一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種長裙竹蓀液體發(fā)酵法制備綠色防腐劑的方法，該方法包括如下步驟：步驟1，制備長裙竹蓀液體發(fā)酵培養(yǎng)基；步驟2，培養(yǎng)液體發(fā)酵培養(yǎng)基；步驟3，收集長裙竹蓀發(fā)酵液，后進(jìn)行干燥，濃縮至原有體積的1/10，用3倍體積的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白質(zhì)，離心后棄去沉淀，所得上清液減壓濃縮至原體積后加3倍體積的無水乙醇沉淀未除盡的多糖及蛋白質(zhì)，重復(fù)2次；步驟4，將步驟3所得上清液減壓濃縮至無乙醇為，將濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到竹筍防腐劑顆粒。本發(fā)明利用長裙竹蓀深層發(fā)酵液開發(fā)的天然防腐劑是一種理想的綠色防腐劑，可作為人工化學(xué)合成防腐劑的替代產(chǎn)品。
【專利說明】一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明提供一種竹筍液體發(fā)酵法制備綠色防腐劑的方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]長裙竹蘇學(xué)名Dictyophora indusiata (Vent, ex Pers) Fisch,俗名有竹參、竹笙、面紗菌、網(wǎng)紗菌、竹姑娘。長裙竹蓀隸屬于腹菌綱、鬼筆目、鬼筆科、長裙竹蓀屬。長裙竹蓀是寄生在枯竹根部的一種隱花菌類，稀有珍貴，故有“真菌之花”、“京果之王”等美稱。長裙竹蓀營養(yǎng)豐富，香味濃郁，滋味鮮美，自古就被列為“草八珍”之一。
[0003]據(jù)測定，干長裙竹蓀中含粗蛋白19.4%、粗脂肪2.6%，可溶性無氮傾倒物總量60.4%，其中菌糖4.2%、粗纖維8.4%，灰分9.3%。長裙竹蓀游離氨基酸含量比較低，約占干品重量的0.5%:有95%以上的氨基酸是以菌體蛋白形態(tài)存在著。蛋白質(zhì)含量較高，干品種含有13-17%的蛋白質(zhì)，是優(yōu)越的植物蛋白和營養(yǎng)源。其中以天冬氨酸、谷氨酸和亮氨酸居多，三者約占氨基酸總量的三分之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明研究的長裙竹蓀深層發(fā)酵液萃取物對引起食品腐敗的常見的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、霉菌和酵母菌等具有顯著的抑菌活性，抑制效果顯著優(yōu)于幾種常見的化學(xué)食品防腐劑。因此，利用長裙竹蓀深層發(fā)酵液開發(fā)的天然防腐劑是一種理想的綠色防腐劑，可作為人工化學(xué)合成防腐劑的替代產(chǎn)品。
[0005]實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)解決方案如下:
一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，包括:
步驟1，制備長裙竹蓀液體發(fā)酵培養(yǎng)基，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料包括玉米淀粉、黃豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素BI ；
步驟2，培養(yǎng)液體發(fā)酵培養(yǎng)基，包括如下步驟:將裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶在
0.lMPa，121°C條件下滅菌20min，接長裙竹蓀斜面菌種兩塊，接著在28°C條件下?lián)u床靜止培養(yǎng)5天，再將轉(zhuǎn)速調(diào)整到180r/min，在28°C條件下?lián)u床培養(yǎng)5天后，終止發(fā)酵，用8層紗布過濾，發(fā)酵液離心后收集上清液備用；
步驟3，收集長裙竹蓀發(fā)酵液，干燥后濃縮至原有體積的1/10，用3倍體積的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白質(zhì)，離心后棄去沉淀，所得上清液減壓濃縮至原體積后加3倍體積的無水乙醇沉淀未除盡的多糖及蛋白質(zhì)，重復(fù)2次；
步驟4，將步驟3所得上清液減壓濃縮除去無水乙醇得濃縮液，將濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到竹筍防腐劑顆粒。
[0006]所述步驟I中所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料按下列配比:玉米淀粉20g，黃豆粉1g,葡萄糖20g,酵母膏5g,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,維生素B150mg/L。
[0007]所述步驟2中的長裙竹蘇斜面菌種面積為IcmX Icm,離心速度控制在5000r/min。
[0008]所述步驟3中采用真空冷凍干燥法干燥所收集的長裙竹蓀發(fā)酵液。
[0009]所述步驟3中用于沉淀干燥濃縮后長裙竹蓀發(fā)酵液的乙醇為濃度95%的乙醇溶液。
[0010]所述步驟3中噴霧干燥后的長裙竹蘇發(fā)酵液在8000r/min的條件下離心lOmin。
[0011]所述步驟4中的噴霧干燥，將干燥溫度控制在180°C ?192°C。
[0012]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明中的長裙竹蓀深層發(fā)酵液萃取物對引起食品腐敗的常見的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、霉菌和酵母菌等具有顯著的抑菌活性，抑制效果顯著優(yōu)于幾種常見的化學(xué)食品防腐劑，本發(fā)明利用長裙竹蓀深層發(fā)酵液開發(fā)的天然防腐劑是一種理想的綠色防腐劑，可作為人工化學(xué)合成防腐劑的替代產(chǎn)品。

【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0014]本發(fā)明公開一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，包括:
步驟1，制備長裙竹蓀液體發(fā)酵培養(yǎng)基，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料包括玉米淀粉、黃豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素BI ；
步驟2，培養(yǎng)液體發(fā)酵培養(yǎng)基，包括如下步驟:將裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶在
0.lMPa，121°C條件下滅菌20min，接長裙竹蓀斜面菌種兩塊，接著在28°C條件下?lián)u床靜止培養(yǎng)5天，再將轉(zhuǎn)速調(diào)整到180r/min，在28°C條件下?lián)u床培養(yǎng)5天后，終止發(fā)酵，用8層紗布過濾，發(fā)酵液離心后收集上清液備用；
步驟3，收集長裙竹蓀發(fā)酵液，干燥后濃縮至原有體積的1/10，用3倍體積的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白質(zhì)，離心后棄去沉淀，所得上清液減壓濃縮至原體積后加3倍體積的無水乙醇沉淀未除盡的多糖及蛋白質(zhì)，重復(fù)2次；
步驟4，將步驟3所得上清液減壓濃縮除去無水乙醇得濃縮液，將濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到竹筍防腐劑顆粒。
[0015]所述步驟I中所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料按下列配比:玉米淀粉20g，黃豆粉1g,葡萄糖20g,酵母膏5g,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,維生素B150mg/L。
[0016]所述步驟2中的長裙竹蘇斜面菌種面積為IcmX Icm,離心速度控制在5000r/min。
[0017]所述步驟3中采用真空冷凍干燥法干燥所收集的長裙竹蓀發(fā)酵液。
[0018]所述步驟3中用于沉淀干燥濃縮后長裙竹蓀發(fā)酵液的乙醇為濃度95%的乙醇溶液。
[0019]所述步驟3中噴霧干燥后的長裙竹蓀發(fā)酵液在8000r/min的條件下離心lOmin。
[0020]所述步驟4中的噴霧干燥，將干燥溫度控制在180°C "192°C。
[0021]竹蓀防腐劑顆粒抑制活性實(shí)驗(yàn)
將竹筍防腐劑顆粒稀釋成lOOmg/mL的溶液進(jìn)行試驗(yàn)，以食品中常用的同等濃度的苯甲酸鈉、山梨酸鉀等防腐劑作為陽性對照，以無菌注射用水作為空白對照。
[0022]實(shí)施例1抑制細(xì)菌活性試驗(yàn)(圓形制片擴(kuò)散法)
試驗(yàn)證明100 mg/mL的竹蓀防腐劑對引起食品腐敗的常見的芽孢桿菌(嗜熱脂肪芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、嗜熱解糖梭狀芽孢桿菌)、非芽孢細(xì)菌(液化鏈球菌、糞鏈球菌和嗜熱鏈球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌)等具有明顯的抑制作用，可延長食品保質(zhì)期一倍以上。
[0023]實(shí)施例2抑制細(xì)菌活性試驗(yàn)(菌絲生長速率法)
試驗(yàn)證明100 mg/mL的竹蓀防腐劑對引起食品變質(zhì)的霉菌(灰緣曲霉、匍匐曲霉、咖啡色串孢霉、乳卵孢霉)等具有明顯的抑制作用，可延長食品保質(zhì)期一倍以上。
[0024]實(shí)施例3抑制細(xì)菌活性試驗(yàn)(菌落計數(shù)法)
試驗(yàn)證明100 mg/mL的竹蓀防腐劑對引起食品變質(zhì)的霉酵母菌(魯氏酵母、羅氏酵母、蜂蜜酵母、煉乳球擬酵母)等具有明顯的抑制作用，可延長食品保質(zhì)期一倍以上。
[0025]本發(fā)明中的長裙竹蓀深層發(fā)酵液萃取物對引起食品腐敗的常見的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、霉菌和酵母菌等具有顯著的抑菌活性，抑制效果顯著優(yōu)于幾種常見的化學(xué)食品防腐劑，本發(fā)明利用長裙竹蓀深層發(fā)酵液開發(fā)的天然防腐劑是一種理想的綠色防腐齊IJ，可作為人工化學(xué)合成防腐劑的替代產(chǎn)品。
【權(quán)利要求】
1.一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:包括: 步驟1，制備長裙竹蓀液體發(fā)酵培養(yǎng)基，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料包括玉米淀粉、黃豆粉、葡萄糖、酵母膏、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素BI ； 步驟2，培養(yǎng)液體發(fā)酵培養(yǎng)基，包括如下步驟:將裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶在0.lMPa，121°C條件下滅菌20min，接長裙竹蓀斜面菌種兩塊，接著在28°C條件下?lián)u床靜止培養(yǎng)5天，再將轉(zhuǎn)速調(diào)整到180r/min，在28°C條件下?lián)u床培養(yǎng)5天后，終止發(fā)酵，用8層紗布過濾，發(fā)酵液離心后收集上清液備用； 步驟3，收集長裙竹蓀發(fā)酵液，干燥后濃縮至原有體積的1/10，用3倍體積的乙醇溶液沉淀多糖及蛋白質(zhì)，離心后棄去沉淀，所得上清液減壓濃縮至原體積后加3倍體積的無水乙醇沉淀未除盡的多糖及蛋白質(zhì)，重復(fù)2次； 步驟4，將步驟3所得上清液減壓濃縮除去無水乙醇得濃縮液，將濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得到竹筍防腐劑顆粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟I中所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基原材料按下列配比:玉米淀粉20g，黃豆粉10g，葡萄糖20g,酵母膏5g,磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,維生素B150mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟2中的長裙竹蘇斜面菌種面積為IcmX Icm,離心速度控制在5000r/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟3中采用真空冷凍干燥法干燥所收集的長裙竹蓀發(fā)酵液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟3中用于沉淀干燥濃縮后長裙竹蓀發(fā)酵液的乙醇為濃度95%的乙醇溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟3中噴霧干燥后的長裙竹蓀發(fā)酵液在8000r/min的條件下離心lOmin。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種長裙竹蓀液體發(fā)酵制備綠色防腐劑的方法，其特征在于:所述步驟4中的噴霧干燥，將干燥溫度控制在180°C ?192°C。
【文檔編號】A23L3/3463GK104041910SQ201410248272
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月6日
【發(fā)明者】傅苗青, 周白水, 朱旭偉 申請人:寧波大生祥中醫(yī)投資管理有限公司, 浙江磐谷藥源有限公司