本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖，
[0012]圖3是孔底面仰視圖，
[0013]圖4是孔底面俯視圖，[0014]圖5是圖4的A-A視圖，
[0015]圖6是揭下分隔條后的邊緣狀態(tài)示意圖。
[0016]圖中:I板體，2孔，3分隔條，31拿持部，32拉環(huán)，4柵格。
【具體實(shí)施方式】
[0017]一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，包括板體I和均勻分布在板體I上的孔2，孔2設(shè)置為方形?？筛鶕?jù)需求確定需要的孔的數(shù)量，在孔2底部的外側(cè)設(shè)有柵格4，柵格間距為
0.25_，柵格4的中心線與孔2的中軸線重合。在孔2底部的內(nèi)側(cè)貼有分隔條3為材質(zhì)超薄透明塑料膠條，粘合的材料為醫(yī)用高分子粘合劑，無細(xì)胞毒性，去除分隔條3后孔2底部無殘留，不影響細(xì)胞生長。分隔條3縱向中心線與柵格4的中心線重合，這樣當(dāng)分隔條3揭下后，分隔條3兩側(cè)的細(xì)胞相對于柵格4中心線的距離是相同的，便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。所述分隔條3的寬度為1_，長度大于方形孔長度，這樣可避免圓形孔邊緣有部分細(xì)胞未分割開而導(dǎo)致的劃痕面積計(jì)算不準(zhǔn)確問題。在分隔條3的一端設(shè)有拿持部31，拿持部位于孔外且不高于板蓋，拿持部31高于孔2邊緣部分設(shè)有拉環(huán)32，便于工作人員拿鑷子夾持制作劃痕。
[0018]實(shí)驗(yàn)步驟:
[0019]1.細(xì)胞培養(yǎng)
[0020]以人肝癌細(xì)胞系BEL-7402為例，腫瘤細(xì)胞在RPMI1640培養(yǎng)基(含10% FBS，100U/ml青霉素，100ug/ml鏈霉素)、37°C、5% C02條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞達(dá)到90%融合度時(shí)消化細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
[0021](I) 75%酒精擦拭超凈臺臺面，依次擺好操作所需要的塑料吸管、培養(yǎng)瓶等，紫外線照射30min后使用；PBS磷酸鹽緩沖液、RPMI1640完全培養(yǎng)液及0.25%胰酶置于37°C溫箱中預(yù)溫，酒精擦拭后放入超凈臺；
[0022](2)戴好無菌無粉手套，取出培養(yǎng)瓶置于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，待細(xì)胞生長至大約90%融合度時(shí)即可消化細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)；
[0023](3)吸管吸棄舊培養(yǎng)液，用PBS緩沖液沖洗2遍，加入適量胰酶，胰酶的量以剛好覆蓋細(xì)胞即可，必要時(shí)放在37°C溫箱中孵育；
[0024](4)顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，待胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，肉眼觀察細(xì)胞呈沙狀脫落，表明細(xì)胞消化適度，吸棄消化液，加入完全培養(yǎng)液終止消化；
[0025](5)用吸管將消化下來的細(xì)胞輕柔吹打成細(xì)胞懸液。
[0026]2.細(xì)胞計(jì)數(shù)和種板
[0027](I)用75%的酒精棉球?qū)⒀蛴?jì)數(shù)板及蓋玻片擦拭干凈，將蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上；
[0028](2)將待測細(xì)胞懸液吹打均勻，然后吸取少量懸液沿蓋玻片邊緣緩緩滴入，要保證蓋玻片下充滿懸液，注意不能出現(xiàn)氣泡，也不能讓懸液流入旁邊凹槽中，靜置3min后計(jì)數(shù)；
[0029](3)將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡低倍鏡下觀察，計(jì)數(shù)4角4個(gè)大格(每個(gè)大格含有16個(gè)中格)的細(xì)胞總數(shù)，按下面公式計(jì)算細(xì)胞密度:
[0030]細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)/ml = (4個(gè)大格的細(xì)胞總數(shù)/4) X IO4 ；
[0031]3.劃痕實(shí)驗(yàn)
[0032](I)將細(xì)胞懸液分別注入孔2中，至細(xì)胞融合度約90%時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；[0033](2)用無菌鑷子夾住拿持部31輕輕將分隔條3取下，由于采用醫(yī)用高分子粘合劑，無細(xì)胞毒性，去除分隔條3后孔2底部無殘留，不影響細(xì)胞生長；
[0034](3)用PBS洗細(xì)胞3次，加入無血清培養(yǎng)基，顯微鏡下選取實(shí)驗(yàn)點(diǎn)并拍照記錄，37°C,5% C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)；
[0035](4)48小時(shí)后觀察，通過柵格4判斷細(xì)胞位置，從而判斷不同組別遷移速度，并拍
昭.[0036] (5)運(yùn)用Image-Pro Plus6.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)算相對劃痕面積。各組劃痕面積均以BEL7402細(xì)胞Oh劃痕面積為標(biāo)準(zhǔn)取相對值，相對劃痕面積=48h劃痕面積/Oh劃痕面積。
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，其特征是，包括板體和均勻分布在板體上的孔，孔設(shè)置為方形，在孔底部的外側(cè)設(shè)有柵格，柵格的中心線與孔的中軸線重合，在孔底部的內(nèi)側(cè)貼有分隔條，粘合的材料為醫(yī)用高分子粘合劑，分隔條縱向中心線與柵格的中心線重合，所述分隔條寬度為1mm，長度大于孔長度，在分隔條的一端設(shè)有拿持部。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，其特征是，所述的柵格間距為0.25mm0
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，其特征是，所述的分隔條的拿持部位于孔外且不高于板蓋，且末端設(shè)有拉環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一權(quán)項(xiàng)所述的一種細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)用的裝置，其特征是，所述的分隔條為材質(zhì)超薄透明塑料膠條。
【文檔編號】C12M1/00GK103952291SQ201410206458
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月15日
【發(fā)明者】曹莉莉, 宋艷, 王亮, 孔歉歉, 吳廣萍, 杜娟, 鄭盈盈, 鄭亞冰 申請人:山東省千佛山醫(yī)院