一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法
【專利摘要】一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其方法是：先通過培養(yǎng)容器采用馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng)百合灰霉病菌，經(jīng)滅菌鍋滅菌，靜置放涼為培養(yǎng)基配制；待測百合的采集：取現(xiàn)蕾初期的健康且無百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其上須有6-9片健康葉片，分別從上中下三個(gè)部位取完整百合葉片；病原菌采集：取百合典型感病葉片，分離純化病原菌，經(jīng)鑒定是灰霉菌后，在馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，接種健康的百合葉片；采用菌絲塊接種法、孢子液噴霧接種法或摩擦接種法接種；接種好病原菌的百合葉片葉柄傷口處用濕潤的棉花包裹，將接種好的百合葉片置于培養(yǎng)皿中，噴灑適量無菌水進(jìn)行保濕培養(yǎng)；然后分別于3、5、7、9d調(diào)查葉片發(fā)病情況觀察鑒定。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了在可控條件下準(zhǔn)確高效地鑒定不同百合品種對百合灰霉病的抗性。
【專利說明】一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于花卉抗病性鑒定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種快速人工接種離體鑒定百合 灰霉病抗性的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 百合)是百合科百合屬多年生草本球根植物，主要分布在亞洲東部、 歐洲、北美洲等北半球溫帶地區(qū)，全球已發(fā)現(xiàn)有上百個(gè)品種，其中55種產(chǎn)于中國，中國是其 最主要的起源地。百合除傳統(tǒng)藥用、食用和提取香精外，由于其花姿優(yōu)美，氣度不凡，已是 目前世界上最受歡迎的鮮切花之一。百合灰霉?。癱iflerea)是百合地上部的主 要病害，是抑制百合生產(chǎn)的重要因素之一。
[0003] 百合灰霉病病原菌為橢圓葡萄孢) Cbofc.)。每年 6-8月，為灰霉病多發(fā)季節(jié)，田間百合葉片枯死，花器褐腐，莖桿發(fā)黑，后期似火燒一樣。病株 地下鱗莖提早停止生長，導(dǎo)致產(chǎn)量下降，品質(zhì)變劣，嚴(yán)重制約了百合生產(chǎn)和發(fā)展。一般產(chǎn)量 損失209Γ30%，嚴(yán)重流行時(shí)可造成失收。
[0004] 不同百合品種對百合灰霉病的感、抗程度不同，目前鑒定百合抗病性的調(diào)查方法 多以田間噴霧處理為主，此法易受溫度、濕度、光照、空氣傳播等不定因素影響，造成鑒定結(jié) 果不準(zhǔn)確并且較難估計(jì)觀察時(shí)間。由于灰霉病原菌可在土壤及各種植體上存活生長，在寄 主被害部或以菌核遺留在土壤中越冬，故開放式活體接種易造成該病的擴(kuò)散。因此采用一 種可控的、科學(xué)有效的方法評價(jià)和鑒定不同百合品種的抗病性，對于抗源材料的篩選、抗病 品種的選育和抗性品種的利用具有十分重要的意義。
[0005] 長期以來，由于沒有篩選到抗源材料，致使百合抗灰霉病的育種工作進(jìn)展緩慢。綜 上可見，如果能找到離體條件下安全、快速的鑒定百合對百合灰霉病抗性的方法，可為篩選 抗病百合資源提供科學(xué)、有效的評價(jià)方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，高效地 鑒定不同百合品種對于百合灰霉病的抗性。
[0007] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下： A.培養(yǎng)容器準(zhǔn)備：采用平板培養(yǎng)皿作為離體培養(yǎng)容器，在培養(yǎng)皿中放置濾紙2-3張。
[0008] B.培養(yǎng)基配制：采用馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng)百合灰霉病菌，高壓滅菌鍋 121°C滅菌25分鐘，超凈工作臺上將滅菌后的培養(yǎng)基分裝到平板培養(yǎng)皿中，靜置放涼。
[0009] C.待測百合的采集：選取現(xiàn)蕾初期的健康且無百合灰霉病病原菌感染的百合株 苗，其上須有6-9片健康葉片，分別從上、中、下3個(gè)部位剪取完整的百合葉片。
[0010] D.病原菌采集：取百合典型感病葉片，分離純化病原菌，經(jīng)鑒定是灰霉菌后，在馬 鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，用于接種健康的百合葉片。
[0011] E.接種方法：采用以下的菌絲塊接種法，孢子液噴霧接種法或摩擦接種法來接種 百合灰霉病原菌； 所述菌絲塊接種法：用直徑為0. 5cm的打孔器將在馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上生長7d的 灰霉菌打成菌絲塊，將其接種于待測百合葉片； 所述孢子液噴霧接種法：用無菌水將在馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上生長7d的灰霉菌孢 子洗出，并調(diào)成濃度為

【權(quán)利要求】
1. 一種快速人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于： A. 培養(yǎng)容器準(zhǔn)備：采用平板培養(yǎng)皿作為離體培養(yǎng)容器，在培養(yǎng)皿中放置濾紙2-3張； B. 培養(yǎng)基配制：采用馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng)百合灰霉病菌，高壓滅菌鍋 121-125°C滅菌25分鐘，超凈工作臺上將滅菌后的培養(yǎng)基分裝到平板培養(yǎng)皿中，靜置放涼； C. 待測百合的采集：選取現(xiàn)蕾初期的健康且無百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其 上須有6-9片健康葉片，分別從上、中、下3個(gè)部位剪取完整的百合葉片； D. 病原菌采集：取百合典型感病葉片，分離純化病原菌，經(jīng)鑒定是灰霉菌后，在馬鈴薯 燕麥淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d，用于接種健康的百合葉片； E. 接種方法：采用以下的菌絲塊接種法，孢子液噴霧接種法或摩擦接種法來接種百合 灰霉病原菌； 所述菌絲塊接種法：用直徑為0. 5cm的打孔器將在馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上生長7d的 灰霉菌打成菌絲塊，將其接種于待測百合葉片； 所述孢子液噴霧接種法：用無菌水將在馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上生長7d的灰霉菌孢 子洗出，并調(diào)成濃度為
的菌懸液，噴霧接種于待測百合葉片； 所述摩擦接種法：挑取馬鈴薯燕麥淀粉培養(yǎng)基上生長7d的灰霉病原菌與適量石英砂 及無菌水混合均勻，用無菌的小指形管沾取調(diào)制好的孢子葉，避開主葉脈涂抹于待測葉片 上，摩擦數(shù)次至形成細(xì)小的傷口； F. 培養(yǎng)：接種好病原菌的百合葉片葉柄傷口處用濕潤的棉花包裹，將接種好的百合葉 片置于培養(yǎng)皿中，噴灑適量無菌水，于25°C (常溫）條件下保濕培養(yǎng)； G. 觀察鑒定：分別于3、5、7、9d調(diào)查葉片發(fā)病情況。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：在 E.接種方法中，選擇菌絲接種法接種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的人工接種離體鑒定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：所 述的平板培養(yǎng)皿為9cm平板培養(yǎng)皿。
【文檔編號】C12R1/645GK104087653SQ201410212525
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年5月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月20日
【發(fā)明者】陳麗靜, 楊妮娜, 孫少坤, 馬鏑, 孫紅梅, 蘇瑛, 郭志富, 馬慧 申請人:沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)