一株蠟樣芽胞桿菌及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一株蠟樣芽胞桿菌及其在酸性染料脫色中的應(yīng)用，此株菌分類名為蠟樣芽胞桿菌J-6（BacilluscereusJ-6），已于2014年4月9日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏號(hào)為CCTCC?NO.M2014119。本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌對(duì)印染污水有更好的適應(yīng)性，更有應(yīng)用價(jià)值；脫色效果好，所需時(shí)間短；在好氧及厭氧條件下均有良好的脫色效果，應(yīng)用范圍更廣。
【專利說(shuō)明】一株蠟樣芽胞桿菌及其制備方法、應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株蠟樣芽胞桿菌及其制備方法、應(yīng)用，尤其是在酸性染料脫色中的 應(yīng)用，屬于微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 酸性染料(Acid Dyes)是一類結(jié)構(gòu)上帶有酸性基團(tuán)的水溶性染料，在酸性介質(zhì)中 進(jìn)行染色。酸性染料大多數(shù)含有磺酸鈉鹽，能溶于水，色澤鮮艷、色譜齊全。主要用于羊毛、 蠶絲和錦綸等染色，也可用于皮革、紙張、墨水等方面。對(duì)纖維素纖維一般無(wú)著色力。
[0003] 酸性染料按其化學(xué)結(jié)構(gòu)和染色條件的不同分為強(qiáng)酸性、弱酸性、酸性媒介、酸性絡(luò) 合染料等。酸性染料有偶氮型、蒽醌型、三芳甲烷型等，但大部分屬于偶氮染料。酸性絡(luò)合染 料的生產(chǎn)與一般染料相似，但必須增加一步與金屬絡(luò)合的工藝，例如中性灰2BL，先由2-氨 基苯酚-4-磺酰胺重氮化，與1-乙酰氨基-7-萘酚偶合，然后再用水楊酸鉻鈉絡(luò)合而成。
[0004] 很多細(xì)菌能夠?qū)θ玖线M(jìn)行有效降解和脫色，這些細(xì)菌主要分布在氣單胞菌屬、假 單胞菌屬、芽胞桿菌屬、紅球菌屬、志賀菌屬和克雷伯氏菌屬中，多為好氧生長(zhǎng)，但在厭氧條 件下可以產(chǎn)生偶氮還原酶，表現(xiàn)出最大的脫色活性。細(xì)菌在厭氧條件下產(chǎn)生的偶氮還原酶 具有較低的底物專一性，能夠還原染料分子中高親電子的偶氮鍵，產(chǎn)生無(wú)色的芳香胺。產(chǎn) 生的芳香胺會(huì)阻止厭氧礦化的進(jìn)一步發(fā)生，并且在環(huán)境中滯留會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生毒性和致突變 性。一些好氧細(xì)菌能以這些芳香胺作為食物，將其徹底礦化。據(jù)此設(shè)計(jì)的序列厭氧-好氧系 統(tǒng)處理含染料廢水獲得一定成功，并得到一定應(yīng)用。在好氧條件下能夠?qū)θ玖线M(jìn)行降解脫 色的細(xì)菌很少，同時(shí)，細(xì)菌對(duì)染料的好氧脫色往往對(duì)染料分子結(jié)構(gòu)具有高度專一性，是微生 物對(duì)某種染料長(zhǎng)期適應(yīng)的結(jié)果，如Wong等人報(bào)道的腫Ofliae RS213能夠在 好氧條件下產(chǎn)生偶氮還原酶，使偶氮鍵斷裂脫色。Zissi等人分離到的 和imas ? a/iopAi/ia的混合菌可以降解ρ2氨基偶氮苯。
[0005] 然而，Kodam等人報(bào)道了一株未鑒定細(xì)菌ΚΜΚ48在嚴(yán)格好氧的條件下可以對(duì)多種 染料完全降解脫色。許玫英等人從活性污泥中分離到一株對(duì)偶氮染料具有廣譜降解性能的 新種一脫色希瓦氏菌ofeco/oraiioflis) S12T，并被證明胞內(nèi)含有組成型酶。
[0006] 因此，為解決上述技術(shù)問(wèn)題，確有必要提供一種新的一株蠟樣芽胞桿菌及其脫色 應(yīng)用，以克服現(xiàn)有技術(shù)中的所述缺陷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的第一目的在于提供一種易于獲得、脫色效果好且 對(duì)印染廢水適應(yīng)性好的一株蠟樣芽胞桿菌。
[0008] 本發(fā)明的第二目的在于提供一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的第三目的在于提供一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法。
[0010]為實(shí)現(xiàn)上述第一目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一株蠟樣芽胞桿菌，此株菌分類 名為蠟樣芽胞桿菌J-6 (Bacillus cereus J-6)，已于2014年4月9日保藏于中國(guó)典型培 養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏號(hào)為CCTCC NO. Μ 2014119。 toon]為實(shí)現(xiàn)上述第二目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用，其用 于酸性染料脫色。
[0012] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用進(jìn)一步為：其接種量為0.5-2%，溫度為 20-40°C，pH為6-8,染料濃度為50-100mg/L，搖床轉(zhuǎn)速為150-200r/min，24h后檢測(cè)其脫色 效率。
[0013] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用還可為：其接種量為0. 5-2%，溫度為20-40°C， pH為6-8,染料濃度為50-100mg/L，在培養(yǎng)箱中靜置24h后檢測(cè)其脫色效率。
[0014] 為實(shí)現(xiàn)上述第三目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法， 其包括如下工藝步驟： 1) ，富集：曝氣池中取曝氣池水，并加入富集培養(yǎng)基中，在180r/min的速度下攪拌， 30°C培養(yǎng)7天，7天后取富集液，并加入富集培養(yǎng)基中，如此重復(fù)2次； 2) ，篩選：取富集液進(jìn)行稀釋涂平板，并在篩選培養(yǎng)基上以30°C培養(yǎng)1-2周，直至平板 上長(zhǎng)出菌落； 3) ，分離純化和分子鑒定：將平板上長(zhǎng)出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上進(jìn)行劃線純化， 30°C培養(yǎng)24 - 48h，挑長(zhǎng)出的單菌落重復(fù)劃線3次；單菌落培養(yǎng)成菌液制成甘油管保存； 4) ，復(fù)篩：配制降解培養(yǎng)基，接種純化的菌株，接種量為1%，培養(yǎng)后查看脫色效果，挑選 出具有脫色效果的菌株，制成甘油管保存。
[0015] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法進(jìn)一步為：步驟1)中，富集培養(yǎng)基中包含 如下成分（單位為 g/L):蛋白胨 2,牛肉膏 3，NaCl 2，KH2P04 0. 5，MgS04 0. 25g，KN03 0. 5， FeS04. 7H20 0.01，CaCl 0.005,酸性染料 0.05。
[0016] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法進(jìn)一步為：步驟1)中，水和富集培養(yǎng)基的 量為1:10 ;富集液和富集培養(yǎng)基的量為1:100。
[0017] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法進(jìn)一步為：步驟2)中，篩選培養(yǎng)基中包含 如下成分（單位為 g/L): NaCl 2，KH2P04 0.5，MgS04 0.25g，KN03 0.5，F(xiàn)eS04. 7H20 0.01， CaC12 0· 005,酸性染料 0· 05,瓊脂 1. 5-2%。
[0018] 本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法還可為：步驟4)中，降解培養(yǎng)基中包含如 下成分（單位為g/L):蛋白胨2,牛肉膏3,蔗糖2, NaCl 2, KH2P04 0. 5, KN03 0. 5, MgS04 0.25g，F(xiàn)eS04. 7H20 0.01，CaC12 0.005,酸性染料 0.05。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果： 1.本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌脫色效果好，所需時(shí)間短；在好氧及厭氧條件下均有良 好的脫色效果，應(yīng)用范圍更廣。
[0020] 2.本發(fā)明的一株蠟樣芽胞桿菌篩選自處理印染污水的曝氣池活性污泥中，對(duì)印 染污水有更好的適應(yīng)性，更有應(yīng)用價(jià)值。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 本發(fā)明為一株蠟樣芽胞桿菌，此株菌分類名為蠟樣芽胞桿菌J-6 (Bacillus cereus J-6)，已于2014年4月9日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏號(hào)為 CCTCC Ν0.Μ 2014119,保藏地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)。
【權(quán)利要求】
1. 一株蠟樣芽胞桿菌，其特征在于：此株菌分類名為蠟樣芽胞桿菌J-6 OfeciBM carets J-6)，已于2014年4月9日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏號(hào)為 CCTCC NO. Μ 2014119〇
2. 如權(quán)利要求1所述的一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用，其特征在于：用于酸性染料脫色。
3. 如權(quán)利要求2所述的一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用，其特征在于：其接種量為0.5-2%，溫 度為20-40°C，pH為6-8,染料濃度為50-100mg/L，搖床轉(zhuǎn)速為150-200r/min，24h后檢測(cè)其 脫色效率。
4. 如權(quán)利要求3所述的一株蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用，其特征在于：其接種量為0.5-2%，溫 度為20-40°C，pH為6-8,染料濃度為50-100mg/L，在培養(yǎng)箱中靜置24h后檢測(cè)其脫色效率。
5. -株蠟樣芽胞桿菌的制備方法，其特征在于：包括如下工藝步驟： 1) ，富集：曝氣池中取曝氣池水，并加入富集培養(yǎng)基中，在180r/min的速度下攪拌， 30°C培養(yǎng)7天，7天后取富集液，并加入富集培養(yǎng)基中，如此重復(fù)2次； 2) ，篩選：取富集液進(jìn)行稀釋涂平板，并在篩選培養(yǎng)基上以30°C培養(yǎng)1-2周，直至平板 上長(zhǎng)出菌落； 3) ，分離純化和分子鑒定：將平板上長(zhǎng)出的菌落在牛肉膏蛋白胨平板上進(jìn)行劃線純化， 30°C培養(yǎng)24 - 48h，挑長(zhǎng)出的單菌落重復(fù)劃線3次；單菌落培養(yǎng)成菌液制成甘油管保存； 4) ，復(fù)篩：配制降解培養(yǎng)基，接種純化的菌株，接種量為1%，培養(yǎng)后查看脫色效果，挑選 出具有脫色效果的菌株，制成甘油管保存。
6. 如權(quán)利要求5所述的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法，其特征在于：步驟1)中，富 集培養(yǎng)基中包含如下成分(單位為g/L):蛋白胨2,牛肉膏3, NaCl 2, KH2P04 0. 5, MgS04 0.25g，KN03 0.5, FeS04. 7H20 0.01，CaCl 0.005,酸性染料 0.05。
7. 如權(quán)利要求5所述的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法，其特征在于：步驟1)中，水和 富集培養(yǎng)基的量為1:10 ;富集液和富集培養(yǎng)基的量為1:100。
8. 如權(quán)利要求5所述的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法，其特征在于：步驟2)中，篩選培 養(yǎng)基中包含如下成分（單位為 g/L) : NaCl 2, KH2P04 0. 5, MgS04 0. 25, KN03 0. 5, FeS04. 7H20 0· 01，CaC12 0· 005,酸性染料 0· 05,瓊脂 1· 5-2%。
9. 如權(quán)利要求5所述的一株蠟樣芽胞桿菌的制備方法，其特征在于：步驟4)中，降解培 養(yǎng)基中包含如下成分(單位為g/L):蛋白胨2,牛肉膏3,蔗糖2，NaCl 2，ΚΗ2Ρ04 0. 5，ΚΝ03 0.5，MgS04 0.25g，F(xiàn)eS04. 7Η20 0.01，CaC12 0.005,酸性染料 0.05。
【文檔編號(hào)】C12R1/085GK104059864SQ201410223612
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】王海云, 任燁, 張翼 申請(qǐng)人:紹興柯橋江濱水處理有限公司