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獲得干細(xì)胞及其數(shù)據(jù)的方法

文檔序號(hào):480027閱讀:813來(lái)源:國(guó)知局
獲得干細(xì)胞及其數(shù)據(jù)的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種獲得干細(xì)胞的方法,其包括:(a)讓一個(gè)體(例如人或動(dòng)物)進(jìn)行或接受一行為;(b)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該個(gè)體等待一段預(yù)定的時(shí)間(例如30分鐘到2小時(shí)之間);(c)在該個(gè)體等待該段預(yù)定的時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得一組織樣本(例如周邊血液樣本);以及(d)從該組織樣本收集或收獲干細(xì)胞。該行為可包括服用一種草藥或是一種含有褐藻糖膠的物質(zhì)。步驟(d)所獲得的干細(xì)胞可以用在植牙手術(shù)中。
【專利說(shuō)明】獲得干細(xì)胞及其數(shù)據(jù)的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是有關(guān)一種獲得細(xì)胞及其資料的方法,尤指一種獲得干細(xì)胞及其數(shù)據(jù)的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著干細(xì)胞研究的發(fā)展,干細(xì)胞已經(jīng)被視為是預(yù)防醫(yī)學(xué)的先趨,再加上近年來(lái)相 關(guān)產(chǎn)業(yè)也加速成長(zhǎng),突顯人們對(duì)于干細(xì)胞在醫(yī)療應(yīng)用上的需求。由于干細(xì)胞負(fù)責(zé)體內(nèi)細(xì)胞 的修復(fù)和更新,所以干細(xì)胞具有維持身體器官與組織健康的功能。因此,干細(xì)胞可以視為是 維持整體健康的決定性因素,并藉由干細(xì)胞開啟審視健康的新窗口。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明主要目的,在于提供多種方法,其是先培養(yǎng)、活化(或催化)、調(diào)動(dòng)、刺激、生 成或增加人或動(dòng)物體內(nèi)的干細(xì)胞(如多功能干細(xì)胞),然后從人或動(dòng)物的周邊血液中獲得、 收集或收獲干細(xì)胞。
[0004] 本發(fā)明另一目的,是在提供多種獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)(如某種干細(xì)胞在取自人或動(dòng)物 的組織樣本中每單位體積的數(shù)量)的方法。
[0005] 為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供一種獲得干細(xì)胞的方法,其包括以下步驟:(1)讓一 個(gè)體(如人或動(dòng)物)進(jìn)行或接受一行為;(2)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,使該個(gè)體 等待一段預(yù)定時(shí)間;(3)在該個(gè)體等待該段預(yù)定時(shí)間之后,從該個(gè)體取得一組織樣本;以及 (4)從該組織樣本收集復(fù)數(shù)個(gè)干細(xì)胞。該行為可包括服用一種草藥或是一種含有褐藻糖膠 的物質(zhì)。該段預(yù)定時(shí)間可以是介于30分鐘到2小時(shí)之間、介于1小時(shí)到12小時(shí)之間或是 介于12小時(shí)到36小時(shí)之間。該組織樣本可包括該個(gè)體的周邊血液。該些干細(xì)胞可包括復(fù) 數(shù)個(gè)多功能干細(xì)胞(例如尺寸介于〇. 1微米至6微米之間的CD9(+),CD349(+)細(xì)胞、尺寸 介于0. 1微米至6微米之間的⑶349(+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的Lgr5(+) 細(xì)胞、尺寸介于〇. 1微米至6微米之間的CD9(-),SSEA4(+)細(xì)胞)。上述獲得干細(xì)胞的方法 可以還包括,在收集該些干細(xì)胞之后,將該些干細(xì)胞儲(chǔ)存在溫度低于攝氏0度的環(huán)境中。該 些干細(xì)胞可以被用在植牙手術(shù)、整形手術(shù)、癌癥治療、組織修復(fù)治療、膝半月板損傷治療或 關(guān)節(jié)炎治療。
[0006] 為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供一種獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法,其包括以下步驟:(1) 處理從一個(gè)體(如人或動(dòng)物)獲得的一組織樣本,以獲得一測(cè)試樣本;(2)使用血球計(jì)數(shù) 器(hemocytometer)計(jì)算該測(cè)試樣本的第一部分中第一群顆粒的數(shù)量,進(jìn)而獲得第一數(shù) 據(jù);(3)使用流式細(xì)胞儀(flow cytometer)計(jì)算該測(cè)試樣本的第二部分中第二群顆粒里 的一種干細(xì)胞的數(shù)量,進(jìn)而獲得第二數(shù)據(jù);以及(4)根據(jù)該第一數(shù)據(jù)和該第二數(shù)據(jù),獲得第 三數(shù)據(jù)。該組織樣本可包括該個(gè)體的周邊血液。該第一群顆粒的尺寸和該第二群顆粒的 尺寸是大于或?qū)嵸|(zhì)上等于一門坎尺寸(threshold size),該門坎尺寸可以是1微米。該 第二群顆??砂◤?fù)數(shù)個(gè)白血球、復(fù)數(shù)個(gè)紅血球、復(fù)數(shù)個(gè)血小板以及/或是復(fù)數(shù)個(gè)粒細(xì)胞 (granulocyte)。該種干細(xì)胞可包括一種多潛能干細(xì)胞或是一種多功能干細(xì)胞(如尺寸介 于0. 1微米至6微米之間的⑶9 (+),⑶349 (+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的 ⑶349(+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的Lgr5(+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微 米之間的CD9(-),SSEA4(+)細(xì)胞)。該第一數(shù)據(jù)可包括該第一群顆粒在該測(cè)試樣本中每單 位體積的數(shù)量。該第二數(shù)據(jù)可包括該種干細(xì)胞的數(shù)量占該第二群顆粒的數(shù)量的百分比。該 第三數(shù)據(jù)可包括該種干細(xì)胞在該組織樣本中每單位體積的數(shù)量。
[0007] 為達(dá)到上述目的,本發(fā)明提供一種獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法,其包括下列步驟:(1) 處理從一個(gè)體(如人或動(dòng)物)獲得的一組織樣本,以獲得一測(cè)試樣本;(2)計(jì)算該測(cè)試樣本 的第一部分中第一群顆粒的數(shù)量,進(jìn)而獲得第一數(shù)據(jù);(3)計(jì)算該測(cè)試樣本的第二部分中 第二群顆粒里的一種干細(xì)胞的數(shù)量,進(jìn)而獲得第二數(shù)據(jù);以及(4)根據(jù)該第一數(shù)據(jù)和該第 二數(shù)據(jù),獲得第三數(shù)據(jù)。該組織樣本可包括該個(gè)體的周邊血液。該第一群顆粒的尺寸和該 第二群顆粒的尺寸是大于或?qū)嵸|(zhì)上等于一門坎尺寸,該門坎尺寸可以是1微米。該第二群 顆??砂◤?fù)數(shù)個(gè)白血球、復(fù)數(shù)個(gè)紅血球、復(fù)數(shù)個(gè)血小板以及/或是復(fù)數(shù)個(gè)粒細(xì)胞。該種干 細(xì)胞可包括一種多潛能干細(xì)胞或是一種多功能干細(xì)胞(如尺寸介于〇. 1微米至6微米之間 的⑶9 (+),⑶349 (+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶349 (+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1 微米至6微米之間的Lgr5(+)細(xì)胞、尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶9(-), SSEA4(+) 細(xì)胞)。該第一數(shù)據(jù)可包括該第一群顆粒在該測(cè)試樣本中每單位體積的數(shù)量。該第二數(shù)據(jù) 可包括該種干細(xì)胞數(shù)量占該第二群顆粒數(shù)量的百分比。該第三數(shù)據(jù)可包括該種干細(xì)胞在該 組織樣本中每單位體積的數(shù)量。上述獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法可以還包括,使用血球計(jì)數(shù)器 進(jìn)行步驟(2),以及使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行步驟(3)。
[0008] 現(xiàn)將經(jīng)由對(duì)說(shuō)明性實(shí)施例、隨附圖式及申請(qǐng)專利范圍的以下詳細(xì)描述的評(píng)述,使 本發(fā)明以及其他組件、步驟、特征、效益及優(yōu)勢(shì)變得明朗。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為純化程序的流程示意圖。
[0010] 圖2為純化程序的流程示意圖。
[0011] 圖3為純化程序的流程不意圖。
[0012] 圖4為純化程序的流程示意圖。
[0013] 圖5為純化程序的流程示意圖。
[0014] 圖6為純化程序的流程示意圖。
[0015] 圖7A為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種從一個(gè)體的一組織樣本中獲得、 收集或收獲大量干細(xì)胞的方法的流程圖。
[0016] 圖7B為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種發(fā)現(xiàn)或偵測(cè)一種或多種新種類干 細(xì)胞的方法的流程圖。
[0017] 圖7C為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種確認(rèn)、決定或評(píng)估一種或多種行 為或刺激對(duì)于治愈或治療患有一種特定疾病的一個(gè)體的效用的方法的流程圖。
[0018] 圖8A至圖8F為三位人類受試者在口服30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品之前與之后的干細(xì) 胞資料。
[0019] 圖9為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種獲得人體干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法的流 程圖。
[0020] 圖10繪示用于流式細(xì)胞儀的前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖。
[0021] 圖11為一褐藻糖膠補(bǔ)充品的內(nèi)容/成分信息。
[0022] 圖12為褐藻糖膠的部分分子結(jié)構(gòu)。
[0023] 圖13為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種獲得個(gè)體干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法的流 程圖。
[0024] 圖14A至圖14C為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種用于獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)的 測(cè)量或分析方法的流程圖。
[0025] 圖15繪示一血球計(jì)數(shù)器的一微小方格圖案(microscopic grid)。
[0026] 圖16繪示用于流式細(xì)胞儀的前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖。
[0027] 圖17A為一位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的干細(xì)胞 資料。
[0028] 圖17B為一流式細(xì)胞儀的一熒光分布圖,其顯示出在細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高 的區(qū)域中細(xì)胞的熒光光強(qiáng)度分布。
[0029] 圖18為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種獲得一實(shí)驗(yàn)組參與者在四個(gè)特定 時(shí)間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法的流程圖。
[0030] 圖19為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示一種獲得一對(duì)照組參者在四個(gè)特定時(shí) 間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法的流程圖。
[0031] 圖20A至圖20J為五位人類受試者在口服30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品之前與之后的干 細(xì)胞資料。
[0032] 圖20K與圖20L為一位人類受試者在沒有口服30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品之前與之后 的干細(xì)胞資料。
[0033] 符號(hào)說(shuō)明
[0034] 10收集袋
[0035] 11過(guò)濾器
[0036] 12a 試管
[0037] 12b 試管
[0038] 12c 試管
[0039] 13離心機(jī)
[0040] 14a試驗(yàn)樣本
[0041] 14b試驗(yàn)樣本
[0042] 14c試驗(yàn)樣本
[0043] 15a分析儀器
[0044] 15b分析儀器
[0045] 16紅血球分解液
[0046] 19貯存器
[0047] 20a 試管
[0048] 20b 試管
[0049] 20c 試管
[0050] 21a試驗(yàn)樣本
[0051] 21b試驗(yàn)樣本
[0052] 21c試驗(yàn)樣本
[0053] 22紅血球分解液
[0054] 1-20 步驟
[0055] 21-43 步驟
[0056] 49-59 步驟
[0057] 61-70 步驟
[0058] 77垂直線
[0059] 81垂直虛線
[0060] 82水平虛線
[0061] 100a 1毫米的正方形
[0062] 100b 1毫米的正方形
[0063] 100c 1毫米的正方形
[0064] 100d 1毫米的正方形
[0065] 101-104 步驟
[0066] 雖然在圖式中已描繪某些實(shí)施例,但本領(lǐng)域技術(shù)人應(yīng)了解,所描繪的實(shí)施例為說(shuō) 明性的,且可在本發(fā)明的范疇內(nèi)構(gòu)想并實(shí)施彼等所示實(shí)施例的變化以及本文所述的其他實(shí) 施例。

【具體實(shí)施方式】
[0067]圖式揭示本發(fā)明的說(shuō)明性實(shí)施例。其并未闡述所有實(shí)施例。可另外或替代使用其 他實(shí)施例。為節(jié)省空間或更有效地說(shuō)明,可省略顯而易見或不必要的細(xì)節(jié)。相反,可實(shí)施一 些實(shí)施例而不揭示所有細(xì)節(jié)。當(dāng)相同數(shù)字或標(biāo)號(hào)出現(xiàn)在不同圖式中時(shí),其是指相同或類似 組件或步驟。
[0068] 當(dāng)以下描述連同隨附圖式一起閱讀時(shí),可更充分地理解本發(fā)明的態(tài)樣,該等隨附 圖式的性質(zhì)應(yīng)視為說(shuō)明性而非限制性的。該等圖式未必按比例繪制,而是強(qiáng)調(diào)本發(fā)明的原 理。
[0069] 以下將先介紹本發(fā)明的各種定義與描述,然后再詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的各種實(shí)施例。
[0070] 尺寸(Z)的定義:
[0071] 在本發(fā)明中,所有后續(xù)段落提及的尺寸(Z)是用于描述細(xì)胞(例如干細(xì)胞或生物 細(xì)胞)的大小。尺寸(Z)可以(但不限定)被描述為或是定義為:(1)細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域或 干細(xì)胞領(lǐng)域?qū)τ诩?xì)胞的大小或代表長(zhǎng)度的傳統(tǒng)定義、(2)細(xì)胞的直徑(特別是當(dāng)細(xì)胞的形 狀實(shí)質(zhì)上為球體時(shí))、(3)細(xì)胞的長(zhǎng)軸長(zhǎng)度(特別是當(dāng)細(xì)胞的形狀實(shí)質(zhì)上為橢圓體時(shí))、(4) 細(xì)胞的寬度(當(dāng)細(xì)胞的形狀近似于正方體時(shí))、(5)細(xì)胞的長(zhǎng)度(當(dāng)細(xì)胞的形狀近似于長(zhǎng)方 體時(shí))或是(6)細(xì)胞的最大橫斷面或橫向尺寸。藉由光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡(例如掃描 式電子顯微鏡)獲得的細(xì)胞影像或是藉由流式細(xì)胞儀(flow cytometer)獲得的數(shù)據(jù)(例 如二維的點(diǎn)、輪廓或是密度圖)是可用于判定或測(cè)量尺寸(Z)-不論是直徑、長(zhǎng)度、寬度或 是最大橫斷面或橫向尺寸。藉由光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡獲得的細(xì)胞影像可以是細(xì)胞的二 維剖面圖或立體結(jié)構(gòu)。舉例來(lái)說(shuō),藉由光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡(例如掃描式電子顯微鏡) 先獲得一個(gè)二維剖面影像,然后通過(guò)測(cè)量這個(gè)二維剖面影像中細(xì)胞的最大橫斷面或橫向尺 寸就可以獲得細(xì)胞的尺寸(Z)。
[0072] 干細(xì)朐定義:
[0073] 干細(xì)胞有許多不同的種類,包括多功能干細(xì)胞(pluripotent stem cell)、多潛 能干細(xì)胞(multipotent stem cell)以及先驅(qū)干細(xì)胞(progenitor stem cell)。先驅(qū)干 細(xì)胞也可以稱為專一性干細(xì)胞或單能干細(xì)胞(unipotent stem cell)。SB-1細(xì)胞、SB-2 細(xì)胞、類卵裂球干細(xì)胞(blastomere-like stem cell,簡(jiǎn)稱BLSC)以及極小類胚胎干細(xì) 胞(very small embryonic-like stem cell,簡(jiǎn)稱VSEL)是屬于多功能干細(xì)胞。間質(zhì)干 細(xì)胞(mesenchymal stem cell,簡(jiǎn)稱 MSC)、多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞(multipotent adult progenitor cell,簡(jiǎn)稱 MAPC)、骨髓多潛能干細(xì)胞(bone marrow derived multipotent stem cell,簡(jiǎn)稱BMSC)以及多潛能成體干細(xì)胞(multipotent adult stem cell,簡(jiǎn)稱 MASC)是屬于多潛能干細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell)、視網(wǎng)膜干細(xì)胞(retina stem cell)、嗅球干細(xì)胞(olfactory bulbs stem cell)、上皮干細(xì)胞(epidermal stem cell)、腸道干細(xì)胞(intestine stem cell)、肌肉干細(xì)胞(muscle stem cell)、 胰臟干細(xì)胞(pancreatic stem cell)、心臟干細(xì)胞(heart stem cell)、肝臟干細(xì)胞 (liver stem cell)、腎臟干細(xì)胞(kidney stem cell)、內(nèi)皮干細(xì)胞(endothelial stem cell)、脂肪干細(xì)胞(adipocyte or adipose-derived stem cell)、成體骨髓多兀性誘 導(dǎo)細(xì)胞(marrow-isolated adult multilineage inducible (MIAMI) cell)、前間質(zhì)干 細(xì)胞(pre-mesenchymal stem cell,簡(jiǎn)稱 pre-MSC)、多潛能先驅(qū)干細(xì)胞(multipotent progenitor cells,簡(jiǎn)稱 MPP)、譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞(lineage-restricted progenitor cell,簡(jiǎn)稱LRP)、共同髓原先驅(qū)細(xì)胞(common myeloid progenitor cell,簡(jiǎn)稱CMP)以及共 同淋巴球先驅(qū)細(xì)胞(common lymphocyte progenitor cell,簡(jiǎn)稱CLP)是屬于先驅(qū)干細(xì)胞。
[0074] 在后續(xù)的段落中,跟隨在細(xì)胞(表面)標(biāo)記后面的符號(hào)" + "是表示干細(xì)胞可以表達(dá) 這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,也就是說(shuō)流式細(xì)胞儀可以藉由某種(特定標(biāo)記用的)抗體偵測(cè)到存 在于干細(xì)胞表面的這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記。跟隨在細(xì)胞(表面)標(biāo)記后面的符號(hào)是表 示干細(xì)胞無(wú)法表達(dá)這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,也就是說(shuō)這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記沒有存在于干 細(xì)胞的表面,而且流式細(xì)胞儀也無(wú)法藉由某種(特定標(biāo)記用的)抗體偵測(cè)到這種細(xì)胞(表 面)標(biāo)記。因此,正號(hào)" + "對(duì)干細(xì)胞而言是指細(xì)胞(表面)標(biāo)記呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)(positive expression),而負(fù)號(hào)對(duì)干細(xì)胞而言則是指細(xì)胞(表面)標(biāo)記呈現(xiàn)陰性表達(dá)(negative expression)〇
[0075] SB-1細(xì)胞為含有細(xì)胞核的多功能干細(xì)胞,而且可以是CD9 (+),CD349 (+)細(xì)胞或 CD349(+)細(xì)胞。SB-1細(xì)胞(例如CD9(+),CD349(+)細(xì)胞和CD349(+)細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于 尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米(micrometer)、 5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微 米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至 5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微 米之間。以⑶9 (+),⑶349(+)細(xì)胞為例,SB-1細(xì)胞可以表達(dá)⑶9和⑶349這兩種細(xì)胞(表 面)標(biāo)記,所以SB-1細(xì)胞可用CD9(+)和CD349(+)描述其特征。以CD349(+)細(xì)胞為例, SB-1細(xì)胞可以表達(dá)⑶349這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以SB-1細(xì)胞可用⑶349 (+)描述其特 征。
[0076] SB-2細(xì)胞為含有細(xì)胞核的多功能干細(xì)胞,而且可以是CD9(_),SSEA4(+)細(xì)胞或 Lgr5(+)細(xì)胞。SB-2細(xì)胞(例如CD9(-),SSEA4(+)細(xì)胞和Lgr5(+)細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于 尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微 米,例如介于〇. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之 間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、 介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米之間。以 ⑶9(-),SSEA4(+)細(xì)胞為例,SB-2細(xì)胞可以表達(dá)SSEA4這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法 表達(dá)⑶9這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以SB-2細(xì)胞可用⑶9 (-)和SSEA4 (+)描述其特征。以 Lgr5(+)細(xì)胞為例,SB-2細(xì)胞可以表達(dá)Lgr5這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以SB-2細(xì)胞可用 Lgr5(+)描述其特征。
[0077] 類卵裂球干細(xì)胞(BLSC)為含有細(xì)胞核的多功能干細(xì)胞,并且可以是CD66e(+)細(xì) 胞。CD66e(+)多功能干細(xì)胞(也就是類卵裂球干細(xì)胞)的尺寸(請(qǐng)參閱尺寸(Z)的定義) 是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于 0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微 米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4 微米之間或介于1微米至4微米之間。類卵裂球干細(xì)胞可以表達(dá)CD66e這種細(xì)胞(表面) 標(biāo)記,因而可用⑶66e(+)描述其特征。
[0078] 極小類胚胎干細(xì)胞(VSEL)為含有細(xì)胞核的多功能干細(xì)胞,而且可以是 CD133 (+),CD45 (-),Lin (-)細(xì)胞或 CXCR4 (+),CD45 (-),Lin (-)細(xì)胞。極小類胚胎干細(xì)胞(例 如 CD133 (+),CD45 (-),Lin (-)多功能干細(xì)胞和 CXCR4 (+),CD45 (-),Lin (-)多功能干細(xì)胞) 的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、 5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米 至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5 微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米 之間。以⑶133(+),⑶45(-),Lin(_)多功能干細(xì)胞為例,極小類胚胎干細(xì)胞可以表達(dá)⑶133 這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)CD45和Lin這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以極小類 胚胎干細(xì)胞可用〇0133(+)、0045(-)和1^11(-)描述其特征。以0乂0?4(+),0045(-),1^11(-) 多功能干細(xì)胞為例,極小類胚胎干細(xì)胞可以表達(dá)CXCR4這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表 達(dá)⑶45和Lin這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以極小類胚胎干細(xì)胞可用CXCR4(+)、⑶45(-) 和Lin(-)描述其特征。另外,極小類胚胎干細(xì)胞略小于紅血球。
[0079] 間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,簡(jiǎn)稱MSC)為含有細(xì)胞核的多潛能干細(xì) 胞,而且可以是⑶13(+)多潛能干細(xì)胞、⑶29(+)多潛能干細(xì)胞、⑶44(+)多潛能干細(xì)胞、 ⑶73(+)多潛能干細(xì)胞、⑶90(+)多潛能干細(xì)胞或⑶105(+)多潛能干細(xì)胞。間質(zhì)干細(xì)胞可以 表達(dá)下列一種或多種的細(xì)胞(表面)標(biāo)記:⑶13、⑶29、⑶44、⑶73、⑶90和⑶105。因此, 間質(zhì)干細(xì)胞可以具有下列一種或多種的特征:CD13 (+)、CD29 (+)、CD44 (+)、CD73 (+)、C90 (+) 和 CD105(+)。
[0080] 間質(zhì)干細(xì)胞是由不同的群體所組成,因此具有各種的尺寸及形狀。例如,某些間質(zhì) 干細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4 微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于 1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米 至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4 微米之間。另有某些間質(zhì)干細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)則 是大于6微米、7微米或10微米。
[0081] 造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cell,簡(jiǎn)稱HSC)為含有細(xì)胞核的多潛能干細(xì) 胞,而且可以是 CD34 (+),cKit (-),CD38 (-),Lin (-)細(xì)胞或 CD150 (+),CD244 (-),CD48 (-) 細(xì)胞。造血干細(xì)胞(例如⑶34⑴,cKit(-),⑶38(-),Lin(_)多潛能干細(xì)胞和 CD150(+),CD244(-),CD48(_)多潛能干細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸 (Z)的定義)是小于或等于(但不限定)4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米 之間、介于〇. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、 介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于 0. 5微米至4微米之間或介于1微米至4微米之間。以CD34 (+),cKit (-),CD38 (-),Lin (-) 多潛能干細(xì)胞為例,造血干細(xì)胞可以表達(dá)⑶34這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)cKit、 ⑶38和Lin這三種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以造血干細(xì)胞可用⑶34(+)、cKit(-)、⑶38(-)和 1^11(-)描述其特征。以00150(+),00244(-),0048(-)多潛能干細(xì)胞為例,造血干細(xì)胞可以 表達(dá)⑶150這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)⑶244和⑶48這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記, 所以造血干細(xì)胞可用CD150(+)、CD244(_)和CD48(_)描述其特征。
[0082] 多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞(multipotent adult progenitor cell,簡(jiǎn)稱 MAPC)為含有 細(xì)胞核的多潛能干細(xì)胞,而且可以是⑶13 (+),SSEA1 (+)細(xì)胞。⑶13 (+),SSEA1 (+)多潛能干 細(xì)胞(也就是多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞)可以表達(dá)CD13與SSEA1這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記。因 此,多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞可用CD13(+)和SSEA1(+)描述其特征。多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞(例 如CD13(+),SSEA1(+)多潛能干細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定 義)可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0083] 骨髓多潛能干細(xì)胞(bone marrow derived multipotent stem cell,簡(jiǎn)稱 BMSC) 為含有細(xì)胞核的多潛能干細(xì)胞,而且可以是CD105 (+)多潛能干細(xì)胞、CD117 (+)多潛能干細(xì) 胞或CD13(+),SSEA3(+)多潛能干細(xì)胞。以CD105(+)多潛能干細(xì)胞為例,骨髓多潛能干細(xì) 胞可以表達(dá)⑶105這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可用⑶105(+)描述其特征。以⑶117(+) 多潛能干細(xì)胞為例,骨髓多潛能干細(xì)胞可以表達(dá)CD117這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可 用⑶117(+)描述其特征。以⑶13 (+),SSEA3(+)多潛能干細(xì)胞為例,骨髓多潛能干細(xì)胞 可以表達(dá)⑶13和SSEA3這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可用⑶13(+)和SSEA3(+)描述 其特征。骨髓多潛能干細(xì)胞(例如CD105(+)多潛能干細(xì)胞、CD117(+)多潛能干細(xì)胞和 CD13(+),SSEA3(+)多潛能干細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0084] 多潛能成體干細(xì)胞(multipotent adult stem cell,簡(jiǎn)稱MASC)為含有細(xì)胞核的 多潛能干細(xì)胞,而且可以是0ct4(+)多潛能干細(xì)胞、Nanog(+)多潛能干細(xì)胞或Rexl(+)多潛 能干細(xì)胞。以0ct4(+)多潛能干細(xì)胞為例,多潛能成體干細(xì)胞可以表達(dá)0ct4這種細(xì)胞(表 面)標(biāo)記,因而可用0ct4(+)描述其特征。以Nanog(+)多潛能干細(xì)胞為例,多潛能成體干 細(xì)胞可以表達(dá)Nanog這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可用Nanog(+)描述其特征。以RexI (+) 多潛能干細(xì)胞為例,多潛能成體干細(xì)胞可以表達(dá)RexI這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可用 Rexl(+)描述其特征。多潛能成體干細(xì)胞(例如0ct4(+)多潛能干細(xì)胞、Nanog(+)多潛能 干細(xì)胞和RexI (+)多潛能干細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0085] 成體骨髓多兀性誘導(dǎo)(marrow-isolated adult multilineage inducible,簡(jiǎn)稱 MIAMI)細(xì)胞為含有細(xì)胞核的先驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是CD29 (+),CD63 (+),CD81 (+),CD122 (+),⑶164(+)先驅(qū)干細(xì)胞。成體骨髓多元性誘導(dǎo)細(xì)胞可以表達(dá)⑶29、⑶63、⑶81、⑶122 和CD164這五種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,因而可用CD29(+)、CD63(+)、CD81(+)、CD122(+)和 CD164(+)描述其特征。成體骨髓多元性誘導(dǎo)細(xì)胞(例如CD29(+),CD63(+),CD81(+),CD12 2(+),CD164(+)先驅(qū)干細(xì)胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以 是(但不限定)大于6微米、7微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0086] 前間質(zhì)干細(xì)胞(pre-mesenchymal stem cell,簡(jiǎn)稱pre-MSC)為含有細(xì)胞核的先 驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是SSEA1(+)先驅(qū)干細(xì)胞。前間質(zhì)干細(xì)胞可以表達(dá)SSEA1這種細(xì)胞(表 面)標(biāo)記,因而可用SSEA1 (+)描述其特征。前間質(zhì)干細(xì)胞(例如SSEA1 (+)先驅(qū)干細(xì)胞) 的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是(但不限定)大于6微米、7 微米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。
[0087] 多潛能先驅(qū)干細(xì)胞(multipotent progenitor cell,簡(jiǎn)稱 MPP)為 含有細(xì)胞核的先驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是⑶34⑴,cKit(+),⑶38(-),Lin(_) 細(xì)胞或⑶150(-),⑶244(+),⑶48(-)細(xì)胞。多潛能先驅(qū)干細(xì)胞(例如 CD34 (+),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅(qū)干細(xì)胞和 CD150 (-),CD244 (+),CD48 (-)先驅(qū)干細(xì) 胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微 米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。以CD34 (+),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅(qū) 干細(xì)胞為例,多潛能先驅(qū)干細(xì)胞可以表達(dá)CD34和cKit這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法 表達(dá)⑶38和Lin這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以多潛能先驅(qū)干細(xì)胞可用⑶34 (+)、cKit (+)、 CD38 (-)和Lin (-)描述其特征。以CD150 (-),CD244 (+),CD48 (-)先驅(qū)干細(xì)胞為例,多潛能 先驅(qū)干細(xì)胞可以表達(dá)CD244這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)CD150和CD48這兩種細(xì) 胞(表面)標(biāo)記,所以多潛能先驅(qū)干細(xì)胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(_)描述其特征。
[0088] 譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞(lineage-restricted progenitor cell,簡(jiǎn)稱 LRP)為含有細(xì)胞核的先驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是⑶34(-),cKit(+),⑶38(-),Lin(_) 細(xì)胞或⑶150(-),⑶244(+),⑶48⑴細(xì)胞。譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞(例如 CD34 (-),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅(qū)干細(xì)胞和 CD150 (-),CD244 (+),CD48 (+)先驅(qū)干細(xì) 胞)的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微 米或10微米,例如介于8微米至15微米之間。以CD34 (-),cKit (+),CD38 (-),Lin (-)先驅(qū)干 細(xì)胞為例,譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞可以表達(dá)cKit這種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)CD34、 ⑶38和Lin這三種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞可用⑶34(-)、cKit (+)、 CD38(_)和Lin(-)描述其特征。以CD150(-),CD244(+),CD48(+)先驅(qū)干細(xì)胞為例,譜系限 制先驅(qū)干細(xì)胞可以表達(dá)CD244和CD48這兩種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,但是無(wú)法表達(dá)CD150這種 細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞可用CD150(-)、CD244(+)和CD48(+)描述其 特征。
[0089] 共同髓原先驅(qū)細(xì)胞(common myeloid progenitor cell)或共同淋巴球先驅(qū)細(xì)胞 (common lymphocyte progenitor cell)為含有細(xì)胞核的先驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是⑶90(+) 細(xì)胞。共同髓原先驅(qū)細(xì)胞或共同淋巴球先驅(qū)細(xì)胞(例如CD90(+)先驅(qū)干細(xì)胞)的尺寸(關(guān) 于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是大于(但不限定)6微米、7微米或10微米, 例如介于8微米至15微米之間。共同髓原先驅(qū)細(xì)胞或共同淋巴球先驅(qū)細(xì)胞可表達(dá)CD90這 種細(xì)胞(表面)標(biāo)記,所以可用CD90(+)描述其特征。
[0090] 造血先驅(qū)細(xì)胞(hematopoietic progenitor cell,簡(jiǎn)稱HPC)為含有細(xì)胞核的先 驅(qū)干細(xì)胞,而且可以是CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞、CD38(+)先驅(qū)干細(xì)胞、CD48(+)先驅(qū)干細(xì)胞、 CD244(+)先驅(qū)干細(xì)胞或CXCR4(+)先驅(qū)干細(xì)胞。造血先驅(qū)細(xì)胞可以表達(dá)下列一種或多種的 細(xì)胞(表面)標(biāo)記:⑶24、⑶38、⑶48、⑶244和CXCR4。因此,造血先驅(qū)細(xì)胞可以具有下列 一種或多種的特征:CD24 (+)、CD38 (+)、CD48 (+)、CD244 (+)和 CXCR4 (+)。
[0091] 間質(zhì)先驅(qū)細(xì)胞(mesenchymal progenitor cell)為含有細(xì)胞核的先驅(qū)干細(xì)胞,而 且可以是CXCR4(+)先驅(qū)干細(xì)胞、SSEA1(+)先驅(qū)干細(xì)胞、CD271(+)先驅(qū)干細(xì)胞或Str〇-l(+) 先驅(qū)干細(xì)胞。間質(zhì)先驅(qū)細(xì)胞可以表達(dá)下列一種或多種的細(xì)胞(表面)標(biāo)記:CXCR4、SSEA1、 CD271和Stro-1。因此,間質(zhì)先驅(qū)細(xì)胞可以具有下列一種或多種的特征:CXCR4(+)、 SSEA1(+)、CD271 (+)或 Stro-1(+)。
[0092] 行為或刺激(X)的描沭:
[0093] 以下列出許多種行為或刺激(X)的范例。這些項(xiàng)目可以經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,確認(rèn)能有 效增加一個(gè)體(例如人體或非人體(如動(dòng)物體))體內(nèi)某一種或特定幾種干細(xì)胞的細(xì)胞數(shù) 量。
[0094] 行為或刺激(X)包括:
[0095] 1.服用藥物,此藥物可以是合成藥物或是含有天然萃取物的藥物;
[0096] 2.服用草藥或中藥,此草藥或中藥可以是冬蟲夏草、人參、枸杞、靈芝、牛樟芝以及 /或是巴西蘑菇;
[0097] 3.服用營(yíng)養(yǎng)品或膳食補(bǔ)充品(dietary supplement),例如營(yíng)養(yǎng)片或營(yíng)養(yǎng)粉。此 營(yíng)養(yǎng)品或膳食補(bǔ)充品可以包含有下列一種或多種的物質(zhì)或成分:維他命(如維他命A、維 他命B、維他命B群、維他命B12、維他命D、維他命D3、維他命E等)、巨量與微量礦物質(zhì)(如 隹丐、鈉、鉀、氟、溴、鉻、碘、娃、硒、鈹、鋰、鈷、f凡、鎳等)、多醣(polysaccharide)、含巖藻糖的 高分子活性醣蛋白(high molecular weight fucose-containing glycoprotein)、海藻 (包括綠藻、藍(lán)綠藻、褐藻等)、巖藻糖(fucose)、褐藻的主要成分一褐藻糖膠(fucoidan)、 小分子褐藻糖膠(oligo fucoidan)、藻類、含有褐藻糖膠的褐藻(例如生長(zhǎng)或生產(chǎn)在日本 沖繩縣(Okinawa)的褐藻)、日本的水云(mozuku)、綠藻、藍(lán)綠藻(或稱藍(lán)藻)、褐藻(包括 水云、昆布(kelp)、裙帶菜(undaria pinnatifida)、羊棲菜(sargassum fusiforme)等)、 植化素(phytochemical)(例如異黃酮素(isoflavones)、植物雌激素(phytoestrogen) 等)、爺紅素(lycopene)、綠茶素 (green tea essence)、表沒食子兒茶素沒食子酸脂 (epigallocatechin gallate,簡(jiǎn)稱 EGCG)、醋質(zhì)營(yíng)養(yǎng)素(gluconutrients)(例如半乳 糖(Galactose)、木糖(Xylose)、葡萄糖(Glucose)、甘露糖(Mannose)、乙酰葡萄糖胺 (N-acetyl glucosamine)、乙酰半乳糖胺(N-acetyl galactosamine)、乙酰神經(jīng)胺酸 (N-acetyl neuraminic acid)等)、魚油、香樁、取自植物、葉子、果實(shí)、蔬菜、魚、海藻或藻類 的營(yíng)養(yǎng)素;
[0098] 4.勵(lì)行素食飲食;
[0099] 5.食用健康食品或有機(jī)食品;
[0100] 6.服用另類(非傳統(tǒng)的)藥物;
[0101] 7.接受另類療法或另類治療(例如葛森療法(Gerson therapy)、布魯士癌癥療法 (the Breuss cancer cure)等);
[0102] 8.接受針灸治療;
[0103] 9.接受按摩(例如足底按摩);
[0104] 10.做運(yùn)動(dòng)(例如走路、慢跑、跳舞、體操、瑜珈、有氧運(yùn)動(dòng)、太極拳等);
[0105] 11.睡覺(其目的在于評(píng)估睡眠質(zhì)量);
[0106] 12.冥想;
[0107] 13.進(jìn)行由個(gè)人、保健專家或醫(yī)生設(shè)計(jì)的健康改善計(jì)劃或疾病治療計(jì)劃;
[0108] 14.服用某種可以改善體內(nèi)器官健康狀況的營(yíng)養(yǎng)品,例如服用可以改善前列腺健 康狀況的茄紅素;
[0109] 15.進(jìn)行復(fù)健計(jì)劃,以治療傷害、治療由手術(shù)造成的創(chuàng)傷或是治療疾?。?br> [0110] 16.飲用藥酒(藥酒乃是將一種或數(shù)種藥材浸泡在酒里存放一段時(shí)間而制成),例 如飲用人參藥酒(人參藥酒是將人參浸泡在高酒精濃度米酒里一個(gè)月的時(shí)間而制成);
[0111] 17.服用政府部門或機(jī)構(gòu)(例如美國(guó)食品藥物管理局)核準(zhǔn)用于治療特定疾病 (例如癌癥、皮膚病、腎臟病等)的一種或數(shù)種藥物;
[0112] 18.接受政府部門核準(zhǔn)用于治療特定疾?。ɡ绨┌Y、皮膚病、腎臟病等)的一種 或數(shù)種治療方法;
[0113] 19.從事或參與宗教活動(dòng),例如禱告或拜神等;
[0114] 20.接受陽(yáng)光(或日光)直接照射或間接照射,而接受照射的時(shí)間可以是:(1)日 出前10分鐘至日出后50分鐘(此時(shí)含有大量的紅外線)的早晨時(shí)段、(2)上午11點(diǎn)30分 (11:30AM)至下午12點(diǎn)30分(12:30PM)(此時(shí)含有大量的紫外線)的中午時(shí)段、或是(3) 日落前50分鐘至日落后10分鐘(此時(shí)含有大量的紅外線)的下午時(shí)段;
[0115] 21.照射日光燈或發(fā)光二極管(LED)發(fā)出的光源,而日光燈或發(fā)光二極管(LED)發(fā) 出的光源可包含可見光的整個(gè)光譜(spectrum)、紅外線的整個(gè)光譜、紅光的整個(gè)光譜、綠光 的整個(gè)光譜、藍(lán)光的整個(gè)光譜、紫外線的整個(gè)光譜或混合上述一種以上光線的整個(gè)光譜;
[0116] 22.進(jìn)行或接受改善身體自愈力的計(jì)劃、治療、方法、儀器以及/或是系統(tǒng),例如病 后、傷后或術(shù)后用于改善身體自愈力的方法或治療(如高壓氧治療);
[0117] 23.飲用咖啡(例如黑咖啡);
[0118] 24.喝茶(例如綠茶、紅茶或茉莉花茶;
[0119] 25.飲用紅酒;
[0120] 26.服用褪黑激素(melatonin);
[0121] 27.聆聽音樂,例如莫扎特交響曲或貝多芬交響曲;
[0122] 28. 口服一顆或多顆褐藻補(bǔ)充品,其中每一顆褐藻補(bǔ)充品可以含有重量百分比超 過(guò)60 %的褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠,有關(guān)褐藻補(bǔ)充品的敘述可以參考以下第一實(shí)驗(yàn)和圖 11的敘述;
[0123] 29.注射含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的物質(zhì)(如營(yíng)養(yǎng)品或補(bǔ)充品);
[0124] 30.服用或攝取4.5克(或超過(guò)3.5克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,此沖繩褐藻補(bǔ)充品包 括重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的日本水云粉(有關(guān)沖繩褐藻補(bǔ)充品的敘述請(qǐng)參 閱以下第一實(shí)驗(yàn)和圖11的相關(guān)敘述),其中4. 5克的沖繩褐藻補(bǔ)充品例如含有3克(或是 超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是包括重量百分比超過(guò)60 %的褐藻糖膠,圖12揭示褐藻糖膠的部 分分子結(jié)構(gòu);
[0125] 31.服用荷爾蒙補(bǔ)充品或是注射荷爾蒙;以及
[0126] 32.服用營(yíng)養(yǎng)品、營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品、營(yíng)養(yǎng)液、營(yíng)養(yǎng)飲料、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑或營(yíng)養(yǎng)食品,其含有: (1) 各種的胺基酸(例如精胺酸(Arginine)、組胺酸(Histidine)、離胺酸(Lysine)、天 門冬胺酸(Aspartic acid)、麩胺酸(Glutamic acid)、絲胺酸(Serine)、輕丁胺酸(或 稱蘇胺酸,Threonine)、天門冬酰胺酸(Asparagine)、麩酰胺酸(Glutamine)、半胱胺酸 (Cysteine)、硒半胱胺酸(Selenocysteine)、甘胺酸(Glycine)、脯胺酸(Proline)、色胺 酸(Tryptophan)、丙胺酸(Alanine)、繳胺酸(Valine)、異白胺酸(Isoleucine)、白胺酸 (Leucine)、甲硫胺酸(Methionine)、苯丙胺酸(Phenylalanine)、酪胺酸(Tyrosine)等)、 (2) 均衡胺基酸(balanced amino acid)、或是(3)九種人體必需胺基酸(也就是,組胺酸、 異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、羥丁胺酸、色胺酸以及纈胺酸)。例如,(a) 含紅豆、綠豆或黑豆發(fā)酵物的產(chǎn)品、(b)含一種或數(shù)種水果(例如甜菜(sugar beet)、蘋果、 番石榴、奇異果、葡萄、菠蘿、火龍果、青木瓜、西紅柿、酪梨等)發(fā)酵物的液態(tài)物、飲料或飲 品、(c)將一種或數(shù)種藥材浸泡在酒里存放一段時(shí)間而制成的藥酒,例如將人參浸泡在高酒 精濃度的米酒里一個(gè)月時(shí)間而制成的人參藥酒。
[0127] 另外,進(jìn)行上述的行為或刺激(X)可以將劑量、強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、施行頻率(每一個(gè) 行為可包括一種以上的細(xì)部行為(sub-action),例如以每次間隔一小時(shí)的方式服用一顆藥 物共三次)以及/或是施行時(shí)間(例如一天的時(shí)段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用 餐之前、用餐當(dāng)中、用餐之后、季節(jié)(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素納入考慮。舉例 來(lái)說(shuō),當(dāng)個(gè)體(例如人體或非人體)服用藥物或營(yíng)養(yǎng)品時(shí),可將劑量(例如克數(shù))以及時(shí)間 (例如早餐前、早餐后、睡前)等因素納入考慮。又例如,當(dāng)個(gè)體(例如人體或非人體)照 射陽(yáng)光時(shí),可將一天的時(shí)段(例如早晨、中午或下午)、季節(jié)(例如春天、夏天、秋天或冬天) 以及持續(xù)照射時(shí)間(例如30分鐘、1小時(shí)或2小時(shí))等因素納入考慮。
[0128] 個(gè)體(S)與鉬織樣本(P)的描沭:
[0129] 個(gè)體(S)可以是人體,例如孩童、青少年、成年男子、成年女子或老年人?;蛘撸瑐€(gè) 體(S)也可以是非人體(或稱非人體生物),例如寵物(動(dòng)物)、農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物或疾 病模式動(dòng)物(disease-model animal)。以下列出寵物、農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物或疾病模式動(dòng) 物的范例:靈長(zhǎng)類動(dòng)物(如猴子或大猩猩)、狗、嚙齒動(dòng)物(如老鼠或豚鼠)、貓、馬、牛、羊、 豬、雞、鴨、鵝、鳥、大象、青蛙、魚等。個(gè)體⑶的敘述可以用在后續(xù)的各個(gè)實(shí)施例中。在本 發(fā)明中,個(gè)體(S)可以作為參與者或受試者。
[0130] 含有各種細(xì)胞的組織樣本(P)可以從個(gè)體(S)的體液(bodily fluid)或固體組 織(solid tissue)取出、獲得、得到或取得。個(gè)體(S)的體液可以是血液(如周邊血液 (peripheral blood))或是骨髓等。當(dāng)個(gè)體(S)為人體時(shí),體液可以是人體的骨髓或是人體 的血液(如周邊血液)。周邊血液是指體內(nèi)循環(huán)流動(dòng)的血液。個(gè)體(S)的固體組織可以是 神經(jīng)、肌肉、皮膚、內(nèi)臟、骨骼、腎臟、肝臟、胰臟、胸腺、脂肪細(xì)胞或是脂肪組織等。當(dāng)組織樣 本(P)是從個(gè)體(S)的體液取得時(shí),組織樣本(P)可以是體液樣本,例如周邊血液樣本、全 血樣本或骨髓樣本。全血可以從個(gè)體(S)(如人體)的周邊血液收集取得,然后和抗凝劑混 合而成,但是尚未進(jìn)行其它的處理。當(dāng)組織樣本(P)是從個(gè)體(S)的固體組織取得時(shí),組織 樣本(P)可以是固體組織樣本,例如肌肉樣本或脂肪細(xì)胞樣本。當(dāng)個(gè)體(S)為人體時(shí),組織 樣本(P)可以是人體骨髓樣本或是人體血液樣本(如周邊血液樣本或全血樣本)。
[0131] 檢測(cè)或測(cè)量方法(M0):
[0132] 當(dāng)取自個(gè)體(其可參閱個(gè)體(S)的敘述)的組織樣本為血液樣本(如周邊血液樣 本或全血樣本)時(shí),檢測(cè)或測(cè)量方法(M0)可以透過(guò)執(zhí)行分析前的準(zhǔn)備程序(Y0)然后再執(zhí) 行分析程序(T0)的方式從血液樣本中獲得有關(guān)一種或多種干細(xì)胞(如前所述)的結(jié)果或 數(shù)據(jù)。該結(jié)果或數(shù)據(jù)可包括每一種干細(xì)胞的數(shù)量。
[0133] 分析前的準(zhǔn)備程序(Y0)可以透過(guò)下列兩種方式中的任何一種來(lái)處理取自個(gè)體的 血液樣本。
[0134] 用于準(zhǔn)備程序(Y0)的第一種方式敘述如下。首先,將混合液(cocktail)加到 裝有全血(其從上述個(gè)體取得)的試管中,并在均勻混合全血和混合液之后,獲得血液樣 本。舉例來(lái)說(shuō),當(dāng)混合液為100微升(μ L)的RosetteSep?富含人類先驅(qū)細(xì)胞混合液 (RosetteSep? Human Progenitor Enrichment Cocktail)時(shí),試管內(nèi)則裝有2毫升(ml,) 的全血。接著,將血液樣本在室溫(如27°C左右)培養(yǎng)一段時(shí)間(例如20分鐘左右)。在 完成培養(yǎng)后,以第一溶液稀釋血液樣本,然后慢慢地將兩者混合。待完成混合后,獲得稀釋 樣本。所述的第一溶液可以是2%胎牛血清(fetal bovine serum,簡(jiǎn)稱FBS)/磷酸鹽緩沖 液(phosphate-buffered saline,簡(jiǎn)稱PBS)。接著,將稀釋樣本慢慢倒入裝有試劑(例如 Ficoll-PaqueJ?)的試管中。在倒入的過(guò)程中,須避免稀釋樣本與試劑相互混合,以及讓 稀釋樣本位在試劑上面。接著,將含有稀釋樣本與試劑的混合物在室溫(如攝氏27 °C左右) 下以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘3, 000轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如20分鐘),待離心完成后, 可形成四個(gè)明顯的分層。這四個(gè)明顯的分層由上而下分別是血漿層、富含多種細(xì)胞的細(xì)胞 層、試劑層以及紅血球?qū)?。接下?lái),將血漿層、富含多種細(xì)胞的細(xì)胞層以及試劑層的上半部 放入到另一試管中,然后以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘3, 000轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如20分 鐘),待離心完成后,可獲得離心樣本。接著,移除離心樣本的上清液(supernatant),并使 離心樣本內(nèi)的多種細(xì)胞重新懸浮于第二溶液(例如2% FBS/PBS)中。再來(lái),將適當(dāng)?shù)木彌_ 液(如3X紅血球分解液(red-blood-cell(RBC)lysis buffer)加到第二溶液中,并使含有 緩沖液的第二溶液在室溫培養(yǎng)一段時(shí)間(例如10分鐘),然后以第三溶液(例如2% FBS/ PBS)沖洗第二溶液(此時(shí)含有緩沖液)內(nèi)的多種細(xì)胞兩次。待沖洗完成后,使多種細(xì)胞重 新懸浮于第四溶液(例如含有1 %或2%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,簡(jiǎn)稱BSA) 的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得含有多種細(xì)胞和第四溶液的混合物。在本發(fā)明中,讓0.1克的 牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸鹽緩沖液中,可以獲得含有1 %牛血清白蛋白的磷酸鹽 緩沖液;讓〇. 2克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸鹽緩沖液中,可以獲得含有2%牛 血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。接著,將含有適當(dāng)抗體的試劑加到含有多種細(xì)胞和第四溶液 的混合物中,進(jìn)而形成試驗(yàn)樣本。此試驗(yàn)樣本可以被用于后續(xù)的分析程序(το)中。
[0135] 用于準(zhǔn)備程序(Y0)的第二種方式敘述如下。首先,將6%羥乙基淀粉 (Hetastarch)加入到全血(其從上述個(gè)體取得)中(6%羥乙基淀粉與全血的體積比為1 : 5),以獲得血液樣本。6%羥乙基淀粉是一種磷酸鹽緩沖液(PBS)內(nèi)含有6%的羥乙基淀粉 的溶液,也就是每100毫升(mL)的磷酸鹽緩沖液含有6克的羥乙基淀粉。接著,讓血液樣 本在室溫(如約27°C )靜置或培育一段時(shí)間(例如至少30分鐘)。待血液樣本形成上下 兩個(gè)分層后,在不擾動(dòng)下分層(其為紅血球?qū)樱┑那闆r下,將上分層(其為細(xì)胞層)以吸取 器(pipette)移出并放置到一試管中,然后再將試管內(nèi)的上分層以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分 鐘3, 000轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如15分鐘),并在離心完成后獲得離心樣本。接下來(lái),將離 心樣本的上清液移除,并以適當(dāng)?shù)柠}溶液(如PBS)沖洗離心樣本的顆粒。然后,使顆粒重 新懸浮于一適當(dāng)溶液(例如含有1%或2%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得含有 顆粒和適當(dāng)溶液的混合物。最后,將含有適當(dāng)抗體的試劑加到含有顆粒和適當(dāng)溶液的混合 物中,進(jìn)而形成試驗(yàn)樣本。此試驗(yàn)樣本可以被用于后續(xù)的分析程序(T0)中。
[0136] 在完成準(zhǔn)備程序(Y0)之后,以分析程序(TO)分析從準(zhǔn)備程序(Y0)第一種或第二 種方式獲得的試驗(yàn)樣本,進(jìn)而得到血液樣本中有關(guān)一種或多種干細(xì)胞的一組結(jié)果或數(shù)據(jù)。 該組結(jié)果或數(shù)據(jù)可透過(guò)量化、質(zhì)化或描述等方式呈現(xiàn)。此處所述的一種或多種干細(xì)胞可以 包括下列一種或多種干細(xì)胞:至少一種多功能干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞、SB-2細(xì)胞、類卵裂 球干細(xì)胞、極小類胚胎干細(xì)胞、其它種類的多功能干細(xì)胞以及/或是一群選定的兩種或兩 種以上的多功能干細(xì)胞)、至少一種多潛能干細(xì)胞(例如間質(zhì)干細(xì)胞、其它種類的多潛能干 細(xì)胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多潛能干細(xì)胞)、造血干細(xì)胞以及至少一種 先驅(qū)干細(xì)胞。
[0137] 分析程序(T0)可以透過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry)完成。流式細(xì)胞技術(shù)可 以透過(guò)流式細(xì)胞儀(flow cytometer,其為一種分析儀器)執(zhí)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分類以及生 物標(biāo)記偵測(cè)等步驟來(lái)分析血液樣本的參數(shù)。流式細(xì)胞儀可以用來(lái)分析血液樣本中特定的細(xì) 胞(表面)標(biāo)記是否呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。藉由流式細(xì)胞儀,上述有關(guān)一種或多種干細(xì)胞的結(jié)果 或數(shù)據(jù)可包括干細(xì)胞的種類以及上述一種或多種干細(xì)胞的相關(guān)數(shù)值(例如數(shù)量、百分比以 及/或是尺寸大?。?。
[0138] 檢測(cè)或測(cè)量方法(Ml):
[0139] 檢測(cè)或測(cè)量方法(Ml)可以透過(guò)執(zhí)行純化程序(Y1)然后再執(zhí)行分析程序(T1)的 方式來(lái)完成。純化程序(Y1)可以透過(guò)下列三種方式中的任何一種方式來(lái)處理取自一個(gè)體 (其可參閱個(gè)體(S)的敘述)的一組織樣本。有關(guān)該組織樣本的說(shuō)明可參閱組織樣本(P) 的敘述。例如,當(dāng)該組織樣本是從上述個(gè)體的體液(例如人體血液、周邊血液或是骨髓)取 得時(shí),該組織樣本為一體液樣本(例如周邊血液樣本、全血樣本或是骨髓樣本)。當(dāng)該組織 樣本是從上述個(gè)體的固體組織(例如肌肉或脂肪細(xì)胞)取得時(shí),該組織樣本為一固體組織 樣本(例如肌肉樣本或脂肪細(xì)胞樣本)。另外,若該組織樣本是從上述個(gè)體的固體組織取 得,在進(jìn)行純化程序(Y1)之前,會(huì)在該組織樣本中加入膠原蛋白酶(collagenase),并且讓 該組織樣本與膠原蛋白酶在適當(dāng)?shù)臏囟认拢ù藴囟瓤梢允?7°C左右、30°C以上、介于35°C 至39°C之間或是介于30°C至40°C之間)作用至少6或8小時(shí)。
[0140] 在純化程序(Y1)的第一種方式中,請(qǐng)參閱圖1所示,首先將上述的組織樣本移到 含有抗凝血?jiǎng)ɡ缍r(jià)陽(yáng)離子螯合劑)的收集袋10里。此二價(jià)陽(yáng)離子螯合劑(divalent cation chelating agent)可以是乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,簡(jiǎn) 稱EDTA)。接著,利用裝在收集袋10底部的過(guò)濾器11,讓該組織樣本中的小細(xì)胞流出收集 袋10而被收集到試管12a里??赏ㄟ^(guò)過(guò)濾器11的小細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱 上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6微米 之間、介于〇. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、 介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、介于 0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。接下來(lái),利用離心機(jī)13將試管12a以 適當(dāng)?shù)碾x心力(例如1,〇〇〇g、大于700g、大于1,300g、介于500g至2, 500g之間、介于800g 至1,600g之間)離心一段時(shí)間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分 鐘、15至22分鐘)。待試管12a完成離心后,這些小細(xì)胞會(huì)被分離出來(lái)。最后,將這些小細(xì) 胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細(xì)胞重新懸浮于此溶液中,以 獲得含有這些小細(xì)胞和此溶液的試驗(yàn)樣本14a。試驗(yàn)樣本14a可用于后續(xù)的分析程序(T1) 中。
[0141] 在純化程序(Y1)的第二種方式中,請(qǐng)參閱圖2所示,若上述的組織樣本是從固體 組織取得,則將經(jīng)過(guò)膠原蛋白酶處理的組織樣本(如前所述)放入到試管12b中。接著,利 用離心機(jī)13以低轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如大約100g、介于50g至450g之間或是介于80g至 250g之間)將試管12b離心一段時(shí)間(例如10分鐘左右、8分鐘以上、12分鐘以上、8至15 分鐘、9至20分鐘),然后再以高轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、 介于500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管12b離心一段時(shí)間(例如 18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘、15至22分鐘)。待試管12a完成離 心后,可從組織樣本中分離出小細(xì)胞。這些分離出來(lái)的小細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可 參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至6 微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米 之間、介于〇. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、 介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。最后,將這些小細(xì)胞放置到一 溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細(xì)胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這 些小細(xì)胞和此溶液的試驗(yàn)樣本14b。試驗(yàn)樣本14b可用于后續(xù)的分析程序(T1)中。
[0142] 在純化程序(Y1)的第三種方式中,請(qǐng)參閱圖3所示,若上述的組織樣本是從體液 取得,則將該組織樣本以紅血球分解液16培養(yǎng)或作用一段時(shí)間(例如10分鐘左右、8分鐘 以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是9至20分鐘),以消除組織樣本中所有的紅血球細(xì)胞。 接著,將含有組織樣本與紅血球分解液16的混合液倒入試管12c中。然后,利用離心機(jī)13 以低轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如大約l〇〇g、介于50g至450g之間或是介于80g至250g之間) 將試管12c離心一段時(shí)間(例如10分鐘左右、8分鐘以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是 9至20分鐘),然后再以高轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于 500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管12c離心一段時(shí)間(例如18分 鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管12c完成離 心后,可從含有組織樣本與紅血球分解液16的混合液中分離出小細(xì)胞。這些分離出來(lái)的小 細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)是小于或等于4微米、5微米 或6微米,例如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6 微米之間、介于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米 之間、介于〇. 1微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之 間。最后,將這些小細(xì)胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些小細(xì)胞重 新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些小細(xì)胞和此溶液的試驗(yàn)樣本14c。試驗(yàn)樣本14c可用于 后續(xù)的分析程序(T1)中。
[0143] 在利用純化程序(Y1)獲得試驗(yàn)樣本14a、14b或14c之后,以分析程序(T1)對(duì)試 驗(yàn)樣本14a、14b或14c進(jìn)行分析,進(jìn)而獲得上述組織樣本中有關(guān)一種或多種小尺寸干細(xì) 胞的一組結(jié)果或數(shù)據(jù)。該組結(jié)果或數(shù)據(jù)可透過(guò)量化、質(zhì)化或描述等方式呈現(xiàn)。另外,圖1、 圖2或圖3所示的分析儀器15a(例如逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction ;RT-PCR)儀或是流式細(xì)胞儀)可用于進(jìn)行分析程序(T1)。上 述有關(guān)一種或多種小尺寸干細(xì)胞的該組結(jié)果或數(shù)據(jù)可以包括小尺寸干細(xì)胞的種類以及上 述一種或多種小尺寸干細(xì)胞的相關(guān)數(shù)值(例如數(shù)量、百分比以及/或是尺寸大?。?。此處 所述的一種或多種小尺寸干細(xì)胞可以包括下列一種或多種干細(xì)胞:至少一種多功能干細(xì)胞 (例如SB-1細(xì)胞、SB-2細(xì)胞、類卵裂球干細(xì)胞、極小類胚胎干細(xì)胞、其它種類的多功能干細(xì) 胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多功能干細(xì)胞)、至少一種多潛能干細(xì)胞(例如 間質(zhì)干細(xì)胞、其它種類的多潛能干細(xì)胞以及/或是一群選定的兩種或兩種以上的多潛能干 細(xì)胞)、造血干細(xì)胞以及至少一種先驅(qū)干細(xì)胞。這些小尺寸干細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述 可參閱上述尺寸(Ζ)的定義)是小于或等于4微米、5微米或6微米,例如介于0. 1微米至 6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介于0. 1微米至5微米 之間、介于〇. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1微米至4微米之間、 介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。
[0144] 分析程序(Τ1)可以透過(guò)以下兩種方式達(dá)成:流式細(xì)胞技術(shù)或是逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連 鎖反應(yīng)(RT-PCR)分析法(例如實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法(real-time RT-PCR analysis))。流式細(xì)胞技術(shù)可以透過(guò)流式細(xì)胞儀(此儀器為一種分析儀器15a)執(zhí)行細(xì)胞 計(jì)數(shù)、細(xì)胞分類以及生物標(biāo)記偵測(cè)等步驟來(lái)分析一樣本的參數(shù)。流式細(xì)胞儀15a可以用來(lái) 分析樣本中特定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記是否呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法可 以透過(guò)(實(shí)時(shí))逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)儀(此儀器為一種分析儀器15a)來(lái)偵測(cè)與量化一 樣本中干細(xì)胞的基因表達(dá)。透過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法獲得的結(jié)果可以得知干細(xì)胞 表達(dá)的各種基因,而這些基因可以是0ct4、Nanog、Nestin以及甲種胚胎蛋白(alpha-feto protein)〇
[0145] 檢測(cè)或測(cè)量方法(M2):
[0146] 檢測(cè)或測(cè)量方法(M2)可以透過(guò)執(zhí)行純化程序(Y2)然后再執(zhí)行分析程序(T2)的 方式來(lái)完成。純化程序(Y2)可以透過(guò)下列三種方式中的任何一種方式來(lái)處理取自一個(gè)體 (其可參閱個(gè)體(S)的敘述)的一組織樣本。有關(guān)該組織樣本的說(shuō)明可參閱組織樣本(P)的 敘述。例如,當(dāng)該組織樣本是從上述個(gè)體的體液(例如人體血液、周邊血液或是骨髓)取得 時(shí),該組織樣本為一體液樣本(例如周邊血液樣本、全血樣本或是骨髓樣本)。當(dāng)該組織樣 本是從上述個(gè)體的固體組織(例如肌肉或脂肪細(xì)胞)取得時(shí),該組織樣本為一固體組織樣 本(例如肌肉樣本或脂肪細(xì)胞樣本)。另外,若該組織樣本是從上述個(gè)體的固體組織取得, 在進(jìn)行純化程序(Y2)之前,會(huì)在該組織樣本中加入膠原蛋白酶,并且讓該組織樣本與膠原 蛋白酶在適當(dāng)?shù)臏囟认拢ù藴囟瓤梢允?7°C左右、30°C以上、介于35°C至39°C之間或是介 于30°C至40°C之間)作用至少6或8小時(shí)。
[0147] 在純化程序(Y2)的第一種方式中,請(qǐng)參閱圖4所示,首先將上述的組織樣本移到 含有抗凝血?jiǎng)ɡ缍r(jià)陽(yáng)離子螯合劑)的收集袋或貯存器19里,以獲得含有組織樣本與 抗凝血?jiǎng)┑幕旌弦骸I鲜龅亩r(jià)陽(yáng)離子螯合劑可以是乙二胺四乙酸(EDTA)。接著,將混合 液倒入到試管20a中。然后,利用離心機(jī)13將試管20a以適當(dāng)?shù)碾x心力(例如1,000g、大 于700g、大于1,300g、介于500g至2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)離心一段時(shí) 間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試 管20a完成離心后,分離出包含大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞。這些小細(xì)胞的尺寸(關(guān) 于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是小于或等于4微米、5微米或6微米,例 如介于0. 1微米至6微米之間、介于0. 5微米至6微米之間、介于1微米至6微米之間、介 于0. 1微米至5微米之間、介于0. 5微米至5微米之間、介于1微米至5微米之間、介于0. 1 微米至4微米之間、介于0. 5微米至4微米之間或是介于1微米至4微米之間。這些大細(xì) 胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是大于6微米。最后,將上 述含有大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并 使這些細(xì)胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些細(xì)胞及此溶液的試驗(yàn)樣本21a。試驗(yàn)樣本 21a可用于后續(xù)的分析程序(T2)中。
[0148] 在純化程序(Y2)的第二種方式中,請(qǐng)參閱圖5所示,若上述的組織樣本是從固體 組織取得,則將經(jīng)過(guò)膠原蛋白酶處理的組織樣本(如前所述)放入到試管20b中。接著,利 用離心機(jī)13以高轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如1,000g、大于700g、大于1,300g、介于500g至 2, 500g之間或是介于800g至1,600g之間)將試管20b離心一段時(shí)間(例如18分鐘左右、 12分鐘以上、16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管20a完成離心后,分 離出包含大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞。此處有關(guān)大細(xì)胞與小細(xì)胞的敘述,請(qǐng)參閱上述 純化程序(Y2)的第一種方式中的相關(guān)敘述。最后,將上述含有大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有 細(xì)胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并使這些細(xì)胞重新懸浮于此溶液中, 以獲得含有這些細(xì)胞及此溶液的試驗(yàn)樣本21b。試驗(yàn)樣本21b可用于后續(xù)的分析程序(T2) 中。
[0149] 在純化程序(Y2)的第三種方式中,請(qǐng)參閱圖6所示,若上述的組織樣本是從體液 取得,則將該組織樣本以紅血球分解液22培養(yǎng)或作用一段時(shí)間(例如10分鐘左右、8分鐘 以上、12分鐘以上、8至15分鐘或是9至20分鐘),以消除組織樣本中所有的紅血球細(xì)胞。 接著,將含有組織樣本與紅血球分解液22的混合液倒入試管20c中。然后,利用離心機(jī)13 以高轉(zhuǎn)速產(chǎn)生的離心力(例如l,〇〇〇g、大于700g、大于l,300g、介于500g至2,500g之間或 是介于800g至1,600g之間)將試管20c離心一段時(shí)間(例如18分鐘左右、12分鐘以上、 16分鐘以上、10至30分鐘或是15至22分鐘)。待試管20c完成離心后,從含有組織樣本 與紅血球分解液22的混合液中分離出包含大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞。此處有關(guān)大 細(xì)胞與小細(xì)胞的敘述,請(qǐng)參閱上述純化程序(Y2)的第一種方式中的相關(guān)敘述。最后,將上 述含有大細(xì)胞與小細(xì)胞在內(nèi)的所有細(xì)胞放置到一溶液中(此溶液可以含有PBS與BSA),并 使這些細(xì)胞重新懸浮于此溶液中,以獲得含有這些細(xì)胞及此溶液的試驗(yàn)樣本21c。試驗(yàn)樣本 21c可用于后續(xù)的分析程序(T2)中。
[0150] 在利用純化程序(Υ2)獲得試驗(yàn)樣本21a、21b或21c之后,以分析程序(Τ2)對(duì)試 驗(yàn)樣本21a、21b或21c進(jìn)行分析,進(jìn)而獲得上述組織樣本中有關(guān)一種或多種干細(xì)胞的一組 結(jié)果或數(shù)據(jù)。該組結(jié)果或數(shù)據(jù)可透過(guò)量化、質(zhì)化或描述等方式呈現(xiàn)。另外,圖4、圖5或圖6 所示的分析儀器15b (例如逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)(RT-PCR)儀或是流式細(xì)胞儀)可用于進(jìn) 行分析程序(T2)。上述有關(guān)一種或多種干細(xì)胞的結(jié)果或數(shù)據(jù)可以包括干細(xì)胞的種類以及上 述一種或多種干細(xì)胞的相關(guān)數(shù)值(例如數(shù)量、百分比以及/或是尺寸大小)。此處所述的一 種或多種干細(xì)胞可以包括一種或多種小尺寸干細(xì)胞(相關(guān)內(nèi)容請(qǐng)參閱分析程序(T1)中的 敘述)以及/或是一種或數(shù)種大尺寸干細(xì)胞(例如至少一種多潛能干細(xì)胞(如某些種類的 間質(zhì)干細(xì)胞))。這些大尺寸干細(xì)胞的尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義) 可以是大于6微米。
[0151] 分析程序(T2)可以透過(guò)以下兩種方式達(dá)成:流式細(xì)胞技術(shù)或是逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連 鎖反應(yīng)(RT-PCR)分析法(例如實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法)。流式細(xì)胞技術(shù)可以 透過(guò)流式細(xì)胞儀(此儀器為一種分析儀器15b)執(zhí)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分類以及生物標(biāo)記偵 測(cè)等步驟來(lái)分析一樣本的參數(shù)。流式細(xì)胞儀15b可以用來(lái)分析樣本中特定的細(xì)胞(表面) 標(biāo)記是否呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法可以透過(guò)(實(shí)時(shí))逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連 鎖反應(yīng)儀(此儀器為一種分析儀器15b)來(lái)偵測(cè)與量化一樣本中干細(xì)胞的基因表達(dá)。透過(guò) 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)分析法獲得的結(jié)果可以得知干細(xì)胞表達(dá)的基因,而這些基因可以是 0ct4、Nanog、Nestin以及甲種胚胎蛋白。
[0152] 前面段落所描述或提及的項(xiàng)目、規(guī)格、定義、方法、材料、制程、設(shè)備、步驟等都可以 用在以下所提及的所有實(shí)施例中。例如,在以下段落中,「尺寸」一詞的定義可以參考上述 有關(guān)尺寸(Z)的敘述,「?jìng)€(gè)體」一詞的定義可以參考上述有關(guān)個(gè)體(S)的敘述,「組織樣本」 一詞的定義可以參考上述有關(guān)組織樣本(P)的敘述。
[0153] 實(shí)施方式
[0154] 實(shí)施例1 :
[0155] 以下將敘述從一生物(例如人體或動(dòng)物體)獲取、收集或收獲大量干細(xì)胞的方法。 圖7A為根據(jù)本發(fā)明中的一個(gè)實(shí)施例所繪示的流程圖,其是提供一種從取自一個(gè)體的一組 織樣本中獲取、收集或收獲大量干細(xì)胞的方法。所述的干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定 義"里所提及的一種或多種干細(xì)胞。請(qǐng)參閱圖7A所示,在步驟51中,一個(gè)體進(jìn)行或接受一 種或多種的行為或刺激(X),例如服用或攝取一營(yíng)養(yǎng)品或膳食補(bǔ)充品(如含有重量百分比 超過(guò)60%的褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的褐藻補(bǔ)充品或是一顆或多顆在以下第一實(shí)驗(yàn)和 圖11所提及的褐藻糖膠補(bǔ)充品)、服用經(jīng)過(guò)政府部門(如美國(guó)食品藥物管理局)核準(zhǔn)的一 種或多種藥物以及/或是服用一草藥或一中藥。有關(guān)此個(gè)體(也就是前述的生物)的說(shuō)明 可以參閱個(gè)體(S)的敘述。例如,此個(gè)體可以是一人類或是一動(dòng)物(如狗、貓、豬、雞、鴨或 牛)。另外,在進(jìn)行步驟51所述的一種或多種行為或刺激時(shí),可以將劑量、強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、 施行頻率(例如以每次間隔一小時(shí)的方式服用一顆營(yíng)養(yǎng)品或膳食補(bǔ)充品共三次)以及/或 是施行時(shí)間(例如一天的時(shí)段(如早晨、中午、下午、傍晚、晚上)、用餐之前、用餐當(dāng)中、用 餐之后、季節(jié)(如春天、夏天、秋天、冬天)等)等因素納入考慮。例如,當(dāng)個(gè)體服用藥物或 補(bǔ)充品(如褐藻糖膠補(bǔ)充品)的時(shí)候,可將劑量(例如克數(shù))以及施行時(shí)間(例如早餐前、 早餐后或是睡覺前)等因素納入考慮。步驟51所述的一種或多種行為或刺激可以讓個(gè)體 在進(jìn)行或接受步驟51所述的一種或多種行為或刺激一段時(shí)間之后,增加個(gè)體的周邊血液 中特定一種或多種干細(xì)胞(其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種干細(xì)胞) 的數(shù)量。
[0156] 在步驟52中,在個(gè)體進(jìn)行或接受上述的一種或多種的行為或刺激(X)之后,讓個(gè) 體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、 0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí)。透過(guò)步驟 51和步驟52,可以增加或擴(kuò)增活體內(nèi)的干細(xì)胞數(shù)量。接著,在步驟53中,從個(gè)體獲得一組織 樣本(如周邊血液樣本)。有關(guān)組織樣本的說(shuō)明可參閱組織樣本(P)的敘述。接著,在步驟 54中,對(duì)組織樣本進(jìn)行一種干細(xì)胞獲取、收集或收獲程序或方法,進(jìn)而從組織樣本大量地獲 取、收集到或收獲上述的特定一種或多種的干細(xì)胞(其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提 及的一種或多種干細(xì)胞)。例如,透過(guò)對(duì)組織樣本進(jìn)行上述的干細(xì)胞獲取、收集或收獲程序 或方法,可以從組織樣本中大量地獲取、收集到或收獲SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞。
[0157] 接著,在步驟55中,經(jīng)由上述干細(xì)胞獲取、收集或收獲程序或方法而從組織樣本 中獲得的一種或多種的干細(xì)胞可以為了以后的用途(PS)(其敘述在下一段段落中)而被存 放(或儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如攝氏負(fù)30度或攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如冰 箱)中一段時(shí)間(例如1個(gè)月以上或一年以上)。此設(shè)施可以由一機(jī)構(gòu)(如細(xì)胞銀行)所 提供。這些被儲(chǔ)存的干細(xì)胞可以在獲取、收集到或收獲這些干細(xì)胞后的一段時(shí)間(如一個(gè) 月、三個(gè)月、六個(gè)月、一年、兩年、五年或十年)之后因?yàn)橛猛荆≒S)而被用在上述同一個(gè)體或 另一個(gè)體上。此處所述的另一個(gè)體可以是與上述個(gè)體相同生物分類的物種,而且可以與上 述個(gè)體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0158] 這些被儲(chǔ)存的干細(xì)胞可以被用在以下的用途(PS)上,此用途(PS)可以是:干細(xì) 胞治療、抗衰老治療或產(chǎn)品、逆轉(zhuǎn)老化(reverse ageing)治療或產(chǎn)品、創(chuàng)傷治療或產(chǎn)品、臉 部整容治療或產(chǎn)品、整形手術(shù)、侵入式醫(yī)學(xué)美容治療、非侵入式醫(yī)學(xué)美容治療或產(chǎn)品、重建 整形外科手術(shù)、癌癥治療、退化性疾病治療、自體免疫疾病治療、牙齒治療、植牙手術(shù)、燒燙 傷治療、膝半月板損傷治療、關(guān)節(jié)炎治療、膝關(guān)節(jié)炎治療、骨損傷治療、骨折治療、組織修復(fù) 治療、組織或器官?gòu)?fù)制、再生性復(fù)制(reproductive cloning)、治療性復(fù)制(therapeutic cloning)、化妝品、皮膚護(hù)理產(chǎn)品、面膜、飼料添加物、營(yíng)養(yǎng)品、補(bǔ)充品。在一范例中,這些被 儲(chǔ)存的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷谏鲜鰝€(gè)體或上述另一個(gè) 體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、牙齒、肝臟或腎臟)上。在另一范例中,這些被儲(chǔ)存 的干細(xì)胞可以與某些緩沖液(如鹽)混合,然后透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缱⑸浠蛲磕ǎ?混合緩沖液的干細(xì)胞用在上述個(gè)體或上述另一個(gè)體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、 牙齒、肝臟或腎臟)上。
[0159] 實(shí)施例2:
[0160] 經(jīng)由上述干細(xì)胞獲取、收集或收獲程序或方法而從上述組織樣本中獲得的一種或 多種的干細(xì)胞可以不用存放在上述溫度低于攝氏0度的設(shè)施中而被用在上述的用途(PS) 中?;蛘撸?jīng)由上述干細(xì)胞獲取、收集或收獲程序或方法而從上述組織樣本中獲得的一種或 多種的干細(xì)胞可以不用存放在上述溫度低于攝氏0度的設(shè)施中,而是透過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ?注射或涂抹)用在上述個(gè)體或另一個(gè)體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、牙齒、肝臟或 腎臟)上。此處所述的另一個(gè)體可以是與上述個(gè)體相同生物分類的物種,而且可以與上述 個(gè)體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0161] 實(shí)施例3:
[0162] 從步驟53獲得的組織樣本可以被存放在一細(xì)胞銀行或一冷藏設(shè)備(如冰箱或冷 凍庫(kù))之溫度低于攝氏0度(例如攝氏負(fù)30度或攝氏負(fù)80度)的環(huán)境中。在組織樣本存 放一段時(shí)間(如一個(gè)月、三個(gè)月、六個(gè)月、一年、兩年、五年或十年)之后,從冷藏設(shè)備取出組 織樣本,然后對(duì)組織樣本進(jìn)行一種干細(xì)胞獲取、收集或收獲方法,進(jìn)而從組織樣本中獲取、 收集到或收獲上述的特定一種或多種的干細(xì)胞(其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及 的一種或多種干細(xì)胞)。例如,透過(guò)對(duì)組織樣本進(jìn)行上述的干細(xì)胞獲取、收集或收獲方法,可 以從組織樣本中獲取、收集到或收獲SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞。經(jīng)由上述干細(xì)胞獲 取、收集或收獲程序或方法而從組織樣本中獲得的一種或多種的干細(xì)胞可以被用在上述的 用途(PS)中或是透過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缱⑸浠蛲磕ǎ┯迷谏鲜鰝€(gè)體或另一個(gè)體的一組織或 器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所述的另一個(gè)體可以是與上述個(gè)體 相同生物分類的物種,而且可以與上述個(gè)體有相同的血型(如A型、B型、C型或AB型)。
[0163] 實(shí)施例4:
[0164] 從步驟53獲得的組織樣本可以被存放在一細(xì)胞銀行或一冷藏設(shè)備(如冰箱或冷 凍庫(kù))之溫度低于攝氏0度(例如攝氏負(fù)30度或攝氏負(fù)80度)的環(huán)境中。此組織樣本含 有上述的特定一種或多種的干細(xì)胞(其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多 種干細(xì)胞),例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞。在組織樣本存放一段時(shí)間(如一個(gè)月、 三個(gè)月、六個(gè)月、一年、兩年、五年或十年)之后,從冷藏設(shè)備取出組織樣本,然后將組織樣 本用在上述的用途(PS)中或是透過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缱⑸浠蛲磕ǎ┯迷谏鲜鰝€(gè)體或另一個(gè) 體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所述的另一個(gè)體可以 是與上述個(gè)體相同生物分類的物種,而且可以與上述個(gè)體有相同的血型(如A型、B型、C型 或AB型)。
[0165] 實(shí)施例5:
[0166] 從步驟53獲得的組織樣本可以不用被存放在一細(xì)胞銀行或一冷藏設(shè)備(如冰箱 或冷凍庫(kù))的(非常)低溫環(huán)境中一段時(shí)間(如一個(gè)月、三個(gè)月、六個(gè)月、一年、兩年、五年 或十年),而是直接用在上述的用途(PS)中或是透過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缱⑸浠蛲磕ǎ┯迷谏?述個(gè)體或另一個(gè)體的一組織或器官(如皮膚、骨頭、關(guān)節(jié)、牙齒、肝臟或腎臟)上。此處所 述的另一個(gè)體可以是與上述個(gè)體相同生物分類的物種,而且可以與上述個(gè)體有相同的血型 (如A型、B型、C型或AB型)。另外,上述的組織樣本含有上述的特定一種或多種的干細(xì)胞 (其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種干細(xì)胞),例如SB-1細(xì)胞以及/或 是SB-2細(xì)胞。
[0167] 實(shí)施例6:
[0168] 從步驟53獲得的組織樣本可以用來(lái)發(fā)現(xiàn)或偵測(cè)尚未被識(shí)別或發(fā)現(xiàn)的一種或多種 的新種類干細(xì)胞。以下在本實(shí)施例的敘述是以組織樣本是從個(gè)體的周邊血液獲得作為范例 來(lái)進(jìn)行說(shuō)明。在個(gè)體進(jìn)行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之前,個(gè)體的 周邊血液可以沒有上述一種或多種的新種類干細(xì)胞或是僅有相當(dāng)稀少(也就是指數(shù)量非 常的低或是無(wú)法偵測(cè))的上述一種或多種的新種類干細(xì)胞,所以無(wú)法使用或是非常難以使 用一流式細(xì)胞儀或是其它測(cè)量工具發(fā)現(xiàn)上述一種或多種的新種類干細(xì)胞。在個(gè)體進(jìn)行步驟 51和步驟52之后,上述一種或多種的新種類干細(xì)胞會(huì)在個(gè)體的周邊血液內(nèi)增加、進(jìn)行活化 反應(yīng)、流動(dòng)、生成或進(jìn)行刺激反應(yīng)。因此,透過(guò)一流式細(xì)胞儀或是其它測(cè)量工具,可以輕易地 發(fā)現(xiàn)上述一種或多種的新種類干細(xì)胞,相關(guān)內(nèi)容可參閱下面步驟59的敘述。
[0169] 透過(guò)發(fā)現(xiàn)或偵測(cè)新種類干細(xì)胞的方法,可以發(fā)現(xiàn)或偵測(cè)到上述一種或多種的新種 類干細(xì)胞。圖7B揭示一種發(fā)現(xiàn)或偵測(cè)一種或多種新種類干細(xì)胞的方法的流程圖。請(qǐng)參閱圖 7B所示,在依序進(jìn)行步驟51至步驟53之后,接著進(jìn)行步驟59。在步驟59中,利用一種可 以偵測(cè)上述一種或多種的新種類干細(xì)胞的分析方法(如前面所述的檢測(cè)或測(cè)量方法(M0)、 (Ml)或(M2))來(lái)處理步驟53所獲得的組織樣本(例如周邊血液樣本)。上述的分析方法 包括偵測(cè)組織樣本中的細(xì)胞是否含有細(xì)胞核的步驟以及組織樣本中的細(xì)胞是否可以表達(dá) 以及/或是無(wú)法表達(dá)一種或多種選定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記的步驟。
[0170] 實(shí)施例7:
[0171] 利用前面所述的檢測(cè)或測(cè)量方法(MO)、(Ml)或(M2)、圖9中的步驟61至步驟70、 圖14A-圖14C中的步驟1至步驟20、之后所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或是之 后所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD),可以從圖7A步驟53所獲得的組織樣本中獲得 有關(guān)上述個(gè)體在進(jìn)行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之后的干細(xì)胞數(shù) 據(jù)(以下稱"數(shù)據(jù)A")。數(shù)據(jù)A可以包括各種干細(xì)胞的數(shù)量、各種干細(xì)胞所占的百分比以及 /或是一種或多種干細(xì)胞在步驟53所獲得的組織樣本中每毫升的數(shù)量(也就是一種或多種 干細(xì)胞在步驟53所獲得的組織樣本中每單位體積的數(shù)量)。此處所述的一種或多種干細(xì)胞 可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種干細(xì)胞。例如,數(shù)據(jù)A可以包括SB-1 細(xì)胞的數(shù)量或百分比、SB-2細(xì)胞的數(shù)量或百分比、類卵裂球干細(xì)胞的數(shù)量或百分比、極小類 胚胎干細(xì)胞的數(shù)量或百分比、間質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量或百分比、造血干細(xì)胞的數(shù)量或百分比、一 種或多種的多功能干細(xì)胞、多潛能干細(xì)胞以及/或是先驅(qū)干細(xì)胞的數(shù)量或百分比、以及/或 是一種或多種的多功能干細(xì)胞、多潛能干細(xì)胞和/或先驅(qū)干細(xì)胞在步驟53所獲得的組織樣 本中每單位體積的數(shù)量。數(shù)據(jù)A可以用于臨床診斷或是用于監(jiān)測(cè)、決定、確認(rèn)或評(píng)估個(gè)體的 病程階段(disease stage)、治療進(jìn)展(treatment progress)、健康狀況以及/或是生理情 況。
[0172] 或者,數(shù)據(jù)A可以用來(lái)評(píng)估或確認(rèn)步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)對(duì) 于治療或治愈患有一種特定疾病的個(gè)體的功效(或效用)。在此范例中,可以透過(guò)控制步 驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)的劑量、強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間、施行頻率以及/或是施 行時(shí)間來(lái)治療或治愈患有上述特定疾病的個(gè)體。上述的特定疾病可以是前列腺癌、肝癌、胃 癌、口腔癌、大腸癌、乳癌、肺癌、鼻咽癌、子宮頸癌、皮膚癌、食道癌、膀胱癌、胰臟癌、子宮內(nèi) 膜癌、卵巢癌、膽囊癌、甲狀腺癌、白血病、淋巴癌、非何杰金氏淋巴瘤、黑色素瘤、帕金森氏 癥(parkinsonism)、阿茲海默?。ˋlzheimer's disease)、癡呆癥(dementia)、糖尿病、過(guò) 敏性鼻炎、腦瘤、后天免疫缺乏癥候群(acquired immunodeficiency syndrome)。在本范例 中,也可以獲得有關(guān)上述個(gè)體在進(jìn)行或接受步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)之 前的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(以下稱"數(shù)據(jù)B")。然后,透過(guò)比較數(shù)據(jù)A與數(shù)據(jù)B,可以確認(rèn)、決定或評(píng) 估步驟51所述的一種或多種的行為或刺激(X)對(duì)于治療或治愈患有上述特定疾病的個(gè)體 的功效(或效用)。圖7C根據(jù)本范例繪出一種確認(rèn)、決定或評(píng)估步驟51所述的一種或多種 的行為或刺激(X)對(duì)于治愈或治療患有上述特定疾病的個(gè)體的功效(或效用)的方法的流 程圖。
[0173] 請(qǐng)參閱圖7C所示,在步驟49中,從上述個(gè)體取出、獲得、得到或取得一組織樣本 (以下稱"第一組織樣本")。有關(guān)第一組組織樣本的說(shuō)明可參閱前面所述的組織樣本(P)。 接著,在步驟50中,以第一檢測(cè)或測(cè)量方法分析或檢測(cè)第一組織樣本,進(jìn)而獲得與第一組 織樣本中一種或多種干細(xì)胞有關(guān)的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)(也就是數(shù)據(jù)B)。第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可藉 由量化或描述等方式呈現(xiàn)。第一檢測(cè)或測(cè)量方法可以包括取得和/或測(cè)量干細(xì)胞的步驟。 有關(guān)第一檢測(cè)或測(cè)量方法的說(shuō)明可參閱檢測(cè)或測(cè)量方法(MO)、(Ml)或(M2)的敘述、圖9中 步驟61至步驟70的敘述或是圖14A-圖14C中步驟1至步驟20的敘述。除了透過(guò)第一 檢測(cè)或測(cè)量方法,第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)也可以透過(guò)之后所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD) 或是之后所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD)來(lái)獲得。
[0174] 第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)報(bào)括數(shù)個(gè)結(jié)果或數(shù)據(jù)Ru-R+b,其中a為正整數(shù)(例如是2到100 中的任何一個(gè)數(shù)字),b也是正整數(shù)(例如是1或2)。R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字(也就是跟隨在 字母R之后的數(shù)字一 1到a)是代表某一種選定的干細(xì)胞。R的第二個(gè)下標(biāo)數(shù)字(也就是跟 隨在第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字之后的數(shù)字一 1到b)是代表某一種數(shù)據(jù)型態(tài)。
[0175] 以下將對(duì)R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字進(jìn)行敘述。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為1的時(shí)候,結(jié) 果或數(shù)據(jù)Ru_R lib可以是與"SB-1細(xì)胞"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為2 的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R2il_R 2ib可以是與"SB-2細(xì)胞"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo) 數(shù)字為3的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R3il-R 3,b可以是與"類卵裂球干細(xì)胞(BLSC) "有關(guān)的結(jié)果或數(shù) 據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為4的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R41-R4b可以是與"極小類胚胎干細(xì)胞 (VSEL) "有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為5的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R5,x-R5, b可 以是與"某一種多潛能干細(xì)胞(如間質(zhì)干細(xì)胞或多潛能成體先驅(qū)細(xì)胞)"有關(guān)的結(jié)果或數(shù) 據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為6的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)Rw-Rm可以是與"另一種多潛能干細(xì) 胞(如造血干細(xì)胞、骨髓多潛能干細(xì)胞或多潛能成體干細(xì)胞)"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的 第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為7的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R 7;1-R7,b可以是與"某一種先驅(qū)干細(xì)胞(如前間質(zhì) 干細(xì)胞、多潛能先驅(qū)干細(xì)胞、譜系限制先驅(qū)干細(xì)胞、共同髓原先驅(qū)細(xì)胞、共同淋巴球先驅(qū)細(xì) 胞或造血先驅(qū)細(xì)胞)"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第一個(gè)下標(biāo)數(shù)字為8的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù) R8;1_R8;b可以是與"另一種先驅(qū)干細(xì)胞(如成體骨髓多元性誘導(dǎo)細(xì)胞或間質(zhì)先驅(qū)細(xì)胞)"有 關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。
[0176] 以下將對(duì)R的第二個(gè)下標(biāo)數(shù)字進(jìn)行敘述。在R的第二個(gè)下標(biāo)數(shù)字為1的時(shí)候,結(jié) 果或數(shù)據(jù)R M-Rail可以是與"干細(xì)胞的數(shù)量"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第二個(gè)下標(biāo)數(shù)字為 2的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R li2_Ra,2可以是與"干細(xì)胞的百分比"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。在R的第 二個(gè)下標(biāo)數(shù)字為3的時(shí)候,結(jié)果或數(shù)據(jù)R li3-Ra,3可以是與"干細(xì)胞在一組織樣本(如上述的 第一組織樣本)中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量"有關(guān)的結(jié)果或數(shù)據(jù)。
[0177] 因此,結(jié)果或數(shù)據(jù)Ru可代表或顯示出SB-1細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果或數(shù)據(jù)Rli2可代表 或顯示出SB-1細(xì)胞的百分比。結(jié)果或數(shù)據(jù)可代表或顯示出SB-1細(xì)胞在一組織樣本 (如上述的第一組織樣本)中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量。結(jié)果或數(shù)據(jù)R 2il可代表或 顯示出SB-2細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果或數(shù)據(jù)R2,2可代表或顯示出SB-2細(xì)胞的百分比。結(jié)果或數(shù) 據(jù)R 2i3可代表或顯示出SB-2細(xì)胞在一組織樣本(如上述的第一組織樣本)中每單位體積 (如每毫升)的數(shù)量。其它的結(jié)果或數(shù)據(jù)則以此類推,在此就不加以論述。
[0178] 請(qǐng)參閱圖7C所示,在進(jìn)行完(或完成)步驟49或步驟50之后,依序進(jìn)行前面所 述的步驟51至步驟53,因而從進(jìn)行或接受步驟51所述之一種或多種行為或刺激(X)之后 的個(gè)體取出、獲得、得到或取得一組織樣本(以下稱"第二組織樣本")。有關(guān)第二組組織樣 本的說(shuō)明可參閱前面所述的組織樣本(P)。第一與第二組織樣本可以是從個(gè)體的同一種組 織所獲得的兩個(gè)樣本。例如,第一與第二組織樣本可以從個(gè)體的周邊血液、骨骼、肌肉、脂肪 細(xì)胞或是脂肪組織獲得。在一范例中,第一與第二組織樣本都可以是周邊血液樣本。
[0179] 接著,在步驟56中,以第二檢測(cè)或測(cè)量方法分析或檢測(cè)第二組織樣本,進(jìn)而獲得 與第二組織樣本中一種或多種干細(xì)胞有關(guān)的第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)(也就是數(shù)據(jù)A)。第二干細(xì)胞 數(shù)據(jù)可藉由量化或描述等方式呈現(xiàn)。第二檢測(cè)或測(cè)量方法可以包括取得和/或測(cè)量干細(xì)胞 的步驟。有關(guān)第二檢測(cè)或測(cè)量方法的說(shuō)明可參閱檢測(cè)或測(cè)量方法(MO)、(Ml)或(M2)的敘 述、圖9中步驟61至步驟70的敘述或是圖14A-圖14C中步驟1至步驟20的敘述。除了 透過(guò)第二檢測(cè)或測(cè)量方法,第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)也可以透過(guò)之后所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或 工具(AD)或是之后所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD)來(lái)獲得。
[0180] 第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)含有與步驟50所提及的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)相同類型的信息內(nèi)容, 也就是說(shuō)第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)含有對(duì)應(yīng)的結(jié)果或數(shù)據(jù)& ,其中有關(guān)R的第一個(gè)與第二個(gè)下 標(biāo)數(shù)字是定義在、描述在或是說(shuō)明在步驟50所提及的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)的Ru-Ra, b中。為了 獲得相同類型的信息內(nèi)容以及減少實(shí)驗(yàn)誤差,本發(fā)明透過(guò)相同的方式(例如檢測(cè)或測(cè)量方 法(MO)、(Ml)或(M2)、圖9的步驟61至步驟70或是圖14A-圖14C的步驟1至步驟20) 或是相同的儀器(例如整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或是單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置 (TD))來(lái)進(jìn)行獲得第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)與第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)的第一與第二檢測(cè)或測(cè)量方法。
[0181] 接著,在步驟57中,根據(jù)對(duì)第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)與第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)所做的分析(其可 包括比較第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)與第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)),可以確認(rèn)、決定或評(píng)估步驟51所述的一種 或多種的行為或刺激(X)對(duì)于治愈或治療患有上述特定疾病的個(gè)體的功效(或效用)。第 一干細(xì)胞數(shù)據(jù)與第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以做成一份評(píng)估或檢查報(bào)告。另外,圖7C的步驟49、步 驟50、步驟51、步驟52、步驟53、步驟56和步驟57也可以用來(lái)確認(rèn)、決定、評(píng)估或測(cè)試步驟 51所述之一種或多種的行為或刺激(如服用或攝取一顆或多顆以下第一實(shí)驗(yàn)和圖11所提 及的褐藻補(bǔ)充品)的效果或功效(或效用)。
[0182] 請(qǐng)參閱圖7C所示,在進(jìn)行完(或完成)步驟56或步驟57之后,如果需要可以進(jìn) 行步驟58,也就是讓相同個(gè)體依序進(jìn)行步驟51、步驟52、步驟53、步驟56和步驟57 -次或 多次。在步驟58中,每次進(jìn)行步驟53的時(shí)候,都會(huì)在進(jìn)行完(或完成)步驟52之后,從相 同個(gè)體獲得或得到一組織樣本。在步驟58中,每次以一檢測(cè)或測(cè)量方法(如步驟56所提 及的檢測(cè)或測(cè)量方法)分析或檢測(cè)從相同個(gè)體獲得的組織樣本都可以獲得與組織樣本中 一種或多種干細(xì)胞有關(guān)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(其說(shuō)明可參閱步驟50所述的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))。在 步驟58中,每次將當(dāng)前的干細(xì)胞數(shù)據(jù)和前一次的干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(如步驟57所述的 比較第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)與第二干細(xì)胞數(shù)據(jù))都可以確認(rèn)、決定或評(píng)估步驟51所述的一種或多 種的行為或刺激(X)對(duì)于治愈或治療患有上述特定疾病的個(gè)體的功效(或效用)。步驟58 所獲得的每一組干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以含有與步驟50所述的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)相同類型的信息內(nèi) 容,也就是說(shuō)步驟58所獲得的每一組干細(xì)胞數(shù)據(jù)含有對(duì)應(yīng)的結(jié)果或數(shù)據(jù)& rlb,其中有關(guān) R的第一個(gè)與第二個(gè)下標(biāo)數(shù)字是定義在、描述在或是說(shuō)明在步驟50所提及的第一干細(xì)胞數(shù) 據(jù)的R1;1_Ra;b中。另外,圖7C的步驟58也可以用來(lái)確認(rèn)、決定、評(píng)估或測(cè)試步驟51所述的 一種或多種的行為或刺激(如服用或攝取一顆或多顆以下第一實(shí)驗(yàn)和圖11所提及的褐藻 補(bǔ)充品)的效果或功效(或效用)。
[0183] 在接下來(lái)的內(nèi)容中,將以一種增加人體周邊血液干細(xì)胞數(shù)量的方法作為范例,敘 述第一實(shí)驗(yàn)并顯示相關(guān)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖8A-圖8F顯示出三位人類受試者在口服30顆褐藻 糖膠補(bǔ)充品之前與之后的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。透過(guò)步驟49至步驟53和步驟56至步驟58的這個(gè) 方法,可以從三位人類受試者獲得圖8A-圖8F的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。在第一實(shí)驗(yàn)中,每一位人類 受試者在步驟51中是口服30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品。每一顆褐藻糖膠補(bǔ)充品的重量為151. 3 毫克(mg),并且含有0. 1克的褐藻糖膠(其是透過(guò)萃取的方式從生長(zhǎng)在日本沖繩縣周圍海 域的褐藻中獲得)和0.04克的膳食纖維。此褐藻糖膠補(bǔ)充品可以在日本沖繩縣生產(chǎn)。褐 藻是海藻的一種。褐藻有各式各樣的種類,例如水云、昆布、裙帶菜、羊棲菜等。綠藻、藍(lán)藻 或藍(lán)綠藻是生長(zhǎng)在靠近海岸的地方或是在淺海里,而且依賴光合作用生長(zhǎng)。紅藻是生長(zhǎng)在 深海里,而且倚賴微光進(jìn)行光合作用。褐藻是生長(zhǎng)在介于綠/藍(lán)藻和紅藻之間的海洋中,換 句話說(shuō),褐藻是生長(zhǎng)在海洋深度中間的地方。
[0184] 圖11顯示用在第一實(shí)驗(yàn)之褐藻糖膠補(bǔ)充品的內(nèi)容/成分信息。如圖11所示,一顆 褐藻糖膠補(bǔ)充品含有重量百分比為80%的水云粉(mozuku powder)、重量百分比為15%的 結(jié)晶纖維素 (crystalline cellulose)、重量百分比為3 %的鹿糖脂肪酸酯(sucrose fatty acid esters)以及重量百分比為2%的精細(xì)二氧化硅。水云粉是萃取自(或是提取自)生 長(zhǎng)在日本沖繩縣周圍海域中的水云褐藻(為一種海藻)。然后,將水云粉混合結(jié)晶纖維素、 蔗糖脂肪酸酯以及精細(xì)二氧化硅,就可以獲得這顆褐藻糖膠補(bǔ)充品。在第一實(shí)驗(yàn)中,每一 位受試者口服30顆沖繩褐藻糖膠補(bǔ)充品,也就是說(shuō)每一位受試者服用4. 5克(或超過(guò)3. 5 克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,此沖繩褐藻補(bǔ)充品包括重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水 云粉。這30顆的沖繩褐藻糖膠補(bǔ)充品(也就是約4. 5克左右的沖繩褐藻補(bǔ)充品)含有3 克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過(guò)60%的褐藻糖膠。因此,每一位 受試者服用3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠。
[0185] 在第一實(shí)驗(yàn)中,這三位受試者每一位的體重大約是75公斤。這意味著褐藻糖膠的 劑量是每公斤體重約40毫克?;蛘?,褐藻糖膠的劑量也可以是每公斤體重超過(guò)20毫克、30 毫克、40毫克或是50毫克。圖12揭示褐藻糖膠的部分分子結(jié)構(gòu),其包含多個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu),每 一個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu)含有5個(gè)碳原子(C)和1個(gè)氧原子(0)。另外,此分子結(jié)構(gòu)也包含數(shù)個(gè)基團(tuán) (radical) R,其可是S03*H。S03基團(tuán)在褐藻糖膠中扮演著非常重要的角色。在沖繩褐藻 糖膠補(bǔ)充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比大約是12%。對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例而 言,在這個(gè)褐藻糖膠補(bǔ)充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比也可以大于6%、8% 或10%。或者,在這個(gè)褐藻糖膠補(bǔ)充品中,硫(S)在褐藻糖膠分子中的重量百分比也可以大 于 12%、16%或 20%。
[0186] 在第一實(shí)驗(yàn)中,這三位受試者是:(1)受試者A :-位近三十歲的女性,其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 顯示在圖8A和圖8B ; (2)受試者B :-位五十五歲左右的男性,其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在圖8C和 圖8D ;以及(3)受試者C :一位五十歲出頭的男性,其實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在圖8E和圖8F。圖8A 和圖8B的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示受試者A在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前、之后第1. 5小時(shí)、 之后第24小時(shí)以及之后第48小時(shí)的每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的百分比。圖8C 和圖8D的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示受試者B在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前、之后第1. 5小時(shí)、 之后第24小時(shí)以及之后第48小時(shí)的每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的百分比。圖8E 和第8圖8F的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示受試者C在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前、之后第1. 5小 時(shí)、之后第24小時(shí)以及之后第48小時(shí)的每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的百分比。
[0187] 用于干細(xì)胞研究的實(shí)驗(yàn)方法、程序和規(guī)范(其包括使用流式細(xì)胞儀)已敘述在前 面的段落中。圖9的步驟61至步驟70也可以用來(lái)獲得每一位受試者在食用或攝取褐藻糖 膠補(bǔ)充品之前、之后第1. 5小時(shí)、之后第24小時(shí)以及之后第48小時(shí)的每一種干細(xì)胞(共有 27種干細(xì)胞)的百分比。請(qǐng)參閱圖9所示,在步驟61中,從一個(gè)體(如上述三位人類受試 者的任何一位)獲得或收集5毫升的周邊血液,然后將5毫升的周邊血液放進(jìn)第一試管中, 并使其混合二價(jià)陽(yáng)離子螯合劑(例如乙二胺四乙酸)。接著,在步驟62中,將1毫升的6% 羥乙基淀粉加到第一試管內(nèi)的5毫升周邊血液中,以形成一個(gè)第一中間樣本。6%羥乙基淀 粉是一種磷酸鹽緩沖液內(nèi)含有6%的羥乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升的磷酸鹽緩沖 液含有6克的羥乙基淀粉。接著,在步驟63中,讓第一中間樣本在室溫(如約27°C)靜置 或培育一段時(shí)間(例如至少30分鐘)。待第一中間樣本形成上下兩個(gè)分層后,在不擾動(dòng)下 分層(其為紅血球?qū)樱┑那闆r下,將上分層(其為細(xì)胞層)以吸取器移出并放置到第二試 管中。然后,在步驟64中,將放到第二試管內(nèi)的上分層以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘3, 000 轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如15分鐘),并在離心完成后,獲得離心樣本。接著,在步驟65中, 移除離心樣本的上清液。接下來(lái),在步驟66中,以適當(dāng)?shù)柠}溶液(如PBS)沖洗離心樣本的 顆粒,然后使顆粒重新懸浮于3毫升的第一溶液(例如含有1 %或2%牛血清白蛋白的磷酸 鹽緩沖液)中,以獲得3毫升樣本。
[0188] 接著,在步驟67中,將3毫升樣本分到多個(gè)樣本容器(如試管)中。每個(gè)樣本容 器含有來(lái)自3毫升樣本的100微升(microliter)溶液(以下稱" 100微升樣本")。然后, 每個(gè)樣本容器可以加入特定一種的染色劑(其可含有特定一種的抗體或是多種特定的抗 體)。加到每個(gè)樣本容器里的染色劑可以是彼此不同的,所以每個(gè)樣本容器中的染色劑所含 有的一種或多種抗體也可以是彼此不同的。因此,加到這些樣本容器里的染色劑是彼此含 有不同種類的抗體。在每個(gè)樣本容器中加入一種特定染色劑的目的在于識(shí)別一種特定的細(xì) 胞(表面)標(biāo)記、多種選定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記或是特定種類的干細(xì)胞。在染色劑里的每 一種抗體可以用來(lái)識(shí)別一種特定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記、一種特定的干細(xì)胞或是多種特定的 干細(xì)胞或細(xì)胞(表面)標(biāo)記。這些染色劑里的每一種抗體是不同于這些染色劑里的其它種 抗體。因此,每一個(gè)樣本容器里含有一個(gè)第二中間樣本,而且每一個(gè)第二中間樣本都是由經(jīng) 過(guò)上述對(duì)應(yīng)的染色劑(其含有一種或多種特定的抗體)染色的100微升樣本所構(gòu)成。
[0189] 接著,在步驟68中,讓這些樣本容器里的第二中間樣本在室溫(如約27°C )靜置 或培育一段時(shí)間(例如至少30分鐘)。接著,在步驟69中,將每一個(gè)第二中間樣本和大約 400微升的第二溶液(如含有1 %或2%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液)進(jìn)行混合,以形成 體積為500微升的樣本(以下稱"500微升樣本")。每一個(gè)500微升樣本都是100微升樣 本(其是經(jīng)過(guò)相對(duì)應(yīng)的一種染色劑(此染色劑含有一種或多種抗體)染色)和第二溶液的 混合物。接著,在步驟70中,利用一流式細(xì)胞儀分析這些樣本容器里的500微升樣本,進(jìn)而 獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)。在第一實(shí)驗(yàn)中,流式細(xì)胞儀會(huì)去計(jì)數(shù)和分析每個(gè)500微升樣本里的其中 一百萬(wàn)個(gè)顆粒(其是含有干細(xì)胞、其它的細(xì)胞以及來(lái)自加入的染色劑或第二溶液的顆粒)。
[0190] 在圖9的步驟70中,透過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)量到的前向散射系數(shù)(forward scattering coefficient,簡(jiǎn)稱 FSC)和側(cè)向散射系數(shù)(side scattering coefficient,簡(jiǎn) 稱SSC),可以將上述提及的每個(gè)500微升樣本里的其中一百萬(wàn)個(gè)顆粒(其是含有干細(xì)胞、 其它的細(xì)胞以及來(lái)自加入的染色劑或第二溶液的顆粒)區(qū)分成對(duì)應(yīng)的多個(gè)細(xì)胞群或顆粒 群。圖10是用在上述流式細(xì)胞儀的前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖,并且顯示某個(gè)500微 升樣本里的一百萬(wàn)個(gè)顆粒(其系含有干細(xì)胞、其它的細(xì)胞以及來(lái)自加入的染色劑或第二溶 液的顆粒)的多個(gè)細(xì)胞群或顆粒群。請(qǐng)參閱圖10所示,橫軸代表范圍從1〇 3到1〇7 2的前 向散射系數(shù),縱軸代表范圍從101到1〇72的側(cè)向散射系數(shù)。在本發(fā)明中,前向散射系數(shù)與 一個(gè)細(xì)胞或顆粒的表面積或尺寸有關(guān)或是成比例,側(cè)向散射系數(shù)與一個(gè)細(xì)胞或顆粒的粒性 (granularity)或內(nèi)部復(fù)雜度有關(guān)或是成比例。位在圖10所示的垂直虛線81右側(cè)區(qū)域的 點(diǎn)狀物可以代表尺寸大于1微米的顆?;蚣?xì)胞。位在圖10所示的水平虛線82上方區(qū)域的 點(diǎn)狀物可以代表側(cè)向散射系數(shù)大于1〇 2的顆?;蚣?xì)胞。
[0191] 圖10所示的細(xì)胞群或顆粒群包括:(1)微顆粒(micro particles),如區(qū)域P1所 示;(2)尺寸大于1微米且側(cè)向散射系數(shù)大于102的細(xì)胞,如區(qū)域P3所示;(3)未知的微 顆粒,如區(qū)域P4所示;(4)染色緩沖溶液(staining buffer),如區(qū)域P5所示;(5)淋巴球 (lymphocyte),如區(qū)域P6所示;(6)紅血球,如區(qū)域P7所示;(7)粒細(xì)胞(granulocyte),如 區(qū)域P8所示;以及(8)血小板,如區(qū)域P9所示。區(qū)域P3包括區(qū)域P1、區(qū)域P6、區(qū)域P7、區(qū) 域P8和區(qū)域P9。感興趣的細(xì)胞或顆粒(以下稱"全部細(xì)胞或顆粒TS")是位在區(qū)域P3里, 但是沒有位在區(qū)域P1、區(qū)域P6、區(qū)域P7、區(qū)域P8和區(qū)域P9這些區(qū)域里。全部細(xì)胞或顆粒 TS包含有一種或多種上述的27種干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)。在本 發(fā)明中,其它500微升樣本含有與圖10所提及的細(xì)胞群或顆粒群相同的細(xì)胞群或顆粒群。
[0192] 透過(guò)流式細(xì)胞儀,可以測(cè)得(或獲得)每個(gè)500微升樣本里的全部細(xì)胞或顆粒TS 的數(shù)量以及在全部細(xì)胞或顆粒TS中選定種類干細(xì)胞的數(shù)量。然后,使用上述的數(shù)據(jù)或資 料,可以得到圖8A-圖8F所示的"上述27種干細(xì)胞中每一種干細(xì)胞的數(shù)量或總數(shù)占全部細(xì) 胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比"。圖8A-圖8F所示的每一種干細(xì)胞的百分比可以透過(guò) 下列的計(jì)算方式來(lái)獲得:將每一種干細(xì)胞的數(shù)量或總數(shù)除以對(duì)應(yīng)的全部細(xì)胞或顆粒TS的 數(shù)量或總數(shù),然后將每一個(gè)相除的結(jié)果乘以100% (其是為了將相除的結(jié)果轉(zhuǎn)換成百分比 數(shù)字)。在步驟70中,透過(guò)上述流式細(xì)胞儀獲得的干細(xì)胞數(shù)據(jù)報(bào)括"每一種干細(xì)胞(共有 27種干細(xì)胞)的數(shù)量或總數(shù)占對(duì)應(yīng)的全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比"。
[0193] 因此,對(duì)上述三位人類受試者進(jìn)行步驟61至步驟70所述的方法,可以獲得圖 8A-圖8F所示的每位人類受試者在食用或攝取上述褐藻糖膠補(bǔ)充品之前、之后第1. 5小時(shí)、 之后第24小時(shí)以及之后第48小時(shí)的"每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的數(shù)量或總數(shù) 占對(duì)應(yīng)的全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比"。利用獲得的百分比數(shù)據(jù),則可獲得 每位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前和之后第1. 5小時(shí)每一種干細(xì)胞(共有 27種干細(xì)胞)的百分比變化(percentage change)、在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前和 之后第24小時(shí)每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的百分比變化或是在食用或攝取褐藻糖 膠補(bǔ)充品之前和之后第48小時(shí)每一種干細(xì)胞(共有27種干細(xì)胞)的百分比變化。這些百 分比變化的數(shù)據(jù)可以用來(lái)建立或得到干細(xì)胞在體內(nèi)培養(yǎng)或培育的最佳收獲(或獲?。r(shí)間 點(diǎn)(例如在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后的第24小時(shí))。
[0194] 請(qǐng)?jiān)俅螀㈤唸D8A-圖8F,將三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前的 數(shù)據(jù)和三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第24小時(shí)的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,得 知大部分種類的干細(xì)胞在百分比上顯示出有增加的情況。特別是可以發(fā)現(xiàn)下列的干細(xì)胞在 百分比上有兩倍或是更多的增加:SB-1細(xì)胞、⑶44(+)多潛能干細(xì)胞、⑶13(+)多潛能干細(xì) 胞、⑶73(+)多潛能干細(xì)胞、⑶90(+)多潛能干細(xì)胞、⑶34(+)造血干細(xì)胞、⑶48(+)先驅(qū)干 細(xì)胞、⑶244(+)先驅(qū)干細(xì)胞、⑶140b(+)先驅(qū)干細(xì)胞、⑶117(+)先驅(qū)干細(xì)胞、⑶10(+)先驅(qū) 干細(xì)胞以及CD33(+)先驅(qū)干細(xì)胞。上述12種干細(xì)胞在百分比上有兩倍或是更多的增加是 透過(guò)下列的方式得知:將三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第24小時(shí)有 關(guān)上述12種干細(xì)胞的"干細(xì)胞的數(shù)量或總數(shù)占對(duì)應(yīng)的全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的 百分比"和三位人類受試者在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前有關(guān)上述12種干細(xì)胞的"干 細(xì)胞的數(shù)量或總數(shù)占對(duì)應(yīng)的全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比"進(jìn)行比較。
[0195] 根據(jù)圖8A-圖8F的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示,服用上述的褐藻糖膠補(bǔ)充品可以導(dǎo)致、引起 或造成某些種類干細(xì)胞的百分比在三位人類受試者食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第24 小時(shí)的周邊血液中至少有兩倍的增加。此處所述的"兩倍增加"是指「某些特定種類的干細(xì) 胞在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之前的百分比」和「這些特定種類的干細(xì)胞在食用或攝取 褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第24小時(shí)(也可以是其它特定時(shí)間,例如第1. 5小時(shí)、第3小時(shí)、第6 小時(shí)、第9小時(shí)、第12小時(shí)、第18小時(shí)、第30小時(shí)或第36小時(shí))的百分比」的比例。另外, 圖8A-圖8F的干細(xì)胞數(shù)據(jù)也顯示,其它種類的干細(xì)胞也有1. 5倍、3倍或4倍的增加。因 此,口服褐藻糖膠(一種褐藻的主要成分)可以是一種使人類或動(dòng)物的周邊血液增加干細(xì) 胞的有效方法。綜上所述,一種行為,例如口服3克(也就是超過(guò)2克)的褐藻糖膠(其可 來(lái)自上述的褐藻糖膠補(bǔ)充品)或是一種或多種的行為或刺激(X),可以導(dǎo)致、引起、活化或 催化人類或動(dòng)物周邊血液中的干細(xì)胞至少有1.5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以 上)或4倍(或以上)的增加。
[0196] 某些準(zhǔn)則(或標(biāo)準(zhǔn))可以設(shè)定用來(lái)決定步驟53獲得的組織樣本(其在進(jìn)行或接 受步驟51的一種或多種的行為或刺激(X)之后取得)是否可以用于收獲、獲得或是收集圖 7A步驟54的干細(xì)胞。例如,請(qǐng)參閱圖7A所示,當(dāng)測(cè)量結(jié)果或數(shù)據(jù)顯示SB-1細(xì)胞的數(shù)量或 總數(shù)占全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比是大于20%、25%或30%、SB-2細(xì)胞的數(shù) 量或總數(shù)占全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比是大于20%、25%或30%以及/或 是類卵裂球干細(xì)胞的數(shù)量或總數(shù)占全部細(xì)胞或顆粒TS的數(shù)量或總數(shù)的百分比是大于5% 或10%的時(shí)候,從步驟53獲得的組織樣本(其在進(jìn)行或接受步驟51的一種或多種的行為 或刺激(X)之后取得)才可以用來(lái)收獲、獲得或是收集干細(xì)胞?;蛘撸?qǐng)參閱圖7A所示,當(dāng) 測(cè)量結(jié)果或數(shù)據(jù)顯示SB-1細(xì)胞、SB-2細(xì)胞以及/或是類卵裂球干細(xì)胞至少有1. 5倍(或 以上)增加、2倍(或以上)增加或是3倍(或以上)增加的時(shí)候,從步驟53獲得的組織 樣本(其在進(jìn)行或接受步驟51的一種或多種的行為或刺激(X)之后取得)才可以用來(lái)收 獲、獲得或是收集干細(xì)胞。此處所述的X倍(如1. 5倍、2倍或3倍)增加已定義在前面的 段落中。
[0197] 根據(jù)圖8A-圖8F所示的結(jié)果,證實(shí)口服褐藻糖膠可以增加人類或動(dòng)物的周邊血液 中干細(xì)胞的數(shù)量。因此,用來(lái)表示(或指出)口服褐藻糖膠(其為一種行為或刺激(X))有 益于增加人體某些種類干細(xì)胞數(shù)量的標(biāo)志、記號(hào)、陳述或符號(hào)就可以被允許貼在或是印在 一種產(chǎn)品(如上述的褐藻糖膠補(bǔ)充品)的包裝、容器或是包裝紙上。在另外一個(gè)范例中,圖 8A-圖8F所示的結(jié)果也可以用來(lái)判斷使用在口服褐藻糖膠補(bǔ)充品這種行為的劑量、強(qiáng)度、 持續(xù)時(shí)間、施行頻率以及/或是施行時(shí)間是否有益于增加人體某些種類干細(xì)胞的數(shù)量。根 據(jù)圖8A-圖8F所示的結(jié)果,每天或是一次服用30顆的褐藻糖膠補(bǔ)充品(這30顆褐藻糖膠 補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠)可以用來(lái)治療某些疾病或是傷害或是用來(lái) 維持健康。
[0198] 一般情況下,圖8A-圖8F所述的27種干細(xì)胞在組織中可以認(rèn)為是靜止或休眠的 (quiescent),但是在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后,可以讓這27種干細(xì)胞移動(dòng)或調(diào)動(dòng) 到周邊血液中,并且活化或分化這27種干細(xì)胞來(lái)修補(bǔ)受損傷的組織。因此,褐藻的褐藻糖 膠成分可以在干細(xì)胞從一適當(dāng)位置(如肌肉或骨髓)移動(dòng)或調(diào)動(dòng)到血流的機(jī)制中或是在活 化或生成干細(xì)胞的機(jī)制中扮演一個(gè)關(guān)鍵性的角色。換句話說(shuō),褐藻的主要成分一褐藻糖膠, 可以是干細(xì)胞的一種調(diào)動(dòng)(或移動(dòng))器、產(chǎn)生器或是活化(或催化)器。前面敘述的實(shí)施 例可以用來(lái)調(diào)動(dòng)、產(chǎn)生或是活化(或催化)一種或多種的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或 是SB-2細(xì)胞)。
[0199] 圖13所示為一種獲得有關(guān)一個(gè)體的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(或資料)的方法。請(qǐng)參閱圖13 所示,在步驟101中,一實(shí)驗(yàn)對(duì)象(如前面所述的個(gè)體(S))進(jìn)行或接受一種或多種的行為 或刺激(X)。例如,實(shí)驗(yàn)對(duì)象(或稱實(shí)驗(yàn)組參與者)可以在步驟101中口服30顆褐藻糖膠 補(bǔ)充品(其可是圖11和圖12所提及的褐藻糖膠補(bǔ)充品),所以實(shí)驗(yàn)對(duì)象在步驟101中服 用了 3克(也就是超過(guò)2克)的褐藻糖膠?;蛘?,實(shí)驗(yàn)對(duì)象也可以在步驟101中接受注射 一種含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的營(yíng)養(yǎng)品或補(bǔ)充品。接著,在步驟102中,在實(shí)驗(yàn)對(duì)象 進(jìn)行或接受步驟101所述的一種或多種的行為或刺激(X)之后,讓實(shí)驗(yàn)對(duì)象等待一段(預(yù) 定的)時(shí)間,例如1. 5小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)或是1小時(shí)至2小 時(shí)。接下來(lái),在步驟103中,將實(shí)驗(yàn)對(duì)象在一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液取出,并放到一采血管 (例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得一血液樣本(也就是一組織樣本)。所述的 特定時(shí)間點(diǎn)為該段(預(yù)定的)時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。血液樣本的體積可以是大于或等于5毫 升或10毫升。接著,在步驟104中,對(duì)血液樣本進(jìn)行一測(cè)量或分析方法(以下稱"測(cè)量方法 MT"),進(jìn)而獲得實(shí)驗(yàn)對(duì)象在所述的特定時(shí)間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。該干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括實(shí)驗(yàn)對(duì) 象在所述的特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中,每單位體積(如每毫升)的每一種干細(xì)胞(其可是 本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的多種干細(xì)胞)的數(shù)量。在對(duì)血液樣本進(jìn)行步驟104中 的測(cè)量方法MT之前,血液樣本可以存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C 之間、介于l〇°C至20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環(huán)境中。從步驟103獲得血液 樣本到步驟104對(duì)血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分 鐘、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)或是1星期,例如是介于10分鐘到30分鐘之間、介于 30分鐘到60分鐘之間、介于0. 5小時(shí)到2小時(shí)之間、介于2小時(shí)到12小時(shí)之間、介于12小 時(shí)到24小時(shí)之間、介于24小時(shí)到48小時(shí)之間或是介于48小時(shí)到72小時(shí)之間。
[0200] 圖13步驟104所提及的測(cè)量方法MT可以包括圖14A的步驟1至步驟8、圖14B的 步驟9至步驟14以及圖14C的步驟15至步驟20。請(qǐng)參閱圖14A所示,在步驟1中,將含有 6%輕乙基淀粉的紅血球凝集劑(erythrocyte aggregation agent)加到裝有一血液樣本 (如周邊血液)的一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以形成第一中間樣本。 含有6 %羥乙基淀粉的紅血球凝集劑可以是HetaS^?溶液。裝有血液樣本的采血管例如 可以在圖13的步驟103中獲得。血液樣本可以透過(guò)以下方式獲得:取出一個(gè)體(如前面所 述的個(gè)體(S))的周邊血液,并將取出的周邊血液放到上述的采血管中。在對(duì)血液樣本進(jìn)行 步驟1之前,可以將血液樣本存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C之間、 介于10°C至20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環(huán)境中。從獲得血液樣本到對(duì)血液樣 本進(jìn)行步驟1的時(shí)間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分鐘、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72 小時(shí)或是1星期,例如介于10分鐘到30分鐘之間、介于30分鐘到60分鐘之間、介于0. 5 小時(shí)到2小時(shí)之間、介于2小時(shí)到12小時(shí)之間、介于12小時(shí)到24小時(shí)之間、介于24小時(shí) 到48小時(shí)之間或是介于48小時(shí)到72小時(shí)之間。血液樣本的體積可以是大于或等于5毫 升或10毫升。血液樣本與含有6%羥乙基淀粉的紅血球凝集劑的體積比可以是5:1。6% 羥乙基淀粉是一種磷酸鹽緩沖液(PBS)內(nèi)含有6%的羥乙基淀粉的溶液,也就是每100毫升 (mL)的磷酸鹽緩沖液含有6克的羥乙基淀粉。
[0201] 接著,在步驟2中,將第一中間樣本放到第一試管(如falcon試管)中,然后讓第 一中間樣本在室溫(如27°C左右)培養(yǎng)一段時(shí)間(例如30分鐘至90分鐘)。待第一試管 中的第一中間樣本形成上下兩個(gè)分層后,在不擾動(dòng)下分層(其為紅血球?qū)樱┑那闆r下,將上 分層(其為細(xì)胞層)以吸取器移出并放置到第二試管中。接下來(lái),在步驟3中,將移到第二 試管內(nèi)的上分層以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘1,800轉(zhuǎn)或是每分鐘3, 000轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間 (例如10分鐘至20分鐘),并在離心完成后獲得第一離心樣本。接著,在步驟4中,將第一 離心樣本的上清液移除,并使第一離心樣本里的顆粒重新懸浮于不含有鈣與鎂的第一含鹽 溶液(例如不含有鈣與鎂的杜爾貝科(Dulbecco)磷酸鹽緩沖液)中,以形成第二中間樣 本。第一離心樣本里的顆粒有部分來(lái)自于血液樣本。接下來(lái),在步驟5中,將第二中間樣本 以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘1,800轉(zhuǎn)或是每分鐘3, 000轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如10分鐘 至20分鐘),并在離心完成后獲得第二離心樣本。
[0202] 接著,在步驟6中,將第二離心樣本的上清液移除,并使第二離心樣本里的顆粒重 新懸浮于不含有鈣與鎂的第二含鹽溶液(例如不含有鈣與鎂的杜爾貝科(Dulbecco)磷酸 鹽緩沖液)中,以形成第三中間樣本。第二離心樣本里的顆粒有部分來(lái)自于血液樣本。接 下來(lái),在步驟7中,將第三中間樣本以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速(例如每分鐘1,800轉(zhuǎn)或是每分鐘3, 000 轉(zhuǎn))離心一段時(shí)間(例如10分鐘至20分鐘),并在離心完成后獲得第三離心樣本。接著, 在步驟8中,將第三離心樣本的上清液移除,并使第三離心樣本里的顆粒重新懸浮于第一 培養(yǎng)液(例如含有1 %牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液)中,以獲得一個(gè)經(jīng)過(guò)處里的樣 本(以下稱"處理過(guò)樣本")。在本發(fā)明中,讓〇. 1克的牛血清白蛋白溶解在10毫升的磷酸 鹽緩沖液中,可以獲得含有1 %牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。第三離心樣本里的顆粒有部 分來(lái)自于血液樣本。處理過(guò)樣本的體積可以大于或等于0. 8毫升或3毫升,而且也可以小 于步驟1所述的血液樣本的體積。第一培養(yǎng)液的體積可以大致等于處理過(guò)樣本的體積。
[0203] 請(qǐng)參閱圖14B所示,在透過(guò)步驟8獲得處理過(guò)樣本之后,依序進(jìn)行步驟9至步驟 14。在步驟9中,從處理過(guò)樣本中取出一部分(以下稱"第一部分樣本"),然后將第一部分樣 本分到第三試管中。接著,在步驟10中,將染色劑(例如臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue))加到裝有 第一部分樣本的第三試管中,讓染色劑和第一部分樣本混合,以形成第一測(cè)試樣本。第一部 分樣本的體積可以是介于5微升(microliter)至50微升之間(例如10微升),而且可以等 于染色劑的體積。接下來(lái),在步驟11中,將部分的第一測(cè)試樣本(此部分的體積可以是介于 10微升至20微升之間(例如10微升))放入到一個(gè)血球計(jì)數(shù)器(hemocytometer)的一個(gè) 空室(chamber)中。此血球計(jì)數(shù)器具有位在上述空室下方的一微小方格圖案(microscopic grid),如圖15所示。此微小方格圖案包括4個(gè)寬度為1毫米(mm)的正方形(也可以稱為 1毫米寬正方形)100a-100d,而且這4個(gè)正方形100a-100d中的每一個(gè)又再分成16個(gè)寬度 為0. 25毫米的正方形(也可以稱為0. 25毫米寬正方形)。另外,一玻璃蓋玻片覆蓋在上述 空室的上面。位在玻璃蓋玻片底部表面與上述空室地面之間的空間,其深度為0. 1毫米。因 此,4個(gè)1毫米寬正方形100a-100d中的每一個(gè)都代表0. 1立方毫米(mm3)或是ΚΓ4毫升。
[0204] 請(qǐng)參閱圖14B所示,在進(jìn)行完(或完成)步驟11之后,如步驟12所述,將血球計(jì) 數(shù)器放到顯微鏡的載物臺(tái)(stage)上。此顯微鏡的總放大倍率可以是大于或等于200倍。 另外,此顯微鏡可以包括放大倍率大于或等于10倍的接目鏡(ocular lens)以及放大倍率 大于或等于20倍的接物鏡(objective lens)。接著,在步驟13中,透過(guò)顯微鏡的視野范 圍,計(jì)數(shù)(或計(jì)算)位在1毫米寬正方形l〇〇a里其中一個(gè)0. 25毫米寬正方形內(nèi)尺寸大于 或等于1微米的細(xì)胞(也可以稱為彡1微米細(xì)胞),進(jìn)而獲得彡1微米細(xì)胞在1毫米寬正 方形100a之上述0. 25毫米寬正方形內(nèi)的數(shù)量(或總數(shù))。因此,將彡1微米細(xì)胞在1毫 米寬正方形l〇〇a之上述0. 25毫米寬正方形內(nèi)的數(shù)量(或總數(shù))乘以16 (其為1毫米寬正 方形100a所具有0. 25毫米寬正方形的數(shù)量),可估算出彡1微米細(xì)胞在1毫米寬正方形 l〇〇a里的數(shù)量(或總數(shù))。接下來(lái),在步驟14中,將彡1微米細(xì)胞在1毫米寬正方形100a 里的數(shù)量(或總數(shù))乘以一個(gè)稀釋系數(shù)(例如等于或大于1.5、2或3),然后將相乘的結(jié)果 除以1毫米寬正方形l〇〇a的體積(也就是ΚΓ 4毫升),因而估算出彡1微米細(xì)胞在處理過(guò) 樣本中每毫升的數(shù)量(也就是> 1微米細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量)。例如,當(dāng) 第一部分樣本用體積和第一部分樣本相同的染色劑稀釋的時(shí)候,上述的稀釋系數(shù)可以是2。 步驟13和步驟14所提及的> 1微米細(xì)胞可以包括微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板、白血球 (包含淋巴球)以及各種的干細(xì)胞,其中微顆粒可以沒有細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)。
[0205] 此外,在步驟14中,> 1微米細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量也可以透過(guò)以下 的方式來(lái)估算:首先將> 1微米細(xì)胞在血球計(jì)數(shù)器之每個(gè)1毫米寬正方形里的平均計(jì)數(shù) (或數(shù)量)乘以上述的稀釋系數(shù),然后將相乘的結(jié)果除以血球計(jì)數(shù)器里每個(gè)1毫米寬正方 形的平均體積(也就是1〇_ 4毫升)。在這種情況下,步驟13包括:(1)透過(guò)顯微鏡的視野 范圍,算出每一個(gè)1毫米寬正方形(共有4個(gè),也就是1毫米寬正方形100a-100d)中某個(gè) 0. 25毫米寬正方形里尺寸大于或等于1微米之細(xì)胞(也可以稱為> 1微米細(xì)胞)的數(shù)量, 以獲得4個(gè)> 1微米細(xì)胞的原始數(shù)量(或總數(shù)),以及(2)將每一個(gè)> 1微米細(xì)胞的原始 數(shù)量(或總數(shù))乘以16 (其為4個(gè)1毫米寬正方形100a-100d中,每一個(gè)1毫米寬正方形 里所具有0. 25毫米寬正方形的數(shù)量),因而估算出(或獲得1微米細(xì)胞在每一個(gè)1毫 米寬正方形(共有4個(gè),也就是1毫米寬正方形100a-100d)里的數(shù)量(或總數(shù))。因此, >1微米細(xì)胞在血球計(jì)數(shù)器的每個(gè)1毫米寬正方形里的平均計(jì)數(shù)(或數(shù)量)可以透過(guò)以下 方式獲得:將> 1微米細(xì)胞在每一個(gè)1毫米寬正方形(共有4個(gè),也就是1毫米寬正方形 100a-100d)里的數(shù)量(或總數(shù))相加起來(lái),然后將相加的結(jié)果除以4 (其為血球計(jì)數(shù)器中1 毫米寬正方形的數(shù)量,也就是4個(gè)1毫米寬正方形100a-100d)。
[0206] 請(qǐng)參閱圖14C所示,在透過(guò)步驟8獲得處理過(guò)樣本之后,依序進(jìn)行步驟15至步驟 20。在步驟15中,從處理過(guò)樣本中取出另一部分(以下稱"第二部分樣本"),然后將第二部 分樣本分到多個(gè)樣本容器(如試管)中。因此,每個(gè)樣本容器中含有L微升的第二部分樣 本(L微升的第二部分樣本以下稱為"小部分樣本"),其中L可以是50到250中的任何一 個(gè)數(shù)字(例如100)。在處理過(guò)樣本是均勻且含有大致相同之內(nèi)容物的情況下,第二部分樣 本可以假定含有與步驟9所述的第一部分樣本大致上相同的內(nèi)容物。第二部分樣本的總體 積可以是介于〇. 5毫升至18微升之間(例如2微升)。樣本容器的數(shù)量可以是2個(gè)至50 個(gè)之間。接著,在步驟16中,在每一個(gè)樣本容器中加入一種特定的染色劑(其可含有一種 或多種的抗體)。加到每一個(gè)樣本容器中的染色劑可以是彼此不同的,而且可以含有特定一 種的抗體或是多種特定的抗體。每一個(gè)樣本容器中的染色劑所含有的一種或多種抗體可以 是彼此不同的。在每個(gè)樣本容器中加入一種或多種染色劑的目的在于識(shí)別一種或多種特定 的細(xì)胞(表面)標(biāo)記或是一種或多種的干細(xì)胞(每一種干細(xì)胞可以用本發(fā)明在"干細(xì)胞定 義"里所提及的一種或多種細(xì)胞(表面)標(biāo)記描述其特征)。這些染色劑中的每一種抗體 可以用來(lái)識(shí)別一種特定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記、一種特定的干細(xì)胞或是多種選定的干細(xì)胞或 細(xì)胞(表面)標(biāo)記,而且與這些染色劑中的其它種抗體所識(shí)別的干細(xì)胞或細(xì)胞(表面)標(biāo) 記有所不同。因此,每一個(gè)樣本容器中含有一個(gè)第四中間樣本,而且每一個(gè)第四中間樣本都 是由經(jīng)過(guò)上述對(duì)應(yīng)的染色劑(其含有一種或多種特定的抗體)染色的小部分樣本所構(gòu)成。
[0207] 接著,在步驟17中,將這些樣本容器中的第四中間樣本在室溫(如27°C左右)培 養(yǎng)一段時(shí)間(例如至少30分鐘)。接下來(lái),在步驟18中,將在這些樣本容器中的每一個(gè)第 四中間樣本和第二培養(yǎng)液(例如含有1 %牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液)混合,以形 成多個(gè)第二測(cè)試樣本(也可以稱為"流式細(xì)胞儀樣本")。每個(gè)第二測(cè)試樣本都是小部分樣 本(其經(jīng)過(guò)相對(duì)應(yīng)的一種染色劑(此染色劑含有一種或多種抗體)染色)和第二培養(yǎng)液的 混合物。每個(gè)第二測(cè)試樣本的體積可以是介于250微升至1,250微升之間,例如500微升。 用來(lái)和每個(gè)第四中間樣本混合的第二培養(yǎng)液的體積可以是介于200微升至1,000微升之間 (例如400微升),而且大于對(duì)應(yīng)的小部分樣本的體積。
[0208] 接著,在步驟19中,利用流式細(xì)胞儀分析這些樣本容器中的第二測(cè)試樣本,進(jìn)而 獲得多組數(shù)據(jù)(或資料)。每一組數(shù)據(jù)(其從對(duì)應(yīng)的第二測(cè)試樣本中獲得)包含有:尺寸 大于或等于1微米之細(xì)胞的數(shù)量(以下稱"細(xì)胞數(shù)C1")、細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū) 域中的細(xì)胞數(shù)量(以下稱"細(xì)胞數(shù)C2")以及一種特定的(或選定的)干細(xì)胞在細(xì)胞核/ 細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域中的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C2的百分比(以下稱"干細(xì)胞百分比SP")。 上述的一種特定的(或選定的)干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何一 種干細(xì)胞,或是以本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種細(xì)胞(表面)標(biāo)記(例如 CD349(+)、Lgr5(+)或CD66e(+))描述其特征的干細(xì)胞。在細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的 區(qū)域中的細(xì)胞,其尺寸(關(guān)于尺寸的描述可參閱上述尺寸(Z)的定義)可以是大于或等于1 微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米,或是介于1微米至15微米之間(例如 介于2微米至6微米之間)。另外,在細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域中的細(xì)胞,其具有 細(xì)胞核以及/或是細(xì)胞質(zhì),而且含有各種在"干細(xì)胞定義"里所提及的干細(xì)胞(例如上述的 一種特定的(或選定的)干細(xì)胞),但卻幾乎不含有微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板和白血 球(包含淋巴球)。在步驟13、步驟14和步驟19里所提及的尺寸大于或等于1微米(其 為一門坎尺寸(threshold size))的細(xì)胞大致上具有相同的性質(zhì)或特性。步驟19所提及 的尺寸大于或等于1微米的細(xì)胞可以包括微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板、白血球(其包含 淋巴球)以及在細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域中的細(xì)胞,其中微顆??梢詻]有細(xì)胞核 或細(xì)胞質(zhì)。
[0209] 在上述的每一組數(shù)據(jù)中,細(xì)胞數(shù)C1包括:(1)細(xì)胞數(shù)C2 ; (2)粒細(xì)胞的數(shù)量;(3)血 小板的數(shù)量;(4)紅血球的數(shù)量;(5)白血球的數(shù)量;以及(6)微顆粒的數(shù)量。圖16是用在 上述流式細(xì)胞儀的前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖。請(qǐng)參閱圖16所示,橫軸代表前向散射 系數(shù),縱軸代表側(cè)向散射系數(shù)。在使用流式細(xì)胞儀分析每一個(gè)第二測(cè)試樣本之前,圖16的 前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖可以事先設(shè)定在流式細(xì)胞儀分析中。圖16的前向散射系數(shù) /側(cè)向散射系數(shù)圖包含有:(1)血小板的區(qū)域P1 ; (2)微顆粒的區(qū)域P2 ; (3)紅血球與白血球 的區(qū)域P3 ;(4)細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域,如區(qū)域P4所示;以及(5)粒細(xì)胞的區(qū)域 (圖中未示)。在用流式細(xì)胞儀分析每一個(gè)第二測(cè)試樣本之前,可以使用微粒(microbeads) 或聚合物顆粒,將流式細(xì)胞儀的前向散射系數(shù)設(shè)定在1微米尺寸所對(duì)應(yīng)的(近似)數(shù)值。 這個(gè)(近似)數(shù)值可以用來(lái)定義出(或建立出)細(xì)胞尺寸大于或等于1微米的特定區(qū)域 (threshold region),并透過(guò)這個(gè)特定區(qū)域確定或測(cè)定尺寸大于或等于1微米的細(xì)胞,因而 獲得這個(gè)特定區(qū)域中的細(xì)胞數(shù)C1。上述的區(qū)域P1至P4和上述的粒細(xì)胞的區(qū)域都是位在這 個(gè)特定區(qū)域中。在步驟19中,流式細(xì)胞儀會(huì)不斷地分析每個(gè)第二測(cè)試樣本,直到(1)對(duì)應(yīng)的 細(xì)胞數(shù)C1達(dá)到一個(gè)特定數(shù)目(其可是大于或等于五十萬(wàn)、八十萬(wàn)或一百萬(wàn))或是(2)對(duì)應(yīng) 的細(xì)胞數(shù)C2達(dá)到一個(gè)特定數(shù)目(其可是大于或等于1000、1500、2000、2500、3000或3500) 為止。因此,在完成每個(gè)第二測(cè)試樣本的分析之后,可以獲得與該些第二測(cè)試樣本有關(guān)的上 述多組數(shù)據(jù)(一個(gè)第二測(cè)試樣本可以獲得一組數(shù)據(jù))。
[0210] 請(qǐng)參閱圖14C所示,在進(jìn)行完(或完成)步驟14和步驟19之后,接著進(jìn)行圖14C 的步驟20,以獲得干細(xì)胞數(shù)據(jù)(或資料)。在步驟20中,根據(jù)> 1微米細(xì)胞在處理過(guò)樣本中 每毫升的數(shù)量(其可從步驟14獲得)以及上述含有細(xì)胞數(shù)C1、細(xì)胞數(shù)C2與干細(xì)胞百分比 SP的多組數(shù)據(jù)(其可從步驟19獲得),可以計(jì)算出(或獲得)該干細(xì)胞數(shù)據(jù)。該干細(xì)胞數(shù) 據(jù)可以包括每一種特定的干細(xì)胞(其可是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的干細(xì)胞)在血 液樣本中每毫升的數(shù)量(也可以稱為上述每一種特定的干細(xì)胞在血液樣本中每單位體積 的數(shù)量)。透過(guò)以下的計(jì)算,可獲得上述每一種特定的干細(xì)胞在血液樣本中每毫升的數(shù)量: (1)將細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域P4中獲得的細(xì)胞數(shù)C2除以上述細(xì)胞尺寸大于或 等于1微米的特定區(qū)域中獲得的細(xì)胞數(shù)C1,然后將相除的結(jié)果乘以100% (其為了將相除 的結(jié)果轉(zhuǎn)換成百分比數(shù)字),因而獲得細(xì)胞數(shù)C2占細(xì)胞數(shù)C1的百分比(其是一種與細(xì)胞 數(shù)C1和細(xì)胞數(shù)C2之間的關(guān)系有關(guān)的數(shù)據(jù)或資料);(2)將細(xì)胞數(shù)C2占細(xì)胞數(shù)C1的百分比 乘以與一種選定之干細(xì)胞有關(guān)的干細(xì)胞百分比SP,然后將相乘的結(jié)果乘以100% (其為了 將相乘的結(jié)果轉(zhuǎn)換成百分比數(shù)字),因而獲得該種選定的干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分 比(其是一種與處理過(guò)樣本有關(guān)以及與該種選定的干細(xì)胞和細(xì)胞數(shù)C1之間的關(guān)系有關(guān)的 數(shù)據(jù)或資料);(3)將該種選定的干細(xì)胞占細(xì)胞數(shù)C1的百分比乘以> 1微米細(xì)胞在處理過(guò) 樣本中每毫升的數(shù)量(其從步驟14中獲得),因而獲得該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中 每毫升的數(shù)量(也就是該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量),其是一種 與該種選定的干細(xì)胞和處理過(guò)樣本之間的關(guān)系有關(guān)的數(shù)據(jù);(4)將處理過(guò)樣本的體積(單 位為毫升)除以血液樣本的體積(單位為毫升),因而獲得一個(gè)體積改變系數(shù)(或稱樣本 準(zhǔn)備系數(shù)),其可是處理過(guò)樣本的體積與血液樣本的體積的比率;以及(5)將該種選定的干 細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量乘以體積改變系數(shù),因而獲得該種選定的干細(xì)胞在血液 樣本中每毫升的數(shù)量(也就是該種選定的干細(xì)胞在血液樣本中每單位體積的數(shù)量),其是 一種與該種選定的干細(xì)胞和血液過(guò)樣本之間的關(guān)系有關(guān)的數(shù)據(jù)或資料,而且可以用來(lái)代表 該種選定的干細(xì)胞在一個(gè)體(如圖13所述的實(shí)驗(yàn)對(duì)象)的周邊血液中每毫升的數(shù)量。該 種選定的干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何一種干細(xì)胞,或是以本發(fā)明 在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種細(xì)胞(表面)標(biāo)記(其可包括CD349(+)、Lgr5(+) 或CD66e(+))描述其特征的干細(xì)胞。為了能更準(zhǔn)確地獲得上述的干細(xì)胞數(shù)據(jù),與該種選定 的干細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C2可以是大于或等于1,000顆細(xì)胞、1,500顆細(xì)胞、2, 000顆細(xì)胞或 2, 500顆細(xì)胞。
[0211] 更詳細(xì)地說(shuō),圖14B所提及的細(xì)胞數(shù)量可以透過(guò)計(jì)算尺寸大于或等于一給定門坎 尺寸(在> 1微米細(xì)胞的數(shù)量或4個(gè)> 1微米細(xì)胞的原始數(shù)量的范例中,該給定門坎尺寸 等于1微米)的細(xì)胞的數(shù)量來(lái)獲得,圖14C所提及的細(xì)胞數(shù)C1可以透過(guò)計(jì)算(或計(jì)數(shù))尺 寸大于或等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細(xì)胞的數(shù)量 來(lái)獲得。該給定門坎尺寸除了可以是本范例所述的1微米之外,也可以是〇. 5微米、0. 8微 米、1. 5微米、2微米或3微米。在細(xì)胞數(shù)C1是透過(guò)計(jì)算尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 (在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)之細(xì)胞的數(shù)量而獲得的情形下,用于分析每個(gè) 第二測(cè)試樣本的流式細(xì)胞儀可以透過(guò)尺寸為該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺 寸等于1微米)的微?;蚓酆衔镱w粒來(lái)設(shè)定前向散射系數(shù)/側(cè)向散射系數(shù)圖中前向散射系 數(shù)的(近似)數(shù)值,以定義出(或建立出)細(xì)胞尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的特定區(qū) 域(threshold region),并透過(guò)這個(gè)特定區(qū)域確定或測(cè)定尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 (在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細(xì)胞。
[0212] 根據(jù)圖13、圖14A、圖14B和圖14C所述的方法,本發(fā)明可以使用一個(gè)整合系統(tǒng)、裝 置、儀器或工具(AD)來(lái)獲得步驟20所提及的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(其與圖13所述之實(shí)驗(yàn)對(duì)象的血 液樣本有關(guān))。這個(gè)整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)可包括:(1) 一個(gè)第一裝置、儀器或工 具,其可從實(shí)驗(yàn)對(duì)象(或個(gè)體)獲得或取得血液樣本,如圖13的步驟103所述;(2) -個(gè)第 二裝置、儀器或工具(其可包括一離心機(jī)),其可處理血液樣本,以獲得或制備出處理過(guò)樣 本(其為一測(cè)試樣本),如圖14A的步驟1至步驟8所述;(3) -個(gè)第三裝置、儀器或工具 (其可以包括一血球計(jì)數(shù)器、一顯微鏡和由一軟件編譯的一處理器/計(jì)算機(jī)),其可透過(guò)第 一方法從處理過(guò)樣本的第一部分獲得第一數(shù)據(jù)(例如圖14B步驟14所獲得的> 1微米細(xì) 胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量),該第一方法可以包括使用血球計(jì)數(shù)器(和顯微鏡)計(jì)算 處理過(guò)樣本的第一部分的顆?;蚣?xì)胞的數(shù)量,如圖14B的步驟9至步驟14所述;(4) 一個(gè)第 四裝置、儀器或工具(其可包括一流式細(xì)胞儀和一處理器/計(jì)算機(jī)),其可透過(guò)第二方法從 處理過(guò)樣本的第二部分獲得第二數(shù)據(jù)(例如與一種選定的干細(xì)胞有關(guān)的干細(xì)胞百分比SP) 和第三數(shù)據(jù)(例如與該種選定的干細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C2占與該種選定的干細(xì)胞有關(guān)的細(xì) 胞數(shù)C1的百分比),該第二方法可以包括使用流式細(xì)胞儀計(jì)算處理過(guò)樣本的第二部分的顆 粒或細(xì)胞的數(shù)量,如圖14C的步驟15至步驟20所述;以及(5) -個(gè)第五裝置、儀器或工具 (例如一計(jì)算機(jī)或一處理器),其可:(a)對(duì)第二數(shù)據(jù)和第三數(shù)據(jù)進(jìn)行第一運(yùn)算或計(jì)算(例 如將第二數(shù)據(jù)乘以第三數(shù)據(jù)(譬如將干細(xì)胞百分比SP乘以細(xì)胞數(shù)C2占細(xì)胞數(shù)Cl的百分 比),然后將相乘的結(jié)果乘以100% ),以獲得與處理過(guò)樣本有關(guān)的第四數(shù)據(jù)(例如該種選 定的干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分比);(b)對(duì)第一數(shù)據(jù)和第四數(shù)據(jù)進(jìn)行第二運(yùn)算或計(jì) 算(例如將第一數(shù)據(jù)乘以第四數(shù)據(jù)(譬如將>1微米細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量乘 以該種選定的干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分比)),以獲得與處理過(guò)樣本有關(guān)的第五數(shù) 據(jù)(例如該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量);(C)對(duì)處理過(guò)樣本的體積和血 液樣本的體積進(jìn)行第三運(yùn)算或計(jì)算(例如將處理過(guò)樣本的體積除以血液樣本的體積),以 獲得上述的體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)(例如處理過(guò)樣本的體積與血液樣本的體積的比 率);以及(d)對(duì)第五數(shù)據(jù)和體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)進(jìn)行第四運(yùn)算或計(jì)算(例如將 第五數(shù)據(jù)乘以體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)(譬如將該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每 毫升的數(shù)量乘以處理過(guò)樣本的體積與血液樣本的體積的比率)),以獲得與血液樣本有關(guān)的 第六數(shù)據(jù)(例如該種選定的干細(xì)胞在血液樣本中每毫升的數(shù)量)。
[0213] 另外,亦可將上述的第一、第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具中的任兩個(gè)或 以上的裝置、儀器或工具合并組成一個(gè)可以進(jìn)行上述任兩個(gè)或以上的裝置、儀器或工具之 功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。例如,第一和第二裝置、儀器或工 具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行第一和第二裝置、儀器或工具的功能的第一整合裝置、儀器 或工具或是第一單一裝置、儀器或工具,以及第三、第四和第五裝置、儀器或工具可以合并 組成一個(gè)可以進(jìn)行第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的第二整合裝置、儀器或工具 或是第二單一裝置、儀器或工具。或者,第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具可以合并 組成一個(gè)可以進(jìn)行第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工 具或是單一裝置、儀器或工具?;蛘?,第二、第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一 個(gè)可以進(jìn)行第二、第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝 置、儀器或工具?;蛘?,第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行第三和第 四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具?;蛘?,第四 和第五裝置、儀器或工具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行第四和第五裝置、儀器或工具的功能 的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。
[0214] 在本發(fā)明中,第三裝置、儀器或工具可以用來(lái)獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺 寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量, 第四和第五裝置、儀器或工具可以用來(lái)獲得該種選定的干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門 坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)的細(xì)胞中的百分比(其與處理過(guò)樣本 有關(guān))。將上述獲得的細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量乘以上述獲得之該種選定的干細(xì) 胞的百分比,可以獲得該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量。將該種選定 的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量乘以上述的體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù),可 以獲得該種選定的干細(xì)胞在血液樣本中每單位體積的數(shù)量。透過(guò)將第三裝置、儀器或工具 所獲得的細(xì)胞數(shù)量數(shù)據(jù)結(jié)合第四和第五裝置、儀器或工具所獲得的該種選定的干細(xì)胞的百 分比的方式,可以更準(zhǔn)確地獲得該種選定的干細(xì)胞在周邊血液中的數(shù)量。
[0215] 根據(jù)圖13、圖14A、圖14B和圖14C所述的方法,本發(fā)明可以使用一個(gè)單一系統(tǒng)、裝 置、儀器或工具(TD)來(lái)獲得步驟20所提及的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(其與圖13所述之實(shí)驗(yàn)對(duì)象的血 液樣本有關(guān))。這個(gè)單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(TD)可以提供或執(zhí)行:(1)第一功能,其可 從實(shí)驗(yàn)對(duì)象(或個(gè)體)獲得或取得血液樣本,如圖13的步驟103所述;(2)第二功能,其可 處理血液樣本,以獲得或制備出處理過(guò)樣本(其為一測(cè)試樣本),如圖14A的步驟1至步驟 8所述;(3)第三功能,其可透過(guò)第一方法(其可是圖14B的步驟9至步驟14所描述的方 法)從處理過(guò)樣本的第一部分獲得第一數(shù)據(jù)(例如圖14B步驟14所獲得的> 1微米細(xì)胞 在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量);(4)第四功能,其可透過(guò)第二方法(其可是圖14C的步驟 15至步驟20所描述的方法)從處理過(guò)樣本的第二部分獲得第二數(shù)據(jù)(例如與一種選定的 干細(xì)胞有關(guān)的干細(xì)胞百分比SP)和第三數(shù)據(jù)(例如與該種選定的干細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C2 占與該種選定的干細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C1的百分比);(5)第五功能,其可對(duì)第二數(shù)據(jù)和第三 數(shù)據(jù)進(jìn)行第一運(yùn)算或計(jì)算(例如將第二數(shù)據(jù)乘以第三數(shù)據(jù)(譬如將干細(xì)胞百分比SP乘以 細(xì)胞數(shù)C2占細(xì)胞數(shù)C1的百分比),然后將相乘的結(jié)果乘以100% ),以獲得與處理過(guò)樣本有 關(guān)的第四數(shù)據(jù)(例如該種選定的干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分比);(6)第六功能,其可 對(duì)第一數(shù)據(jù)和第四數(shù)據(jù)進(jìn)行第二運(yùn)算或計(jì)算(例如將第一數(shù)據(jù)乘以第四數(shù)據(jù)(譬如將>1 微米細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量乘以該種選定的干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分 比)),以獲得與處理過(guò)樣本有關(guān)的第五數(shù)據(jù)(例如該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫 升的數(shù)量);(7)第七功能,其可對(duì)處理過(guò)樣本的體積和血液樣本的體積進(jìn)行第三運(yùn)算或計(jì) 算(例如將處理過(guò)樣本的體積除以血液樣本的體積),以獲得上述的體積改變(或樣本準(zhǔn) 備)系數(shù)(例如處理過(guò)樣本的體積與血液樣本的體積的比率);以及(8)第八功能,其可對(duì) 第五數(shù)據(jù)和體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)進(jìn)行第四運(yùn)算或計(jì)算(例如將第五數(shù)據(jù)乘以體積 改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)(譬如將該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量乘以處 理過(guò)樣本的體積與血液樣本的體積的比率)),以獲得與血液樣本有關(guān)的第六數(shù)據(jù)(例如該 種選定的干細(xì)胞在血液樣本中每毫升的數(shù)量)。
[0216] 由單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(TD)所提供的第三功能可以用來(lái)獲得尺寸大于或 等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺寸等于1微米)之細(xì)胞在處理過(guò)樣本中 每單位體積的數(shù)量。由單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(TD)所提供的第四和第五功能可以用 來(lái)獲得該種選定的干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸(在本范例中,該給定門坎尺 寸等于1微米)的細(xì)胞中的百分比(其與處理過(guò)樣本有關(guān))。將上述獲得的細(xì)胞在處理過(guò) 樣本中每毫升的數(shù)量乘以上述獲得的該種選定的干細(xì)胞的百分比,可以獲得該種選定的干 細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積的數(shù)量。將該種選定的干細(xì)胞在處理過(guò)樣本中每單位體積 的數(shù)量乘以上述的體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù),可以獲得該種選定的干細(xì)胞在血液樣本 中每單位體積的數(shù)量。透過(guò)將單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(TD)的第三功能所獲得的細(xì)胞 數(shù)量數(shù)據(jù)結(jié)合單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(TD)的第四與第五功能所獲得的該種選定的干 細(xì)胞的百分比的方式,可以更準(zhǔn)確地獲得該種選定的干細(xì)胞在周邊血液中的數(shù)量。
[0217] 在某些應(yīng)用上,本發(fā)明也可以透過(guò)一單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具來(lái)提供或執(zhí)行上 述的第一至第八功能中任兩個(gè)(或以上)的功能可由。例如,這個(gè)單一系統(tǒng)、裝置、儀器或 工具可以提供或執(zhí)行上述的第三和第四功能、上述的第二、第三和第四功能、上述的第三、 第四、第五、第六和第八功能或是上述的第三至第八功能。
[0218] 圖17A顯示一位五十五歲左右的男性(其是作為一實(shí)驗(yàn)對(duì)象)在食用或攝取褐藻 糖膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。本發(fā)明透過(guò)對(duì)此位男性進(jìn)行圖13所述的方法 獲得圖17A所示的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。在這個(gè)范例中,此位男性在步驟101中是口服30顆褐藻糖 膠補(bǔ)充品,而此褐藻糖膠補(bǔ)充品可以與圖11和圖12所提及的褐藻糖膠補(bǔ)充品相同。因此, 此位男性在步驟101中是服用3克(也就是大于2克)的褐藻糖膠。在步驟102中,讓此 位男性在服用30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品之后等待1. 5小時(shí)。在步驟103中,取出此位男性的周 邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管中,因而獲得一個(gè)10毫升血液樣本。接著,透過(guò) 圖14A的步驟1至步驟8,將10毫升血液樣本處理成一個(gè)3毫升處理過(guò)樣本。3毫升處理過(guò) 樣本會(huì)被分成兩部分,一部分(以下稱"第一部分")用在圖14B的步驟9至步驟14中,另 一部分(以下稱"第二部分")用在圖14C的步驟15至步驟19中。在對(duì)3毫升處理過(guò)樣本 的第一部分進(jìn)行圖14B的步驟9至步驟14之后,可以獲得> 1微米細(xì)胞在3毫升處理過(guò)樣 本中每毫升的數(shù)量,如圖17A中的第(A)欄所示。在對(duì)3毫升處理過(guò)樣本的第二部分進(jìn)行 圖14C的步驟15至步驟19之后,可以獲得與每一種干細(xì)胞(如圖17A所示,共有5種干細(xì) 胞)有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C1、細(xì)胞數(shù)C2和干細(xì)胞百分比SP,其分別顯示在圖17A中的第(B)欄、 第(C)欄和第(E)欄。透過(guò)對(duì)3毫升處理過(guò)樣本的第二部分進(jìn)行步驟15至步驟18,可以獲 得多個(gè)第二測(cè)試樣本(或稱"流式細(xì)胞儀樣本")。在本范例中,步驟19中的流式細(xì)胞儀會(huì) 不斷分析每一個(gè)第二測(cè)試樣本,直到對(duì)應(yīng)的細(xì)胞數(shù)C1達(dá)到一百萬(wàn)或是對(duì)應(yīng)的細(xì)胞數(shù)C2達(dá) 到2500為止。在完成每個(gè)第二測(cè)試樣本的分析之后,可以獲得與該些第二測(cè)試樣本(其是 透過(guò)對(duì)3毫升處理過(guò)樣本的第二部分進(jìn)行步驟15至步驟18而獲得)有關(guān)的多組數(shù)據(jù)(一 個(gè)第二測(cè)試樣本可以獲得一組數(shù)據(jù))。
[0219] 在從步驟14獲得> 1微米細(xì)胞在3毫升處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量以及從步驟 19獲得與上述每一種干細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞數(shù)C1、細(xì)胞數(shù)C2和干細(xì)胞百分比SP之后,接著在 步驟20中獲得有關(guān)此位男性在食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。 該干細(xì)胞數(shù)據(jù)包括每一種干細(xì)胞(如圖17A所示,共有5種干細(xì)胞)在此位男性食用或攝取 褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量。以下將以CD24(+)先驅(qū)干細(xì) 胞為范例進(jìn)行說(shuō)明,請(qǐng)參閱圖17A所示,CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞在此位男性食用或攝取褐藻糖 膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量可以透過(guò)下列的計(jì)算獲得:(1)將第 (1)列第(C)欄所示的2,500(其為細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的區(qū)域P4中的細(xì)胞數(shù)C2) 除以第(1)列第(B)欄所示的995, 918 (其為細(xì)胞尺寸大于或等于1微米的特定區(qū)域中的細(xì) 胞數(shù)C1),然后將相除的結(jié)果(也就是0. 0025)乘以100% (其為了將相除的結(jié)果轉(zhuǎn)換成百 分比數(shù)字),因而獲得第⑴列第⑶欄所示的0. 25% (其為細(xì)胞數(shù)C2占細(xì)胞數(shù)C1的百 分比);(2)將第(1)列第⑶欄所示的0. 25%乘以第(1)列第(E)欄所示的46% (其為 CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C2的百分比),然后將相乘的結(jié)果(也就是0.00115) 乘以100% (其為了將相乘的結(jié)果轉(zhuǎn)換成百分比數(shù)字),因而獲得第(1)列第(F)欄所示的 0· 1150% (其為CD24⑴先驅(qū)干細(xì)胞的數(shù)量占細(xì)胞數(shù)C1的百分比);(3)將第⑴列第(F) 欄所示的0. 1150%乘以第(1)列第(A)欄所示的1. 77E+08(其為彡1微米細(xì)胞在3毫升處 理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量),因而獲得第(1)列第(G)欄所示的203, 550 (其為CD24(+)先 驅(qū)干細(xì)胞在3毫升處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量);(4)將3毫升(其為處理過(guò)樣本的體積) 除以10毫升(其為血液樣本的體積),因而獲得0. 3這個(gè)數(shù)值(其為上述的體積改變(或 樣本準(zhǔn)備)系數(shù));以及(5)將第(1)列第(G)欄所示的203, 550 (其為CD24(+)先驅(qū)干細(xì) 胞在3毫升處理過(guò)樣本中每毫升的數(shù)量)乘以0. 3 (其為上述的體積改變(或樣本準(zhǔn)備) 系數(shù)),因而獲得第(1)列第(H)欄所示的61,065 (其為CD24 (+)先驅(qū)干細(xì)胞在10毫升血 液樣本中每毫升的數(shù)量),其可代表CD24 (+)先驅(qū)干細(xì)胞在此位男性食用或攝取褐藻糖膠 補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量。另外,用上述的計(jì)算方式,也可以從相 關(guān)的數(shù)值計(jì)算出其它種干細(xì)胞在此位男性食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第1. 5小時(shí)的 周邊血液中每毫升的數(shù)量,在此不再詳加敘述。
[0220] 圖17B為流式細(xì)胞儀的一熒光分布圖,其顯示出在細(xì)胞核/細(xì)胞質(zhì)之比為較高的 區(qū)域中細(xì)胞的熒光光強(qiáng)度分布。在熒光分布圖中的細(xì)胞被一條垂直線77分成左右兩部分。 在垂直線77右邊的細(xì)胞會(huì)對(duì)CD24表現(xiàn)出陽(yáng)性反應(yīng),所以屬于CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞。在垂 直線77左邊的細(xì)胞則對(duì)⑶24表現(xiàn)出陰性反應(yīng)。因此,流式細(xì)胞儀可以透過(guò)垂直線77識(shí)別 CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞,進(jìn)而獲得圖17A中第(1)列第(E)欄所提及的CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞的 數(shù)量。
[0221] 圖18描述一種獲得一實(shí)驗(yàn)對(duì)象(例如前面所述的個(gè)體(S))在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的 干細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法,藉以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)對(duì)象在進(jìn)行或接受一種或多種的行為或刺激(X)(其可 包括一系列選自行為或刺激(X)的行為)之后的一理想(或最佳)干細(xì)胞收獲時(shí)間,所收 獲的一種或多種干細(xì)胞是從實(shí)驗(yàn)對(duì)象或是與實(shí)驗(yàn)對(duì)象相同生物分類的一個(gè)體的一組織樣 本(其可是本發(fā)明在"個(gè)體(S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣本)獲得。請(qǐng) 參閱圖18所示,在步驟21中,將實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液取出,并放到一采 血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第一血液樣本。第一血液樣本的體積可 以是大于或等于5毫升或10毫升。接著,在步驟22中,對(duì)第一血液樣本進(jìn)行前面所述的測(cè) 量方法MT,進(jìn)而獲得實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第一特定時(shí)間點(diǎn)的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可 包括一種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升) 的數(shù)量,也就是與該種特定干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù) 量有關(guān)的第一獲取數(shù)據(jù)。該種特定干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何 一種干細(xì)胞,或是以本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種細(xì)胞(表面)標(biāo)記(例 如〇0349(+)、1^沾(+)或00666(+))描述其特征的干細(xì)胞。圖14八-圖14(:所述的方法可以 用來(lái)處理和估算第一血液樣本。在對(duì)第一血液樣本進(jìn)行步驟22中的測(cè)量方法MT之前,第 一血液樣本可以存放在溫度介于1°C至30°C之間(例如介于1°C至10°C之間、介于10°C至 20°C之間或是介于20°C至30°C之間)的環(huán)境中。從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22 對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以是等于或小于30分鐘、60分鐘、12小時(shí)、 24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)或是1星期,例如是介于10分鐘到30分鐘之間、介于30分鐘到 60分鐘之間、介于0. 5小時(shí)到2小時(shí)之間、介于2小時(shí)到12小時(shí)之間、介于12小時(shí)到24小 時(shí)之間、介于24小時(shí)到48小時(shí)之間或是介于48小時(shí)到72小時(shí)之間。此外,本實(shí)施例也可 以透過(guò)上述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD) 來(lái)獲得第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)。
[0222] 在獲得步驟21所述的第一血液樣本之后,接著進(jìn)行步驟23。在步驟23中,實(shí)驗(yàn)對(duì) 象進(jìn)行或接受一種或多種的行為或刺激(X),其可包括一系列選自行為或刺激(X)的行為。 例如,實(shí)驗(yàn)對(duì)象可以口服30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品(其可是前面第一實(shí)驗(yàn)和圖11所述的褐藻 糖膠補(bǔ)充品),所以實(shí)驗(yàn)對(duì)象在步驟23中服用了 3克(也就是超過(guò)2克)的褐藻糖膠。或 者,實(shí)驗(yàn)對(duì)象也可以注射一種含有褐藻糖膠或小分子褐藻糖膠的物質(zhì)或物品(如營(yíng)養(yǎng)品或 補(bǔ)充品)。步驟21所述的第一特定時(shí)間點(diǎn)可以在步驟23之前的一時(shí)間點(diǎn)。在實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn) 行或接受一種或多種的行為或刺激(X)之后,將進(jìn)行含有下列步驟24至步驟26的第一方 法、含有下列步驟27至步驟29的第二方法以及含有下列步驟30至步驟32的第三方法。
[0223] 關(guān)于第一方法,在步驟24中,在實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實(shí)驗(yàn)對(duì)象等待第一段時(shí)間(也就是一段第一預(yù)定時(shí)間),例如1. 5 小時(shí)、30分鐘至3小時(shí)、1小時(shí)至2小時(shí)或是45分鐘至12小時(shí)。接著,在步驟25中,取出 實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第二特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺 四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第二血液樣本。第二血液樣本的體積可以是大于或等于5 毫升或10毫升,而且也可以與第一血液樣本的體積相同。第二特定時(shí)間點(diǎn)為第一段時(shí)間結(jié) 束的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟26中,對(duì)第二血液樣本進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得 實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第二特定時(shí)間點(diǎn)的第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞 在第二特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與該 種特定干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第二獲取數(shù) 據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理和估算第二血液樣本。在對(duì)第二血液樣本進(jìn) 行步驟26中的測(cè)量方法MT之前,第二血液樣本可以存放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫 度與用來(lái)存放進(jìn)行步驟22之測(cè)量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟25獲得 第二血液樣本到步驟26對(duì)第二血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21 獲得第一血液樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔。此外,本實(shí)施 例也可以透過(guò)上述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝 置(TD)來(lái)獲得第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)。
[0224] 關(guān)于第二方法,在步驟27中,在實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實(shí)驗(yàn)對(duì)象等待第二段時(shí)間(也就是一段第二預(yù)定時(shí)間),例如24小 時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是3小時(shí)至36小時(shí)。接著,在步驟28中,取出實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第三特定 時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管) 中,以獲得第三血液樣本。第三血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且 也可以與第一血液樣本的體積和第二血液樣本的體積相同。第三特定時(shí)間點(diǎn)為第二段時(shí)間 結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟29中,對(duì)第三血液樣本進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得 實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第三特定時(shí)間點(diǎn)的第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞 在第三特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與該 種特定干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第三獲取數(shù) 據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理和估算第三血液樣本。在對(duì)第三血液樣本進(jìn) 行步驟29中的測(cè)量方法MT之前,第三血液樣本可以存放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫 度與用來(lái)存放進(jìn)行步驟22之測(cè)量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟28獲得 第三血液樣本到步驟29對(duì)第三血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21 獲得第一血液樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔。此外,本實(shí)施 例也可以透過(guò)上述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或上述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝 置(TD)來(lái)獲得第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)。
[0225] 關(guān)于第三方法,在步驟30中,在實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后,讓實(shí)驗(yàn)對(duì)象等待第三段時(shí)間(也就是一段第三預(yù)定時(shí)間),例如48小 時(shí)、36小時(shí)至60小時(shí)、60小時(shí)至84小時(shí)或是超過(guò)84小時(shí)。接著,在步驟31中,取出實(shí)驗(yàn) 對(duì)象在第四特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血管(例如乙二胺四乙 酸(EDTA)試管)中,以獲得第四血液樣本。第四血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升 或10毫升,而且也可以與第一血液樣本的體積、第二血液樣本的體積和第三血液樣本的體 積相同。第四特定時(shí)間點(diǎn)為第三段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟32中,對(duì)第四血液樣 本進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得實(shí)驗(yàn)對(duì)象在第四特定時(shí)間點(diǎn)的第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)。 此第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在第四特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每 單位體積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與該種特定干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位 體積(如每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第四獲取數(shù)據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理 和估算第四血液樣本。在對(duì)第四血液樣本進(jìn)行步驟32中的測(cè)量方法MT之前,第四血液樣 本可以存放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫度與用來(lái)存放進(jìn)行步驟22之測(cè)量方法MT前 的第一血液樣本的溫度相同。從步驟31獲得第四血液樣本到步驟32對(duì)第四血液樣本進(jìn)行 測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本 進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔。此外,本實(shí)施例也可以透過(guò)上述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工 具(AD)或上述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD)來(lái)獲得第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)。
[0226] 利用步驟22、26、29和32所獲得的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)可得到與每單位體積 的該種特定干細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)的變化量,其包括:(1)第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞 在第二特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中 該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量 Λ 1 ;(2)第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第三特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中 每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì) 象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量Λ2;以及(3)第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干 細(xì)胞在第四特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù) 據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變 化量△ 3。也就是說(shuō),對(duì)步驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟26所獲得的第二獲取數(shù)據(jù)進(jìn) 行第一分析運(yùn)算可以獲得變化量△ 1,此第一分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第二獲取數(shù) 據(jù)進(jìn)行比較;對(duì)步驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟29所獲得的第三獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第二 分析運(yùn)算可以獲得變化量Λ 2,此第二分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第三獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行 比較;對(duì)步驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟32所獲得的第四獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第三分析運(yùn) 算可以獲得變化量Λ 3,此第三分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第四獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。
[0227] 對(duì)變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的每?jī)蓚€(gè)變化量進(jìn)行比較(例如對(duì)變化量Λ 1和變化 量Λ2進(jìn)行比較),可以獲知或找出與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ1、Λ2和Λ3中的 最大變化量,進(jìn)而確定、找出或得到適合用在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間 (例如第一段時(shí)間、第二段時(shí)間或第三段時(shí)間)以及/或是最佳收獲時(shí)間點(diǎn)(例如第二至第 四特定時(shí)間點(diǎn)的其中一個(gè))。當(dāng)變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最大變化量是變化量△ 1的時(shí) 候,最佳收獲時(shí)間為第一段時(shí)間,最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為第二特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)變化量Λ 1、Λ2和 Λ3中的最大變化量是變化量Λ2的時(shí)候,最佳收獲時(shí)間為第二段時(shí)間,最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為 第三特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ3的時(shí)候,最佳收 獲時(shí)間為第三段時(shí)間,最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為第四特定時(shí)間點(diǎn)。因此,欲從某一個(gè)體(其可是實(shí) 驗(yàn)對(duì)象或是與實(shí)驗(yàn)對(duì)象相同生物分類的一個(gè)體)取得該種特定干細(xì)胞的時(shí)候,可以在該個(gè) 體進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)后的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)從該個(gè)體 取得一組織樣本(其可是本發(fā)明在"個(gè)體(S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣 本),然后再?gòu)娜〉玫慕M織樣本中取得該種特定干細(xì)胞。另外,在實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行或接受步驟 23所述的一種或多種的行為或刺激(X)(藉以在體內(nèi)培養(yǎng)或培育該種特定干細(xì)胞)之后,圖 18所述的方法(其包括步驟21至步驟32)可以用來(lái)監(jiān)測(cè)該種特定干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周 邊血液中的增加數(shù)量。
[0228] 此外,本發(fā)明也可以分別對(duì)復(fù)數(shù)個(gè)相同生物分類的實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行圖18所述的方 法,進(jìn)而獲得與每一個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象有關(guān)的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)(詳細(xì)說(shuō)明可參閱圖18所述 的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù))。利用從這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)可得到與 每單位體積的該種特定干細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)的變化量,其包括:(1)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象的 該種特定干細(xì)胞在第二特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第二干細(xì)胞 數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于 第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量Λ1 ;(2)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞在第三特定時(shí) 間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第三干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在 第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量Λ2 ; 以及(3)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞在第四特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位 體積的數(shù)量(其屬于第四干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血 液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量Λ 3。
[0229] 對(duì)從這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得且與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布 中的每?jī)蓚€(gè)變化量分布進(jìn)行比較(例如對(duì)與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 1的分布和與SB-1 細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ2的分布進(jìn)行比較),可以得知或找出與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化 量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布,進(jìn)而確定、找出或得到適合用在這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該 種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間(例如第一段時(shí)間、第二段時(shí)間或第三段時(shí)間)以及/或是 最佳收獲時(shí)間點(diǎn)(例如第二至第四特定時(shí)間點(diǎn)的其中一個(gè))。
[0230] 當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布是與該種 特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ1的分布的時(shí)候,最佳收獲時(shí)間為第一段時(shí)間,最佳收獲時(shí)間 點(diǎn)為第二特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分 布是與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 2的分布的時(shí)候,最佳收獲時(shí)間為第二段時(shí)間,最 佳收獲時(shí)間點(diǎn)為第三特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義 的變化量分布是與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 3的分布的時(shí)候,最佳收獲時(shí)間為第三 段時(shí)間,最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為第四特定時(shí)間點(diǎn)。因此,欲從某一個(gè)體(其可是與這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象 相同生物分類的一個(gè)體或是這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的其中一個(gè))取得該種特定干細(xì)胞的時(shí)候,可以 在該個(gè)體進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)后的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)從 該個(gè)體取得一組織樣本(其可是本發(fā)明在"個(gè)體(S)以及組織樣本(Ρ)"的描述里所提及的 組織樣本),然后再?gòu)娜〉玫慕M織樣本中取得該種特定干細(xì)胞。
[0231] 圖19描述一種獲得一對(duì)照者(例如前面所述的個(gè)體(S))在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的干 細(xì)胞數(shù)據(jù)的方法。利用此方法所獲得的干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以用來(lái)與圖18所述的實(shí)驗(yàn)對(duì)象所獲 得的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(也就是利用圖18所述的方法而獲得的干細(xì)胞數(shù)據(jù))進(jìn)行比較,藉以確認(rèn) 與實(shí)驗(yàn)對(duì)象在兩個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)(其為實(shí)驗(yàn)對(duì)象在進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的 行為或刺激(X)之后的兩個(gè)不同時(shí)間點(diǎn))有關(guān)的兩組干細(xì)胞數(shù)據(jù)之間的變化是來(lái)自步驟23 所述的一種或多種的行為或刺激(X)。除了對(duì)照者沒有進(jìn)行或者接受實(shí)驗(yàn)對(duì)象在圖18步 驟23所進(jìn)行或接受的一種或多種的行為或刺激(X)之外,圖19所述的用于對(duì)照者的方法 是與圖18所述的用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象的方法相同。從圖19所述的用于對(duì)照者的方法所獲得的干 細(xì)胞數(shù)據(jù),可以作為評(píng)估圖18所述的變化量(其與"從圖18所述的用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象的方法所 獲得的干細(xì)胞數(shù)據(jù)"有關(guān))的標(biāo)準(zhǔn)。
[0232] 請(qǐng)參閱圖19所示,在步驟33中,將對(duì)照者(或稱對(duì)照組參與者)在第五特定時(shí)間 點(diǎn)的周邊血液取出,并放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第五血 液樣本。第五血液樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與圖18步 驟21所述的第一血液樣本的體積相同。第五特定時(shí)間點(diǎn)為開始進(jìn)行圖19所述的用于對(duì)照 者的方法的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟34中,對(duì)第五血液樣本進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn) 而獲得對(duì)照者在第五特定時(shí)間點(diǎn)的第五干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第五干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括一種特定干 細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與 該種特定干細(xì)胞在對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第五獲取數(shù) 據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理和估算第五血液樣本。敘述在圖19的該種特 定干細(xì)胞可以與敘述在圖18的該種特定干細(xì)胞相同。在對(duì)第五血液樣本進(jìn)行步驟34中的 測(cè)量方法MT之前,第五血液樣本可以存放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫度與用來(lái)存放 進(jìn)行步驟22的測(cè)量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟33獲得第五血液樣本 到步驟34對(duì)第五血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液 樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔。在取得步驟33所述的第五 血液樣本之后,將會(huì)進(jìn)行含有下列步驟35至步驟37的第四方法、含有下列步驟38至步驟 40的第五方法以及含有下列步驟41至步驟43的第六方法。
[0233] 關(guān)于第四方法,在步驟35中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對(duì)照者 等待第四段時(shí)間(也就是一段第四預(yù)定時(shí)間),例如1. 5小時(shí)、30分鐘至3小時(shí)、1小時(shí)至2 小時(shí)或是45分鐘至12小時(shí)。在時(shí)間長(zhǎng)度上,第四段時(shí)間可以等于圖18步驟24所述的第 一段時(shí)間。接著,在步驟36中,取出對(duì)照者在第六特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊 血液放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第六血液樣本。第六血液 樣本的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積相同。 第六特定時(shí)間點(diǎn)為第四段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟37中,對(duì)第六血液樣本進(jìn)行前 面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得對(duì)照者在第六特定時(shí)間點(diǎn)的第六干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第六干細(xì) 胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在第六特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如 每毫升)的數(shù)量,也就是與該種特定干細(xì)胞在對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升) 的數(shù)量有關(guān)的第六獲取數(shù)據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理和估算第六血液樣 本。在對(duì)第六血液樣本進(jìn)行步驟37中的測(cè)量方法MT之前,第六血液樣本可以存放在一受 控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫度與用來(lái)存放進(jìn)行步驟22的測(cè)量方法MT前的第一血液樣本的 溫度相同。從步驟36獲得第六血液樣本到步驟37對(duì)第六血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí) 間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT 的時(shí)間間隔。
[0234] 關(guān)于第五方法,在步驟38中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對(duì)照者 等待第五段時(shí)間(也就是一段第五預(yù)定時(shí)間),例如24小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是3小時(shí) 至36小時(shí)。在時(shí)間長(zhǎng)度上,第五段時(shí)間可以等于圖18步驟27所述的第二段時(shí)間。接著, 在步驟39中,取出對(duì)照者在第七特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊血液放到一采血 管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第七血液樣本。第七血液樣本的體積可以 是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積和第六血液樣本的體積 相同。第七特定時(shí)間點(diǎn)為第五段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。接著,在步驟40中,對(duì)第七血液樣本 進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得對(duì)照者在第七特定時(shí)間點(diǎn)的第七干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第 七干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在第七特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體 積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與該種特定干細(xì)胞在對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如 每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第七獲取數(shù)據(jù)。圖14A-圖14C所述的方法可以用來(lái)處理和估算第 七血液樣本。在對(duì)第七血液樣本進(jìn)行步驟40中的測(cè)量方法MT之前,第七血液樣本可以存 放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫度與用來(lái)存放進(jìn)行步驟22的測(cè)量方法MT前的第一血 液樣本的溫度相同。從步驟39獲得第七血液樣本到步驟40對(duì)第七血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法 MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方 法MT的時(shí)間間隔。
[0235] 關(guān)于第六方法,在步驟41中,在取得步驟33所述的第五血液樣本之后,讓對(duì)照者 等待第六段時(shí)間(也就是一段第六預(yù)定時(shí)間),例如48小時(shí)、36小時(shí)至60小時(shí)、60小時(shí)至 84小時(shí)或是超過(guò)84小時(shí)。在時(shí)間長(zhǎng)度上,第六段時(shí)間可以等于圖18步驟30所述的第三段 時(shí)間。接著,在步驟42中,取出對(duì)照者在第八特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液,并將取出的周邊血液 放到一采血管(例如乙二胺四乙酸(EDTA)試管)中,以獲得第八血液樣本。第八血液樣本 的體積可以是大于或等于5毫升或10毫升,而且也可以與第五血液樣本的體積、第六血液 樣本的體積和第七血液樣本的體積相同。第八特定時(shí)間點(diǎn)為第六段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。接 著,在步驟43中,對(duì)第八血液樣本進(jìn)行前面所述的測(cè)量方法MT,進(jìn)而獲得對(duì)照者在第八特 定時(shí)間點(diǎn)的第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)。此第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在第八特定時(shí)間點(diǎn) 的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,也就是與該種特定干細(xì)胞在對(duì)照 者的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量有關(guān)的第八獲取數(shù)據(jù)。圖14A-圖14C所 述的方法可以用來(lái)處理和估算第八血液樣本。在對(duì)第八血液樣本進(jìn)行步驟43中的測(cè)量方 法MT之前,第八血液樣本可以存放在一受控制的環(huán)境中,此環(huán)境的溫度與用來(lái)存放進(jìn)行步 驟22的測(cè)量方法MT前的第一血液樣本的溫度相同。從步驟42獲得第八血液樣本到步驟 43對(duì)第八血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔可以等于從步驟21獲得第一血液樣本到步 驟22對(duì)第一血液樣本進(jìn)行測(cè)量方法MT的時(shí)間間隔。
[0236] 利用步驟22、26、29和32所獲得的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)以及步驟34、37、40和 43所獲得的第五至第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)可得到與該種特定干細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)的變化量,其包 括:(1)第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第二特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中 每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì) 象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量Δ1 ;(2)第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞 在第三特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中 該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量 Λ2 ; (3)第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第四特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的周邊血液中 每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)對(duì) 象的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量Δ3; (4)第六干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞 在第六特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第五干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該 種特定干細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量S1 ; (5)第七干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第七特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體 積的數(shù)量相對(duì)于第五干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血 液中每單位體積的數(shù)量的變化量S 2 ;以及(6)第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定干細(xì)胞在第八 特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積的數(shù)量相對(duì)于第五干細(xì)胞數(shù)據(jù)中該種特定 干細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照者的周邊血液中每單位體積的數(shù)量的變化量S 3。
[0237] 對(duì)步驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟26所獲得的第二獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第一分析 運(yùn)算可以獲得變化量Λ 1,此第一分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第二獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。 對(duì)步驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟29所獲得的第三獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第二分析運(yùn)算可 以獲得變化量Λ 2,此第二分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第三獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。對(duì)步 驟22所獲得的第一獲取數(shù)據(jù)和步驟32所獲得的第四獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第三分析運(yùn)算可以獲得 變化量Λ3,此第三分析運(yùn)算包括對(duì)第一獲取數(shù)據(jù)和第四獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。對(duì)步驟34所 獲得的第五獲取數(shù)據(jù)和步驟37所獲得的第六獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第四分析運(yùn)算可以獲得變化量 S 1,此第四分析運(yùn)算包括對(duì)第五獲取數(shù)據(jù)和第六獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。對(duì)步驟34所獲得的 第五獲取數(shù)據(jù)和步驟40所獲得的第七獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第五分析運(yùn)算可以獲得變化量δ 2,此 第五分析運(yùn)算包括對(duì)第五獲取數(shù)據(jù)和第七獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。對(duì)步驟34所獲得的第五獲 取數(shù)據(jù)和步驟43所獲得的第八獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行第六分析運(yùn)算可以獲得變化量δ 3,此第六分 析運(yùn)算包括對(duì)第五獲取數(shù)據(jù)和第八獲取數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。
[0238] 對(duì)變化量Δ 1、Δ 2和Δ 3中的每?jī)蓚€(gè)變化量進(jìn)行比較,可以獲知或找出與該種特 定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量,然后將變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中 的最大變化量和變化量S1、δ 2和δ 3中對(duì)應(yīng)的變化量進(jìn)行比較,以判斷變化量Λ 1、Λ 2 和Λ3中的最大變化量是否由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起。如果 變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量(在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ 1、δ 2和δ 3中對(duì) 應(yīng)的變化量,則可以確認(rèn)(或確定)變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最大變化量是由步驟23所 述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。當(dāng)變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是 變化量Λ 1的時(shí)候,變化量δ 1、δ 2和δ 3中對(duì)應(yīng)的變化量為變化量δ 1。當(dāng)變化量Λ 1、 Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ2的時(shí)候,變化量δ 1、δ 2和δ 3中對(duì)應(yīng)的變化量為 變化量3 2。當(dāng)變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ3的時(shí)候,變化量δ 1、 δ 2和δ 3中對(duì)應(yīng)的變化量為變化量δ 3。因此,透過(guò)上述的方法,可以獲得適合用在該種 特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間。當(dāng)變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量Λ1,而 且變化量△ 1 (在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量S 1的時(shí)候,適合用在該種特定干細(xì)胞的最佳收 獲時(shí)間為步驟24所述的第一段時(shí)間。當(dāng)變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變化量 Λ 2,而且變化量Λ 2(在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ 2的時(shí)候,適合用在該種特定干細(xì)胞的 最佳收獲時(shí)間為步驟27所述的第二段時(shí)間。當(dāng)變化量Λ 1、Λ2和Λ3中的最大變化量是 變化量Λ 3,而且變化量Λ 3 (在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ 3的時(shí)候,適合用在該種特定干 細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間為步驟30所述的第三段時(shí)間。另外,透過(guò)上述的方法,也可以獲得適 合用在該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是變 化量Λ 1,而且變化量Λ 1 (在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ 1的時(shí)候,適合用在該種特定干細(xì) 胞的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為步驟25所述的第二特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)變化量△ 1、△ 2和△ 3中的最 大變化量是變化量Λ 2,而且變化量Λ 2 (在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ 2的時(shí)候,適合用在 該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為步驟28所述的第三特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)變化量Λ1、△ 2 和Λ3中的最大變化量是變化量Λ 3,而且變化量Λ 3(在統(tǒng)計(jì)上)明顯優(yōu)于變化量δ3的 時(shí)候,適合用在該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)為步驟31所述的第四特定時(shí)間點(diǎn)。如果 變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3中的最大變化量(在統(tǒng)計(jì)上)沒有明顯優(yōu)于變化量δ 1、δ 2和δ 3 中對(duì)應(yīng)的變化量,則無(wú)法確認(rèn)(或確定)變化量Λ1、Λ2和Λ3中的最大變化量是由步驟 23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。
[0239] 因此,欲從某一個(gè)體(其可是實(shí)驗(yàn)對(duì)象或是與實(shí)驗(yàn)對(duì)象相同生物分類的一個(gè)體) 取得該種特定干細(xì)胞的時(shí)候,可以在該個(gè)體進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種的行為 或刺激(X)后的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)從該個(gè)體取得一組織樣本(其可是本發(fā)明在"個(gè)體(S)以 及組織樣本(Ρ) "的描述里所提及的組織樣本),然后再?gòu)娜〉玫慕M織樣本中取得該種特定 干細(xì)胞。
[0240] 此外,本發(fā)明也可以分別對(duì)復(fù)數(shù)個(gè)相同生物分類的對(duì)照者進(jìn)行圖19所述的方法, 進(jìn)而獲得與每一個(gè)對(duì)照者有關(guān)的第五至第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)(詳細(xì)說(shuō)明可參閱圖19所述的第 五至第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)),以及分別對(duì)復(fù)數(shù)個(gè)相同生物分類的實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行圖18所述的方 法,進(jìn)而獲得與每一個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象有關(guān)的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)(詳細(xì)說(shuō)明可參閱圖18所述 的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù))。利用從這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得的第一至第四干細(xì)胞數(shù)據(jù)以及從這 些對(duì)照者獲得的第五至第八干細(xì)胞數(shù)據(jù)可得到與該種特定干細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)的變化量,其 包括:(1)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞在第二特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位 體積的數(shù)量(其屬于第二干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血 液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量Λ1 ;(2)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì) 象的該種特定干細(xì)胞在第三特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第三干 細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其 在第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)中)的變化量Λ2; (3)關(guān)于每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞在第四 特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第四干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干 細(xì)胞在第一特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第一干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化 量Λ3; (4)關(guān)于每一位對(duì)照者的該種特定干細(xì)胞在第六特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位 體積的數(shù)量(其屬于第六干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血 液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第五干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量S 1 ;(5)關(guān)于每一位對(duì)照者的 該種特定干細(xì)胞在第七特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第七干細(xì)胞 數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì)胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其在第 五干細(xì)胞數(shù)據(jù)中)的變化量S 2;以及(6)關(guān)于每一位對(duì)照者的該種特定干細(xì)胞在第八特 定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第八干細(xì)胞數(shù)據(jù))相對(duì)于該種特定干細(xì) 胞在第五特定時(shí)間點(diǎn)的周邊血液中每單位體積的數(shù)量(其屬于第五干細(xì)胞數(shù)據(jù))的變化量 δ 3〇
[0241] 對(duì)從這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象獲得且與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布 中的每?jī)蓚€(gè)變化量分布進(jìn)行比較(例如對(duì)與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 1的分布和與SB-1 細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 2的分布進(jìn)行比較),可以得知或找出與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化 量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布。然后,將與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最 具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布和與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量S 1、δ 2和δ 3的分布中對(duì)應(yīng) 的變化量分布進(jìn)行比較(例如當(dāng)與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量 分布是與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ 1的分布的時(shí)候,將與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量δ 1的 分布和與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 1的分布進(jìn)行比較),以判斷與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的 變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布(例如與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 1的分布) 是否由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起。如果與該種特定干細(xì)胞有關(guān) 的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布(例如與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 1的分布) 在統(tǒng)計(jì)上明顯優(yōu)于與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中對(duì)應(yīng)的變化 量分布(例如與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量δ 1的分布),則可以確認(rèn)(或確定)與該種特定 干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布(例如與SB-1細(xì)胞有關(guān)的變化量 Λ 1的分布)是由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。在與該種特定 干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ 1、Λ2和Λ3的分布中,如果變化量Λ 1的分布是最具統(tǒng)計(jì)意義的 變化量分布,則在與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對(duì)應(yīng)的 變化量分布為與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量δ 1的分布。在與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變 化量Λ 1、Λ 2和Λ 3的分布中,如果變化量Λ 2的分布是最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布,則在 與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量δ 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對(duì)應(yīng)的變化量分布為與該 種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量S 2的分布。在與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ1、Λ2和 Λ 3的分布中,如果變化量△ 3的分布是最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布,則在與該種特定干細(xì) 胞有關(guān)的變化量3 1、δ 2和δ 3的分布中,與其對(duì)應(yīng)的變化量分布為與該種特定干細(xì)胞有 關(guān)的變化量S3的分布。如果與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化 量分布在統(tǒng)計(jì)上沒有明顯優(yōu)于與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量S1、δ 2和δ 3的分布中 對(duì)應(yīng)的變化量分布,則無(wú)法確認(rèn)(或確定)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng) 計(jì)意義的變化量分布是由步驟23所述的一種或多種的行為或刺激(X)所引起的。因此,透 過(guò)上述的方法,可以獲得適合用在這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間和最佳 收獲時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布是與該 種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ1的分布,而且與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量Λ1的分布 在統(tǒng)計(jì)上明顯優(yōu)于與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量S 1的分布的時(shí)候,適合用在這些實(shí)驗(yàn) 對(duì)象的該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間和最佳收獲時(shí)間點(diǎn)分別是步驟24所述的第一段時(shí) 間和步驟25所述的第二特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量分布中最具統(tǒng)計(jì) 意義的變化量分布是與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 2的分布,而且與該種特定干細(xì)胞 有關(guān)的變化量△ 2的分布在統(tǒng)計(jì)上明顯優(yōu)于與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量δ2的分布的 時(shí)候,適合用在這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間和最佳收獲時(shí)間點(diǎn)分別是 步驟27所述的第二段時(shí)間和步驟28所述的第三特定時(shí)間點(diǎn)。當(dāng)與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的 變化量分布中最具統(tǒng)計(jì)意義的變化量分布是與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 3的分布, 而且與該種特定干細(xì)胞有關(guān)的變化量△ 3的分布在統(tǒng)計(jì)上明顯優(yōu)于與該種特定干細(xì)胞有 關(guān)的變化量S3的分布的時(shí)候,適合用在這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的該種特定干細(xì)胞的最佳收獲時(shí)間 和最佳收獲時(shí)間點(diǎn)分別是步驟30所述的第三段時(shí)間和步驟31所述的第四特定時(shí)間點(diǎn)。因 此,欲從某一個(gè)體(其可是與這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象相同生物分類的一個(gè)體或是這些實(shí)驗(yàn)對(duì)象的其 中一個(gè))取得該種特定干細(xì)胞的時(shí)候,可以在該個(gè)體進(jìn)行或接受步驟23所述的一種或多種 的行為或刺激(X)后的最佳收獲時(shí)間點(diǎn)從該個(gè)體取得一組織樣本(其可是本發(fā)明在"個(gè)體 (S)以及組織樣本(P)"的描述里所提及的組織樣本),然后再?gòu)娜〉玫慕M織樣本中取得該 種特定干細(xì)胞。
[0242] 在接下來(lái)的內(nèi)容中,將以一種獲得各個(gè)人體每毫升周邊血液的干細(xì)胞數(shù)量的方法 作為范例,敘述第二實(shí)驗(yàn)并顯示相關(guān)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。在第二實(shí)驗(yàn)中,挑選五位人類受試者作 為第二實(shí)驗(yàn)中的實(shí)驗(yàn)組,并讓這五位人類受試者進(jìn)行圖18所述的方法。另外,還挑選一位 人類受試者(以下稱"受試者CP")作為第二實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組,并讓受試者CP進(jìn)行圖19所 述的方法。實(shí)驗(yàn)組中的這五位人類受試者是:(1)受試者E1:-位五十五歲左右的男性,其 干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示在圖20A和圖20B ; (2)受試者E2 :-位四十歲出頭的男性,其干細(xì)胞數(shù)據(jù) 顯示在圖20C和圖20D ; (3)受試者E3 :-位五十五歲左右的男性,其干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示在圖 20E和圖20F ;(4)受試者E4 :-位三十五歲左右的男性,其干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示在圖20G和圖 20H ;以及(5)受試者E5 :-位二十五歲左右的女性,其干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示在圖201和圖20J。 受試者CP是一位二十五歲左右的女性,其干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示在圖20K和圖20L。
[0243] 受試者E1-E4中的每一位都會(huì)進(jìn)行圖18步驟21至步驟32所述的方法,藉以獲得 每一位受試者在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。受試者E5則進(jìn)行圖18所述的步驟21至 步驟29,因而獲得受試者E5在三個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。在每一位實(shí)驗(yàn)對(duì)象(也就 是受試者E1-E5)所進(jìn)行的方法中,受試者E1-E5中的每一位都會(huì)在圖18的步驟23中口服 30顆褐藻糖膠補(bǔ)充品(可與圖11和圖12所述的褐藻糖膠補(bǔ)充品相同)。也就是說(shuō),受試 者E1-E5中的每一位都會(huì)在圖18的步驟23中服用3克(也就是超過(guò)2克)的褐藻糖膠。 另外,這五位受試者E1-E5每一位的體重大約是65公斤。這意味著褐藻糖膠的劑量是每公 斤體重約46毫克?;蛘?,褐藻糖膠的劑量也可以是每公斤體重超過(guò)20毫克、30毫克、40毫 克或是50毫克。
[0244] 圖20A和圖20B顯示受試者E1在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的每一種干細(xì)胞(共有23種干 細(xì)胞)在周邊血液中每毫升的數(shù)量。圖20C和圖20D顯示受試者E2在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的 每一種干細(xì)胞(共有23種干細(xì)胞)在周邊血液中每暈升的數(shù)量。圖20E和圖20F顯不受 試者E3在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的每一種干細(xì)胞(共有23種干細(xì)胞)在周邊血液中每毫升的數(shù) 量。圖20G和圖20H顯示受試者E4在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的每一種干細(xì)胞(共有23種干細(xì)胞) 在周邊血液中每毫升的數(shù)量。上述用在這四位受試者E1-E4的四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)分別是:(1) 第一時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品前的一個(gè)時(shí)間點(diǎn),也就是圖18步驟21所述的 第一特定時(shí)間點(diǎn);(2)第二時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后的第1.5小時(shí),也 就是圖18步驟24所述的第一段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn);(3)第三時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻 糖膠補(bǔ)充品之后的第24小時(shí),也就是圖18步驟27所述的第二段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn);以及 (4)第四時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后的第48小時(shí),也就是圖18步驟30所 述的第三段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。
[0245] 圖201和圖20J顯示受試者E5在三個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的每一種干細(xì)胞(共有23種干 細(xì)胞)在周邊血液中每毫升的數(shù)量。用在受試者E5的三個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)分別是:(1)第一時(shí) 間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品前的一個(gè)時(shí)間點(diǎn),也就是圖18步驟21所述的第一特 定時(shí)間點(diǎn);(2)第二時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ)充品之后的第1.5小時(shí),也就是圖 18步驟24所述的第一段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn);以及(3)第三時(shí)間點(diǎn),其為食用或攝取褐藻糖 膠補(bǔ)充品之后的第24小時(shí),也就是圖18步驟27所述的第二段時(shí)間結(jié)束的時(shí)間點(diǎn)。
[0246] 另外,受試者CP是進(jìn)行圖19步驟33至步驟43所述的方法來(lái)獲得受試者CP在四 個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)。過(guò)程中,受試者CP沒有服用任何的褐藻糖膠補(bǔ)充品。圖20K 和圖20L顯示受試者CP在四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)的每一種干細(xì)胞(共有23種干細(xì)胞)在周邊血 液中每毫升的數(shù)量。用在受試者CP的四個(gè)特定時(shí)間點(diǎn)分別是:(1)第五時(shí)間點(diǎn),其為從受試 者CP取得一個(gè)血液樣本的時(shí)間點(diǎn)(也就是圖19步驟33所述的第五特定時(shí)間點(diǎn));(2)第 六時(shí)間點(diǎn),其為第五時(shí)間點(diǎn)之后的第1. 5小時(shí)(也就是圖19步驟35所述的第四段時(shí)間結(jié) 束的第六特定時(shí)間點(diǎn));(3)第七時(shí)間點(diǎn),其為第五時(shí)間點(diǎn)之后的第24小時(shí)(也就是圖19 步驟38所述的第五段時(shí)間結(jié)束的第七特定時(shí)間點(diǎn));以及(4)第八時(shí)間點(diǎn),其為第五時(shí)間 點(diǎn)之后的第48小時(shí)(也就是圖19步驟41所述的第六段時(shí)間結(jié)束的第八特定時(shí)間點(diǎn))。
[0247] 根據(jù)圖20A至圖20L的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示,對(duì)某些特定種類的干細(xì)胞(如下面所列 舉的干細(xì)胞)而言,最佳的收獲時(shí)間點(diǎn)是在體內(nèi)培育干細(xì)胞之后的第1.5小時(shí)或是在食用 (或攝取)褐藻糖膠補(bǔ)充品之后的第1. 5小時(shí)。在受試者E1-E5食用(或攝取)褐藻糖膠 補(bǔ)充品之后的第1. 5小時(shí)取得的周邊血液中,每毫升的數(shù)量有2倍以上增加的干細(xì)胞列舉 如下:SB-1細(xì)胞、SB-2細(xì)胞、類卵裂球干細(xì)胞、SSEA4(+)多功能干細(xì)胞、⑶13(+)多潛能干 細(xì)胞、⑶90 (+)多潛能干細(xì)胞、⑶105(+)多潛能干細(xì)胞、⑶34 (+)造血干細(xì)胞、⑶150(+)造 血干細(xì)胞、CD24(+)先驅(qū)干細(xì)胞、SSEA1(+)先驅(qū)干細(xì)胞、CD45(+)先驅(qū)干細(xì)胞、CD33(+)先驅(qū) 干細(xì)胞、CD10(+)先驅(qū)干細(xì)胞以及CXCR1(+)干細(xì)胞。
[0248] 另外,根據(jù)圖20A至圖20L的干細(xì)胞數(shù)據(jù)顯示,服用褐藻糖膠補(bǔ)充品(如第一實(shí)驗(yàn) 和圖11所述的褐藻糖膠補(bǔ)充品)可以導(dǎo)致、引起或造成某些種類的干細(xì)胞在人或動(dòng)物食用 (或攝取)褐藻糖膠補(bǔ)充品之后第24小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量至少有兩倍的增加。 此處所述的"兩倍增加"是指「某種干細(xì)胞在一個(gè)體(如人體或動(dòng)物體)食用或攝取褐藻糖 膠補(bǔ)充品前的周邊血液中每毫升的數(shù)量」和「該種干細(xì)胞在該個(gè)體食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ) 充品之后第1. 5小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量」的比例。除此之外,圖20A至圖20L的干 細(xì)胞數(shù)據(jù)也顯示,某些種類的干細(xì)胞在受試者El、E2、E3、E4或E5食用或攝取褐藻糖膠補(bǔ) 充品之后第1. 5小時(shí)的周邊血液中每毫升的數(shù)量有1. 5倍、3倍或4倍的增加。因此,口服 褐藻糖膠(一種褐藻的主要成分)可以是一種使人類或動(dòng)物的周邊血液增加干細(xì)胞的有效 方法。綜上所述,一種行為,例如口服3克(也就是超過(guò)2克)的褐藻糖膠(其可來(lái)自上述 的褐藻糖膠補(bǔ)充品)或是一種或多種的行為或刺激(X),可以導(dǎo)致、引起、活化或催化人類 或動(dòng)物周邊血液中的干細(xì)胞至少有1. 5倍(或以上)、2倍(或以上)、3倍(或以上)或4 倍(或以上)的增加。
[0249] 歸納起來(lái),本發(fā)明提供了許多種方法,分別簡(jiǎn)述如下。
[0250] -種從第一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)收獲(或獲?。┖蛢?chǔ)存干細(xì)胞的方法, 其包括下列步驟:(1)讓該第一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克) 的一沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云 粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重 量百分比超過(guò)60%的褐藻糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加該第一個(gè)體體 內(nèi)的一種或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的數(shù)量;(2)在該 第一個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該第一個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至 60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小 時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(3)在該第一個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該 第一個(gè)體取得一組織樣本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液);(4)從該組織樣本收獲、 收集或取得該種或該些種選定的干細(xì)胞;以及(5)將該種或該些種選定的干細(xì)胞存放(或 儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如 冰箱)中一段時(shí)間(例如1個(gè)月以上或一年以上),其中該設(shè)施是由一機(jī)構(gòu)(如細(xì)胞銀行) 所提供。在一范例中,在存放(或儲(chǔ)存)該種或該些種選定的干細(xì)胞之后,該種或該些種選 定的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷谠摰谝粋€(gè)體上。在另一 范例中,在存放(或儲(chǔ)存)該種或該些種選定的干細(xì)胞之后,該種或該些種選定的干細(xì)胞可 以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷诘诙€(gè)體(例如另一人體或另一動(dòng)物 體)上。
[0251] 一種儲(chǔ)存第一個(gè)體(例如人體或動(dòng)物體)的干細(xì)胞的方法,其包括下列步驟:(1) 讓該第一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,該 沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云粉,其中該4. 5克的該沖 繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過(guò)60%的褐藻 糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加該第一個(gè)體體內(nèi)的一種或多種選定的干 細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的數(shù)量;(2)在該第一個(gè)體進(jìn)行或接受該行 為之后,讓該第一個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分 鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí) 至50小時(shí);(3)在該第一個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該第一個(gè)體取得一組織樣 本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液);以及⑷將含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的 該組織樣本存放(或儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80 度)的一設(shè)施(如冰箱)中一段時(shí)間(例如1個(gè)月以上或一年以上),其中該設(shè)施是由一機(jī) 構(gòu)(如細(xì)胞銀行)所提供。在一范例中,在存放(或儲(chǔ)存)含有該種或該些種選定的干細(xì) 胞的該組織樣本之后,含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)?方法(例如注射或涂抹)而被用在該第一個(gè)體上。在另一范例中,在存放(或儲(chǔ)存)含有 該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本之后,含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織 樣本可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷诘诙€(gè)體(例如另一人體或另 一動(dòng)物體)上。
[0252] -種從第一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)收獲或獲取干細(xì)胞的方法,其包括下 列步驟:(1)讓該第一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克)的一沖繩 褐藻補(bǔ)充品,該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云粉,其中 該4. 5克的該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比 超過(guò)60%的褐藻糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加該第一個(gè)體體內(nèi)的一種 或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的數(shù)量;(2)在該第一個(gè)體進(jìn) 行或接受該行為之后,讓該第一個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20 分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí) 或是36小時(shí)至50小時(shí);(3)在該第一個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該第一個(gè)體取 得一組織樣本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液);以及(4)從該組織樣本收獲或取得 該種或該些種選定的干細(xì)胞。在一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該種或該些種選定 的干細(xì)胞之后(在這之后沒有或是略過(guò)下列步驟:將該種或該些種選定的干細(xì)胞存放(或 儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如冰 箱)中一段時(shí)間,例如1個(gè)月以上或一年以上),該種或該些種選定的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè) 適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷谠摰谝粋€(gè)體上。在另一范例中,在從該組織樣本 收獲或取得該種或該些種選定的干細(xì)胞之后(在這之后沒有或是略過(guò)下列步驟:將該種或 該些種選定的干細(xì)胞存放(或儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏0度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于 攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如冰箱)中一段時(shí)間,例如1個(gè)月以上或一年以上),該種或該些 種選定的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷诘诙€(gè)體(例如另 一人體或另一動(dòng)物體)上。
[0253] -種儲(chǔ)存第一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)的干細(xì)胞的方法,其包括下列步驟: (1)讓該第一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品, 該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云粉,其中該4. 5克的該 沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過(guò)60%的褐 藻糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加該第一個(gè)體體內(nèi)的一種或多種選定的 干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的數(shù)量;(2)在該第一個(gè)體進(jìn)行或接受該 行為之后,讓該第一個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100 分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小 時(shí)至50小時(shí);以及(3)在該第一個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該第一個(gè)體取得一 組織樣本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液),其中該組織樣本含有該種或該些種選定 的干細(xì)胞。在一范例中,在從該第一個(gè)體取得含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣 本之后(在這之后沒有或是略過(guò)下列步驟:將含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣 本存放(或儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80度)的一 設(shè)施(如冰箱)中一段時(shí)間,例如1個(gè)月以上或一年以上),含有該種或該些種選定的干細(xì) 胞的該組織樣本可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷谠摰谝粋€(gè)體上。在 另一范例中,在從該第一個(gè)體取得含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本之后(在 這之后沒有或是略過(guò)下列步驟:將含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本存放(或 儲(chǔ)存)在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如冰 箱)中一段時(shí)間,例如1個(gè)月以上或一年以上),含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織 樣本可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ缱⑸浠蛲磕ǎ┒挥迷诘诙€(gè)體(例如另一人體或另 一動(dòng)物體)上。
[0254] -種從第一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)儲(chǔ)存和收獲(或獲?。└杉?xì)胞的方法, 其包括下列步驟:(1)讓該第一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克) 的沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云 粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重 量百分比超過(guò)60%的褐藻糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加該第一個(gè)體體 內(nèi)的一種或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的數(shù)量;(2)在該第 一個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該第一個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60 分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至 36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(3)在該第一個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該第一 個(gè)體取得一組織樣本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液),其中該組織樣本含有該種或 該些種選定的干細(xì)胞;(4)將含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本存放(或儲(chǔ)存) 在溫度低于攝氏〇度(例如低于攝氏負(fù)30度或低于攝氏負(fù)80度)的一設(shè)施(如冰箱)中 一段時(shí)間(例如1個(gè)月以上或一年以上),其中該設(shè)施是由一機(jī)構(gòu)(如細(xì)胞銀行)所提供; 以及(5)在存放(或儲(chǔ)存)含有該種或該些種選定的干細(xì)胞的該組織樣本之后,從該組織 樣本收獲或取得該種或該些種選定的干細(xì)胞。在一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該 種或該些種選定的干細(xì)胞之后,該種或該些種選定的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ?如注射或涂抹)而被用在該第一個(gè)體上。在另一范例中,在從該組織樣本收獲或取得該種 或該些種選定的干細(xì)胞之后,該種或該些種選定的干細(xì)胞可以透過(guò)一個(gè)適當(dāng)?shù)姆椒ǎɡ?注射或涂抹)而被用在第二個(gè)體(例如另一人體或另一動(dòng)物體)上。
[0255] -種發(fā)現(xiàn)新種類干細(xì)胞(為一種尚未被發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞)的方法,其包括下列步驟: (1)讓一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)進(jìn)行或接受一行為,例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5 克)的一沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的 水云粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有 重量百分比超過(guò)60%的褐藻糖膠,該行為可經(jīng)過(guò)事先評(píng)估,以確認(rèn)能有效增加體內(nèi)一種或 多種干細(xì)胞的數(shù)量;(2)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí) 間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小 時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(3)在該個(gè)體等待該段(預(yù)定的) 時(shí)間之后,從該個(gè)體取得一組織樣本(例如該人體或該動(dòng)物體的周邊血液);以及(4)利 用一種用于偵測(cè)新種類干細(xì)胞的分析方法來(lái)處理該組織樣本,其中該種分析方法包括偵測(cè) 該組織樣本中的細(xì)胞是否含有細(xì)胞核的步驟以及該組織樣本中的細(xì)胞是否可以表達(dá)以及/ 或是無(wú)法表達(dá)一種或多種選定的細(xì)胞(表面)標(biāo)記的步驟,該種分析方法包括使用流式細(xì) 胞儀。
[0256] 一種評(píng)估一行為(例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩 褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云粉,其中該4.5克的該沖繩褐 藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過(guò)60 %的褐藻糖 膠)對(duì)于治療患有疾?。ㄈ绨┌Y、帕金森氏癥或阿茲海默病)的一個(gè)體(例如一人體或一 動(dòng)物體)的效果的方法,其包括下列步驟:(1)從該個(gè)體獲得第一組織樣本(例如周邊血液 樣本);(2)利用一分析或測(cè)量方法(例如前面所述的測(cè)量方法MT)或是裝置、儀器或設(shè)備 (例如前面所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或是前面所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具 或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲得與一種或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及 /或是SB-2細(xì)胞)之信息有關(guān)的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù);(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一 干細(xì)胞數(shù)據(jù)之后,讓該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為;(4)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該 個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小 時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(5)在 該個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本); (6)利用該分析或測(cè)量方法或是該裝置、儀器或設(shè)備從該第二組織樣本中獲得與該種或該 些種選定的干細(xì)胞之信息有關(guān)的第二干細(xì)胞數(shù)據(jù);以及(7)對(duì)該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第二 干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,其中該分析可以包括將該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行 比較。該種或該些種選定的干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種 干細(xì)胞。該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該第一組織樣本中每單位 體積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選定的干細(xì)胞每單 位體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該 第二組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第二組織樣本中該種或該 些種選定的干細(xì)胞每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以更包括與該 第一組織樣本有關(guān)的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干細(xì)胞的數(shù)量在顆 粒尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以更包括與該第 二組織樣本有關(guān)的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細(xì)胞的數(shù)量在顆粒 尺寸大于或等于該門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該門坎尺寸可以是〇. 5微米、0. 8微米、 1微米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0257] 一種評(píng)估一行為(例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩 褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水云粉,其中該4.5克的該沖繩褐 藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有重量百分比超過(guò)60 %的褐藻糖 膠)對(duì)于治療患有疾?。ㄈ绨┌Y、帕金森氏癥或阿茲海默病)的一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng) 物體)的效果的方法,其包括下列步驟:(1)從該個(gè)體獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣 本);(2)利用分析或測(cè)量方法(例如前面所述的測(cè)量方法MT)或是裝置、儀器或設(shè)備(例 如前面所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具(AD)或是前面所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝 置(TD))從該第一組織樣本中獲得與一種或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或 是SB-2細(xì)胞)有關(guān)的第一干細(xì)胞數(shù)據(jù);(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù) 之后,讓該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為;(4)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該行為之后,讓該個(gè)體等待一 段第一(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5 小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(5)在該個(gè)體等 待該段第一(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本);(6) 利用該分析或測(cè)量方法或是該裝置、儀器或設(shè)備從該第二組織樣本中獲得與該種或該些種 選定的干細(xì)胞有關(guān)的第二干細(xì)胞數(shù)據(jù);(7)對(duì)該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行 第一分析,其中該第一分析可包括將該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行比較;(8) 在獲得該第二組織樣本或是該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)之后,讓該個(gè)體再次進(jìn)行或接受該行為;(9) 在該個(gè)體再次進(jìn)行或接受該行為之后,讓該個(gè)體等待一段第二(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分 鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12 小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(10)在該個(gè)體等待該段第二(預(yù)定的)時(shí)間之后, 從該個(gè)體獲得第三組織樣本(例如周邊血液樣本);(11)利用該分析或測(cè)量方法或是該裝 置、儀器或設(shè)備從該第三組織樣本中獲得與該種或該些種選定的干細(xì)胞有關(guān)的第三干細(xì)胞 數(shù)據(jù);以及(12)對(duì)該第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第一或第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行第二分析,其中該第 二分析可包括將該第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第一或第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。該種或該些種選 定的干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種干細(xì)胞。該第一干細(xì)胞數(shù) 據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該第一組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數(shù) 量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選定的干細(xì)胞每單位體積(例如每毫升)的 數(shù)量。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該第二組織樣本中每單位體 積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第二組織樣本中該種或該些種選定的干細(xì)胞每單位 體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該第 三組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第三組織樣本中該種或該些 種選定的干細(xì)胞每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以更包括與該第 一組織樣本有關(guān)的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干細(xì)胞的數(shù)量在顆粒 尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以更包括與該第二 組織樣本有關(guān)的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細(xì)胞的數(shù)量在顆粒尺 寸大于或等于該門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該第三干細(xì)胞數(shù)據(jù)可以更包括與該第三組 織樣本有關(guān)的第三百分比,該第三百分比為該種或該些種選定的干細(xì)胞的數(shù)量在顆粒尺寸 大于或等于該門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該門坎尺寸可以是0. 5微米、0. 8微米、1微 米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0258] 一種評(píng)估或測(cè)試一種或多種的上述行為或刺激(X)(例如服用4. 5克(或超過(guò)3. 5 克)的沖繩褐藻補(bǔ)充品,該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有重量百分比為80% (或是超過(guò)70%)的水 云粉,其中該4. 5克的該沖繩褐藻補(bǔ)充品含有3克(或是超過(guò)2克)的褐藻糖膠或是含有 重量百分比超過(guò)60 %的褐藻糖膠)效果或效用的方法,其包括下列步驟:(1)從一個(gè)體(例 如一人體或一動(dòng)物體)獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣本);(2)利用分析或測(cè)量方法 (例如前面所述的測(cè)量方法MT)或是裝置、儀器或設(shè)備(例如前面所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀 器或工具(AD)或是前面所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲 得與一種或多種選定的干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞以及/或是SB-2細(xì)胞)的信息有關(guān)的第一 干細(xì)胞數(shù)據(jù);(3)在獲得該第一組織樣本或是該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)之后,讓該個(gè)體進(jìn)行或接 受該種或該些種的上述行為或刺激(X) ; (4)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該種或該些種的上述行 為或刺激(X)之后,讓該個(gè)體等待一段(預(yù)定的)時(shí)間,例如15分鐘至60分鐘、20分鐘至 100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36 小時(shí)至50小時(shí);(5)在該個(gè)體等待該段(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得第二組織樣本 (例如周邊血液樣本);(6)利用該分析或測(cè)量方法或是該裝置、儀器或設(shè)備從該第二組織 樣本中獲得與該種或該些種選定的干細(xì)胞有關(guān)的第二干細(xì)胞數(shù)據(jù);以及(7)對(duì)該第一干細(xì) 胞數(shù)據(jù)和該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行一分析,其中該分析可包括將該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)和該第二 干細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。該種或該些種選定的干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提 及的一種或多種干細(xì)胞。該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選定的干細(xì)胞在該第一組 織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第一組織樣本中該種或該些種選 定的干細(xì)胞每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種或該些種選 定的干細(xì)胞在該第二組織樣本中每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量,也就是在該第二組織 樣本中該種或該些種選定的干細(xì)胞每單位體積(例如每毫升)的數(shù)量。該第一干細(xì)胞數(shù)據(jù) 可以更包括與該第一組織樣本有關(guān)的第一百分比,該第一百分比為該種或該些種選定的干 細(xì)胞的數(shù)量在顆粒尺寸大于或等于一門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該第二干細(xì)胞數(shù)據(jù)可 以更包括與該第二組織樣本有關(guān)的第二百分比,該第二百分比為該種或該些種選定的干細(xì) 胞的數(shù)量在顆粒尺寸大于或等于該門坎尺寸的一區(qū)域中的百分比。該門坎尺寸可以是0. 5 微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。
[0259] -種監(jiān)測(cè)一個(gè)體(例如前面所述的人體或是前面所述的非人體)周邊血液中一種 選定干細(xì)胞(例如SB-1細(xì)胞或SB-2細(xì)胞)數(shù)量的方法,其可用來(lái)監(jiān)測(cè)該個(gè)體進(jìn)行或接受 一種或多種的上述行為或刺激(X)后該種選定干細(xì)胞增加的數(shù)量,該個(gè)體可透過(guò)該種或該 些種的上述行為或刺激(X)在體內(nèi)培養(yǎng)或培育該種選定干細(xì)胞,該種方法包括下列步驟: (1)從該個(gè)體獲得第一組織樣本(例如周邊血液樣本);(2)利用分析或測(cè)量方法(例如前 面所述的測(cè)量方法MT)或是裝置、儀器或設(shè)備(例如前面所述的整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工 具(AD)或是前面所述的單一系統(tǒng)、儀器、工具或裝置(TD))從該第一組織樣本中獲得與每 單位體積(例如每毫升)的該種選定干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)的第一數(shù)據(jù);(3)在獲得該第一組織 樣本之后,讓該個(gè)體進(jìn)行或接受該種或該些種的上述行為或刺激(X) ; (4)在該個(gè)體進(jìn)行或 接受該種或該些種的上述行為或刺激(X)之后,讓該個(gè)體等待一段第一(預(yù)定的)時(shí)間,例 如15分鐘至60分鐘、20分鐘至100分鐘、30分鐘至2小時(shí)、0. 5小時(shí)至3小時(shí)、1小時(shí)至 12小時(shí)、12小時(shí)至36小時(shí)或是36小時(shí)至50小時(shí);(5)在該個(gè)體等待該段第一(預(yù)定的) 時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得第二組織樣本(例如周邊血液樣本);(6)利用該分析或測(cè)量方法 或是該裝置、儀器或設(shè)備從該第二組織樣本中獲得與每單位體積(例如每毫升)的該種選 定干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)的第二數(shù)據(jù);(7)對(duì)該第一數(shù)據(jù)和該第二數(shù)據(jù)進(jìn)行第一分析,以獲得與 每單位體積(例如每毫升)的該種選定干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)的第一變化量,其中該第一分析可 包括將該第一數(shù)據(jù)和該第二數(shù)據(jù)進(jìn)行比較;(8)在該個(gè)體進(jìn)行或接受該種或該些種的上述 行為或刺激(X)之后,讓該個(gè)體等待一段第二(預(yù)定的)時(shí)間,例如12小時(shí)至36小時(shí)或是 36小時(shí)至60小時(shí),該段第二(預(yù)定的)時(shí)間與該段第一(預(yù)定的)時(shí)間不同;(9)在該個(gè) 體等待該段第二(預(yù)定的)時(shí)間之后,從該個(gè)體獲得第三組織樣本(例如周邊血液樣本); (10)利用該分析或測(cè)量方法或是該裝置、儀器或設(shè)備從該第三組織樣本中獲得與每單位體 積(例如每毫升)的該種選定干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)的第三數(shù)據(jù);以及(11)對(duì)該第一數(shù)據(jù)和該第 三數(shù)據(jù)進(jìn)行第二分析,以獲得與每單位體積(例如每毫升)的該種選定干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)的 第二變化量,其中該第二分析可包括將該第一數(shù)據(jù)和該第三數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。該第一、第二和 第三組織樣本可以由該個(gè)體的周邊血液獲得。該種選定干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定 義"里所提及的任何一種干細(xì)胞或是以本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的一種或多種細(xì)胞 (表面)標(biāo)記(例如〇0349(+)、1^沾(+)或00666(+))描述其特征的干細(xì)胞。
[0260] 一種獲得一組織樣本(例如一周邊血液)之一干細(xì)胞數(shù)據(jù)(例如每單位體積的干 細(xì)胞數(shù)量)的方法,其包括下列步驟:(1)從一個(gè)體(例如一人體或一動(dòng)物體)獲得該組織 樣本(其體積可以是10毫升);(2)處理該組織樣本,以獲得或制備出一測(cè)試樣本(其體積 可以是3毫升);(3)利用第一方法從該測(cè)試樣本的第一部分中獲得第一數(shù)據(jù)(例如每單位 體積(如每毫升)內(nèi)第一群特定顆粒(其包含細(xì)胞)的數(shù)量),該第一方法包括使用一血 球計(jì)數(shù)器(hemocytometer)計(jì)算該第一部分中的顆粒數(shù)量;(4)利用第二方法從該測(cè)試樣 本的第二部分中獲得第二數(shù)據(jù)(例如一種特定干細(xì)胞的數(shù)量占第二群特定顆粒(其包含細(xì) 胞)的數(shù)量的百分比)與第三數(shù)據(jù)(例如該第二群特定顆粒的數(shù)量占第三群特定顆粒(其 包含細(xì)胞)的數(shù)量的百分比),該第二方法包括使用流式細(xì)胞儀(flow cytometer)計(jì)算該 第二部分中的顆粒數(shù)量,其中在該測(cè)試樣本是均勻且含有大致相同之內(nèi)容物的情況下,該 第二部分假定含有與該第一部分大致上相同的內(nèi)容物,該第一群特定顆粒與該第三群特定 顆粒大致上具有相同的性質(zhì)或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸 是大于或等于一給定門坎尺寸(例如0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微 米);(5)對(duì)該第二數(shù)據(jù)和該第三數(shù)據(jù)進(jìn)行第一運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第二數(shù)據(jù)乘以該第三 數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè)試樣本有關(guān)的第四數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞的數(shù)量占該第三群特 定顆粒的數(shù)量的百分比);(6)對(duì)該第一數(shù)據(jù)和該第四數(shù)據(jù)進(jìn)行第二運(yùn)算或計(jì)算(例如將該 第一數(shù)據(jù)乘以該第四數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè)試樣本有關(guān)的第五數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞 在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量);以及(7)對(duì)該第五數(shù)據(jù)和一體積改變 (或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)進(jìn)行第三運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第五數(shù)據(jù)乘以該體積改變(或樣本準(zhǔn) 備)系數(shù)),以獲得與該組織樣本(如該周邊血液)有關(guān)的第六數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞 在該組織樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量)。該種獲得該組織樣本的干細(xì)胞數(shù)據(jù)的 方法還可以包括下列步驟:對(duì)該測(cè)試樣本的體積和該組織樣本的體積進(jìn)行第四運(yùn)算或計(jì)算 (例如將該測(cè)試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系 數(shù)。
[0261] 該干細(xì)胞數(shù)據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在該個(gè)體的周邊血液中每單位體積(如每 毫升)的數(shù)量。該第三群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它群的顆粒和/或細(xì)胞 (其可包括微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。該第二群特定顆粒包 括該種特定干細(xì)胞,但是幾乎不含有微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板和白血球(包含淋巴 球)。(該第一群特定顆粒和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸可以是〇. 5微米、0. 8 微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆粒的尺寸可以是大于或 實(shí)質(zhì)上等于1微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。在該第一群特定顆粒、 該第二群特定顆粒和該第三群特定顆粒中,每一群特定顆??梢允腔蚩梢园ㄒ蝗杭?xì)胞。 該種特定干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何一種多功能干細(xì)胞、任何一 種多潛能干細(xì)胞或任何一種先驅(qū)干細(xì)胞。該組織樣本可以是血液、周邊血液或是其它組織。 該個(gè)體可以是人類或是動(dòng)物。步驟(2)中所述的處理該組織樣本包括下列步驟:將紅血球 凝集劑和該組織樣本進(jìn)行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織樣本進(jìn)行混合之后,使來(lái) 自該組織樣本的顆粒重新懸浮于溶液或培養(yǎng)液中。該溶液或培養(yǎng)液可以是不含有鈣與鎂的 含鹽溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)該組織樣本制備成該測(cè)試樣本的方 式,可計(jì)算出或是獲得該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)。例如,將10毫升的該組織樣本處 理成3毫升的該測(cè)試樣本,則該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)為3/10 (其為該測(cè)試樣本的 體積與該組織樣本的體積的比率)。
[0262] 概括地說(shuō),血球計(jì)數(shù)器(連同顯微鏡)是用來(lái)獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺 寸的顆粒(其是包括細(xì)胞)在該測(cè)試樣本(其由該組織樣本(例如周邊血液)經(jīng)過(guò)處理而 成)中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,而流式細(xì)胞儀則是用來(lái)獲得該種特定干細(xì)胞在尺 寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細(xì)胞)中所占的百分比(其與該測(cè)試樣本有 關(guān))。將上述獲得的尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測(cè)試樣本中每單位體積的 數(shù)量乘以上述獲得的該種特定干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒中所占的 百分比,可以獲得該種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量。將該 種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積的數(shù)量乘以該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù),可 以獲得該種特定干細(xì)胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如每毫升)的 數(shù)量。因此,結(jié)合上述的細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)(也就是上述利用血球計(jì)數(shù)器獲得的數(shù)據(jù))和上述 的該種特定干細(xì)胞的百分比(也就是上述利用流式細(xì)胞儀測(cè)量出來(lái)的數(shù)據(jù)),可以更準(zhǔn)確 地獲得該種特定干細(xì)胞在周邊血液中的數(shù)量。
[0263] 本發(fā)明揭露一整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具,其可用來(lái)獲得與一個(gè)體(例如一人 體)的組織樣本(例如周邊血液)有關(guān)的干細(xì)胞數(shù)據(jù)(例如每單位體積的干細(xì)胞數(shù)量)。 該整合系統(tǒng)、裝置、儀器或工具包括:(1)第一裝置、儀器或工具,其是用來(lái)從該個(gè)體獲得或 取得該組織樣本(其體積可以是10毫升);(2)第二裝置、儀器或工具(其可包括離心機(jī)), 其是用來(lái)處理該組織樣本,以獲得或制備出一測(cè)試樣本(其體積可以是3毫升);(3)第三 裝置、儀器或工具(其可包括血球計(jì)數(shù)器、顯微鏡以及含有軟件的處理器或計(jì)算機(jī)),其是 用來(lái)從該測(cè)試樣本的第一部分獲得第一數(shù)據(jù)(例如每單位體積(如每毫升)內(nèi)第一群特定 顆粒的數(shù)量);(4)第四裝置、儀器或工具(其可包括流式細(xì)胞儀和處理器或計(jì)算機(jī)),其是 用來(lái)從該測(cè)試樣本的第二部分獲得第二數(shù)據(jù)(例如一種特定干細(xì)胞的數(shù)量占第二群特定 顆粒的數(shù)量的百分比)和第三數(shù)據(jù)(例如該第二群特定顆粒的數(shù)量占第三群特定顆粒的數(shù) 量的百分比),其中在該測(cè)試樣本是均勻且含有大致相同的內(nèi)容物的情況下,該第一部分假 定含有與該第二部分大致上相同的內(nèi)容物,另外該第一群特定顆粒與該第三群特定顆粒大 致上具有相同的性質(zhì)或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸是大于 或等于一給定門坎尺寸;以及(5)第五裝置、儀器或工具(例如一計(jì)算機(jī)或處理器),其是 用來(lái)進(jìn)行下列的運(yùn)算或計(jì)算:(a)對(duì)該第二數(shù)據(jù)和該第三數(shù)據(jù)進(jìn)行第一運(yùn)算或計(jì)算(例如 將該第二數(shù)據(jù)乘以該第三數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè)試樣本有關(guān)的第四數(shù)據(jù)(例如該種特定干 細(xì)胞的數(shù)量占該第三群特定顆粒的數(shù)量的百分比);(b)對(duì)該第一數(shù)據(jù)和該第四數(shù)據(jù)進(jìn)行 第二運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第一數(shù)據(jù)乘以該第四數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè)試樣本有關(guān)的第五 數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量);以及(c)對(duì) 該第五數(shù)據(jù)和一體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)進(jìn)行第三運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第五數(shù)據(jù)乘 以該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)),以獲得與該組織樣本有關(guān)的第六數(shù)據(jù)(例如該種特 定干細(xì)胞在該組織樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量)。該第五裝置、儀器或工具也 可以用來(lái)進(jìn)行下列的運(yùn)算或計(jì)算:對(duì)該測(cè)試樣本的體積和該組織樣本的體積進(jìn)行第四運(yùn)算 或計(jì)算(例如將該測(cè)試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得該體積改變(或樣本 準(zhǔn)備)系數(shù)。另外,也可以將該第一、第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具中的任兩個(gè) 或以上的裝置、儀器或工具合并組成一個(gè)可以進(jìn)行所述的任兩個(gè)或以上的裝置、儀器或工 具之功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。例如,該第一和第二裝置、儀 器或工具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行該第一和第二裝置、儀器或工具的功能的第一整合裝 置、儀器或工具或是第一單一裝置、儀器或工具,而該第三、第四和第五裝置、儀器或工具可 以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行該第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的第二整合裝置、儀 器或工具或是第二單一裝置、儀器或工具?;蛘?,該第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工 具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行該第二、第三、第四和第五裝置、儀器或工具的功能的整合裝 置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。或者,該第二、第三和第四裝置、儀器或工具可 以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行該第二、第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或 工具或是單一裝置、儀器或工具?;蛘?,該第三和第四裝置、儀器或工具可以合并組成一個(gè) 可以進(jìn)行該第三和第四裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀 器或工具。或者,該第四和第五裝置、儀器或工具可以合并組成一個(gè)可以進(jìn)行該第四和第五 裝置、儀器或工具的功能的整合裝置、儀器或工具或是單一裝置、儀器或工具。該干細(xì)胞數(shù) 據(jù)可包括該種特定干細(xì)胞在該個(gè)體的周邊血液中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量。該第三 群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它群的顆粒和/或細(xì)胞(其可包括微顆粒、粒細(xì) 胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。該第二群特定顆粒包括該種特定干細(xì)胞,但是 幾乎不含有微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板和白血球(包含淋巴球)。(該第一群特定顆粒 和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸可以是0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微 米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆粒的尺寸可以是大于或?qū)嵸|(zhì)上等于1微米、1. 1微 米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。在該第一群特定顆粒、該第二群特定顆粒和該第 三群特定顆粒中,每一群特定顆粒可以是或可以包括一群細(xì)胞。該種特定干細(xì)胞可以是本 發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何一種多功能干細(xì)胞、任何一種多潛能干細(xì)胞或任何一 種先驅(qū)干細(xì)胞。該組織樣本可以是一周邊血液樣本。該個(gè)體可以是一人類或是一動(dòng)物。在 該第二裝置、儀器或工具處理該組織樣本的時(shí)候,可包括下列步驟:將一紅血球凝集劑和該 組織樣本進(jìn)行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織樣本進(jìn)行混合之后,使來(lái)自該組織樣 本的顆粒重新懸浮于一溶液或培養(yǎng)液中。該溶液或培養(yǎng)液可以是一不含有鈣與鎂的含鹽溶 液或是一含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)該組織樣本制備成該測(cè)試樣本的方式, 可以計(jì)算出或是獲得該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)。例如,將10毫升的該組織樣本處理 成3毫升的該測(cè)試樣本,則該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)為3/10 (其為該測(cè)試樣本的體 積與該組織樣本的體積的比率)。
[0264] 概括地說(shuō),該第三裝置、儀器或工具是用來(lái)獲得尺寸大于或等于該給定門坎尺寸 的顆粒(其包括細(xì)胞)在該測(cè)試樣本(其由該組織樣本(例如周邊血液)經(jīng)過(guò)處理而成) 中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,而該第四和第五裝置、儀器或工具則是用來(lái)獲得該種特 定干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細(xì)胞)中所占的百分比(其與 該測(cè)試樣本有關(guān))。將上述獲得的尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測(cè)試樣本中 每單位體積的數(shù)量乘以上述獲得的該種特定干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的 顆粒中所占的百分比,可以獲得該種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升) 的數(shù)量。將該種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積的數(shù)量乘以該體積改變(或樣本準(zhǔn) 備)系數(shù),可以獲得該種特定干細(xì)胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如 每毫升)的數(shù)量。因此,結(jié)合上述的細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)(其是由該第三裝置、儀器或工具提供) 和上述的該種特定干細(xì)胞的百分比(其由該第四與第五裝置、儀器或工具提供),可以更準(zhǔn) 確地獲得該種特定干細(xì)胞在周邊血液中的數(shù)量。
[0265] 本發(fā)明還揭露單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具,其可提供或執(zhí)行下列八種功能中任兩 個(gè)(或以上)的功能:(1)第一功能,其是用來(lái)從一個(gè)體獲得或取得一組織樣本(其體積可 以是10毫升);(2)第二功能,其是用來(lái)處理該組織樣本,以獲得或制備出一測(cè)試樣本(其 體積可以是3毫升);(3)第三功能,其是用來(lái)從該測(cè)試樣本的第一部分獲得第一數(shù)據(jù)(例 如每單位體積(如每毫升)內(nèi)第一群特定顆粒的數(shù)量);(4)第四功能,其是用來(lái)從該測(cè)試 樣本的第二部分獲得第二數(shù)據(jù)(例如一種特定干細(xì)胞的數(shù)量占第二群特定顆粒的數(shù)量的 百分比)和第三數(shù)據(jù)(例如該第二群特定顆粒的數(shù)量占第三群特定顆粒的數(shù)量的百分比), 其中在該測(cè)試樣本是均勻且含有大致相同之內(nèi)容物的情況下,該第一部分假定含有與該第 二部分大致上相同的內(nèi)容物,另外該第一群特定顆粒與該第三群特定顆粒大致上具有相同 的性質(zhì)或特性,該第一群特定顆粒的尺寸和該第三群特定顆粒的尺寸是大于或等于一給定 門坎尺寸;(5)第五功能,其是用來(lái)對(duì)該第二數(shù)據(jù)和該第三數(shù)據(jù)進(jìn)行第一運(yùn)算或計(jì)算(例如 將該第二數(shù)據(jù)乘以該第三數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè)試樣本有關(guān)的第四數(shù)據(jù)(例如該種特定干 細(xì)胞的數(shù)量占該第三群特定顆粒的數(shù)量的百分比);(6)第六功能,其是用來(lái)對(duì)該第一數(shù)據(jù) 和該第四數(shù)據(jù)進(jìn)行第二運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第一數(shù)據(jù)乘以該第四數(shù)據(jù)),以獲得與該測(cè) 試樣本有關(guān)的第五數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升)的 數(shù)量);(7)第七功能,其是用來(lái)對(duì)該測(cè)試樣本的體積和該組織樣本的體積進(jìn)行第三運(yùn)算或 計(jì)算(例如將該測(cè)試樣本的體積除以該組織樣本的體積),以獲得一體積改變(或樣本準(zhǔn) 備)系數(shù);以及(8)第八功能,其是用來(lái)對(duì)該第五數(shù)據(jù)和該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)進(jìn) 行第四運(yùn)算或計(jì)算(例如將該第五數(shù)據(jù)乘以該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)),以獲得與該 組織樣本有關(guān)的第六數(shù)據(jù)(例如該種特定干細(xì)胞在該組織樣本中每單位體積(如每毫升) 的數(shù)量)。該種特定干細(xì)胞在該組織樣本中每單位體積的數(shù)量可以是該種特定干細(xì)胞在該 個(gè)體的周邊血液中每單位體積的數(shù)量。該第三群特定顆粒包括該第二群特定顆粒以及其它 群的顆粒和/或細(xì)胞(其可包括微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板、白血球(包含淋巴球))。 該第二群特定顆粒包括該種特定干細(xì)胞,但是幾乎不含有微顆粒、粒細(xì)胞、紅血球、血小板 和白血球(包含淋巴球)。(該第一群特定顆粒和該第三群特定顆粒的)該給定門坎尺寸 可以是0. 5微米、0. 8微米、1微米、1. 5微米、2微米或3微米。在該第二群特定顆粒中,顆 粒的尺寸可以是大于或?qū)嵸|(zhì)上等于1微米、1. 1微米、1. 5微米、2微米、2. 1微米或3微米。 在該第一群特定顆粒、該第二群特定顆粒和該第三群特定顆粒中,每一群特定顆粒可以是 或可以包括一群細(xì)胞。該種特定干細(xì)胞可以是本發(fā)明在"干細(xì)胞定義"里所提及的任何一種 多功能干細(xì)胞、任何一種多潛能干細(xì)胞或任何一種先驅(qū)干細(xì)胞。該組織樣本可以是一周邊 血液樣本。該個(gè)體可以是一人類或是一動(dòng)物。對(duì)于該第二功能而言,處理該組織樣本可包 括下列步驟:將一紅血球凝集劑和該組織樣本進(jìn)行混合,并在將該紅血球凝集劑和該組織 樣本進(jìn)行混合之后,使來(lái)自該組織樣本的顆粒重新懸浮于一溶液或培養(yǎng)液中。該溶液或培 養(yǎng)液可以是不含有鈣與鎂的含鹽溶液或是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)該組織 樣本制備成該測(cè)試樣本的方式,可以計(jì)算出或是獲得該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù)。例 如,將10毫升的該組織樣本處理成3毫升的該測(cè)試樣本,則該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系 數(shù)為3/10(其為該測(cè)試樣本的體積與該組織樣本的體積的比率)。
[0266] 在一范例中,該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具可以提供或執(zhí)行該第三和第四功能。 在另一范例中,該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具可以提供或執(zhí)行該第二、第三和第四功能。在 另一范例中,該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具可以提供或執(zhí)行該第三、第四、第五、第六和第 八功能。在另一范例中,該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具可以提供或執(zhí)行該第三至第八功能。 在另一范例中,該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具可以提供或執(zhí)行該第一至第八功能。
[0267] 概括地說(shuō),該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具所提供的該第三功能是用來(lái)獲得尺寸大 于或等于該給定門坎尺寸的顆粒(其包括細(xì)胞)在該測(cè)試樣本(其由該組織樣本(例如周 邊血液)經(jīng)過(guò)處理而成)中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量,而該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或 工具所提供的該第四和第五功能則是用來(lái)獲得該種特定干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定 門坎尺寸的顆粒(其包括細(xì)胞)中所占的百分比(其與該測(cè)試樣本有關(guān))。將上述獲得的 尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒在該測(cè)試樣本中每單位體積的數(shù)量乘以上述獲得 的該種特定干細(xì)胞在尺寸大于或等于該給定門坎尺寸的顆粒中所占的百分比,可以獲得該 種特定干細(xì)胞在該測(cè)試樣本中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量。將該種特定干細(xì)胞在該測(cè) 試樣本中每單位體積的數(shù)量乘以該體積改變(或樣本準(zhǔn)備)系數(shù),可以獲得該種特定干細(xì) 胞在該組織樣本(如上述的周邊血液)中每單位體積(如每毫升)的數(shù)量。因此,結(jié)合上 述的細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)(其由該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具的該第三功能提供)和上述的該種 特定干細(xì)胞的百分比(其由該單一系統(tǒng)、裝置、儀器或工具的該第四與第五功能提供),可 以更準(zhǔn)確地獲得該種特定干細(xì)胞在周邊血液中的數(shù)量。
[0268] 以上所述是通過(guò)實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的特點(diǎn),其目的在使本領(lǐng)域技術(shù)人員能了解本 發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施,而非限定本發(fā)明的專利范圍,所以凡其他未脫離本發(fā)明所揭示的 精神所完成的等效修飾或修改,仍應(yīng)包含在以下所述的申請(qǐng)專利范圍中。
【權(quán)利要求】
1. 一種獲得干細(xì)胞的方法,其包括下列步驟: (a) 讓一個(gè)體進(jìn)行或接受一行為; (b) 在步驟(a)后,使該個(gè)體等待一段預(yù)定時(shí)間; (c) 在步驟(b)后,從該個(gè)體取得一組織樣本;以及 (d) 從該組織樣本收集復(fù)數(shù)干細(xì)胞。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該行為包括服用一種含有褐藻糖膠的物質(zhì)或營(yíng) 養(yǎng)品。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該行為包括服用一種草藥或中藥。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該段預(yù)定時(shí)間是介于30分鐘到2小時(shí)之間、介 于1小時(shí)到12小時(shí)之間或是介于12小時(shí)到36小時(shí)之間。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該組織樣本包括該個(gè)體的一周邊血液。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該些干細(xì)胞包括多功能干細(xì)胞或多潛能干細(xì) 胞。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該些干細(xì)胞是用于植牙手術(shù)、整形手術(shù)、癌癥治 療、組織修復(fù)治療、膝半月板損傷治療或關(guān)節(jié)炎治療。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是在步驟(d)后,將該些干細(xì)胞儲(chǔ)存在溫度低于攝 氏〇度的環(huán)境中。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該些干細(xì)胞包括尺寸介于0. 1微米至6微米之 間的⑶9 (+),⑶349 (+)細(xì)胞或尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶349 (+)細(xì)胞。
10. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征是該些干細(xì)胞包括尺寸介于0. 1微米至6微米之 間的Lgr5 (+)細(xì)胞或尺寸介于0. 1微米至6微米之間的⑶9 (-),SSEA4 (+)細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】C12N5/0789GK104232580SQ201410286516
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月24日
【發(fā)明者】王俊麟, 陳寬仁, 林茂雄, 閻云 申請(qǐng)人:干細(xì)胞生物科技公司
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